В настоящее время на рынке появилось огромное количество витаминизированных продуктов питания для человека и кормов для животных, представляющих собой сухие многокомпонентные смеси. Ассортимент таких продуктов представлен достаточно широко. Это, прежде всего, биологически активные добавки к пище, премиксы, комбикорма для животных и птиц, поливитаминные препараты. Критерием качества таких продуктов может являться их анализ на содержание витаминов и, особенно, таких жизненно необходимых, как водорастворимые и жирорастворимые витамины, количество которых регламентируется нормативными документами и санитарными нормами качества.

Для определения витаминов применяют различные методы. Широко используемые оптические методы анализа трудоемки, требуют больших затрат времени и дорогостоящих реактивов, применение хроматографических методов осложнено использованием дорогостоящего оборудования. С каждым годом расширяется ассортимент и увеличивается производство продуктов питания, совершенствуется рецептура детского питания. Это в свою очередь предъявляет повышенные требования к контролю за качеством выпускаемой продукции и совершенствованию методов определения витаминов. Медико-биологические требования и санитарные нормы качества продовольственного сырья и пищевых продуктов характеризуют пищевую ценность большинства видов и групп продуктов детского питания различного назначения.

1. Общий обзор методов определения витаминов

Почти все витамины легко подвергаются окислению, изомеризации и разрушаются под воздействием высокой температуры, света, кислорода воздуха, влаги и других факторов.

Из существующих методов определения витамина С (аскорбиновой кислоты) наиболее широко применяют метод визуального и потенциометрического титрования раствором 2,6-ди-хлорфенолиндофенола по ГОСТ 24556—81, основанный на редуцирующих свойствах аскорбиновой кислоты и ее способности восстанавливать 2,6-ДХФИФ. Темно-синяя окраска этого индикатора при добавлении аскорбиновой кислоты переходит в бесцветную. Важное значение имеет приготовление экстракта исследуемого продукта. Наилучшим экстрагентом является 6 %-ный раствор метафосфорной кислоты, который инактивирует аскорбинотоксидазу и осаждает белки.

Каротин в растительном сырье, концентратах и безалкогольных напитках контролируют физико-химическим методом по ГОСТ 8756.22—80. Метод основан на фотометрическом определении массовой доли каротина в растворе, полученном в процессе экстрагирования из продуктов органическим растворителем. Предварительно раствор очищают от сопутствующих красящих веществ с помощью колоночной хроматографии. Каротин легко растворяется в органических растворителях (эфир, бензин и др.) и придает им желтую окраску. Для количественного определения каротина используют адсорбционную хроматографию на колонках с окисью алюминия и магния. Такое определение пигментов на колонке зависит от активности адсорбента, количества пигментов, а также присутствия других компонентов в разделяемой смеси. Сухая смесь окиси алюминия задерживает каротин, а влажная пропускает в раствор другие красящие вещества.

Тиамин в основном находится в связанном состоянии в виде дифосфорного эфира — кокарбоксилазы, которая является активной группой ряда ферментов. С помощью кислотного гидролиза и под воздействием ферментов тиамин освобождается из связанного состояния. Этим способом определяют количество тиамина. Для расчета содержания витамина B1 используют флюрометрический метод, который применяют для определения тиамина в пищевых продуктах. Он основан на способности тиамина образовывать в щелочной среде с феррнцианндом калня тиохром, который дает интенсивную флюоресценцию в бутиловом спирте. Интенсивность процесса контролируют на флюорометре ЭФ-ЗМ.

В продуктах питания и напитках рибофлавин присутствует в связанном состоянии, т. е. в форме фосфорных эфиров, связанных с белком. Чтобы определить количество рибофлавина в продуктах, необходимо освободить его из связанного состояния путем кислотного гидролиза и обработки ферментными препаратами. Витамин B1 в безалкогольных напитках рассчитывают с помощью химического метода для определения количества легкогидролизуемых и прочно связанных форм рибофлавина в тканях. Метод основан на способности рибофлавина к флюоресценции до и после восстановления его гипосульфитом натрия. Определение общего содержания фенольных соединений. Для этого используют колориметрический метод Фолина — Дениса, который основан на образовании голубых комплексов при восстановлении вольфрамовой кислоты под действием полифенолов с реагентом в щелочной среде. Фенольные соединения определяют по хлорогеновой кислоте методом пламенной фотометрии на приборе ЕКФ-2.

2. Хроматографические методы определения витаминов

В последнее время за рубежом бурное развитие переживает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Это связано, прежде всего, с появлением прецизионных жидкостных хроматографов, совершенствованием техники выполнения анализа. Широкое использование метода ВЭЖХ при определении витаминов нашло отражение и в числе публикаций. На сегодняшний день более половины всех опубликованных работ по анализу как водо- так и жирорастворимых витаминов посвящено применению этого метода.Широкое распространение при определении витаминов получили различные варианты хроматографии.

Для очистки токоферола от посторонних примесей используют метод тонкослойной хроматографии В сочетании со спектрофотометрическими и флуориметрическими методами этим способом проводят и количественное определение витамина Е. При разделении используют пластинки с силуфолом, кизельгелем

Метод газовой хроматографии рекомендован Государственной Фармакопеей (ГФ XI) для анализа масляных растворов а-токоферола ацетата. Этим способом определяют витамин Е в виде гептафторбутирильных производных и в пищевых продуктах.

Анализ изомеров токоферола в оливковом масле проводится методом газо-жидкостной хроматографии. Методики анализа ГХ и ГЖХ требуют получения летучих производных, что крайне затруднительно при анализе жирорастворимых витаминов. По этой причине данные способы определения не получили большого распространения. Определение витамина Е в пищевых продуктах, фармпрепаратах и биологических объектах проводят в градиентном и изократическом режимах как в нормально-фазовых, так и в обращенно-фазовых условиях. В качестве адсорбентов используют силикагель (СГ), кизельгур, силасорб, ODS-Гиперсил и другие носители. Для непрерывного контроля состава элюата в жидкостной хроматографии при анализе витаминов и увеличения чувствительности определения используют УФ (А,=292 нм), спектрофотометрический (Х=295нм), флуоресцентный (Х,=280/325нм), электрохимический, ПМР- [81] и масс-спектроскопический детекторы.

Большинство исследователей для разделения смесей всех восьми изомеров токоферолов и их ацетатов предпочитают использовать адсорбционную хроматографию. В этих случаях подвижной фазой обычно служат углеводороды, содержащие незначительные количества какого-либо простого эфира. Перечисленные методики определения витамина Е, как правило, не предусматривают предварительного омыления образцов, что существенно сокращает время выполнения анализа.

Разделение с одновременным количественным определением содержания жирорастворимых витаминов (А, Д, Е, К) при их совместном присутствии в поливитаминных препаратах проводят как на прямой, так и на обращенной фазах. При этом большинство исследователей предпочитают использовать обращенно-фазовый вариант ВЭЖХ. Метод ВЭЖХ позволяет анализировать водорастворимые витамины В1 и В2 как одновременно, так и отдельно. Для разделения витаминов используют обращенно-фазный, ион-парный и ионообменный варианты ВЭЖХ. Применяют как изократический, так и градиентный режимы хроматографирования. Предварительное отделение определяемых веществ от матрицы осуществляют путем ферментативного и кислотного гидролиза пробы.

Преимущества метода жидкостной хроматографии:

-Одновременное определение нескольких компонентов

-Устранение влияния мешающих компонентов

— Комплекс можно быстро перестроить на выполнение других анализов.

Состав и характеристика оборудования и программного обеспечения для жидкостного хроматографа «Хромос ЖХ-301»:

Таблица 1

Насос SSI серии III	Насос для подачи элюента имеет низкий уровень пульсаций
Детектор спектрофотометрический СПФ-1	Детектор по измерению поглощения (длинна волны 254 — 455 нм)
Кран-дозатор	Применяется шестипортовый двухходовой петлевой дозатор. Увеличение петли дозирования позволяет увеличить чувствительность анализа.
Насос SSI серии III	Дополнительный насос может быть использован для создания градиента (необязателен)
Колонки хроматографические	Аналитическая колонка Vydac 201SP54 250х4 мм или аналогичная.
Вспомогательное оборудование для лаборатории жидкостной хроматографии	Вакуумный насос для дегазации элюента .
Программа сбора и обработки хроматографической информации «Хромос 2.3.»	Работа одного компьютера с несколькими хроматографами (количество зависит от конфигурации компьютера). Методы расчета хроматограмм: абсолютная калибровка, внутренний стандарт.
Компьютер IBM-PC/AT с принтером	Celeron-366 (и выше), 32 Мб RAM. HDD-10G. FDD 1.44 (либо CD-ROM). клавиатура, мышь. монитор 15" SVGA, принтер.

Достоинства хроматографа «Хромос ЖХ-301»:

-высокая стабильность и точность поддержания расхода элюента обеспечивается конструкцией насосов высокого давления.

-легкий доступ к колонкам обеспечивается конструкцией прибора.

-эффективность разделения обеспечивается применением высокоэффективных хроматографических колонок.

-широкий линейный диапазон измерительного сигнала детекторов без переключений предела измерения, что позволяет с высокой точностью измерять пики как большой, так и малой концентрации.

Хроматограмма анализа водорастворимых витаминов:

1 аскорбиновая кислота (C), 2 никотиновая кислота (Niacin), 3 пиридоксин (B6), 4 тиамин (B1), 5 никотинамид (B3), 6 фолиевая кислота (M), 7 цианокобаламин (B12), 8 рибофлавин (B2).

Хроматограмма анализа жирорастворимых витаминов:

1. Витамин А 2. токол 3. y -токоферол 4. a -токоферол (Витамин E) 5. лютеин 6. зеаксантин 7. криптоксантин

8. a -каротин

Несмотря на высокую чувствительность метода ВЭЖХ, высокая стоимость приборов, а также длительность анализа с учетом времени пробоподготовки существенно ограничивает его применение в аналитических лабораториях нашей страны.

3. Электрохимические методы определения витаминов

Электрохимические методы анализа широко используются в аналитической практике благодаря простоте, надежности, экспрессности, возможности определять практически все элементы периодической системы, разнообразные неорганические и органические соединения в широком диапазоне концентраций. Наибольшее развитие электрохимические методы получили в последние годы за счет использования электронной аппаратуры, компьютеров, разработке новых электродов и способов их очистки, позволяющих применять электрохимию на различных стадиях исследования. В настоящее время электрохимические методы анализа успешно применяются и для определения витаминов.

Публикации по определению витамина Е электрохимическими методами немногочисленны. Потенциометрическое и амперометрическое титрование хлорным золотом находит ограниченное применение из-за малой специфичности, т.к. хлорное золото не обладает способностью окислять эфиры токоферолов и другие производные. Для определения суммы токоферолов в их концентратах предложен метод амперометрического титрования в среде 1н. раствора серной кислоты в 75% этаноле раствором сульфата церия (IV) с помощью платинового электрода. Анализ токоферолов в этаноле и хлороформе с использованием ферроцианид иона в качестве медиатора проводили методом кулонометрии .

Также существует методика определения витамина Е в растительных маслах хронопотенциометрическим методом. Токоферолы окисляют при постоянном токе (4-10 мА) на стеклоуглеродном плоском дисковом электроде. Предел обнаружения и нижняя граница определяемых содержаний, достигнутые при определении витамина этим методом, составили соответственно 15 мг/дм3 и 20 мг/дм3.

Потенциометрическое определение витамина В1 применяют в нескольких вариантах. Потенциометрическое титрование тиамина бромида проводят в 0,05 М AgNC>3 на индикаторном серебряном электроде. В фармпрепаратах тиамин титруют вольфрамовофосфорной кислотой с использованием графитового электрода.

В основе амперометрического метода определения тиамина лежит его реакция с метавольфрамовой кислотой. Измерения проводят при Е=-0,65 В анализаторе Гейровского.

Полярографический метод получил достаточно широкое распространение при анализе органических веществ. Основой, позволяющей делать заключение о структуре вещества, является форма и характер поляризационной кривой, а также величина потенциала полуволны, которая характеризует не только функциональную группу, но и ее положение в молекуле. Токоферолы являются полярографически активными, способны окисляться, образуя в области положительных потенциалов анодную волну. Известен способ определения токоферолацетата, основанный на получении одноэлектронной волны его анодного окисления (Е1/2-1,33 В, относительно нас.к.э.) в растворе ацетонитрила на фоне перхлората лития. о-Токоферол в этих условиях образует анодную волну при потенциале Е,/2=0,68 В. Определение витамина Е полярографированием на катоде возможно в виде его окисленной формы — токоферилхинона. Восстановление проводят в 75% этаноле на фоне ацетатного буферного раствора (рН 6-7).

Методика количественного полярографического определения токоферолов в маслах и жирах в виде токоферилхинонов основан на том, что анализ ведут на ртутном капельном электроде в среде ацетатного буферного раствора, содержащем 75 % этилового спирта (рН 7). Пробоподготовка включает омыление пробы 2 н. раствором КОН на кипящей водяной бане, экстракцию неомыляемой фракции сернокислым эфиром, растворение полученного экстракта в 96% этиловом спирте. После осаждения стеринов, токоферолы окисляют до токоферилхинонов раствором комплексной соли аммонийнитрата церия. Полярографический метод анализа витамина Е находит ограниченное применение в аналитической практике. Использование ртутного капельного электрода нежелательно по требованиям техники безопасности в испытательных химических лабораториях. Много внимания в литературе уделено полярографическому методу определения водорастворимых витаминов. Витамин В вызывает образование каталитических волн в аммиачном растворе кобальтовой соли, которые обусловлены раскрытием тиазолового цикла и образованием SH-формы тиамина. В щелочных средах при рН>9 тиамин образует анодную волну при Е]/2= -0,4В, которая соответствует образованию соединения SH-формы тиамина со ртутью. Определение витамина B1 в поливитаминных препаратах проводили на фоне 0,1 М KCI при Е=-1,25 В. Минимально определяемая концентрация витамина в этих условиях равна 2,0 мг/л [174, 216]. Методом производной полярографии тиамин анализировали в кислых буферных растворах. При рН 1,3 — 3,07 обнаруживается две волны, а при рН 3,07-4,92 только одна волна восстановления витамина. Переменнотоковая полярография применялась при исследовании хлористоводородной соли тиамина в буферных растворах с рН 3-10 [174].

4. Инверсионно вольтамперометрический метод определения водорасторимых витаминов B1 B2 в пищевых продуктах.

Витамины B1 /тиамин; 4-метил-5- β -оксиэтил-N-/2-метил-4-амино-5-метилпиримидил/-тиазолий бромид /или хлорид/ / и B2 /рибофлавин; 6,7-диметил-9-/ D -1-рибитил/-изоаллоксазин/ необходимы для нормальной жизнедеятельности организма. Они входят в состав сложных биокатализаторов, выполняющих различные функции в процессе обмена веществ. Важнейшие вещества такого рода активны физиологически в малых дозах и поступают в организм человека вместе с пищей.

Для вольтамперометрического анализа часто допустимы более простые методики предварительного выделения соединений, чем флуориметрические или хроматографические. Предварительная подготовка проб также может быть существенно уменьшена из-за возможности проведения вольтамперометрических измерений в мутных и окрашенных растворах как в водных, так и в неводных средах. Проводится гидролиз связанных форм витаминов и белка, осаждение водорастворимого белка из гидролизата с последующим инверсионно-вольтамперометрическим определением витаминов. Новым в способе является то, что проводят кислотный гидролиз (0,15-0,20) M раствором h3 SO4 или HCl на кипящей водяной бане в течение 30 40 минут, после охлаждения гидролизата проводят осаждение водорастворимого белка (0,4-0,5) г хлорида марганца 4-водным, затем 2-3 г хлорида калия с последующим инверсионно-вольтамперометрическим определением витаминов в безбелковом гидролизате путем регистрации катодных пиков витамина B1 при потенциалах (0,35-0,48)B (Eэ -0,15 B), анодных пиков витамина B2 в диапазоне потенциалов (0,15-0,20)B и Eэ -(0,50-0,60)B в режиме дробного дифференцирования.

В прототипе описано проведение гидролиза сначала 0,10M раствором HCl, затем протеолитическими и фосфатазными ферментами в течение более 16 20 часов. Для определения витаминов ИВ способом использование ферментов значительно снижает экспрессность анализа и делает невозможным проведение вольтамперометрического определения. Предлагаемые условия гидролиза (0,15-0,20) M h3 SO4 или HCl при кипячении в течение 30 40 минут позволяют селективно и экспрессно определять водорастворимые витамина B1 и В2 с хорошей воспроизводимостью. Относительное стандартное отклонение Sr не превышает 0,2 для концентрации определяемых веществ 0,1 мг/100 г. Тиамин и рибофлавин, вероятно, можно было бы определять методом ИВ и без их выделения из основы в отсутствии больших количеств белковых примесей. Присутствие значительных количеств белка в пищевых продуктах мешает ИВ определению витаминов, т.к. белки являются электрохимически активными, хорошо адсорбируются на электродных материалах и могут участвовать в редокс-превращениях, что затрудняет ИВ анализ и приводит к завышенным показателям содержания витаминов в пробах. Для устранения мешающего влияния белков, разрушения связанных форм витаминов и распада белков на более простые составные части в предлагаемом способе гидролиз проводят (0,15-0,20) М h3 SO4 или HCl. Концентрации кислот и время гидролиза /t/ (равное 30-40 минутам) подобраны экспериментально. Абсолютной новизной является экспериментально подобранный реагент h3 SO4. Использование кислот с молярной концентрацией C<0,15 М ухудшает условия гидролиза, а при C>0,20 М ухудшаются условия ИВ определения из-за большого значения остаточного тока, связанные с выделением водорода на индикаторном стеклоуглеродном электроде. Оптимальным временем гидролиза является 30-40 минут. При t>40 минут снижается экспрессность анализа, а при t<30 минут ухудшаются условия проведения гидролиза. Другим отличительным признаком являются установленные условия осаждения остаточных количеств растворимого белка из гидролизата (в прототипе осаждение не применяли). Необратимое осаждение белка проводили солями тяжелых металлов (Pb2+, Cu2+, Ag+, Fe2+, Mn2+ и др.). При этом вместе с белками выделялись и их комплексные соединения с фенольными веществами и сахаридами, что обеспечивало оптимальные условия проведения электродного процесса. В предлагаемом способе впервые в качестве осадителя выбрана соль MnCl2 · 4h3 O в количестве 0,40-0,50 г. Ранее для отделения белка соль MnCl2 -4h3 O не применялась. Использование больших количеств соли />0,5 г/ повышает растворимость белка, по-видимому, за счет протекания адсорбционной пептизации, и ухудшаются условия проведения электродного процесса, особенно при определении тиамина. При массе соли <0,45 г ухудшаются условия осаждения органических примесей. После отделения осадка центрифугированием проводили вторичное осаждение следов белка из центрифугата с помощью нейтральных солей KCl и (Nh5 )2 SO4 (высаливание следов белковых примесей). Хлорид калия осаждал белки слабее, чем сульфат аммония, вследствие меньшей дегидратирующей способности, которая характеризуется положением ионов в ряду Гофмейстера. Однако применение сульфата аммония ухудшало воспроизводимость и точность электроанализа. Использование KCl способствовало стабилизации условий проведения электродного процесса, повышало точность и воспроизводимость КХА методом ИВ. Масса используемой соли KCl также установлена экспериментально. Использование больших количеств соли KCl />3 г/ понижало электрическую проводимость раствора и ухудшало условия проведения электродного процесса. Уменьшение концентрации соли /<2 г/ ухудшало условия осаждения. Осадок белка мог вновь частично раствориться при стоянии пробы или после разведения пробы водой. Важным для определения водорастворимых витаминов методом ИВ является выбор фонового электролита. В предлагаемом способе применение дополнительного электролита в качестве фона не требуется. Анализируемый раствор после осаждения белков имеет оптимальное значение pH для ИВ определения, обладает хорошей электропроводностью и поэтому сразу подвергается вольтамперметрированию. Определение тиамина проводят методом катодной ИВ с использованием ртутно-пленочного индикаторного электрода, рибофлавина — адсорбционной ИВ на стеклоуглеродном электроде в режиме дробного дифференцирования. Вольтамперограммы регистрируют при максимальных значениях потенциала -(0,35-0,48)В и -(0,15-0,20)В соответственно для витаминов B1 и B2. Метод ИВ для определения водорастворимых витаминов B1 и B2 в пищевых продуктах ранее не применялся. Массовую долю витамина в пробе вычисляют в мг/100 г по формуле:

где X1 содержание данного компонента в анализируемой пробе, мг/100 г; Cд концентрация аттестованной смеси /АС/ витамина, из которой делается добавка к анализируемой пробе, мг/см3 ;

Vд объем добавки АС витамина, см3 ;

J1 величина максимального тока компонента в анализируемой пробе, А;

J2 величина максимального тока компонента в пробе с добавкой АС, А;

Vал объем аликвоты пробы, взятой для анализа, см3 ;

Vк объем анализируемого раствора после гидролиза, см3 ;

mпр. масса анализируемого вещества, г.

Установленные условия анализа в предлагаемом способе впервые позволили экспрессно (за 1,5-2 часа) количественно определять витамины B1 и B2 в пищевых продуктах на уровне 0,01-0,02 мг/100 г в присутствии пигментов, в окрашенных средах без предварительного отделения других водорастворимых витаминов группы B, PP, аскорбиновой, фолиевой, никотиновой, лимонной кислот, триптофана, мочевины, цистина, цистеина, ионов PO34- Cl-, F-, Br-, S2-, SO24- Zn2+, Cu2+, Cd2+, Fe2+, Fe3+ и др.

Пример: 1. Определение витамина B1 (тиамина) в детской молочной смеси «Семилко». Навеску пробы массой 10 г переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 добавляют 92 см3 0,15 М HCl и нагревают с воздушным холодильником на кипящей водяной бане в течение 30 минут.Затем охлаждают до температуры -30o C и добавляют 0,5 г MnCl2 ·4h3 O, центрифугируют на лабораторной медицинской центрифуге в течение 20 минут со скоростью 3000 оборотов в минуту. Центрифугат сливают в стакан и добавляют 3 г KCl. Полученный осадок отфильтровывают через бумажный фильтр. Аликвоту фильтрата объемом 10 см3 помещают в электролизер и проводят вольтамперометрические измерения при условии: потенциал электролиза Eэ =-0,10 В, время электролиза τэ = 180 с, скорость развертки потенциала W=20 мВ/с. Катодный пик витамина регистрируют с использованием ртутно-пленочного электрода в диапазоне потенциалов -(0,45-0,48) B при чувствительности прибора 2·10-9 A/мм. Содержание вещества оценивают методом добавок аттестованных смесей. Время анализа одной пробы не превышает 2 часа.

Заключение

В современных физико – химических методах определения витаминов, при взаимодействии витаминов с рядом химических соединений наблюдаются характерные цветные реакции, интенсивность окраски которых пропорциональна концентрации витаминов в исследуемом растворе. Поэтому витамины можно определить фотоколориметрически, например витамин В1 – при помощи диазореак-тива и т.д. Эти методы позволяют судить как о наличии витаминов, так и о количественном содержании их в исследуемом пищевом продукте или органах и тканях животных и человека. Встречаются трудности при подборе специфического реактива для взаимодействия с определенным витамином. Некоторые витамины обладают способностью поглощать оптическое излучение только определенной части спектра. В частности, витамин А имеет специфичную полосу поглощения при 328-330 нм. Измеряя коэффициент поглощения спектро-фотометрически, можно достаточно точно определить количественное содержание витаминов в исследуемом объекте. Для определения витаминов В1, В2 и других применяют флюорометрические методы. Используют и титриметрические методы — например, при определении витамина С применяют титрование раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола.

Список использованной литературы:

1. ГОСТ 25999-83. Продукты переработки плодов и овощей.

2. Методы определения витаминов B1 и B2. -М.Госкомитет СССР по стандартам, 1984, с.11.

3. Витамины. Под. ред. Смирнова В.Г. -М.: Медицина, 1974. — 496 с.

4. Березовский В.М. Химия витаминов. — М.: Пищепромиздат, 1959.

5. Степанова Е.Н., Сапожникова Г.А., Нефедова Р.С. Сравнительное изучение различных методов определения рибофлавина в пищевых продуктах. //Вопросы питания. — 1969. — Т.28, № 5. — С. 14-18.

6. Экспериментальная витаминология. Под. ред. Ю.М. Островского. — Минск, 1979. — С. 224 — 266.

7. Тутельян В.А., Суханов Б.П., Австриевских А.Н., Позняковский В.М. Биологически активные добавки в питании человека. — Томск: Изд-во НТЛ, 1999.-296 с.

8. Интернет – www.himik.ru; www.vitamin.ru;

www.ronl.ru

Диссертация на тему «Определение витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в премиксах, биологически активных добавках и пищевых продуктах» автореферат по специальности ВАК 02.00.02 - Аналитическая химия

1. Сенов П.Л. Фармацевтическая химия// М.: Медицина -1978. С. 431-448.

2. НД 42-10173-99 Тиамина гидрохлорид//Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-1999. 10 с.

3. НД 42-10207-01 Рибофлавин// Фармакопейный Государственный комитет.- М.-.-2001.- 14 с.

4. НД 42-10360-99 Никотинамид// Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-1999.-7 с.

5. НД 42-7050-97 Ниацин// Фармакопейный Государственный комитет.-М.:-1997. -9 с.

6. НД 42-10171-99 Кальция D-пантотенат// Фармакопейный Государственный комитет,- М.:-1999.-9 с.

7. НД 42-7593-97 Пиридоксина гидрохлорид// Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-1997.- 7 с.

8. НД 42-10174-99 Фолиевая кислота// Фармакопейный Государственный комитет,- М.:-1999,- 10 с.

9. Мелентьева Г.А. Фармацевтическая химия// М: Медицина. 1976. - 828 с.

10. ГОСТ 7047-55. Витамины А, С, Д, Вь В2 и PP. Отбор проб, методы определения витаминов и испытания качества витаминных препаратов// М.: -Госстандарт России. -1981. -45 с.

11. Колосова И.Ф., Филимонов В.Н., Балятинская JI.H. Разделение синтетических витаминов группы В методом ион-парной высокоэффективной жидкостной хроматографии// Ж. физ. химии 1994. - Т. 68. - N 10. - С. 1832-1834.

12. Государственная фармакопея СССР, XI изд., вып.2// М.: Медицина.- 1998. -397 с.

13. Sane R.T., Ghorpade U.A. Colorimetric estimation of vitamin B, pharmaceutical preparations //Acta vitaminol et enzymol. 1983. - V.5, №1.-P. 29-34.

14. Abdel-Hamid M., Baraiy M., Hassan E. Spectrophotometry determination of ascorbic acid and thiamine hydrochloride in pharmaceutical products using derivative spectrophotometry//Analyst. 1985. - V.110, №7. -P. 831-835.

15. Lopez Gimenez J. M., Bosch Serrat Y.F. Nuevo metodo colorimetrico dedeterminacion de vitamina B. en medicamentos//An. Real. Acad. Farm. -1987. -V.53, №2. -P. 261-268.

16. Viswanan M.V. A colorimetric method for the estimation of vitamin B, in some pharmaceutical dosage forms//Indian J. Pharm. Sci. 1986. - V.48, №3.-P. 80-82.

17. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов// Под ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна.-М'.: Брандис, Медицина, 1998.-324 С.

18. Bognar A. Bestimmung von Riboflavin und Thiamin in Lebensmittel mit Hilfe Hochdruch Flussigkeits - Chromatografie (HPLC)//Detsch. Lebensmittel Rasch. - 1981. - V. 77, №12. - P. 431-436.

19. Fellman J.K., Artz W.E. Simultaneous determination of thiamin and riboflavin in selected foods by high-performance liquid chromatography.// J. Food Sci. -1982. V.47, №6. -P. 2048-2050.

20. Augustin Y. Simultaneous determination of thiamin and riboflavin infoods by liquid chromatography//!. Assoc. Offic. Anal.Chem. 1984. - V.67, №5. -P. 1012-1015.

21. Arella F., Lahely S. Liquid chromatography determination of vitamins B, and B2 in foods// Food Chem. 1996. - V.56, №1.-P. 81-86.

22. Halmingh O., Kerkdijk H., Supel H. Automated determination of vitamin A and E in serum by on-line SPE-HPLC// Pittsburg Conf. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc. Atlanta. - 1997. P1TTC097: Book Abstr. - P. 561.

23. Amin ML, Reusch J. High-performance liquid chromatography of water-soluble vitamins. Simultaneous determination of vitamins Bb B2, B6 and Bi2 in pharmaceutical preparations//!. Chromatogr. 1987. - V.390, №2. - P. 448-453.

24. Maeero D.Y., Wetzel D.L. Simultaneous determination of thiamin and riboflavin in enriched cereal based products by high-performance liquid chromatography using selective detection// J. Chromatogr. 1984. - V.29, №1.- P. 281-287.

25. Chase G.W., Landen O., Errenmitter R.R., Soliman A.G. Liquid chromatographic determination of thiamine, riboflavin and pyridoxine in infanl formula// J. AO AS. Int. 1992. - V.75, №3. - P. 561-565.

26. Vandenberg H., Vanschaik F., Finglas P. 3rd EuMat intercomparison on methods for the determination of vitamins Bb B2 and B6 in food// Food Chem. -1996. V.57, №L- P. 101-108.

27. ГОСТ 26573-93. Премиксы. Методы определения витамина А// М.: -Госстандарт России. 1993.- 50 с.

28. Государственная фармакопея СССР, X изд.// М.: Медицина.-1998. -397 с.

29. Walkers М.С., Carpenter В.Е., Cooper E.L. Simultaneousdetermination of thiamin and riboflavin in multivitamin product by high-performance liquid chromatography/Л. Pharm Sci. 1981. - V.70, №1. -P. 99-101.

30. Vedrina-Dragojevic Irena, Sebecic Blazenka. Modifid lumiflavin procedure for determination of riboflavin in soyabeat// Z. Lebensm.-Untersuch. und Forsch.-1986.-V. 182,№2.-P. 127-13 0.

31. Ahmad Jgbal, Rapson David H. Multicomponent spectrophotometry assay of riboflavine and photoproducts// J. Pharm. And Biomed. Anal. 1990. -V.8,№>3.-P. 217-223.

32. Olmedilla В., Granado F., Blanco I., Rojas-Hidalgo E. Determination of nine carotenoids, retinol, retinyl palmitate and a-tocopherol in control human serum using two internal standards// Food Chem. 1992. - V.45, №3. - P. 205-213.

33. Gamache P.H., Acworth I.N. Simultaneous analysis of fat-soluble carotenoids, retinoids, tocopherols, vitamin К and coenzyme Qio in plasma// Pittsburg Conf. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc. New Orleans. - 1998. РГГКХЖ98: Book Abstr. - P. 1619.

34. Abd El- Gawad LA., El-Abd M.M., Kagab F.H. Study on vitamin B2 in milk and some milk products// Egypt. J. Food. Sci. 1998. - V.16, №1-2. - P. 175-192.

35. Артемченко С.С, Петренко В.В. Способ количественного определения тиамина бромида// А.С. 1163225. СССР. - 1985. - МКИ G 01 N 21/78.

36. Barua А.В., Furr Н.С., Jamickbuckner D., Olson J.A. Simultaneous analysis of individual carotenoids, retinol, retinyl esters and tocopherols in serum by isocratic nonaqueous reversed-phase HPLC// Food Chem. 1993. - V.46, №4.-P. 419-424.

37. Будников Г.К., Улахович H.A., Медянцева Н.П. . Основы электрохимической химии// Из-во Казанского ун-та. -1986. -288 с.

38. ФР. 1.31.2004.01071, МУ 08-47/141 «Биологически активные добавки. Вольтамперометрический метод определения массовых концентраций витаминов С, В., В2 и кверцетина». -2004. -55 с.

39. Тенчева Ж. и др. Способы количественного определения витаминов В. В2, В6, РР в препаратах В-комплекса методом жидкостной хроматографии// Фармация. 1990. - Т.40, №3. - С. 6-11.

40. Ульянова С.В., Щавлинский А.Н., Морев С.Н., Дмитренко Т.С., Финкельштейн Е.И. Анализ водорастворимых витаминов В., В2, Вб и никотинамида в драже "Гексавит" методом ВЭЖХ// Фармация. 1993. - Т. 42. -N3. - С. 50-51.

41. Лутцева А.И. и др. Анализ и стандартизация водорастворимых витаминов// Фармация. 1998. - Т.47, №5. - С. 22-29.

42. Филимонов В.Н., Сирицо С.И. Хроматографическое разделение при аналитическом контроле водорастворимых витаминов и физиологически активных кислот в многокомпонентных рецептурах// Сорбц. и хроматогр. процессы 2005. - Т. 5. - N 2. - С. 188-201.

43. Староверов В.М., Дейнека В.И., Григорьев А.М1, Прохода Е.Ф., Покровский М.В., Иванов В.В. ВЭЖХ-анализ водорастворимых витаминов в составе поливитаминного сиропа "Олиговит"// Хим.-фармац. ж. 2004. - Т. 38.-N3.-C. 54-56.

44. Голубицкий Г.Б. Одновременное количественное определение водо- и жирорастворимых витаминов и консервантов и использованием колонки нового типа Chromolith// Заводская лаборатория 2008. - Т. 74. - N 3. - С. 10-14.

45. Власова И.В., Масякова Е.Н., Богданова Л.А., Пермякова НЛО. Определение водорастворимых витаминов в премиксах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии// Заводская лаборатория -2007.-Т. 73.-N9.-С. 25-27.

46. Лутцева А.И., Маслов Л.Г., Евтушенко Н.С., Середенко В.И. Анализ и стандартизация водорастворимых витаминов// Фармация 1998. -Т. 47,-N5.-С. 22, 27-29.

47. J. Microniet. Chase G. William, Soliman A. M. Analysis of thiamin and riboflavin, pyridoxine and niacine in multivitamin premixes and supplemens by high-performance liquid chromatography// Anal.- 1990. V.7, №1. -P. 15-25.

48. Сапрыкин JI.B., Гусаров A.A., Киселева H.B. Определение витамина В6 и полупроводников его синтеза методом ВЭЖХ в ион-парном варианте и с применением динамически модифицированного силикагеля// Ж. анал. химии 1992. - Т. 47. - N 12. - С. 2066-2071.

49. Vails Felicidad, Sancho M.Teresa, Fernandez-Muino Miguel A., Checa Martin A.Determination of vitamin B6 in cooked sausages.//Oпpeдeлeниe витамина B6 в вареной колбасе// J. Agr. and Food Chem. 2001. - Vol. 49. - N 1. -P. 38-41.

50. НД 42-11946-01. Поливитаминная смесь// Фармакопейный Государственный комитет.- М.-.-2001. -29 с.

51. Ang Catharina Y.W., Moseley Frederick A. Determination of thiamin and riboflavin in meat products by high-pressure liquid chromatography// J.Agr. and Food Chem. 1980. - V.26, №3. - P. 483-486.

52. Lumley I.D., Wiggins R.A. Determination thiamin and riboflavin in foodtuuffs using high performance liquid chromatography// Analyst. 1981. -V.106, №1267.-P. 1103-1108.

53. Bognar A. Bestimmung von Riboflavin und Thiamin in Lebensmittel mit Hilfe Hochdruch Flussigkeits - Chromatografie (HPLC)// Lebensmittechen und gerichte Chem. - 1982. - V. 36, №2. - P. 33-34.

54. Wimmalasiri P., Wilis R. Simultaneous analysis of thiamin and riboflavin in foods by high-performance liquid chromatography.// J. Chromatogr. -1985.-V.32, №18. P. 412-416.

55. Vails Falicidad, Sancho M. Teresa, Fernandez-Muino Migel. Determination of thiamin and riboflavin in cooked sausages// J. Agr. and Food Chem. 1999. -V.47, №3.-P. 1067-1070.

56. Ujile Takashi, Tsutake Yukiko, Morita ICohei// Vitamins. 1990.1. V.64, №7.-Р. 379-385.

57. Motoe К// Vitamins. 1994. - V.68, №7. - P. 379-384.

58. Vails Felicidad, Checa Martin A// J. Agr. and Food Chem. 1999. -V.47, №1.-P. 170-173.

59. Hurst W. Jeffrey, Mekim J.M. The HPLS analysis of thiamin in milk chocolate// Int. J. Vitam. and Nutr Res. 1983. - V.53, №3. - P. 239-242.

60. Vidal-Valverde Conception, Reche Angelina. An improved high performance liquid chromatographic method for thiamine analysis in foods// Z. Lebensm.-Untersuch und Forsch. 1990. - V.191, №4-5. -P. 313-318.

61. Whitworth Vivienne A., Metcalfe Lorraine. A rapid method for the determination of thiamine in various foods using high-pressure liquid chromatography// Can. Inst. Food. Sci. and Technol. J. 1985. - V.18, №3.

62. Ishiguro Kozo. The determination of thiamine and ascorbic acid contents in sweet potato by high performance liquid chromatography// Bull. Fac. Educ. Kanazawa Unit. Nat. Sci. 1987. - №36. - P. 1-5.

63. Nicolas Edgar C, Peender Kathleen A. Fast and simple liquid chromatographic determination of thiamine in infant formula, milk and other foods// J. Assoc. Offic. Anal. Chem. 1990. - V.73, №5. - P. 792-798.

64. Ofles Semik. Analysis of thiamin in foods by high-pressure liquid chromatography// 35th IUPAC Congr. Istambul. - 1995 - P. 15.

65. Blanco D., Laneza M.B., Gutternez M.D. A paired ion liquid chromatographic method for thiamine determination in selected foods// J. Lig. Chromatogr. andRelat. Technol. 1996. - V. 19, №13. -P. 2155-2164.

66. J. Assoc. Ashoor Samy H., Knox Michael J. Improved liquid chromatographic determination of riboflavin in milk and dairy products// Offlc. Anal. Chem. 1985. - V.68, №4. - P. 693-696.

67. Stancher В., Zonta F.J. High performance liquid chromatographic analysis of riboflavin with visible absorbance detection in Italian cheeses// Food Sci. -1986.-V.51 ,№3.-P. 857-858.

68. Moll N. Reversed phase high-performance liquid chromatography determination of riboflavin in alcoholic beverages// J. Assoc. Offic. Anal. Chem. -1988. V.66, №3. - P. 753-769.

69. Арбатский А.П., Афоньшин Г.Н., Востоков В.М. Определение витаминов в кормовых и пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии// Ж. анал. Химии 2004.Т.59.- N 12. - С. 13041307.

70. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок// М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России.- 2004.-240 с.

71. Sampson D.A., Wen Q.B., Lorenz K. Vitamin B6 and pyridoxine glucoside content of wheat and wheat flours// Содержание витамина Вб и глюкозида пиридоксина в зерне пшеницы и пшеничной муке// Cereal Chem. -1996. Vol. 73. - N 6. - P. 770-774.

72. Kocs Е., Fekete J. Bres, В2.- vitamin meghatarozasa premixben hagyhatekonysaqy folyadekkromatograflaval// Magy kern folyorirat. 1988. -V.94,№ 311.-P. 505-510.

73. Щукина О.Г., Моргун B.A., Левицкий Ю.А. Применение хроматографии в пищевой, микробиологической и медицинской промышленности// Материалы Всес. конф. Геленжик. - 1990.

74. Fernando Sharma M., Murphy Patricia A. HPLC determination of thiamin and riboflavin in soyeans and tofu/7 J.Agr. and Food Chem. 1990. - V.38, №1.-P. 163-167.

75. Кожанова JI.А., Барам Г.И., Федорова Г.А. Определение водо- и жирорастворимых витаминов в премиксах методом ВЭЖХ// Всерос. конф. "Хим. анал. веществ и матер.", Москва, 16-21 апр., 2000. М.: Изд-во ГЕОХИ РАН, 2000. - С. 70.

76. Tabekha М.М., El-Bastawesy М.А. A modified method for analysis thiamine, riboflavin and niacin content in rise and product by HPLC// Food.Chem. 1995. - V.12,№5. - P. 34-37.

77. Panijapan Bhinyo, Kimura Mieko, Itokawa Yoshihori. Separation and determination of thiamine by reversed-phase high performance liquid chromatography// J. Chromatogr. 1983. - V.258, №2. - P. 307-309.

78. Bontemps Jose, Bettendorff Lucien, Lombet Jacques.// J. Chromatogr. -1984. V.295, №2. - P. 486-491.

79. Bomtemps J., Bettendorff L., Dandrifosse G. Sensitization of thiamine analysis by the peak compression technique// J. High Resolut. Chromatogr. And Chromatogr. Commun. 1984. - V.7, №8. - P. 490-491.

80. Utecht Ronald E. Identification and quatitation of riboflavin in vitamin tablets by total luminescence spectroscopy// J. Chem. Educ. 1993. - V.70, №8.-P. 673.

81. Sastiy C.S.P., Singh N.R., Reddy M.N. New spectrophotometric metods of for the determination of riboflavin// Analysis. 1986. - V.14, №7. - P. 355-356.

82. Бекжанова E.E., Тахиров M.T. Определение рибофлавина в воде водоемов флуоресцентным методом// Гигиена и санитария. 1993. - № 6, -С. 72-73.

83. Barary М., AbdeJ-Hamid М., Hassan Е. Simultaneous spectrofluorimetric determination of thiamine in pharmaceuticals multivitamin preparations// Pharmazie. 1986. - V.41, №7. - P. 483-485.

84. Racegly A. S., Eryilmaz H. Determination of vitamin Bi by the thiochrome reaction using copper (II)// Fen bilimler derg. Marmara Univ. 1987. -№4. - 125-129.

85. Gonsales V., Rubio S., Gomes-Hens A. Fluorimetric determination of thiamine and cocarboxylase by a differential rate method// Anal. Lett. 1988. -V.21, №6.-P. 993-1008.

86. Ay din A., Goksel F. Thiamine determination with hypobromide by the thiochrome reaction// Chim. acta turc. 1988. - V.16, №3. - P. 313-325.

87. Saracogly A.S., Kunduz N. A new reagent for the conventional thiochrome reaction// Fen bilimler derg. Marmara Univ. 1988. - №5. - P. 159-167.

88. Marquez M., Silva M., Perez-Bendito D. Performance of the continuous addition of reagent technique in fluorimetric reaction-rate methods. Determination of thiamine at the nanamolar level//Anal. Lett. 1989. -V.22, №112.-P. 2485-2500.

89. Takasuka S., Kawahara A., Wakida S// Бунсэки катаку. 1991. -V.40, №3.-P. 115-118.

90. Jie N., Yang J., Zhang Z. Fluorimetric determination of thiamine with cobalt (II)// Anal. Lett. 1993. - V.26, №10. - P. 2283-2289.

91. Goksin A., Goksel F., Ibis С Thiamine determination// 35th IUPAC Congr. -Istambul.-1995.-P. 686.

92. Mellurray C.H., Blanchflower W.J., Rice D.A. Influence of extraction techniques on determination of a-tocopherol in animal feedstuffs//J. Assoc. Offic. Anal. Chem. 1980. - V.63, № 6. -P. 1258-1261.

93. Полянский K.K., Рудаков О.Б. Современные методы контроля качества и безопасности молочных продуктов// 41 Отчетная научная конф. за 2002 год., Воронеж, 2002 Изд-во ВГТА, 2003. -257 с.

94. Gliszczynska-Swiglo A., Sikorska Е. Simple reversed-phase liquid chromatography method for determination of tocopherols in edible plant oils// J. Chromatogr. 2004. Vol. 1048. - N 2. - P. 195-198.

95. Макаров В.Г., Краснов К.А., Пименов A.E., Северцев В.А., Габидова А.Э., Косенко Н.В. Исследование химического состава масла шиповника// 5-й Рос. нац. конгр. "Человек и лекарство", Москва, 21-25 апр.,1998.: М.- Фармединфо, 1998. 659 с.

96. ГОСТ P 50928-96. Премиксы. Методы определения витаминов А, D, Е// М.: -Госстандарт России. 1996,- 11 с.

97. В.Н. Скурихин, С.В. Шабаев. Методы анализа витаминов А, Е, D и каротина// М.: Химия, 1996. 95 с.

98. Филимонов В.Н., Балятинская JI.H., Колосова И.Ф. Определение жиро- и водорастворимых витаминов в промышленных водах методом ВЭЖХ// Тез. докл. 1 экол. симп. "Анал. вод", 26-28 июня, 1990 Воронеж, 1990.-С. 134.

99. Стыскин E.JL, Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография// М.: 1986. 214 с.

100. Современные методы анализа и оборудование в санитарно-гигиенических исследованиях// М.:- Министерство здравоохранения Российской Федерации. 1999.-495с.

101. Finglas P.M., Faulks R.M. The HPLC analysis of thiamin and riboflavin in potatoos// Food.Chem. 1984. - V.15, №1. - P. 37-44.

102. ГОСТ P 50929-96. Премиксы. Методы определения витаминов группы В// М.: -.Госстандарт России. 1997.-35 с.

103. Яшин Я.И., Яшин А.Я. Анализ пищевых продуктов и напитков методами высокоэффективной жидкостной и ионной хроматографии с электрохимическими детекторами// Ж. анал. химии 2004. - Т. 59. - N 12. - С. 1237-124.

104. Филимонов B.H., Сирицо С.И., Макрушин H.A. Особенности хроматографического разделения водорастворимых витаминов в изократической ОФ ВЭЖХ// Сорбц. и хроматогр. процессы 2006. - Т. 6. - N 2.-С. 191-197.

105. Zhang Yantu, Zhang Zhujun, Yang Weiping, Tian Suikang// Определение тиамина и рибофлавина методом высокоэффективными хроматографиями с обращенным детектированием// SepuChin. J. Chromatogr. = Chin. J. Chromatogr. 2003. - Vol. 21. - N 4. - P. 391-393.

106. Huang Xiang-dong, Li Zhen-yu. Разделение и определение водорастворимых витаминов в комплексной таблетке витаминов В с помощью ВЭЖХ ионных пар на обращенной фазе// Chin. Pharm. J. 1991. -Vol. 26.-Nl.-P. 34-36.

107. С.Н.Ланин, Ю.С.Никитин. Прогнозирование удерживания в высокоэффективной жидкостной хроматографии. Межмолекулярные взаимодействия в подвижной фазе// Ж. анал. химии 1991. - Т. 46. - N 10. - С. 1971-1980.

108. Замуруев О.В. Нормально-фазовая изократическая ВЭЖХ жирорастворимых витаминов: закономерности удерживания, оптимизация состава подвижной фазы и разработка аналитических методик// Автореф. дис. канд. хим. Наук. М., 2003. 21 с.

109. Филимонов В.Н.,Замуруев О.В., Балятинская Л.Н. Интерпретация закономерностей удерживания жирорастворимых витаминов с позиций квазихимической модели.// Сорбционные и хроматографические порцессы-2004. Т. 4. - N 3. - С. 263-272.

110. Матусова C.M., Брыкина Г.Д., Шпигун О.А. Изучениемеханизмов взаимодействия сорбатов с новой неподвижной фазой на основе фталоцианата цинка// Теория и практика хроматографии. Применение в нефтехимии. Самара: Универс-групп, 2005. - С. 74.

111. Демидова О.А. Оценка содержания водорастворимых витаминов в лекарственных препаратах и биологических жидкостях методом ВЭЖХ// Автореф. канд. фармацевт, наук. М., 2002. 26 с.

112. Степанова E.H., Сапожникова Г.А., Нефедова P.C. Сравнительное изучение различных методов определения рибофлавина в пищевых продуктах//Вопросы питания. 1969. - Т.28, № 5. - С. 14-18.

113. Адлер Ю.П., Маркова Е.В., Грановский Ю.В. Планирование эксперимента при поиске оптимальных условий. М.: Наука, 1976. -280 с.

114. Короткова Е.И. Планирование и организация эксперимента// Учебное пособие, Томск: Изд-во ТПУ, 2003, 92 с.

115. Румшинский JI.3. Математическая обработка результатов эксперимента// М: Наука, 1971.-192 с.

116. НД 42-11946-01. Поливитаминная смесь// Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-2001. -29 с.

117. В заключение выражаю огромную благодарность д.т.н., профессору, директору ООО «Артлайф» Австриевских А.Н. за предоставленную возможность выполнения работы на базе лаборатории предприятия.

www.dissercat.com

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) в фармацевтическом анализе, Фармацевтика

Курсовая работа по предмету: Фармацевтика (Пример)

Содержание

Введение 3

1. Основные теоретические положения метода 5

1.1. Общие сведения. Классификация 5

1.2. Основные величины жидкостной хроматографии 9

2. Применение метода ВЭЖХ в фармацевтическом анализе 10

2.1. Обращенно-фазовая ВЭЖХ 10

2.2. Аппаратура ВЭЖХ 14

2.3. Особенности практического применения метода ВЭЖХ 16

2.4. Анализ лекарственных средств методом ВЭЖХ 19

3. Теоретическое обоснование механизма разделения в ВЭЖХ 30

Заключение 33

Список использованной литературы 34

Приложение 1 38

Приложение 2 39

Приложение 3 40

Приложение 4 41

Приложение 5 43

Содержание

Выдержка из текста

Введение в состав подвижной фазы

2. метанола позволило сократитьвремя процесса, однако пик НА имел высокую асимметрию и пик Рб накладывался на хвост пика НА. После снижения концентрации метанола до

1. пики Рб и НА не перекрывались, однако асимметрия пика НА увеличилась. С целью ее снижения в подвижную фазу, содержащую

1. метанола, вводили ацетонитрил. В результате была подобрана подвижная фаза — водно-органическая фаза, состоящая из фосфатного буфера рН 7,0, содержащего

1. метанола и 0,5% ацетонитрила, которая обеспечила эффективное разделение всех 5 компонентов (рис. 13).

Общее время хроматографированияпри этом составило

3. мин, а времена удерживания компонентов (мин.): у ЯК — 5,3, Пц —

15.

ПГ — 19,3, НА —

26. Рб — 31. Количественное определение проведено методом внешнего стандарта с использованием растворов стандартных образцов индивидуальных компонентов. Метрологические характеристики предлагаемой методики количественного определения изучены на модельных смесях и представлены в таблице 3 (среднее значение из 5 повторений).

Таблица

3. Метрологические характеристики определения среднего результата компонентов в составе модельных смесей препарата «Аданол» методом ВЭЖХ (р=0,95, n = 5) Компонент fS2SSxt (P, f) x, мг, мг,%ЯК 45,952,441,092,786,783,043,0Пц40,9720,9860,4412,782,741,231,8Рб 41,3731,1720,5242,783,251,461,9НА 40,0430,2070,0922,780,570,261,2ПГ 40,1 630,1280,0572,780,360,162,1Рис.

13. Хроматограмма в фосфатном буфере с рН 7,0, содержание ацктонитрила — 1%, метанола — 0,5%; НК — никотиновая кислота, ГК — гипоксантинКак следует из таблицы 13, с помощью разработанной методики в препарате «Аданол» можно определять все 5 компонентов с относительной ошибкой не более 3% с доверительной вероятностью 95%.Кроме пиков основных компонентов препарата, на полученной хроматограммеидентифицированы также пики гипоксантина и никотиновой кислоты, присутствующих в исходных субстанциях, а также образующихся в процессе гидролиза Рб и НА соответственно. Таким образом, разработанная методика позволяет качественно и количественно определить эти посторонние примеси в препарате. Теоретическое обоснование механизма разделения в ВЭЖХНаиболее удачными и распространенными объяснениями механизма разделения в ВЭЖХ ОХ являются теория, использующая представления о параметрах растворимости Гильдебранта, и сольвофобная теория Хорвата-Меландера[12].

По теории, основанной на параметрах растворимости Гильдебранта, удерживание определяется молекулярными взаимодействиями разделяемых веществ с подвижной и неподвижной фазой. Зависимость фактора емкости вещества от состава подвижной фазы описывается уравнениемlnk= A2 + B+ C, где - объемная доля органического компонента (модификатора) в подвижной фазе, А, В и С- константы. Однако поведение соединений сложного строения с несколькими функциональными группами часто не удается описать данной зависимостью. Более адекватно закономерности удерживания сорбатов в ОФ ВЭЖХ описываются сольвофобной теорией. Хорвартом и Миландером впервые было показано, что водные элюенты, не содержащиеорганических растворителей, могли быть использованы для разделения полярных биологических молекул на октадецилсиликагеле. Даже при отсутствии органического компонента в элюенте, взаимодействие между растворенным веществом и привитыми углеводородными радикалами неподвижной фазы, являлось причиной удерживания растворенного вещества. Это позволило сделать вывод о том, что удерживание в обращено-фазовом варианте в основном определяется гидрофобными взаимодействиями. Важнейшую роль в понимании механизма удерживания обращенно-фазовой хроматографии сыграли работы Хорвата и его школы[12, 22−24].

Суть теории Хорвата заключается в принципиальном различии процессов сорбции на полярных поверхностях из относительно неполярных растворителей («нормально-фазовый режим») и сорбции из воды либо сильнополярных растворителей на неполярных поверхностях («обращенно-фазовый режим»).

В первом случае, молекулысорбатов и неподвижных фаз образуютассоциаты за счет кулоновских взаимодействий или водородных связей. Во втором случае, причиной ассоциации на поверхности являются сольвофобные взаимодействия в подвижной фазе. Для полярных подвижных фаз характерно сильное кулоновское взаимодействие и образование водородных связей между молекулами растворителей. Для того чтобы поместить в эту среду молекулу сорбата, необходимо образование"полости" между молекулами растворителя. Энергетические затраты на образование такой «полости» лишь частично покрываются за счет взаимодействия полярных групп в молекуле сорбата с полярными молекулами растворителя. В аналогичном положении по отношению к растворителюнаходятся и неполярные молекулы неподвижной фазы. С энергетической точки зрения более выгодно такое положение, когда поверхность раздела между полярной средой (растворителем) и неполярными фрагментами неподвижной фазы и молекул сорбатаминимальна. Уменьшение этой поверхности достигается при сорбции (рис. 14).

МолекулыРис. 14. К механизму ОФ хроматографии: а — сорбат в растворе; б — сорбат на поверхности неподвижной фазы. воды и органического растворителя обозначены светлыми и темными кружками соответственно. Процесс сорбции ионогенных веществтакже описывается сольвофобной теорией, однако такие сорбаты существуют в растворе, как в виде нейтральных молекул, так и в виде ионов со своими значениями фактора удерживания. В зависимости от рН среды изменяются соотношение различных форм в растворе и факторы удерживания. Меняя состав ПФ в ОФЖХ, можно изменять и удерживание в широких пределах, используя смеси воды с органическим растворителем — так называемым модификатором. Зависимость фактора удерживания компонента от состава ПФ описывается уравнениемlgk = b +pC, гдеC — концентрация органического модификатора в ПФ, b и p — константы. При постоянных условиях хроматографирования удерживание различных сорбатов определяется гидрофобностьюсорбатов, дипольныммоментом, объемом их молекул, поляризуемостью, уменьшением площади неполярной поверхности при сорбции. При описании взаимосвязи удерживания и свойств сорбатов наиболее популярны уравнения, связывающие факторы удерживания, измеряемые в хроматографической системе, с коэффициентами распределения (чаще всего в системе октанол-вода).

Для соединений близкой структуры наблюдается линейная зависимость между логарифмами коэффициентов распределения ифакторами удерживания: lgk' = a + blgPi , гдеPi, j- коэффициент распределения между водной и органической фазами. Во многих случаях логарифм фактора удерживания линейно связан с числом повторяющихся структурных фрагментов: lgk' = a + bn. Самым распространенным дескриптором является число атомов углерода. Эти соотношения полезны как при подборе состава подвижной фазы как при разделении, так и для идентификации компонентов смеси[25, 26].

Для решения конкретной задачи состав как ПФ, так и НФ должен быть тщательно подобран с точки зрения как физических, так и химических свойств ее компонентов. Общая схема выбора варианта ВЭЖХ в зависимости от природы разделяемых веществ показана Приложении 5. ЗаключениеВ настоящей работе рассмотрен метод высокоэффективной жидкостной хроматографии и его применение для фармацевтического анализа. Показано, что ВЭЖХ отличается от классического варианта колонками меньшего диаметром, меньшимразмером частиц сорбента, применением давления до 3107 Па для прокачивания элюента через колонку. Рассмотрены основные теоретические положения метода ВЭЖХ, основные особенности каждого из вариантов ее осуществления в зависимости от механизма удерживания разделяемых веществ неподвижной фазой. Описаны основные виды и характеристики хроматограмм; основные виды оборудования.

Более подробно рассмотрены типы применяемых детекторов. На основании проведенного в работе анализа имеющихся литературных данных Установлено, что для анализа лекарственных средств применяется в основном обращено-фазовая и ион-парная ВЭЖХ. Рассмотрены современные теоретические обоснования механизмов удерживания веществ. Обосновано, что удерживание в обращено-фазовом варианте в основном определяется гидрофобными взаимодействиями, в то время как ион-парная ВЭЖХприменима для ионогенных веществ. Указаны преимущества ОФ ВЭЖХ по сравнению с другими вариантами. Полученные в работе результаты показывают высокую эффективность использования метода ВЭЖХ при исследованиях ЛС за счет комбинации ограниченного числа сорбентов и неограниченного числа различных по составу подвижных фаз, использования различных видов детектирования, что обеспечивает возможность решения очень большого числа встречающихся на практике задачпо качественному (установление подлинности) и количественному (определение содержания основных компонентов и допустимых примесей) фармацевтическому анализу.

СписокиспользованнойлитературыГосударственная фармакопея СССР: 11-е изд. Вып.

2. Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний. — М.: Медицина, 1989. — 400 с. Медведев Ю.В., Раменская Г. В. и др. ВЭЖХ и СВЭЖХ как методы для определения лекарственных веществ в крови (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. — 2013. — № 4. — С. 45−51.Рейхард Д.В., Барам Г. И. и др. Высокоэффективная жидкостная хроматография в контроле качества лекарственных средств // Мед.вестник. — 2005. — № 2 (20−21).

— С. 705−706. — [Электронный ресурс].

— режим доступа: www.medvestnik.ru/library/article/5890.Куркина А.В., Калабухова Е.А. и др. Возможности применения метода ВЭЖХ для стандартизации цветков пижмы обыкновенной // Совр. проблемы науки и обр.: Фарм. науки. — 2013. — № 5. — [Электронный ресурс].

— режим доступа: www. science-education.ru/pdf/2013/5/10 031.pdf .Бубунчикова В.Н., Сухомлинов Ю.А. Изучение состава фенольных соединений лапчатки прямостоячей методом ВЭЖХ // Вестник Воронежского гос. ун-та: сер.: Химия. Биология. Фармация. — 2005. — № 2. — 160−161. Гармонов С.Ю., Салахов И.А. и др. Фармацевтический анализ противовоспалительных и анальгезирующих лекарственных средств методом ВЭЖХ // Ученые Т. 152, кн.3. — С. 110−113.Григорьев А.М., Староверов В.М. и др. Новые экспресс-методики определения жирорастворимых витаминов в сиропе «Олиговит» и таблетках «АЛФАВИТ» методом ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2006. — Т. 6, № 1. — С. 62−69.Евгеньев М.И., Левинсон Ф.С.и др. Влияние кислотности замещенных 5,7-динитробензофуразановых и нитробензодифуразановых производных ароматических аминов на элюирование в ОФ ВЭЖХ // Вестник Казанского технол.

ун-та. — 2008. — № 1. — С. 52−56.Евгеньев М.И., Евгеньева И.И. и др. Изучение параметров разделения 5,7-динитробензофуразановых и нитробензофуразановых производных ароматических аминов в ВЭЖХ//Вест.Казан.технол.ун-та. — 2004. — № 1. — С.81−88.Писарев В.В., Смирнова Л.Б. и др. Определение азитромицина в плазме крови методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием // Клиническая фармокинетика. — 2004. — № 1. — С. 23−26.Фогт В.П., Степанов А.С., Степанова Т.А. Использование методов ВЭТСХ и ВЭЖХ в разработке экстракта противодиабетического // Химия растительного сырья. — 2008. — № 4. — С. 75−78.Буланова Л.В. Хроматография в медицине и биологии: учебное пособие /А.В. Буланова, Ю.Л. Полякова; Федер. агенство по образованию. — 2-е изд. — Самара: Изд-во «Самарский университет», 2006. 116 с. Пунгер В, Григорьева Л. Инструментальный анализ: Учебн. пособие для химико-технологич. спец-тей проф.центров. — Вируамааский колледж Таллиннского технич. ун-та, 2012. — [Электронный ресурс].

— режим доступа: itdvnzknu.com.ua/attachments/article/215.pdf .Дубовик Д.Б., Иванов А.В. и др. Влияние сильного электролита в элюенте на удерживание гетерополикислот фосфора и кремния в ион-парной ОФ ВЭЖХ // Вестн. Моск. ун-та: Сер.2: Химия. — 2002. — Т. 43, № 5. — С. 300−303.Дутов А., Летунов В. и др. Определение вальпроевой кислоты в биологических жидкостях методом ВЭЖХ с УФ-детекцией и предколоночнойдериватизациейфенацил бромидом // Клинич.фармокин. — 2005. — № 1. — С. 34−37.Мельников И.О., Назимов И.В., Глубоков Ю.М. Анализ низкомолекулярных аминотиолов методами капиллярного электрофореза и ВЭЖХ с флуоресцентной и прямой УФ-детекцией//Совр.наук.технол. — 2005. — № 3. — С.40−41.Малинка М.К., Полуэктова М.В., Яшин А.Я. Определение гомоцистеина в плазме методом ВЭЖХ с амперометрическим детектором // Сорбционные и хроматографические процессы.

— 2007. — Т. 7, № 1. — С. 60−65.Сапрыкин Л.В. и др. Прямой анализ бетаинов в биологических жидкостях методом ВЭЖХ // Сорбц.ихроматогр.пр-сы. — 2006. — Т. 6, № 1. — С.114−122.Дейнека В.И., Хлебников В.А. и др. Особенности хроматографического поведения берберина в условиях обращено-фазовой ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2007. — Т. 7, № 2. — С. 228−235.Филимонов В.Н., Сирицо С.И. Параметры гидрофобности для прогнозирования удерживания водорастворимых витаминов неполярным сорбентом в условиях обращенно-фазовой ВЭЖХ // Известия ВУЗов. Сер.: Химия и химическая технология. — 2009. — Т. 52, № 6. — С. 33−35.Рудаков О.Б., Хорохордина Е.А. и др. Определение капсаициноидов и ионола в перцовых пластырях методом микроколоночной ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2008.

— Т. 8, № 2. — С. 339−345.Horvath, Cs., Melander, W., Molnar, J. Solvophobicinteractionsinliquidchromatographywithnonpolarstationaryphases / Cs. Horvath, W. Melander, J. Molnar // J. Chromatogr. — 1976. — V.125. — N 21. — Р. 129−156. Ногvаth, Cs., Melander, W. Liquid chromatography with hydrocarbonaceous bonded phases; theory and practice of reversed-phase chromatography / Cs. Horvath, W. Melander //J.Chromatog.Sci.-1977. — V.15. — N 29. — Р.393−404. Horvath, Cs., Melander, W., Molnar, J. Liquid chromatography of ionogenic substances with nonpolar stationary phases / Cs. Horvath, W. Melander, J. Molnar // Anal. Chem. — 1977. — V.49. — N 21. — Р. 142−154. Шумская Н.Ю. Физико-химические закономерности удерживания производных адамантана в жидкостной хроматографии: Дис. … канд. хим. наук: 02.00.04 Саратов, 2005. — 156 с.- [Электронный ресурс].

— режим доступа: www.dslib.net/fiz-xim.html .Пирогов А.В., Бендрышев А.А. и др. Определение жирорастворимых витаминов в зерновых премиксах, блендах, таблетированных биологически активных добавках и медпрепаратах методом ВЭЖХ // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. — 2008. — Т. 74, № 3. — С.1 — 2. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография: Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии. — Рига: Зинатне. — 1988. — 390 с. А.Ю. Петров, С.А. Дмитриченко, А.Л. Коваленко, Л.Е. Алексеева «Стандартизация препарата «Аданол» // Фармация — № 5 — 2002 — с.11−13.М.А. Казьмин, А.В. Михалев, А.П. Арзамасцев «Определение компонентов препарата «БИЦИЛЛИН-3» методом ВЭЖХ» // Фармация — № 5 — 2002 — с.5−6.Приложение

1 Свойства растворителей для ВЭЖХРастворительПредел прозрачности для УФ-света. имЭлюирую-щая сила 0 на силикагелеПараметр Р’Параметр SГруппа селек-тивнос-тиА цетонитрил 1900,505,83,1VIВода-1,5010,20,0VIIIГексан 1900,010,1--Диоксан 2150,454,83,5VIМетанол 2050,75,13,011Метиленхлорид 2330,323,1-VНропанол-22 050,553,94,211Тетрагидро-фуран 2120,444,04,4IIIТолуол 2850,12,4-VIIТриэтиламин--1,9-IУксусная кислота--6,0-VIХлороформ 2450,264,1VIIIЭтанол 2100,64,3−3,6IIЭтилацетат2560,384,4VIПриложение

2 Сорбенты для обращено-фазовой ВЭЖХСорбентSp, м 2/гДиаметрпор, нмДиаметрчастиц, мкмФорма частицАдсорбсил С 845 065,10НерегулярнаяАдсорбсил С 1 845 065,10НерегулярнаяАдсорбсфер С 820 083,5,

10 СферическаяАдсорбсфер С 1 820 083,5,

10 СферическаяАлтима С 8 105,10СферическаяАлтима С 18 105,10СферическаяАльфаБонд С 830 012,55,10НерегулярнаяАльфаБонд С 1 830 012,510НерегулярнаяМ-Бондопак С 183 001 010НерегулярнаяМ-Бондопак Фенил 3 001 010НерегулярнаяГиперсил С 8 170 103,5,

10 СферическаяГиперсил ОДС 170 103,5,

10 СферическаяЗорбакс С 835 078СферическаяЗорбакс ОДС 35 078СферическаяДиасорб-130-С 1300—350 115, 7,

10 НерегулярнаяДиасфер 130-С 8300−350 115, 7,

10 СферическаяДиасфер-130-С 18 Т 300−350 115, 7,

10 СферическаяЛихросорб RP-2 300 610НерегулярнаяЛихросорб RP 18 300 105,10СферическаяЛуна С

18 3,5СферическаяЛуна С

5 СферическаяНуклеосил С 18 103, 5, 7,

10 СферическаяПартисил ОДС-3 510НерегулярнаяСепарон С 18 105,10СферическаяСиласорб С 2 105, 7, 10, 15, НерегулярнаяСиласорб С 8 1020НерегулярнаяСиласорб С 18 105, 7, 10, 15,

20 НерегулярнаяСферисорб С 18 105, 7, 10, 15,

20 СферическаяПриложение

3 Детекторы для высокоэффективной жидкостной хроматографииВид детектораИзмеряемый параметрМинимально определяемое количество, гСелектив-ностьСпектрофото-метрическийОптическая плотность 10−10ВысокаяФлуориметрическийИнтенсивность флуоресценции 10−11ОченьКондуктометрическийЭлектропроводность 10−9НизкаяАмперометрическийВеличину тока 10−11−10−9ОченьМасс-спектрометрическийВеличину ионного тока 10−12- 10−10ОченьПриложение

4 Условия проведения ВЭЖХ некоторых лекарственных средств [12]Продолжение приложения

6 Приложение

5 Выбор условий ВЭЖХ с учетом гидрофобности разделяемых веществ

Список использованной литературы

1. Государственная фармакопея СССР: 11-е изд. Вып.

2. Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний. — М.: Медицина, 1989. — 400 с.

2. Медведев Ю.В., Раменская Г. В. и др. ВЭЖХ и СВЭЖХ как методы для определения лекарственных веществ в крови (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. — 2013. — № 4. — С. 45−51.

3. Рейхард Д.В., Барам Г. И. и др. Высокоэффективная жидкостная хроматография в контроле качества лекарственных средств // Мед.вестник. — 2005. — № 2 (20−21).

— С. 705−706. — [Электронный ресурс].

— режим доступа: www.medvestnik.ru/library/article/5890.

4. Куркина А.В., Калабухова Е.А. и др. Возможности применения метода ВЭЖХ для стандартизации цветков пижмы обыкновенной // Совр. проблемы науки и обр.: Фарм. науки. — 2013. — № 5. — [Электронный ресурс].

— режим доступа: www. science-education.ru/pdf/2013/5/10 031.pdf .

5. Бубунчикова В.Н., Сухомлинов Ю.А. Изучение состава фенольных соединений лапчатки прямостоячей методом ВЭЖХ // Вестник Воронежского гос. ун-та: сер.: Химия. Биология. Фармация. — 2005. — № 2. — 160−161.

6. Гармонов С.Ю., Салахов И.А. и др. Фармацевтический анализ противовоспалительных и анальгезирующих лекарственных средств методом ВЭЖХ // Ученые Т. 152, кн.3. — С. 110−113.

7. Григорьев А.М., Староверов В.М. и др. Новые экспресс-методики определения жирорастворимых витаминов в сиропе «Олиговит» и таблетках «АЛФАВИТ» методом ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2006. — Т. 6, № 1. — С. 62−69.

8. Евгеньев М.И., Левинсон Ф.С. и др. Влияние кислотности замещенных 5,7-динитробензофуразановых и нитробензодифуразановых производных ароматических аминов на элюирование в ОФ ВЭЖХ // Вестник Казанского технол. ун-та. — 2008. — № 1. — С. 52−56.

9. Евгеньев М.И., Евгеньева И.И. и др. Изучение параметров разделения 5,7-динитробензофуразановых и нитробензофуразановых производных ароматических аминов в ВЭЖХ//Вест.Казан.технол.ун-та. — 2004. — № 1. — С.81−88.

10. Писарев В.В., Смирнова Л.Б. и др. Определение азитромицина в плазме крови методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием // Клиническая фармокинетика. — 2004. — № 1. — С. 23−26.

11. Фогт В.П., Степанов А.С., Степанова Т.А. Использование методов ВЭТСХ и ВЭЖХ в разработке экстракта противодиабетического // Химия растительного сырья. — 2008. — № 4. — С. 75−78.

12. Буланова Л.В. Хроматография в медицине и биологии: учебное пособие /А.В. Буланова, Ю.Л. Полякова; Федер. агенство по образованию. — 2-е изд. — Самара: Изд-во «Самарский университет», 2006. 116 с.

13. Пунгер В, Григорьева Л. Инструментальный анализ: Учебн. пособие для химико-технологич. спец-тей проф.центров. — Вируамааский колледж Таллиннского технич. ун-та, 2012. — [Электронный ресурс].

— режим доступа: itdvnzknu.com.ua/attachments/article/215.pdf .

14. Дубовик Д.Б., Иванов А.В. и др. Влияние сильного электролита в элюенте на удерживание гетерополикислот фосфора и кремния в ион-парной ОФ ВЭЖХ // Вестн. Моск. ун-та: Сер.2: Химия. — 2002. — Т. 43, № 5. — С. 300−303.

15. Дутов А., Летунов В. и др. Определение вальпроевой кислоты в биологических жидкостях методом ВЭЖХ с УФ-детекцией и предколоночной дериватизацией фенацил бромидом // Клинич.фармокин. — 2005. — № 1. — С. 34−37.

16. Мельников И.О., Назимов И.В., Глубоков Ю.М. Анализ низкомолекулярных аминотиолов методами капиллярного электрофореза и ВЭЖХ с флуоресцентной и прямой УФ-детекцией//Совр.наук.технол. — 2005. — № 3. — С.40−41.

17. Малинка М.К., Полуэктова М.В., Яшин А.Я. Определение гомоцистеина в плазме методом ВЭЖХ с амперометрическим детектором // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2007. — Т. 7, № 1. — С. 60−65.

18. Сапрыкин Л.В. и др. Прямой анализ бетаинов в биологических жидкостях методом ВЭЖХ // Сорбц. и хроматогр.пр-сы. — 2006. — Т. 6, № 1. — С.114−122.

19. Дейнека В.И., Хлебников В.А. и др. Особенности хроматографического поведения берберина в условиях обращено-фазовой ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2007. — Т. 7, № 2. — С. 228−235.

20. Филимонов В.Н., Сирицо С.И. Параметры гидрофобности для прогнозирования удерживания водорастворимых витаминов неполярным сорбентом в условиях обращенно-фазовой ВЭЖХ // Известия ВУЗов. Сер.: Химия и химическая технология. — 2009. — Т. 52, № 6. — С. 33−35.

21. Рудаков О.Б., Хорохордина Е.А. и др. Определение капсаициноидов и ионола в перцовых пластырях методом микроколоночной ВЭЖХ // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2008. — Т. 8, № 2. — С. 339−345.

22. Horvath, Cs., Melander, W., Molnar, J. Solvophobic interactions in liquid chromatography with nonpolar stationary phases / Cs. Horvath, W. Melander, J. Molnar // J. Chromatogr. — 1976. — V.125. — N 21. — Р. 129−156.

23. Ногvаth, Cs., Melander, W. Liquid chromatography with hydrocarbonaceous bonded phases; theory and practice of reversed-phase chromatography / Cs. Horvath, W. Melander // J.Chromatog.Sci. — 1977. — V.15. — N 29. — Р.393−404.

24. Horvath, Cs., Melander, W., Molnar, J. Liquid chromatography of ionogenic substances with nonpolar stationary phases / Cs. Horvath, W. Melander, J. Molnar // Anal. Chem. — 1977. — V.49. — N 21. — Р. 142−154.

25. Шумская Н.Ю. Физико-химические закономерности удерживания производных адамантана в жидкостной хроматографии: Дис. … канд. хим. наук: 02.00.04 Саратов, 2005. — 156 с. — [Электронный ресурс].

— режим доступа: www.dslib.net/fiz-xim.html .

26. Пирогов А.В., Бендрышев А.А. и др. Определение жирорастворимых витаминов в зерновых премиксах, блендах, таблетированных биологически активных добавках и медпрепаратах методом ВЭЖХ // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. — 2008. — Т. 74, № 3. — С.1 — 2.

27. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография: Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии. — Рига: Зинатне. — 1988. — 390 с.

28. А.Ю. Петров, С.А. Дмитриченко, А.Л. Коваленко, Л.Е. Алексеева «Стандартизация препарата «Аданол» // Фармация — № 5 — 2002 — с.11−13.

29. М.А. Казьмин, А.В. Михалев, А.П. Арзамасцев «Определение компонентов препарата „БИЦИЛЛИН-3“ методом ВЭЖХ» // Фармация — № 5 — 2002 — с.5−6.

список литературы

referatbooks.ru

Определение витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в премиксах, биологически активных добавках и пищевых продукт

Определение витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в премиксах, биологически активных добавках и пищевых продуктах

Год:

2009

Автор:

Шелеметьева, Ольга Владимировна

Тема диссертации:

Ученая cтепень:

кандидат химических наук

Место защиты диссертации:

Томск

Код cпециальности ВАК:

02.00.02

Специальность:

Аналитическая химия

Количество cтраниц:

138

Введение

Глава 1 Литературный обзор.

1.1. Основные свойства витаминов.

1.2. Аналитические возможности физико-химических методов определения витаминов.

1.3. Современное состояние определения витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Экспериментальная часть

2.1. Приборы, оборудование и методика выполнения эксперимента.

2.2. Растворители и реактивы.

2.3. Объекты исследования.

3.1. Выбор рабочих условий для определения водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ.

3.2. Изучение взаимного влияния водорастворимых витаминов и расчет их предельно допустимых соотношений в методе ВЭЖХ.

4.1. Исследование влияния рН среды при пробоподготовке исследуемых объектов.

4.2. Изучение мешающего влияния органической матрицы при определении водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ.

4.3. Оптимизации условий подготовки пробы при определении витаминов методом ВЭЖХ.

4.4. Алгоритм пробоподготовки при определении водорастворимых витаминов методом

Глава 5 Методики определения витаминов методом

5.1. Методика определения водорастворимых витаминов в премиксах, БАД и пищевых продуктах методом ВЭЖХ.

5.2. Методика определения жирорастворимых витаминов в премиксах, БАД и пищевых продуктах методом ВЭЖХ.

5.3. Расчет массовых концентраций витаминов.

5.4. Метрологическое обеспечение хроматографического анализа.

Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение:

Актуальность. Водорастворимые и жирорастворимые витамины -незаменимые органические вещества, биологические катализаторы химических реакций, протекающих в организме человека; они активно участвуют в обмене веществ и поступают в организм человека практически полностью из внешней среды.

Для поддержания баланса витаминов в организме широкое применение нашли витаминизированные продукты и биологически активные добавки к пище (БАД). Одним из важнейших показателей потребительского качества продукции подобного рода является соответствие содержания биологически активных веществ согласно заявленной рецептуре. Для восстановления качества продуктов питания был принят документ «Основы государственной политики в области здорового питания граждан Российской Федерации на период до 2020 года», пришедший на смену «Концепции здорового питания населения России до 2005 года».

Разработка и совершенствование методов определения витаминов является актуальной задачей, от решения которой зависит качество и безопасность подобной продукции. Выбор инструментального метода анализа для определения водо- и жирорастворимых витаминов в пищевых продуктах обусловлен рядом общих соображений, например: пределами обнаружения метода в зависимости от определяемых содержаний, требованием многоэлементности, допускаемой погрешностью, временными затратами, стоимостью анализа. Безусловно, предпочтение отдается методам, требующим минимальной подготовки пробы к анализу при максимальной информативности. Таким требованиям максимально удовлетворяет метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Современное развитие метода ВЭЖХ расширило аналитические возможности определения витаминов в обогащенных пищевых продуктах. Необходимая подготовка пробы образца весьма проста относительно других методов, что связано прежде всего с исключительной универсальностью, высокой эффективностью разделения, благоприятными условиями анализа (низкая температура, инершый растворитель, отсутствие контакта с кислородом).

Однако, несмотря на интенсивное развитие этого метода в последние 10 лет, в литературных источниках практически отсутствуют методики определения витаминов в таких объектах, как БАД. Трудности в создании методик во многом обусловлены сложностью объектов анализа, таких как обогащенные продукты, в состав которых входят лекарственное растительное сырье (JIPC), растительные экстракты (РЭ), различные минеральные добавки, красители и другие наполнители; низкими концентрациями витаминов в объектах анализа и высокой чувствительностью к термическому, фотоокислительному и химическому воздействиям. Поэтому разработка экспрессных методик одновременного количественного определения водо- и жирорастворимых витаминов в БАД является актуальной задачей.

Целью работы являлось исследование параметров хроматографического определения водорастворимых витаминов группы В, выбор оптимальных условий их определения и разработка экспрессных методик аналитического контроля БАД, пищевых продуктов и премиксов на содержание жиро- и водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

• исследовать хромато графическое поведение водорастворимых витаминов при элюировании бинарными водосодержащими подвижными фазами на основе ацетонитрила, тетрагидрофурана и метанола, провести оценку коэффициентов емкости, асимметрии и разрешения пиков витаминов;

• установить параметры хроматографического определения водорастворимых витаминов группы В;

• оптимизировать основные стадии и предложить алгоритм пробоподготовки для определения витаминов в БАД, обогащенных пищевых продуктах и премиксах; разработать и метрологически аттестовать методики количественного химического анализа БАД, пищевых продуктов и премиксов на содержание витаминов

Научная новизна:

• впервые исследовано хроматографическое поведение водорастворимых витаминов при элюировании бинарными водосодержащими подвижными фазами на основе ацетонитрила, тетрагидрофурана и метанола и установлены условия определения водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ;

• показана применимость универсальной квазихимической модели удерживания для оценки роли межмолекулярных взаимодействий сорбат-сорбент, модификатор-сорбент в хроматографической системе и проведен расчет параметров хроматографического разделения: коэффициентов емкости, асимметрии и разрешения пиков водорастворимых витаминов;

• проведена оценка мешающего влияния водорастворимых витаминов группы В при их совместном присутствии, рассчитаны предельные соотношения водорастворимых витаминов в пробе при заданной систематической погрешности и оценены основные составляющие органической матрицы при определении витаминов методом ВЭЖХ;

• впервые установлены и оптимизированы условия ультразвуковой обработки проб для интенсификации стадии экстракционного извлечения пищевых продуктов и премиксов для последующего определения содержания водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ;

• впервые разработаны методики количественного химического анализа проб Б АД, пищевых продуктов и премиксов на содержание воДО" и жирорастворимых витаминов методом ВЭЖХ.

Практическая значимость работы состоит в том, что:

• на основании проведенных исследований проведена метрологи:^©01^51 аттестация методик количественного химического анализа водорастворимых витаминов (ВРВ) и жирорастворимых витаминов (ЖРВ) для широкого крУга объектов: премиксов, БАД и витаминизированных продуктов пиидевои промышленности. Методики позволяют экспрессно (в течение 45-60 ivhHHут) проводить определение 6 водорастворимых витаминов в сложной матрице БАД;

• разработанные методики: «Биологически активные добавки, пиисхевые продукты, премиксы. Хроматографический (ВЭЖХ) метод опреде.л©ния массовой концентрации водорастворимых витаминов Вь В (никотинамид, никотиновая кислота ), В5, В6 и фолиевой кислотен» и «Биологически активные добавки, премиксы. Хроматографический

Внешторгфарма» (г. Москва) и НИИ фармакологии (г. Томск), подтверждается соответствующими актами о внедрении.

Положения, выносимые на защиту:

1. Описание удерживания водорастворимых витаминов с позиций теории универсальной квазихимической модели удерживания в ВЭЖХ.

2. Закономерности удерживания водорастворимых витаминов группы В в условиях градиентной обращенно-фазовой (ОФ) ВЭЖХ и выбор рабочих условий хроматографического определения водорастворимых витаминов.

3. Условия пробоподготовки Б АД, пищевых продуктов, премиксов и алгоритм оптимизации стадии УЗ-экстрагирования при определении витаминов.

4. Методики хроматографического определения водо- и жирорастворимых витаминов.

Апробация работы.

Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на международном симпозиуме «Федеральный и региональный аспекты политики здорового питания» (Кемерово, 2002), международной конференции «Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий» (Томск, 2006), региональной научно-практической конференции «Электрохимические методы анализа в контроле и производстве» (Томск, 2007), II Всероссийской конференции по аналитической химии» с международным участием (к юбилею академика Ю.А.Золотова) (Краснодар, 2007), международной выставке и научно-практической конференции «Аналитические методы измерений и приборы в пищевой промышленности» (Москва, 2007), VII Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа с международным участием «ЭМА-2008» (Уфа-Абзаково, 2008), II Международном Форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж , 2008), VIII научной конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока» (Томск, 2008), IV Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2009).

Структура и объем диссертации.

Работа изложена на 138 страницах, иллюстрирована 25 рисунками и содержит 27 таблиц. Диссертация состоит из введения и пяти глав, включая литературный обзор. Список цитируемой литературы содержит 180 библиографических названий работ отечественных и зарубежных авторов. Во введении обоснована актуальность проблемы, определены цели и задачи исследования. Первая глава представляет собой обзор литературы по физико-химическим методам определения водорастворимых и жирорастворимых витаминов в различных объектах. На основании литературного обзора формируются задачи исследования. Описание используемого оборудования, растворителей, реактивов и объектов исследования приведены во второй главе. Третья глава посвящена выбору рабочих условий определения водорастворимых витаминов методом ВЭЖХ, изучению взаимного влияния водорастворимых витаминов и расчету их предельно допустимых соотношений в методе ВЭЖХ. В четвертой главе проведены исследования по влиянию рН среды при подготовке проб, изучено влияние органической матрицы при определении водорастворимых витаминов, изложены результаты оптимизации условий подготовки проб и алгоритм пробоподготовки при определении витаминов методом ВЭЖХ. В пятой главе представлены методики определения водо- и жирорастворимых витаминов и метрологическое обеспечение хроматографического анализа. Анализ полученных экспериментальных данных приведен в обсуждении результатов. В заключении сделаны выводы. В приложении представлены таблицы обобщенных данных по определению показателей повторяемости (сходимости) и показателей внутрилабораторной прецизионности,

Заключение:

Выводы

1. Исследованы условия определения водорастворимых витаминов группы В методом ВЭЖХ при элюировании бинарными водосодержащими подвижными фазами на основе ацетонитрила, тетрагидрофурана и метанола. Рассчитаны коэффициенты емкости, асимметрии и разрешения пиков витаминов с применением универсальной квазихимической модели удерживания в ВЭЖХ. Установлено, что оптимальное значение параметров удерживания витаминов наблюдается при содержании модификатора - 5 об. %.

2. Сделана сравнительная оценка коэффициентов удерживания водорастворимых витаминов, рассчитанных различными методами: по программе ACD-Lab/Log Р Version 1.0 и с применением универсальной квазихимической модели и проведено их сопоставление с литературными данными. Выбраны условия хроматографического определения водорастворимых витаминов группы В: колонка Simmetry-Ci8, водно-ацетонитрильный элюент.

3. Исследовано мешающее влияние водорастворимых витаминов и проведен расчет их предельных соотношений при определении методом ВЭЖХ с систематической погрешностью не более 15 %.

4. Изучено влияние органической матрицы в модельных системах на основе белка, сахара, жира и пектина при определении водорастворимых витаминов и проведена оценка предела обнаружения витаминов Вь В2, Вз, В5, Вб, В9 при совместном определении их методом ВЭЖХ. Установлено, что стандартное отклонение определяемого содержания большинства водорастворимых витаминов не превышает 20 %, а для витамина В9 - 40 %.

5. Разработан алгоритм пробоподготовки, предложена дополнительная стадия УЗ-экстрагирования и проведена ее оптимизация на примере витамина В9 в БАД, обогащенных пищевых продуктах и премиксах.

6. Разработаны методики количественного химического определения В], В2, В3, В5, Вб В9, А, Е и D3 в биологически активных добавках, премиксах и пищевых продуктах. Методики метрологически аттестованы и внесены в Федеральный Реестр МВИ, что подтверждается свидетельствами об аттестации и внедрением в ряде аналитических лабораторий.

Список литературы:

1. Сенов П.Л. Фармацевтическая химия// М.: Медицина -1978. С. 431-448.

2. НД 42-10173-99 Тиамина гидрохлорид//Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-1999. 10 с.

3. НД 42-10207-01 Рибофлавин// Фармакопейный Государственный комитет.- М.-.-2001.- 14 с.

4. НД 42-10360-99 Никотинамид// Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-1999.-7 с.

5. НД 42-7050-97 Ниацин// Фармакопейный Государственный комитет.-М.:-1997. -9 с.

6. НД 42-10171-99 Кальция D-пантотенат// Фармакопейный Государственный комитет,- М.:-1999.-9 с.

7. НД 42-7593-97 Пиридоксина гидрохлорид// Фармакопейный Государственный комитет.- М.:-1997.- 7 с.

referat911.ru

Реферат: Методы определения витаминов

Введение……………………………………………………………2

1. Общий обзор методов определения витаминов…………………3

2. Хроматографические методы определения витаминов…………5

3. Электрохимические методы определения витаминов…………10

4. Инверсионно вольтамперометрический метод определения

Возможно вы искали - Реферат: История чёрной металлургии

водорасторимых витаминов B1 B2 в пищевых продуктах………..13

Заключение………………………………………………………...18

Введение

1. Общий обзор методов определения витаминов

Похожий материал - Реферат: Черная и цветная металлургия в России

2. Хроматографические методы определения витаминов

Очень интересно - Курсовая работа: Анализ развития технологии производства нетканых материалов

Анализ изомеров токоферола в оливковом масле проводится методом газо-жидкостной хроматографии. Методики анализа ГХ и ГЖХ требуют получения летучих производных, что крайне затруднительно при анализе жирорастворимых витаминов. По этой причине данные способы определения не получили большого распространения. Определение витамина Е в пищевых продуктах, фармпрепаратах и биологических объектах проводят в градиентном и изократическом режимах как в нормально-фазовых, так и в обращенно-фазовых условиях. В качестве адсорбентов используют силикагель (СГ), кизельгур, силасорб , ODS-Гиперсил и другие носители. Для непрерывного контроля состава элюата в жидкостной хроматографии при анализе витаминов и увеличения чувствительности определения используют УФ (А,=292 нм), спектрофотометрический (Х=295нм), флуоресцентный (Х,=280/325нм), электрохимический, ПМР- [81] и масс-спектроскопический детекторы.

Вам будет интересно - Реферат: Бараночные и сухарные изделия. Сырье и производство

Преимущества метода жидкостной хроматографии:

-Одновременное определение нескольких компонентов

-Устранение влияния мешающих компонентов

- Комплекс можно быстро перестроить на выполнение других анализов.

Состав и характеристика оборудования и программного обеспечения для жидкостного хроматографа "Хромос ЖХ-301":

Таблица 1

cwetochki.ru

Смотрите также

..:::Новинки:::..

Windows Commander 5.11 Свежая версия.

Новая версия
IrfanView 3.75 (рус)

Обновление текстового редактора TextEd, уже 1.75a

System mechanic 3.7f
Новая версия

Обновление плагинов для WC, смотрим :-)

Весь Winamp
Посетите новый сайт.

WinRaR 3.00
Релиз уже здесь

PowerDesk 4.0 free
Просто - напросто сильный upgrade проводника.

..:::Счетчики:::..