Правила забора материала для микробиологического исследования. Реферат микробиологическое исследование на дифтерию

7. Коринебактерии. Микробиологическая диагностика дифтерии.

Род Corynebarteriurn (от лат. Сoryne- булава)– гр+ палочковидные бактерии, не образующие спор, не имеющие жгутиков. Содержат зерна волютина, расположенные чаще всего на концах палочек, они часто превышают размеры поперечника бактерии и придают вид булавы. Также имеются включения липидов и крахмала, который откладывается при недостатке кислорода.

В состав клеточной стенки входят специфические только для бактерий рода Corynebacterium липиды: эфиры коринемиколовой и коринемиколиновой кислот, димикола, фосфатиды маннозы и инозита.

В организме человека обитают условно-патогенные: С.diphtheriae, С.pseudodiphtheriticiim (hofmanii), С.xerosis, С.ulcerans. С.diphtheriae вызывает у человека дифтерию, другие – возбудители вторичных инфекций.

КОРИНЕБАКТЕРИЙ ДИФТЕРИИ С.diphtheriae.

Морфология.Прямые или слегка изогнутые палочки. В препаратах располагаются под углом др к др в виде букв L, V или китайских иероглифов. Зерна волютина (на концах палочек) выявляются при окраске синькой Леффлера или по методу Нейссера. Факультативные анаэробы, хорошо размножаются при свободном доступе кислорода. К пит средам требовательны: не способны утилизировать азот из аммонийных соединений, требуют наличия почти всех АК, солейMg, Zn, Cu, Fe; необходимы углеводыисп среды, полученные на основе ферментативного расщепления белка (казеина, дрожжей) с добавлением крови или сыворотки. На пов плотных сред с КТе дифтерийные палочки образуют ТЕМНО-СЕРЫЕ ИЛИ ЧЕРНЫЕ колонии (биовары гравис, способны расщеплять крахмал, или миттис). Рост на скошенном сывороточном агаре сравнивают с ШАГРЕНЕВОЙ КОЖЕЙ, колонии не сливаются.

Расщепляют глюк и др моно- и дисахариды с образованием КИСЛОТЫ БЕЗ ГАЗА, восстанавливают нитраты, расщепляют цистеин.

Лизируются специфичны для отдельных видов вирулентными фагами, что позволяет устанавливать фаговары исследуемых культур.

АГ.Имеют белковую капсулу, которая содержит К-АГ. Определение этого АГа позволяет установить серовар (их более 10). Группоспецифический ПС АГстенки дает перекрестные реакции с микобактериями, нокардиями.

Экология и распространение.Передается аэрозольным (воздушно-капельным) путем. В настоящее время часто регистрируется у ВЗРОСЛЫХ (тяж формы). Токсигенность связана ЛИЗОГЕНИЗАЦИЕЙ специфическим профагом. Выделяясь в окр среду со слюной, пленками, дифтерийные палочки сохраняют жизнеспособность в течение нескольких дней. Хорошо переносят высушивание. Чувствительны к дез растворам, антибиоткам.

Патогенность и патогенез.Заболевание развивается у лиц, не имеющих антитоксического иммунитета. На месте внедрения (зев, гортань, трахея, реже – нос, ухо) развивается местный воспалительный процесс. Все патогенные виды обладают фимбриямиАДГЕЗИЯ к хозяина, они выявляются в РА трипсинизированных бараньих эритроцитов.

ТОКСИГЕННОСТЬ – способность секретировать гистотоксин, что проявляется в виде локальной воспалительной реакции и в общей интоксикации, особенно чувствительны к нему НАДПОЧЕЧНИКИ, МИОКАРД, НС. Токсин блокирует синтез белка, что приводит к гибели→ некроз и летальный исход.

ФЕРМЕНТЫ (гиалуронидаза, нейраминидаза,фибринолизин) обеспечивают распространение в тканях, но бактериемия клинически не проявляется.

КОРД-ФАКТОР нарушает фосфорилирование и дыхание МК.

Иммунитет.Наиболее восприимчивы дети 1–4 лет. Вырабатывается не очень прочный антитоксический иммунитет, возможны повторные заболевания дифтерией. Невосприимчивость зависит главным образом от содержания в крови антитоксина и АТ (опсонины, преципитины, комплементсвязывающие). Уровень антитоксического иммунитета устанавливают, определяя в крови Ат вРНГА с эритроцитарным диагностикумом (эр-ты нагружены дифтерийным анатоксином). Титр 1:20 и вышеиммунность обследуемого. Т/же применяетсяреакция Шика(внутрикожно вводят дифтерийный токсин, у НЕИММУННЫХ людей – местная воспалительная реакция, при наличии антитоксина реакции нет).

Лаб диагностика.Исп бактериологический и бактериоскопический (ориентировочный) – в мазках обнаруживают палочки с типичной морфологией. Посевы для выделения возбудителя делают на элективные среды, выделяют чистые культуры идентифицируют, принадлежность к роду устанавливают по морфологическим и культуральным признакам, вид С.diphtheriae определяют по БХ свойствам (способность продуцироватьh3Sна средах с цистеином и неспособности расщеплять мочевину). Биовары гравис и митис различают по ферментации крахмала и по морфологии колоний.

Профилактика и лечение.Основное значение имеет активная иммунизация, создание антитоксического иммунитета. Иммунизируют детей начиная с 3-месячного возраста, по схеме вводят вакцину, содержащую как один из компонентов дифтерийный анатоксин (АКДС, АДС).

Лечение начинают сразу, вводят антитоксическую противодифтерийную сыворотку. СЕРОТЕРАПИЯ эффективна в ранний период болезни, пока токсин еще не фиксирован клетками и ткани существенно не повреждены. Кол-во антитоксической сыворотки зависит от тяжести инфекции, ее формы и прочих клинических данных. Возможна антибактериальная терапия.

studfiles.net

Коринебактерии дифтерии и дифтерия - Микробиология

ссылки

Коринебактерии дифтерии

Впервые описана Э. Клебсом в 1983 г. и выделена Ф. Леффлером в 1984 г.

Морфология и физиология

Коринебактерии дифтерии имеют характерную для всего рода форму. Они располагаются под углом друг к другу в виде римских пятерок. Зерна волютина выявляются при окраске уксуснокислой синькой по методу Нейссера, которая окрашивает только включения, не затрагивая цитоплазму. Дифтерийная палочка окружена микрокапсулой и имеет пили. С. diphtheriae требовательны к питательному субстрату. Они нуждаются во многих аминокислотах, углеводах, минеральных солях. Обычно их культивируют на свернутой сыворотке крови и на кровяном агаре с теллуритом калия. На последней среде образуют колонии двух типов: gravis - темно-серого цвета и mitis - черного цвета, которые отличаются друг от друга и по биохимическим признакам.

Антигены

С. diphtheriae содержат в микрокапсуле К-антиген, позволяющий дифференцировать их на серовары и групоспецифический полисахаридный антиген клеточной стенки, который дает перекрестные серологические реакции с микобактериями и нокардиями. Патогенность и патогенез. Факторы вирулентности дифтерийных бактерий - пили и микрокапсула, с помощью которых они прикрепляются к эпителиоцитам миндалин, реже гортани, трахеи, полости носа, конъюнктивы глаза, вульвы. Затем происходит колонизация эпителиоцитов, что сопровождается возникновением воспалительного процесса. Токсичность связана с секрецией гистотоксина, который состоит из двух субъединиц: токсического полипептида и транспортного полипептида, ответственного за доставку токсического компонента к клеткам-«мишеням». Образование первого контролируется бактериальными генами, второго - генами фага, лизогенизировавшего бактериальную клетку. Это свидетельствует о том, что только лизогенные клетки С. diphtheriae могут секретировать гистотоксин.Фиксация гистотоксина происходит на рецепторах мембран мышечных клеток сердца, паренхимы сердца, почек, надпочечников, нервных ганглиев. При этом блокируется синтез белка на рибосомах, что, в конечном итоге, приводит к гибели клеток. При дифтерии, как правило, отсутствует бактериемия и септицемия в связи с локализацией С. diphtheriae в клетках гортани, где развивается фибринозно-некротическое воспаление с образованием пленок, лимфаденита и отеков, что может привести к асфиксии. Кроме дифтерии гортани С. diphtheriae вызывает дифтерию раневых поверхностей и половых органов. К дифтериеподобным коринебактериям относятся следующие: С. xerosis вызывает хронические конъюнктивиты, С. ulcerans - легкие формы дифтериеподобных заболеваний, С. pyogenes и С. haemolyticum - язвенно-некротические фарингиты, тонзиллиты, гингивостоматиты. С. pseudodyphtheriae является постоянным обитателем кожи и слизистых.

Иммунитет

Напряженность постинфекционного иммунитета при дифтерии обусловлена высоким уровнем антитоксина в сыворотке крови. Образующиеся при дифтерии антибактериальные антитела - агглютинины, преципитины и другие - не обладают протективными свойствами. О наличии или отсутствии антитоксического иммунитета судят по реакции Шика - нейтрализации токсина антитоксином. При введении V40 DLM дифтерийного токсина в кожу предплечья появляется покраснение и припухание в случае отсутствия антитоксина в крови. При наличии антитоксина реакция Шика отрицательная.

Экология и эпидемиология

Средой обитания для С. diphtheriae являются люди, в зеве которых они локализуются. Главным образом дифтерией болеют дети. Однако за последние 30 лет дифтерия «повзрослела». У взрослых дифтерия протекает тяжело и может закончиться летальным исходом. В окружающей среде бактерии дифтерии сохраняют жизнеспособность в течение нескольких дней, поскольку они переносят высушивание. Заражение происходит воздушно-капельным и реже контактным путем.

Дифтерия

Дифтерия - острая, преимущественно детская инфекционная болезнь, которая проявляется характерным фибринозным воспалением в месте локализации возбудителя и сильной интоксикацией организма дифтерийными экзотоксин. Возбудителем ее является Corynebacterium diphtheriae, принадлежащего к роду коринебактерий. До этого рода входит еще около 20 видов бактерий, патогенных для людей, животных и растений. Из них наибольшее значение для практической медицины имеют следующие:1. С. ulcerans - может вызвать фарингит, поражение кожи, ее выявляют и у здоровых людей, в молочных продуктах и таре для их перевозки, некоторые штаммы токсигенные.2. С. jeikeium (ранее коринебактерии JK) - влечет пневмонию, эндокардит, перитонит, инфицирует раны, кожу.3. С. cistitidis (ранее коринебактерии группы D2) - инициирует образование камней в мочевыводящих путях и пневмония.4. С. minutissimum - вызывает эритразмы, абсцессы легких, эндокардит.5. С. haemolyticum - может вызвать тонзиллиты, целлюлит, абсцессы мозга, остеомиелит, хронические дерматиты.6. С. xerosis - раньше считали возбудителем ксероза (хронического конъюнктивита), теперь ее относят к сапрофитов.7. С. pseudodiphtheriticum - сапрофит, проживает на слизистой оболочке носоглотки человека.

Взятие и доставка материала в лабораторию

Материалом для исследования пленка из миндалин, дужек, неба, язычка, слизь из зева и носа, реже выделения из глаза, уши, раны, влагалища, пораженного участка кожи. По требованию эпидемиолога исследуют смывы с игрушек и других предметов, некоторые пищевые продукты (молоко, мороженое). Материал нужно брать до начала этиотропного лечения натощак или через 2 ч после приема пищи.Для взятия материала используют тампоны, сухие или предварительно смоченные 5% раствором глицерина, помещенные в пробирку и простерилизованные вместе с ней. Исследуемый материал из ротоглотки и носа берут двумя отдельными тампонами, пытаясь взять его на границе здоровой и пораженной области вращательными движениями, не касаясь тампоном слизистой щек, зубов и языка, который прижимают шпателем. При ларингоскопии пленку или слизь берут непосредственно из гортани. Пленки и слизь изо рта и носа берут обязательно во всех случаях, даже при дифтерии редких локализаций (кожа, рана, глаз, ухо, вульва).Если необходимо провести первичную бактериоскопию по требованию врача, материал берут отдельным (дополнительным) тампоном или направляют часть отснятой пленки, тщательно растертой между двумя предметными стеклами.Тампоны после забора материала помещают в те же пробирки, на которых надписывают номер, дату и время отбора, фамилия врача. Они должны быть доставлены в лабораторию не позднее 3-х часов после взятия материала. Если схема забора предусматривает занял у постели больного, то пробирки и чашки с посевами немедленно направляют в лабораторию или инкубируют при 37 ° С и доставляют через 20-23 ч, в холодное время в сумках с грелками.

Бактериоскопическое исследование

Бактериоскопическое исследование материала от больного проводят только по требованию врача и только для того, чтобы распознать некротическую ангиной Симановского-Плаута-Венсана (выявление веретенообразных палочек и спирохет Венсана, которые при обычных методах культивирования не растут).На протяжении многих лет микроскопическое исследование и выявление зерен волютина, окрашенных по методам Леффлера и Нейссера, было основой лабораторной диагностики дифтерии и выявления бактерионосительства. Теперь, в связи с изменчивостью дифтерийных бактерий под воздействием антибиотиков, первичная микроскопия исследуемого материала не рекомендуется.Бактериоскопическое исследование проводится с целью идентификации нетипичных колоний на кровяно-телуритових средах и при проверке чистоты выделенных культур. Мазки окрашивают по Граму, Леффлером и Нейссером. Можно красить их уксуснокислым метиловым фиолетовым, толуидиновым синим или бентиазоловим и тиазиновых красителей.Дифтерийные палочки в мазках располагаются под углом, в виде латинских букв V, X, Y, или образуют скопления, напоминающие кучку разбросанных спичек. Волютина зерна располагаются, как правило, на полюсах микробных клеток. Псевдодифтерийни бактерии и дифтероиды размещаются параллельно (в виде "частокола") и, конечно, не имеют зерен волютина. Зерна Бабеша-Эрнста можно обнаружить с помощью люминесцентной микроскопии при окраске мазков корифосфином. Зерна приобретают оранжево-красного цвета на фоне желто-зеленых тел бактериальных клеток.

Бактериологическое исследование

Клинический материал засевают на кровяной агар и кровяно-телуритовий агар (или среду Клауберга II), разлитые в чашки Петри. Посев на кровяной агар необходим для обнаружения и другой микрофлоры. Кроме того, некоторые штаммы Cdiphtheriae чувствительны к действию теллурита калия, поэтому их рост на телуритових средах может подавляться. Для выявления дифтерийного бактерионосительства посевы делают только на кровяно-телуритовий агар, поскольку в посевном материале может содержаться небольшое количество дифтерийных палочек, рост которых на неселективных средах будет подавляться другой микрофлорой. При этом допускается использование и транспортной среды.

Кровяно-телуриновий агар

К 100 мл 2% расплавленного и охлажденного до 50 ° С питательного агара рН 7,6 добавляют 10-15 мл дефибринированной крови и 2 мл 2% раствора теллурита калия. Смесь тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри слоем, толщиной 3-4 мм.

Среда Клауберга II

К 100 мл 3% питательного агара рН 7,6, расплавленного и охлажденного до 50 ° С, добавляют 3 мл 2% раствора теллурита калия, 10 мл глицериновой смеси и 50 мл гемолизированной крови. Глицериновую смесь готовят путем добавления 20 мл стерильного глицерина до 40 мл дефибринированной крови. Смесь можно хранить в холодильнике в течение 4-х месяцев. Для приготовления гемолизированной ("лаковой") крови до 34 мл стерильной дистиллированной воды добавляют 16 мл дефибринированной крови.

Транспортная полужидкая среда

К 100 мл перевар Хоттингера или мясопептонного бульона добавляют 1 г любого коммерческого агара, устанавливают рН 7,6, стерилизуют в автоклаве при 112 ° С 30 мин, асептически добавляют 10 мл сыворотки и 1 мл 2% теллурита калия. Среду разливают в пробирки по 5 мл. При возможности используют и более сложное транспортное среду Эмес (AMIES), модифицированное Стюартом.Посев от одного больного производят на одну чашку, используя при этом одну половину среды для посева из ротоглотки (миндалин, дужек, язычка), а вторую - для посева другим тампоном из носа. Если есть изучаемый материал из кожи, глаза, уши и других локализаций - добавляют еще одну чашку. Нельзя сеять материал от нескольких больных на одну чашку. Среды перед посевом согревают в термостате 15-20 мин.При посеве исследуемого материала втирают тампоном сначала в отдельный участок кровяного агара площадью 2x1 см, затем аналогично на кровяно-телуритовому агаре (или среде Клауберга II), при этом тампон все время поворачивают, чтобы засеять из него весь материал. Затем тем же тампоном штрихами засевают остальные поверхности среды (половину чашки). Такая техника посева позволяет получить изолированные колонии (чистую культуру), которые используют непосредственно из чашки для определения токсигенности и последующей их идентификации. Засеяны чашки или пробирки с транспортным средой инкубируют в термостате при 37 ° С в течение 20-24 час.На второй день с помощью стереоскопического микроскопа исследуют характер колоний. Если рост отсутствует на обеих средах, делают повторный забор материала.Чашки с типичными и подозрительными на C.diphtheriae колониями отбирают для дальнейшей идентификации культуры по всем тестам. Микроскопию подозрительных колоний можно не проводить.Колонии дифтерийных палочек на кровяном агаре беловатого или желтоватого цвета, непрозрачные, круглой, слегка выпуклой формы, диаметром 1-2 мм. Обычно они имеют маслянистую консистенцию, хотя некоторые могут образовывать хрупкие жесткие R-колонии.На кровяно-телуритових средах KonomiC.diphtheriae через 24 часа роста имеют серый цвет, выпуклые, с ровным краем, вязкие. Через 48 ч они приобретают темно-серого или черного цвета с металлическим блеском, равными или слегка фестончатыми краями, гладкой или с радиально исполосовано поверхностью (R-формы), вязкие или хрупкие при прикосновении петлей.По структуре 48-часовых колоний на телуритових средах и некоторыми ферментативными признаками возбудителя дифтерии выделяют четыре культурально-биохимических варианта (биовары) - gravis, mitis, belfanti, intermedius.Биовар gravis обычно образует серые или черные матовые сухие колонии, хрупкие, плоские, гладкие, диаметром 1,5-2 мм, с радиально исполосовано поверхностью, он высокотоксичный, не вызывает гемолиза, разлагает крахмал и гликоген.Биовары mitis и belfanti растут в виде серых или черных, круглых гладких выпуклых колоний с ровными краями, диаметром 1-1,5 мм эти варианты менее токсичны, вызывают гемолиз, но не разлагают крахмал и гликоген.Биовар intermedius образует мелкие, серые, прозрачные колонии диаметром 0,5-1 мм, с плоской гладкой поверхностью, он слаботоксичный, не расщепляет крахмала и гликогена.Если типичный рост отсутствует, из других, сомнительных колоний готовят мазки. При обнаружении в них споровых палочек, кокков, дрожжей и др.., Исследования на дифтерию прекращают и дают отрицательный ответ. Однако, важно помнить, что дифтерийные бактерии, которые образовали нетипичные колонии на средах с ингибиторами роста (теллурит калия), могут быть укорочены, утолщены, но сохраняют полиморфизм и характерное местоположение.При росте типичных колоний сразу же приступают к изучению их токсигенности и идентификации. Токсигенные свойства исследуют не менее в 2-х изолированных колоний путем посева одной половины каждой колонии на среду для определения токсигенности и непрожженные петлей на среду Пизу, а второй половины - на скошенный сывороточный агар для выделения чистой культуры и сохранения ее до окончания лабораторной диагностики. В случае, если на чашке вырастают одновременно токсигенные и нетоксигенные разновидности С. diphtheriae, необходимо при множественном росте подозрительных колоний исследовать токсигенные свойства около 20 колоний, засевая в одну бляшку материал из 5-6 колоний. При росте всего одной колонии, ее засевают на среду для определения токсигенности и, прокаливая петлю, - в пробирку со средой Пизу.Если использовали транспортную среду, висел из него делают в плотные кровяно-теллурита среды.На третий день, при появлении специфических линий преципитации в агаровом геле и положительной пробе на цистиназу, выделенную культуру определяют как токсигенные С. diphtheriae. Если линии преципитации через 24 часа отсутствуют, чашки инкубируют еще в течение суток. В случае отрицательной пробы Пизу культуру идентифицируют как вид коринебактерий.Чистую культуру на скошенном сывороточном агаре высевают на углеводородные среды с глюкозой, сахарозой, растворимым крахмалом, ставят пробы на выявление уреазы, пиразинамидазы и нитратредуктазы.На четвертый день делают учет результатов всех посевов и выдают аргументированный бактериологический вывод о выделенную культуру.Используют такие методы идентификации коринебактерий.

Определение токсигенности in vitro

В его основе лежит взаимодействие токсина с антитоксином в агаровом геле. В местах оптимального количественного соотношения токсина и антитоксина в толще агара выпадает преципитат в виде тонких нежных белых линий ("стрелы", "усики"). Этот тест во многих странах за рубежом называют Элек-тестом.Пробу на токсигенность, как правило, проводят с чистыми культурами. Можно определить его и с культурами, загрязненными посторонней микрофлорой, в сутки ускоряет лабораторную диагностику дифтерии. Но при отрицательной пробе ее повторяют с выделенной чистой культурой.Для постановки этой пробы микробиологическая промышленность выпускает специальное сухое стандартное среду для определения токсигенности дифтерийных микробов (ВТДМ) и стандартные бумажные диски, пропитанные антитоксической противодифтерийной сывороткой и высушены.На поверхность свежеизготовленного среды ВТДМ накладывают бумажные диски с антитоксином (не более четырех на одну чашку). На расстоянии 0,5 см от диска вокруг него засевают культуры в виде "бляшек" диаметром 7-8 мм, чередуя "бляшки" изучаемой культуры и контрольного штаммаРезультаты учитывают через 18-24 и 48 год. Критерием специфичности преципитатов является слияние линий преципитации исследуемой культуры с линиями токсигенного штамма. В таком случае выделенную культуру считают токсигенных.При отсутствии стандартных бумажных дисков можно использовать полоски фильтровальной бумаги, пропитанные дифтерийными антитоксином. их изготавливают непосредственно в лаборатории. Нарезанные по указанным размерам и простерилизованные в автоклаве при 121 ° С в течение 30 мин бумажные полоски смачивают 0,25 мл очищенного дифтерийного антитоксина, который содержит 500 МЕ в 1 мл. В таком случае на чашку с соответствующим средой накладывают смоченную антитоксином полоску бумаги, подсушивают, открыв чашку на 15-20 мин в термостате и перевернув ее вверх дном. После этого с обеих сторон полоски засевают культуры "бляшками", чередуя исследуемые и контрольные штаммы.Для определения токсигенности возбудителя дифтерии можно использовать также и другие среды (АГВ, мартеновский агар и др.), рецепты изготовления которых приведены в "Инструкции по бактериологической диагностики дифтерии", Киев (1999).На протяжении многих лет токсигенность дифтерийных бактерий определяли подкожно или внутрикожно введением культуры двум гвинейским свинкам, одной из которых накануне вводят 100-1000 МЕ антитоксической противодифтерийной сыворотки. Теперь этот метод бактериологические лаборатории практически почти не используют из-за дороговизны и значительную задержку ответа.В последнее время разработаны очень чувствителен и высокоспецифичным метод определения гена дифтерийного токсина путем полимеризации цепной реакции. Он базируется на определении участка ДНК С. diphtheriae, где локализован ген дифтерийного токсина, с помощью специфических праймеров. Метод имеет преимущества перед традиционным определением токсигенности: высокую чувствительность, быстрота получения результатов (4-6 ч), не требует выделения чистой культуры. Но для его проведения необходимы специальная аппаратура, дорогие реактивы и соответствующее помещение, а потому может быть проведен лишь в специализированной лаборатории. Все нетоксигенные штаммы дифтерийных бактерий, выделенные от больных и бактерионосителей, необходимо направлять в Украинский центр госсанэпиднадзора (где есть такая лаборатория) для окончательного определения токсигенных свойств С. diphtheriae.

Определение цистиназы (проба Пизу)

С. diphtheriae, С. ulcerans выделяют фермент цистиназу, псевдодифтерийни бактерии и другие дифтероиды его производят.Выделенную культуру засевают уколом в среду с цистином, разлитое столбиком в узкие пробирки. Цистиназопозитивни бактерии расщепляют цистин с выделением сероводорода, который с уксуснокислым свинцом, входящий в среде, образует сернокислый свинец, в результате чего среда окрашивается в темно-коричневый цвет. С. diphtheriae вызывает не только потемнение среды за ходом укалывания, а образует вокруг него "облако" темно-коричневого цвета на расстоянии 1 см от поверхности. Результаты учитывают через 20-24 ч инкубирования в термостате.

Определение уреазы (проба Заксе)

Дифтерийные бактерии этого фермента не образуют. Положительную пробу на уреазу дают лишь некоторые другие виды коринебактерий. Для постановки пробы выделенную культуру сеют в бульон с мочевиной. Уреаза разлагает мочевину, изменяет рН среды, сопровождающееся его покраснением. Если фермент не выделяется, изменения окраски бульона не происходит.

Определение пиразинамидазы

Определение пиразинамидазы проводят путем гидролиза пиразинамида в пиразиновой кислоты и аммония. Для этого в стерильную пробирку вливают 0,25 мл стерильной дистиллированной воды, в которой готовят густую взвесь выделенной культуры, затем вносят одну диагностическую таблетку Rosko 598-21. Инкубируют в течение 4-х часов при 37 ° С, после чего добавляют одну каплю только что приготовленного 5% водного раствора сульфата аммонийного железа. При наличии фермента суспензия приобретает красного или оранжевого цвета. Патогенные коринебактерии не выделяют пиразинамидазу, а следовательно, не изменяют цвета суспензии.

Сахаролитические ферменты

Сахаролитические ферменты определяют путем посева полной петли выделенной культуры в каждую пробирку укороченного пестрого ряда Гисса (глюкоза, сахароза, растворимый крахмал). Результаты учитывают через 24 ч инкубации в термостате. Расщепление крахмала может задерживаться до 48 час.

Определение нитратредуктазы

Определение нитратредуктазы является дополнительным тестом для идентификации С. belfanti и С. ulcerans, которые не образуют этого фермента. В пробирку с бульоном, в который добавляют 0,1% KN03, засевают исследуемую культуру, инкубируют в термостате в течение суток. Обязательном контроле со незасеянными средой. В случае наличия нитратредуктазы при добавлении к засеянного бульона 3-х капель реактива Касаткина возникает красное окрашивание. Среда в контрольной пробирке цвета не меняет.Для идентификации коринебактерий последнее время используют бумажные индикаторные диски с глюкозой, сахарозой, мочевиной и крахмалом из набора "Б" для идентификации энтеробактерий (фирма "ИмБио", г.Нижний Новгород). В 4-х пробирках готовят густую взвесь исследуемой культуры и в каждую из них погружают диск с соответствующим углеводом или иным реактивом. После инкубирования в термостате учет выделения уреазы проводят через 40-120 мин, а определение сахаролитических активности - через 5-24 часов. При наличии уреазы белый диск с мочевиной становится розово-малиновым, при отсутствии - остается белым. Диски с глюкозой и сахарозой при наличии соответствующих ферментов уже через 5-6 ч меняют цвет с красного на желтый. При определении амилазы в пробирку с соответствующим субстратом добавляют индикаторный диск с йодом. Если фермента нет - появляется темно-синюю окраску, если есть - цвет раствора остается без изменений.

Специфическая профилактика и лечение

Вакцинопрофилактика дифтерии проводится при введении дифтерийного анатоксина, полученного при обработке дифтерийного токсина формалином. В нашей стране для вакцинации используют АКДС - адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину. Антитоксическую сыворотку применяют для специфической терапии, а антибиотики - для санации бактерионосителей. Из антибиотиков используют пенициллин, ванкомицин, эритромицин и др.

Инфекционисты в Москве

vse-zabolevaniya.ru

Диагностика дифтерии. Фото

Диагностика дифтерии основана на клинических данных с последующим подтверждением диагноза бактериологическим исследованием. Лабораторная диагностика дифтерии включает в себя ряд исследований, основным из которых является микробиологическое.

Зачастую для постановки диагноза бывает достаточно тщательно собранного анамнеза заболевания и осмотра ротоглотки. Всякая задержка при установлении диагноза и назначения адекватного лечения увеличивает вероятность неблагоприятного исхода заболевания.
Выделение культуры возбудителей с последующим определением у выделенных возбудителей токсикогенности является основным и единственным методом микробиологической диагностики дифтерии. Предварительный результат получается через 24 часа, через 48 часов получается результат исследования дифтерийных палочек на токсикогенность, через 72 часа определяется биовар возбудителя.
Микроскопическое исследование при дифтерии нерационально.
Серологическая диагностика основана на определении роста титра антибактериальных антител. Результаты получаются на 2-й неделе заболевания.
При диагностике дифтерии применяется генетический метод (ПЦР), позволяющий определить ДНК бактерий.
Реакция латекс агглютинации относится к экспресс-методам. Результат получается уже через два часа.
Иммунофлуоресцентный анализ результативен. Однако его проведение должно осуществляться только высококвалифицированным персоналом.

Рис. 1. Пленка грязно-белого цвета и выраженный отек подкожной жировой клетчатки шеи — «бычья шея» — классические признаки дифтерии.

Микробиологическая диагностика дифтерии

Микробиологическое исследование является основным методом лабораторной диагностики дифтерии.

Методика посева на питательные среды

В каких случаях проводится бактериологическое исследование

Бактериологическое исследование проводится в следующих случаях:

с целью диагностики дифтерии зева, носа и глотки у взрослых и детей,
с целью выявления возможного бактерионосительства у лиц, которые поступают в детские дошкольные учреждения и специализированные учреждения для взрослых,
с целью выявления заболевания среди контактирующих лиц.

Материал для исследования

Материал для исследования (мазок на дифтерию) собирается натощак или спустя 2 часа после еды. Для исследования используются дифтерийные пленки или кусочки тканей, расположенных по соседству, отделяемое из мест поражения и носоглоточная слизь.

Методика забора материала

Забор материала (мазок на дифтерию) осуществляется ватным тампоном. Корень языка прижимается шпателем. Ватным тампоном необходимо коснуться слизистой оболочки миндалин на границе пленки, дужек и задней стенки глотки. Далее тампон опускается в стерильную пробирку, не касаясь ее стенок.

В течение первых 3-х часов должен быть отправлен в лабораторию. При невозможности произвести посев в ближайшие 3 — 4 часа, забор материала осуществляется стерильным ватным тампоном, который смачивают в 5% растворе глицерина в изотоническом растворе хлорида натрия или 2% растворе теллурита калия.

Забор материала (мазок на дифтерию) осуществляется двумя ватными тампонами, один из которых используется для посева, другой — для микроскопии.

При подозрении на дифтерию необходимо оповестить сотрудников лаборатории, чтобы собранный материал был посеян на соответствующие среды (кровяной агар, среда Леффлера или теллуритовая среда).

Культивирование бактерий дифтерии

Посев осуществляется на питательные среды (кровяной агар, среда Леффлера или теллуритовая среда). Теллурит в большой концентрации подавляет рост сопутствующей микрофлоры.

Рис. 2. На фото рост колоний палочки дифтерии на разных средах — кровяном агаре и теллуритовой среде.

При росте бактерий на кровяном агаре колонии приобретают беловатую окраску, они непрозрачные, округлые, выпуклой формы, 1 — 2 мм в диаметре, чаще маслянистой консистенции.

При росте бактерий на теллуритовых средах колонии серого цвета, выпуклые, края ровные. Через двое суток колонии приобретают темно-серый или черный цвет, они имеют металлический блеск, ровные или фестончатые края, поверхность гладкая или радиально исчерчена.

Идентификация биотипа (разновидности штамма) дифтерии

Идентификации разновидностей штаммов возбудителей дифтерии основана на способности бактерий расщеплять гликоген и крахмал. Для этих целей используется методика «длинного» ряда углеводов.

Принимая во внимание ферментативные признаки возбудителей и структуру колоний при росте на теллуритовых средах, выделяют 4 биотипа коринебактерий дифтерии: Corynebacterium diphtheriae gravis, Corynebacterium diphtheriae mittis, Corynebacterium diphtheriae intermedius и Corynebacterium diphtheriae belfanti.

Рис. 3. На фото слева колонии коринебактерий дифтерии гравис (Corynebacterium diphtheriae gravis). Они имеют большой размер, выпуклые по центру, радиально исчерчены, с неровными краями. На фото справа Corynebacterium diphtheriae mittis. Они небольшого размера, темной окраски, гладкие и блестящие, с ровными краями.

Определение токсикогенности дифтерийных палочек

Токсикогенность возбудителей дифтерии определяется после выделения культуры бактерий. Для этих целей используется методика диффузной преципитации в геле и методика определения токсикогенности бактерий в живом организме (на морских свинках).

Методика бактериоскопии

Лабораторная диагностика с применением микроскопии является второстепенным по значимости. Ввиду того, что возбудители дифтерии плохо впитывают красители, окраска по Граму считается не специфичной, однако она позволяет косвенно определить непатогенные коринебактерии, которые в мазке располагаются параллельно друг другу.

При окраске по Нейссеру выявляются характерные для дифтерийных палочек зерна Бабеша-Эрнста, которые располагаются на полюсах клеток, придавая им вид булавы.

В мазках патогенные дифтерийные палочки располагаются под углом друг к другу.

Для выявления зерен Бабеша-Эрнста применяется методика люминесцентной микроскопии. При окрашивании мазков корифосфином в микроскопе можно увидеть желто-зеленые тела бактериальных клеток с оранжево красными зернами волютина.

Рис. 4. Дифтерийные палочки под микроскопом. Окраска по Граму.

Рис. 5. На фото слева ложнодифтерийные палочки Гоффмана. Они часто обнаруживаются в носоглотке. Они толстые, короткие, располагаются в мазках параллельно друг другу. На фото справа патогенные бактерии. В мазке располагаются под углом друг к другу.

Серологическая диагностика дифтерии

Серологические исследования позволяют обнаружить антибактериальные и антитоксические антитела. Значимым является обнаружение антибактериальных антител, так как содержание антитоксина изменяется в связи с применением с первых дней антитоксической сыворотки. Наиболее распространенными в настоящее время является реакция пассивной гемагглютинации (РНГА и РПГА).

Иммуноглобулины G и M говорят об остроте инфекционного процесса.

Иммуноглобулины G говорят о недавно перенесенном заболевании.

Иммуноглобулины М говорят об остропротекающей дифтерии.

При дифтерии титр антител со временем повышается. Понижение концентрации антител свидетельствует о выздоровлении больного.

Противодифтерийные антитела образуются после вакцинации. В крови привитого человека они циркулируют многие годы.

Диагностика дифтерии с помощью иммунофлуоресцентного анализа

Благодаря применению методики флуоресцирующих антител стало возможным проведение качественного и количественного анализа внутриклеточных и поверхностных антигенов в образцах клеточных суспензий. Антигены визуализируются с помощью специфических антител с флуоресцентными маркерами. Использование данной методики доверяется только высококвалифицированному персоналу.

Диагностика дифтерии с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Методика ПЦР применяется для раннего выявления дифтерийных палочек, подтверждения диагноза и в случаях атипичной ангины. Обнаружение гена токсикогенности методом ПЦР является наиболее быстрым и надежным методом лабораторной диагностики дифтерии.

Наличие или отсутствие противодифтерийного иммунитета устанавливается при помощи внутрикожной пробы Шика, которая проводится с дифтерийным токсином.

В случае отрицательной реакции говорят о невосприимчивости к дифтерии. Реакцию Шика сегодня используют только по эпидпоказаниям. На ее проведение уходит несколько дней. Однако несмотря на это она помогает определить степень восприимчивости к дифтерии лиц, находившихся в контакте с больным и уточнить их иммунный статус.

microbak.ru

Правила забора материала для микробиологического исследования

Биологический материал целесообразно получать до начала антимикробной терапии.

Материал для бактериологического исследования берут непосредственно из очага инфекции или исследуют клинически значимый биологический материал.
Необходимо соблюдать асептику, избегая контаминации биологического материала посторонней микрофлорой.
Количество материала должно быть достаточным для проведения исследования.
Собирают материал в стерильную посуду с пробками, полученную в микробиологической лаборатории: для взятия отделяемого из раны, мазков со слизистых оболочек, из глаза, уха, носа, зева, цервикального канала, влагалища, анального отверстия следует использовать стерильные ватные тампоны, для крови, гноя, спинномозговой жидкости и экссудатов используют стерильные шприцы и специализированные транспортные среды, для мокроты, мочи и кала - стерильные плотно закрывающиеся небьющиеся контейнеры.

Внимание: необходимо следить за сроками годности посуды, полученной в лаборатории. Если посуда, стерилизуемая в лаборатории, не использована в срок, указанный на этикетках её необходимо вернуть в лабораторию для повторной стерилизации.

Нативный материал доставляют в лабораторию в максимально короткие сроки (для большинства образцов не позднее 1,5-2 ч после их получения). Допускается хранение материала в холодильнике при 4° С (это не относится к биологическому материалу, полученному из стерильных в норме локусов: ликвору, крови, внутрисуставной и плевральной жидкости!).
При использовании транспортных сред биологический материал можно хранить в течение 24 ч.
Жидкий биологический материал можно транспортировать непосредственно в шприце, на кончик которого надет стерильный колпачок или загнутая под углом игла.
Для исследования на анаэробы биологический материал необходимо помещать в анаэробные условия. Для жидких образцов (кровь, гной, экссудат, жидкости из стерильных полостей) используют специальные флаконы с жидкой питательной средой, заполненные газовой смесью определенного состава, куда из шприца уколом иглы через резиновую плотно завальцованную крышку вносят материал. Можно использовать анаэробные коммерческие тампоны с транспортной средой.
Транспортировка осуществляется в металлических биксах (пеналах), термоконтейнерах, которые должны легко подвергаться обработке.
К материалу прилагают сопроводительный документ, где указывают наименование, источник и метод получения биологического материала, дату и время его взятия; ФИО, пол и возраст больного; название учреждения, отделения, № палаты; предполагаемый диагноз инфекционной патологии и предшествующую антибактериальную терапию; фамилию и подпись врача, направившего материал для проведения бактериологического исследования.

Внимание: погрешности в правилах сбора материала для микробиологического исследования приводят к ошибкам в диагностике возбудителя и определении его антибиотикочувствительности.

Исследование крови

Для взятия крови используют стерильные шприцы или системы для одноразового пользования.
Кровь берут во время подъёма температуры из периферической вены с соблюдением правил асептики и мер индивидуальной защиты, предусмотренных при работе с кровью (использовать резиновые перчатки).
Кровь засевают в питательные среды сразу после взятия у постели больного или процедурной.
Перед использованием флаконов визуально определяют прозрачность среды, любое помутнение свидетельствует об их непригодности.
При подозрении на анаэробную инфекцию необходимо одномоментно собирать кровь в два флакона – с питательными средами для аэробного и анаэробного культивирования.
Не следует брать кровь из сосудистых катетеров, кроме случаев, когда предполагается инфекция катетерного происхождения.

Забор и посев кровиДля предотвращения контаминации кожу пациента над пунктируемой веной тщательно обработать следующей последовательности:

70% этиловым спиртом (или заменяющим его антисептиком)
5% настойкой йода (или йодопирона, йодоната, хлоргексидина) начиная обработку от центра будущего прокола к периферии - 30 секунд
этиловым 70% спиртом (или заменяющим его антисептиком)
дают высохнуть обработанному участку кожи
не пальпируя вену повторно, производят венепункцию
вновь обрабатывают участок 70% этиловым спиртом (или заменяющим его антисептиком).
При аллергической реакции на йод кожу дважды обрабатывают 70% этиловым спиртом (или заменяющим его антисептиком).

Использование сред, приготовленных в лаборатории:Среды в стеклянных флаконах, закрытые стерильными ватно-марлевыми пробками и предохранительными стерильными бумажными колпачками: - двухфазная среда» (комбинация плотной и жидкой среды в одном флаконе) – для роста аэробных микроорганизмов - полужидкие специальные среды - для роста анаэробных микроорганизмов

Посев осуществляют во флаконы со средами над пламенем спиртовой горелки.
Взятие и посев крови осуществляют два человека – в то время как один обрабатывает кожу пациента, пунктирует вену и берёт кровь, другой - над пламенем спиртовки
Открывает пробки флаконов, подставляет флаконы со средой под струю крови из шприца или системы, обжигает горлышки и пробки флаконов и закрывает их.
Рекомендуемое соотношение объёмов крови и среды 1:10 (10 мл у взрослых, 5 мл у детей)

Использование коммерческих сред: - для аэробных микроорганизмов (с зелёной крышкой) - для анаэробных микроорганизмов (с красной крышкой) - педиатрические флаконы – (с жёлтой крышкой) для исследования крови в объёме до 5 мл

Снимают предохранительную пластиковую крышку.
Дезинфицируют резиновую пробку флакона 70% этиловым спиртом (или заменяющим его антисептиком).
Дают просохнуть обработанной поверхности.
Прокалывают пробку флакона иглой шприца и производят посев крови.
Объём исследуемой крови по прилагаемой инструкции - обычно 10-30 мл для взрослых и 1- 5 мл для детей до 12 л (метка на этикетке флакона позволяет оценить объём взятой крови).
Сначала производят посев в «анаэробный» флакон, затем – в «аэробный» во избежание попадания воздуха из шприца.
Перемешивают осторожно круговыми движениями содержимое флакона.
Маркируют флаконы и до транспортировки в лабораторию содержат в термостате или при комнатной температуре в защищённом от света месте (не в холодильнике!!)
Исследования крови и других жидкостей организма с помощью анализатора культур крови BacT/ALERT-

При отсутствии в отделении флаконов для гемокультур.

В исключительных случаях, при экстренной ситуации допускается использование 20-миллилитрового шприца с иглами.
В шприц предварительно набирают 0,5-0,7 мл стерильного гепарина.
Заменяют иглу.
Затем пунктируют вену, соблюдая правила асептики. Набирают 10-15- мл крови.
Перемешивают осторожным покачиванием с гепарином (иглу со шприца не снимают).
В этом же шприце с согнутой у основания иглой (или надетым стерильным колпачком) немедленно отправляют в лабораторию.

Исследование сосудистого катетера

Исследуют при подозрении на инфекцию катетерного происхождения.
В асептических условиях отрезают его дистальный (внутрисосудистый) конец около 5 см длиной.
Помещают в стерильный контейнер (пробирку).
Доставляют в лабораторию немедленно.
Важно не допускать высыхания образца.

Исследование ликвора

Спинномозговую жидкость получают при люмбальной пункции или пунции боковых желудочков мозга в объеме 3 -5 мл, помещают в стерильную, желательно центрифужную пробирку и немедленно доставляют в лабораторию.
Полученную пробу доставить в лабораторию, избегая чрезмерного перегрева и особенно охлаждения (может быть использован термос). Охлаждение ликвора ниже 300 ведёт к гибели менингококков.
При невозможности немедленно доставить в лабораторию ликвор сохраняют при 370 в термостате.
При использовании коммерческих сред (BacT/ALERTFA и др.) свежевзятый ликвор в количестве 5-10 мл из шприца, проколов резиновую пробку, вносится во флакон со средой (см. исследование крови).

Исследование жидкостей организма из стерильных в норме полостей

Исследуют перитонеальную, синовиальную, плевральную, суставную, перикардиальную жидкости.
Для бактериологического исследования используют жидкости, взятые при пункции и аспирации.
Попавшие в шприц пузырьки воздуха удаляют и помещают жидкость в анаэробную транспортную систему или отправляют её в шприце, предварительно сняв (или загнув) иглу или надевают на канюлю защитный стерильный колпачок.
Минимальный объём жидкости для выделения бактерий 1-5 мл, для выделения грибов или микобактерий не менее 10 мл.
Избыток жидкости или гной транспортировать в стерильных контейнерах с завинчивающейся крышкой.
Взятие материала тампоном не предохраняет анаэробы от воздействия кислорода воздуха, не позволяет приготовить качественный препарат для микроскопии, не гарантирует выделение культуры при незначительном количестве микробов в образце.
Не рекомендуется использовать антикоагулянты (цитрат, этилендиаминтетрауксусную кислоту), подавляющие рост некоторых видов бактерий.
При необходимости лучше использовать гепарин.
При достаточном количестве жидкости можно производить посев из шприца во флаконы со средой для гемокультур в соотношении 1:5 - 1:10 (5-10 мл). Однако при этом становится невозможной прямая бактериоскопия материала, а сроки идентификации удлиняются на сутки в сравнении с изолятами, выделенными при первичном посеве на плотные среды.

Исследование материала при раневой инфекции

Взятие материала производит лечащий врач во время операции или перевязки.
В большинстве случаев исследуют поражённые ткани и аспираты.
Наиболее правильный способ взятия жидких материалов – объёмно с помощью стерильного шприца. Отбор материала тампоном производят только при невозможности осуществления объёмного метода.
Промыванием раневой поверхности физ. раствором удаляют местно применяемые антисептические и антибактериальные препараты.
Кожу вокруг раны обрабатывают спиртом или другим антисептиком, некротические массы, детрит, гной удаляют стерильной сухой салфеткой.
Все ёмкости с отобранным материалом плотно закрывают стерильными пробками.
Доставляют в лабораторию в течение 1 часа. При невозможности доставить материал в течение этого времени, он должен храниться в холодильнике, но не более 2 часов.

Можно использовать специальные транспортные контейнеры и пробирки со средами. На транспортной среде материал хранится 24 часа.

Отделяемое открытых инфицированных ранМатериал берут двумя стерильными тампонами (один для посева, второй - для бактериоскопии) круговыми вращательными движениями от центра к периферии поражённого участка помещают в стерильную пробирку.

Отделяемое из дренажей.

Берут стерильным шприцем и в количестве 1-2 мл помещают в стерильную пробирку или доставляют в шприце.
Можно использовать для исследования концы удалённых дренажных трубок

Кусочки тканейПомещают в другую плотно закрывающуюся стерильную ёмкость (пробирку), содержащую небольшое количество стерильного физ. раствора.Глубокие раны или абсцессы.

Поверхность раны дезинфицируют 70% этиловым спиртом, затем 1-2% йодным раствором.
Материал берут из глубины, избегая контаминации поверхностной микрофлорой раны.

Биоптат с ожоговой поверхностиПоверхность раны дезинфицируют и берут образец с помощью пункционной биопсии (3-4 мм) для количественного исследования.Язвы и узелковые утолщения

Пораженную область кожи дезинфицируют, удаляют поверхностный слой и делают соскоб со дна язвы или узелкового утолщения.
Если имеется экссудат, его собирают шприцем или стерильным тампоном.

Раны после укусов

Гнойное содержимое из раны получают шприцем после надреза, дренирования или поверхностной обработки инфицированной раны.
При свежих укусах бактериологическое исследование не проводят, так как в этот период трудно выделить этиологически значимый микроорганизм.

Кости

Материал получают при оперативном вмешательстве. Образец помещают в стерильный контейнер без формалина и других консервантов.
Для предотвращения высыхания образца в контейнер может быть добавлен стерильный физ.раствор.

Материал при инфекциях верхних дыхательных путейОбразцы из зева

Исследуют прежде всего для выявления α-гемолитических стрептококов группы А, H.influenzae( при эпиглотитах).При наличии специфического анамнеза проводят исследование для исключения гонококковой этиологии фарингита.
Не следует брать материал при воспалённом надгортаннике, так как может возникнуть обструкция дыхательных путей!
Мазок из зева следует брать до еды или через 2 - 3 часа после приёма пищи. Перед взятием пробы больному необходимо прополоскать рот тёплой кипячёной водой.
Аккуратно прижимая язык шпателем, вводят стерильный тампон между дужками миндалин и язычком.
Движением тампона вперёд и назад собирают материал с задней поверхности глотки, миндалин и участков воспаления или изъязвления слизистой.
Тампон помещают в стерильную пробирку, при необходимости используя транспортную среду.

Внимание: При взятии пробы со слизистой зева (глотки) нельзя касаться щёк, языка, дёсен, а также собирать слюну.

Взятие материала при исследовании на возбудителей дифтерии.

Для взятия материала используют стерильные ватные сухие тампоны.
Материал из ротоглотки и носа берут отдельными тампонами, натощак или не ранее, чем через 2 часа после еды, при хорошем освещении с использованием шпателя, не касаясь тампоном языка, слизистых щек и зубов.
При наличии налетов материал следует брать с границы пораженных и здоровых тканей, слегка нажимая на них тампоном.
Для взятия материала из носа используют один тампон, который вводят сначала в один, а потом в другой носовой ход, не касаясь крыльев носа снаружи
Необходимо обеспечить доставку материала в лабораторию не позднее 2-х часов, а при использовании глицериновых тампонов - в течение 4-х часов.

Бактериологическое исследование носоглоточной слизи на менингококки

Исследуемый материал берут из задней стенки носоглотки натощак или через 3 - 4 часа после еды стерильным ватным тампоном, укрепленным на изогнутой проволоке.
Материал берут с обязательным надавливанием шпателем на корень языка. Тампон вводят концом кверху за мягкое небо в носоглотку и проводят 2 -3 раза по задней стенке.
При извлечении тампон не должен касаться зубов, слизистой щек, языка и язычка.
Материал может быть взят смоченным тампоном, который затем доставляют в лабораторию.
Питательную среду для смачивания тампонов получают в бактериологической лаборатории. Можно использовать специальные транспортные среды.
Полученную пробу доставить в лабораторию, избегая охлаждения

Мазок со слизистой передних отделов полости носа.

Исследование обычно проводится для выявления носительства метициллинрезистентных штаммов S.aureus.
Мазок со слизистой носа берут одним стерильным тампоном.
Тампон вводится сначала в здоровую ноздрю до упора на уровне носовой раковины и вращательными движениями собирают материал со слизистой. Повторяют процедуру в другом носовом ходе.
Тампон помещают в стерильную пробирку.

Аспират из придаточных пазух

Исследуют при бактериальных синуситах помимо исследования микрофлоры носовой полости.
Материал отсылают в лабораторию в анаэробной транспортной среде или непосредственно в шприце.
He рекомендуется исследовать промывную жидкость из носоглотки, так как образцы контаминируются нормальной микрофлорой верхних дыхательных путей, что не позволяет правильно трактовать результаты анализа.
При хронических синуситах возможен прицельный забор материала для микробиологического исследования с использованием эндоскопов.

Исследование отделяемого ухаЖидкость при тимпаноцентезе

Исследуют при среднем отите в случаях, если первичная терапия оказалась безуспешной или если тимпаноцентез проводился как лечебная процедура.
Очищают наружный слуховой проход слабым раствором детергента, после прокола барабанной перепонки врач-отоларинголог шприцем собирает жидкость и помещает ее в стерильный контейнер или отправляет в лабораторию в шприце с загнутой иглой или с защитным колпачком.
При невозможности своевременной доставки целесообразно использовать транспортную среду.
При самопроизвольной перфорации барабанной перепонки экссудат собирают стерильным тампоном, используя слуховое зеркало. Однако в этом случае высока вероятность контаминации биологического материала эндогенной микрофлорой.

Материал при воспалении наружного уха.

Обрабатывают кожу 70% этиловым спиртом и промывают стерильным изотоническим раствором хлорида натрия (физраствором).
Материал из очага берут стерильным ватным тампоном. Тампон помещают в стерильную пробирку.
При поражении среднего и внутреннего уха исследуют пунктаты и материал, полученный во время оперативных вмешательств, собранные в стерильную пробирку или транспортную среду.

Исследование отделяемого глаз.

Накануне, за 6-8 часов (на протяжении ночи, предшествующей забору материала) отменяют все медикаменты и процедуры.
Материал забирают с пораженных мест в разгар воспалительного процесса с соблюдением правил асептики.

Отделяемое с конъюнктивы

Берут стеклянными стерильными палочками или платиновой петлей, предварительно фламбированной в пламени спиртовки и остуженной и погружают в 0,2 % сахарный бульон.
При наличии достаточно обильного гнойного отделяемого использую стерильные ватные тампоны (желательно коммерческие), которыми берут гной с внутренней поверхности нижнего века движением к внутреннему углу глазной щели.
Необходимо следить, чтобы при моргании ресницы не касались тампона (придерживать веки руками)

Край век.Корочки гноя удаляют пинцетом. Берут материал из язвочки у основания ресниц.Роговица.

Материал на исследование после обезболивания, можно взять платиновой петлёй или другим подходящим инструментом.
Если пациент применяет контактные линзы, необходимо исследовать их внутреннюю поверхность.
В кабинете врача производят посев на питательный бульон.
Пробы клинического материала доставить в лабораторию не замочив пробки, чтобы не исказить результат исследования.

Материал при инфекциях нижних дыхательных путей

Мокрота.

Исследуют свободно откашливаемую мокроту, утреннюю порцию, натощак
Пациент предварительно должен почистить зубы, дёсны, язык, слизистую оболочку щёк зубной щёткой и прополоскать рот кипяченой водой.
Если мокрота отделяется плохо, накануне пациенту дают отхаркивающие средства или проводят ингаляцию физ. раствором.
Мокроту собирают в стерильную посуду с крышкой.
Сроки доставки мокроты в лабораторию не должны превышать 1,5-2 часа от момента её получения (допускается хранение в холодильнике, но не более 6 часов), т.к. задержка ведёт к аутолизу S.pneumoniae, а за счёт размножения бактерий-контаминантов меняется истинное соотношение микрофлоры бронхиального секрета.

Качество собранной мокроты можно оценить по данным микроскопии нативных мазков по Граму.

При наличии в мазке мокроты более 10 эпителиальных клеток в поле зрения и менее 25 полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПЯЛ) при малом увеличении микроскопа (объектив Х10) высока вероятность контаминации образца содержимым полости рта (слюной). Дальнейшее исследование такого материала нецелесообразно, материал необходимо взять повторно.

Трахеобронхиальные смывы

Исследуют при отсутствии мокроты или невозможности её выделить естественным путём.
Специальным шприцем в трахею вводят около 10 мл стерильного физ. раствора и собирают откашливаемый смыв в стерильную посуду.
Бронхиальные смывы, в том числе вблизи очага воспаления, могут быть сделаны с помощью бронхоскопа.
Недостатком является очень часто значительное разведение трахеобронхиального содержимого, что снижает возможность выделения бактерий, а концентрация их падает примерно в 100 раз по сравнению с мокротой.

Плевральная жидкость.

Кожу перед пункцией обрабатывают 70% этиловым спиртом, затем спиртовой настойкой йода, затем опять спиртом.
После прокола жидкость собирают шприцем в стерильную пробирку и незамедлительно отправляют в лабораторию.
Допускается посев плевральной жидкости (по 5 мл) в аэробные и анаэробные флаконы, используемые для исследования крови.

Моча при инфекциях мочевыводящих путей

Исследуют утреннюю среднюю порцию (10-20мл) свободно выпущенной мочи (за ночь концентрация бактерий в мочевом пузыре возрастает).
Не следует принуждать пациента к приему жидкости для форсирования диуреза, так как происходит разбавление мочи и снижение числа бактерий.
Для сбора мочи используют стерильные ёмкости которые закрываются резиновой стерильной пробкой. Нельзя собирать мочу из мочеприемника или судна.
Перед взятием мочи проводят тщательный туалет наружных половых органов с мылом и кипяченой водой во избежание излишней ее контаминации при мочеиспускании нормальной микрофлорой промежности.
Доставка мочи в лабораторию должна осуществляться в максимально короткие сроки. Посев следует проводить не позднее 2 ч после взятия материала либо в течение 8 ч при условии ее хранения в холодильнике. (При 4°С число бактерий в моче обычно остается стабильным в пределах 24 ч).
Взятие мочи следует повторить, если нет условий для ее хранения в холодильнике, и с момента взятия образца прошло более 2 часов, в противном случае результаты анализа могут быть недостоверными.
Недопустимо бактериологическое исследование мочи, собранной в течение суток.
Не рекомендуется исследовать мочу, полученную при наличии постоянного катетера

Материал при инфекциях урогенитального трактаИсследование отделяемого женских половых органов Внимание: взятие материала для микробиологического исследования проводит акушер-гинеколог до проведения мануального исследованияАмниотическаю жидкостьСобирают через катетер, либо аспирируют при кесаревом сечении, либо пунктируют плодный пузырь.Материал из уретры

Собирают не ранее, чем через 1 ч после мочеиспускания.
Отделяемое из уретры собирают стерильным ватным тампоном.
Если отделяемое получить не удается, наружное отверстие уретры обмывают мылом и ополаскивают кипяченой водой, вводят в уретру тонкий стерильный «уретральный» тампон на глубину 2-4 см, аккуратно вращают его в течение 2 сек., вынимают, помещают в соответствующую транспортную среду и доставляют в лабораторию.

Материал из вульвы, преддверия влагалища

Берут стерильным ватным тампоном.
При воспалении бартолиниевых желез производят их пункцию.

Материал из влагалища.После введения зеркала и подъемника во влагалище материал собирают стерильным ватным тампоном с заднего свода или с патологически измененных участков.Цервикальный канал.

Обнажают шейку матки с помощью зеркал и влагалищную ее часть тщательно обрабатывают ватным тампоном, смоченным стерильным физраствором или стерильной водой.
Тонкий стерильный ватный тампон осторожно вводят в цервикальный канал, не касаясь стенок влагалища, и берут материал.
Для бактериологческого исследования можно использовать соскоб слизистой, полученный при диагностическом выскабливании стенок цервикального канала.

Матка.

Правильное взятие материала из матки может быть выполнено только при использовании специальных инструментов типа шприца-аспиратора., имеющего на зонде покрытие.
После прохождения зондом цервикального канала в полость матки раскрывают наружную оболочку зонда и набирают в шприц содержимое матки.
Материал из шприца помещают в стерильную пробирку.

Придатки матки.Материал из очага инфекции (гной, экссудат, кусочки ткани) получают при оперативном вмешательстве или при диагностической пункции опухолевидных образований, проводимой через влагалищные своды.Приготовление мазков для микроскопии.

Помимо взятия материала на посев врач-гинеколог готовит мазки для микроскопии (не менее двух - для окраски по Граму и специальными методами), используя отдельные стерильные тампоны или стерильные гинекологические инструменты.
Предметные стекла, предназначенные для приготовления мазков, маркируют.
Материал равномерно распределяют на предметном стекле осторожными движениями, избегая грубого втирания и резких штриховых движений инструментом.
Мазок высушивают при комнатной температуре, покрывают чистым предметным стеклом или помещают его в чашку Петри и отправляют в лабораторию.
Не допускается хранение влажного мазка между двумя стеклами.

Исследование отделяемого мужских половых органов Уретра.

Материал собирают не ранее 2 часов после мочеиспускания.
Вводят в уретру тонкий стерильный ватный тампон на глубину 2- 4 см, аккуратно вращают его в течение 1-2 сек., вынимают, помещают в транспортную среду и доставляют в лабораторию.

Исследование секрета простаты.

Перед отбором проб необходимо тщательно вымыть наружные половые органы и область заднего прохода тёплой водой с мылом, затем сполоснуть тёплой водой.
Проводят массаж простаты через прямую кишку. Материал собирают в стерильную пробирку или стерильным ватным тампоном.
При наличии симптомов острого простатита массаж простаты не проводят.
Для получения более достоверных результатов можно дополнить это исследование бактериологическим исследованием мочи, полученной перед и сразу после массажа простаты, что позволит выявить источник инфекции. Основным методом лабораторной диагностики простатита, позволяющим определить локализацию очага инфекции, является метод Meares и Stamey: исследованию подвергают первую порцию мочи, среднюю порцию мочи, секрет простаты и порцию мочи, полученные после массажа предстательной железы (так называемая 4-стаканная проба).
Пробы клинического материала доставить в лабораторию не замочив пробки, чтобы не исказить результат исследования.

Придатки яичек. Материал собирают путем аспирации с помощью шприца и иглы.

Язва полового члена.

Очищают поверхность язвы тампоном, смоченным физ.раствором.
Производят соскоб язвы до появления серозной жидкости.
Стерильной салфеткой удаляют жидкость и органические наслоения (следует избегать кровоточивости).
Надавливают у основания язвы до появления прозрачной жидкости, аспирируют ее шприцем с тонкой иглой, закрывают иглу защитным колпачком и транспортируют в лабораторию.

Соскобы мочеиспускательного канала, шейки матки для исследования на урогенитальный хламидиоз

Соскобы слизистых оболочек мочеиспускательного канала и шейки матки берут одноразовыми стерильными зондами, «щёточками», ложкой Фолькмана или аналогичными инструментами со слегка затуплёнными краями, соблюдая правила асептики и антисептики.
Наружные половые органы дезинфицируют, выделения удаляют тампонами или с помощью аспираторов.
При повышенной чувствительности слизистую оболочку предварительно анестезируют инстилляцией в мочеиспукательный канал 1-2 мл о.5% раствора дикаина.
Соскобы делают из глубины канала(до 6 см), со всех четырёх квадрантов.
Соскобы шейки матки берут после удаления слизистой пробки из глубины её канала, а также из влагалищной части шейки матки.
Соскобы берут осторожно, при лёгком надавливании. В материале должно быть возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи, экссудата и примесей крови.
Соскобный материал распределяют тонким слоем на поверхность 8-миллиметровой лунки чистого обезжиренного предметного стекла так, чтобы все стороны тампона соприкасались с поверхностью стекла.
Мазок высушивают на воздухе 20-30 минут.
Допускается хранение мазка на стекле до фиксации 2-3 часа при комнатной температуре.
Мазки фиксируют соответственно методу окраски.

Материал при исследовании на анаэробыОбщие показания к обследованию: сепсис неясной этиологии, гангрена, абсцессы, флегмона, перитонит, экссудативный плеврит, нагноения ран с подозрением на анаэробную инфекцию, гнойный артрит. Образцы клинического материала для исследования на анаэробы во избежания контакта с атмосферным воздухом получают при использовании инвазивных методов забора.

Исследуемые материалы: кровь, плевральная, перитонеальная и синовиальная жидкости, гной из абсцессов и других закрытых полостей (если объем гноя превышает 2 мл, то в пробирке под резиновой пробкой сохраняются относительно анаэробные условия в течение нескольких часов), материалы из глубоких отделов свища (после очистки и асептической обработки наружного отверстия) и ран.

Если нет возможности использовать метод аспирации шприцем, материал берут стерильным ватным тампоном, который помещают в анаэробную транспортную среду сохранения и до транспортировки в лабораторию содержат при комнатной температуре;Фрагменты костной и мышечной тканей размером 1x1 см, взятые из глубокого очага воспаления во время операции (если сроки доставки материалов в лабораторию превышают 15-20 мин, фрагменты тканей погружают в небольшой объем стерильного физраствора).Не подлежат исследованию на анаэробы: отделяемое поверхностных ран и язв, мазки из зева, носа и ротовой полости,мазки из влагалища и цервикального канала, мокрота и бронхиальные смывы, моча (кроме мочи, полученной надлобковой пункцией мочевого пузыря), содержимое желудка, тонкого и толстого кишечника, фекалии (за исключением предполагаемой Clostridium difficile-ассоциированной диареи).

Исследование фекалий на патогенные и условно-патогенные энтеробактерии и дисбактериоз.

При исследовании на дисбактериоз пациент за 1-3 дня до взятия пробы должен находиться на диете, исключающей приём продуктов, усиливающих процессы брожения в кишечнике, а также алкоголь, антимикробные лекарственные препараты и т. п.
Фекалии собирают сразу после дефекации из предварительно обработанного дез. раствором и тщательно промытого водой судна, горшка, специального лотка или с пеленки с помощью стерильной стеклянной палочки, проволочной петли или деревянного шпателя.
Порцию фекалий помещают в стерильный флакон.
Объём испражнений для исследования на патогенные энтеробактерии, флору и на дисбактериоз должен составлять 1/3 флакона, объёмом 20 мл.
При наличии в испражнениях патологических примесей (слизь, хлопья, гной) их следует включать в исследуемую пробу.
Материал доставляется в лабораторию в кратчайшие сроки
Испражнения для исследования на патогенные энтеробактерии можно получить непосредственно из прямой кишки с помощью ректальных, ватных или ватно - марлевых тампонов, укрепленных на металлической или деревянной палочке, вводя их круговыми движениями в прямую кишку на 6-8 см.

Исследование желчи (дуоденального содержимого) при инфекциях желчевыводящих путей

Желчь собирают при зондировании в процедурном кабинете отдельно по порциям: А, В и С (соответственно дуоденальное содержимое, пузырную желчь и желчь из желчных протоков) в три стерильные пробирки, либо во время оперативного вмешательства с помощью шприца в одну пробирку.
Дуоденальное содержимое и желчь имеют зеленовато - желтый цвет и щелочную реакцию. Кислая реакция, белесоватый оттенок жидкости, наличие хлопьев, свидетельствует о примеси желудочного сока, такой материал не пригоден для исследования.
Полученные порции желчи доставляют в лабораторию не позднее 1 -2 ч от момента получения, следя за тем, чтобы пробирки находились в строго вертикальном положении

Микробиологическое исследование грудного молока.

Отбор проб грудного молока производится в поликлинике или стационаре в специально выделенном помещении.
Перед сцеживанием молока женщина должна вымыть руки с мылом, тщательно обрабатывает соски и околососковую область молочных желез отдельными ватными тампонами, смоченными 700 спиртом (каждая железа обрабатывается отдельным тампоном).
Молоко из правой и левой молочных желез собирается в отдельную посуду.
Первые 5-10 мл сцеженного молока исследованию не подлежат.
Последующие 3-5 мл сцеживаются в стерильные флаконы, которые закрываются стерильными пробками и доставляются в лабораторию не позднее 2-х часов в вертикальном положении во избежании опрокидывания и замачивания пробок.
До момента исследования молоко должно храниться в холодильнике.
Сцеженное накануне молоко исследованию не подлежит.

Правила забора и доставки материала от больных и контактныхв вирусологическое отделение МЛ ГЦГЭ.Пробы от больных гриппом и ОРВИ

Для вирусологического исследования отбирают при первом появлении клинических симптомов, т.е. в остром периоде заболевания (не позднее третьего дня), так как в этот период в носоглотке больного, а также в крови находится максимальное количество вируса.
Пробы немедленно доставляют в вирусологическое отделение МЛ ГЦГЭ (ул. Короля,23, тел. 200-92-51).
Материалом для исследования служат соскоб из носа и мазок из зева, а также сыворотки крови, взятые в начале болезни и в период выздоровления.

Соскоб из носа.Необходимо предварительно очистить полость носа от слизи ( взрослым – высморкаться, детям – очистить с помощью ватных турунд). Тампон вводят на глубину 2-3- см до нижней раковины, затем слегка опускают книзу , вводят в нижний носовой ход под нижнюю раковину, делают вращательное движение на пол оборота, таким образом, чтобы в мазке было как можно больше эпителиальных клеток. Удаляют тампон вдоль наружной стенки носовой полости, опускают в пробирку с физиологическим раствором. Палочку обломать, флакон закрыть резиновой пробкой. Для ранней диагностики краснухи выявляют антиген в клетках цилиндрического эпителия носа от больных или контактных. В качестве материала для исследования служит соскоб из нижнего носового хода (см.п.1- соскоб из носа).Мазки из зеваРекомендуется мазки делать до еды. Мазки отобрать при помощи сухого стерильного ватного тампона на палочке, которым протереть поверхность миндалин, задней стенки глотки и небных дужек. Тампон не должен касаться языка и слизистой полости рта. После взятия мазка тампон поместить в среду (розового цвета) во флакон из-под пенициллина, палочку обломать, флакон закрыть резиновой пробкой.

Кровь для серологических исследований

Парные сыворотки исследуют для определения прироста титра антител к вирусам (во второй сыворотке по сравнению с первой).
Первую кровь берут в самом начале заболевания, вторую – 10-14 дней спустя.
Кровь в объеме не менее 1 мл берут в чистую центрифужную пробирку, отделяют сыворотку и помешают в пластиковую пробирку, которую хранят в морозильной камере до взятия второй сыворотки от того же больного.
В вирусологическое отделение МЛ обе сыворотки доставляются одновременно.
Результаты исследования зависят от качества доставляемого материала, от сроков забора и своевременной доставки в лабораторию.

Пробы фекалийДля обследования контактных с рота -, энтеро-, полиовирусной инфекцииями забирают пробы фекалий массой 1-2 г. в чистый флакон.

sarstedt.com.ua

Микробиологическое исследование

Количество просмотров публикации Микробиологическое исследование - 60

Цель исследования: выявление возбудителя.

Материал для исследования:

1. Мокрота

2. Экссудат из плевральной полости

3. Асцитическая жидкость и кал

4. Моча

5. Спинномозговая жидкость

6. Кровь

Способы сбора материала:

1. Мокрота (утренняя) – собирают в широкогорлую стеклянную баночку

2. Экссудат из плевральной полости – берут стерильным шприцем в стерильную колбу

3. Асцитическая жидкость – то же

4. Кал – собирают в стерильную банку

5. Моча – берут стерильным катетером в стерильную колбу

6. Спинномозговая жидкость – 3-5 мл из спинномозгового канала берут стерильной иглой, соблюдая привила асептики, в 1-2 стерильные пробирки. Закрывают ватно-марлевыми пробками и оставляют при комнатной температуре. Через 24 часа на поверхности жидкости образуется пленка, в которой находятся микобактерии туберкулеза

7. Кровь – 8-19 мл берут стерильным шприцем

Основные методы исследования:

1. Бактериоскопический

2. Люминесцентный

3. Бактериологический

4. Биологический

5. Аллергический

Вопросы для самоконтроля:

1. К какому роду относят возбудитель дифтерии?

2. Каково латинское название возбудителя дифтерии?

3. Каков перевод слова coryna?

4. Каков дословный перевод слова diphthera?

5. С чем связаны утолщения на концах палочек дифтерии?

6. Какую форму имеет возбудитель дифтерии?

7. Какую форму в связи с утолщениями имеет возбудитель дифтерии?

8. Подвижны ли C. diphtheria?

9. Характерно ли споро–и капсулообразование у возбудителя дифтерии?

10. Как возбудитель дифтерии окрашивается по Граму?

11. Какой метод окраски применяется для выявления возбудителя дифтерии?

12. Как располагаются возбудители дифтерии в мазке?

13. Как располагаются в мазке дифтероиды и сложнодифтерийная палочка?

14. Перечислите, какие 3 биовара C. diphtheria вы знаете?

15. Какие среды используются для культивирования C. diphtheria?

16. Какого цвета колонии возбудителя дифтерии на средах Клауберга и КТА?

17. Кто должна быть источником инфекции?

18. Какую форму имеют микобактерии туберкулёза?

19. Как палочки туберкулёза относятся к красителям?

20. Какие формы являются патогенными?

21. Какой тип дыхания у палочки туберкулёза?

22. Что по форме напоминает коринебактерии дифтерии?

23. Какие среды являются дифференциально-диагностическими для коринебактерий дифтерии?

24. Какие биовары коринебактерий вы знаете?

25. Какие токсины выделяют коринебактерии?

26. Какие ферменты патогенности у коринебактерий?

27. Какие биотипы холерных вибрионов вы знаете?

28. С какого времени вибрион Эль Тор считают возбудителем холеры?

29. Какую форму имеют холерные вибрионы?

30. Какие среды используют для культивирования холерных вибрионов?

31. Как они окрашиваются по Граму?

32. Подвижны ли холерные вибрионы?

33. К какой группе подвижных бактерий по количеству и местонахождению жгутиков относятся V. cholerae?

34. Какие токсины выделяют холерные вибрионы?

35 На что действует холероген?

36. Какие 3 серотипа холерных вибрионов вы знаете?

37. Каким бактериофагом лизируется классический биотип холерного вибриона?

38. К какой группе инфекции относят холеру?

39. Кто является источником инфекции при холере?

40. К какому роду относится возбудитель чумы? (

41. Какую форму имеет возбудитель чумы?

42. Характерно ли спорообразование для возбудителя чумы?

43. Какая температура является оптимальной для роста возбудителя чумы?

44. Что напоминают юные колонии возбудителя чумы?

45. Какая форма колоний (R или S) является вирулентной у возбудителя чумы?

46. К какому семейству относиться возбудитель сибирской язвы?

47. Каково латинское название возбудителя сибирской язвы?

48. Характерно ли спорообразование для Bacillus anthracis?

49. Характерно ли капсулообразование для Bacillus anthracis?

50. Какую форму имеют возбудители сибирской язвы?

51. Как он окрашивается по Граму?

52. Как располагаются споры у сибиреязвенных бацилл?

53. Как располагается возбудитель сибирской язвы в мазке?

Тест №1 на тему ʼʼТуберкулёзʼʼ

1. Возбудители туберкулёза человека:

а) M. tuberculosis, M.leprae

б) M. tuberculosis, M. bovis

в) M. tuberculosis, M. avium

г) M. tuberculosis, M. kansasii

д) M. tuberculosis, M. scrofulaceum

2. Возбудители микобактериозов человека(верно все, кроме)

а) Mycobacterium tubercolosis

б) M. kansasii

в) M. avium

г) M. intracellulare

д) M. scrofulaceum

3. особенности микобактерий туберкулёза (верно все, кроме):

а) кислотоустойчивость

б) медленный рост

в) устойчивость во внешней среде

г) требовательность к питательным средам

д) наличие одного типа нуклеиновой кислоты

4. Особенности микобактерий туберкулёза, связанные с высоким содержанием липидов (верно все, кроме):

а) не окрашиваемость обычными способами

б) не способность к спорообразованию

в) требовательность к питательным средам

г) устойчивость во внешней среде

д) внутриклеточное выживание

5. Окраска микобактерий туберкулёза по Цилю-Нилбсену зависит от:

а) соотношения ДНК и РНК

б) чувствительности к антибиотика

в) высокого содержания липидов

г) высокого содержания нуклеопротеидов

д) высокого содержания пептидогликана

6. Для идентификации микобактерий туберкулёза определяют (верно все, кроме):

а) образование никотиновой кислоты (ниациновый тест)

б) кислотоустойчивость

в) образование токсина

г) чувствительность к салициловому натри

д) особенности роста на среде Левенштейна-Иенсена

7. Источник инфекции при туберкулёзе:

а) бактерионосители

б) реконвалесценты

в) больные люди – бацилловыделители

г) пищевые продукты

д) предметы обихода больного

8. Пути заражения при туберкулёзе (верно всё, к р о м е):

а) трансмиссивный

б) контактный

в) воздушно-капельный

г) трансплацентарный

д) алиментарный

9. Особенности патогенеза при туберкулёзе (верно всё, к р о м е):

а) образование инфекционных гранулем

б) образование фибринозной плёнки

в) казеозный распад гранулем

г) персистенция возбудителя

д) аллергическая перестройка организма

10. При туберкулёзе ЧЛО процесс локализируется на:

а) десне

б) верхней губе

в) нижней губе

г) нёбе

д) в области передних зубов

referatwork.ru

Реферат: Литература - Микробиология ВОЗБУДИТЕЛИ ДИФТЕРИИ И ТУБЕРКУЛЕЗА)

Лекция по микробиологии.

ВОЗБУДИТЕЛИ ДИФТЕРИИ И ТУБЕРКУЛЕЗА.

Дифтерия поражает детские коллективы и все вновь создаваемые коллективы (1, 9 классы школы и училищ, армейские коллективы). Сегодня дифтерия очень актуальна.

Семейство Corinobacteriaceae объединяет порядка 60 видов из них примерно 20 патогенны для человека и животных.

Corinobacterium Difteriae -- микроб патогенный только для человека. Слово Corine обозначает булава. На обоих концах бактерии есть булавовидные утолщения. Считается что эти булавидные утолщения связаны с накоплением на обоих концах питательных веществ в зернах волютина, что выявляется окраской по Нейсеру. Волютин -- это полиметафосфаты, окрашиваются в синий цвет. Коринобактерии довольно мелкие, полиморфные, располагаются в мазке под углом друг к другу, изображая букву L.

Впервые выделил и описал коринобактерии дифтерии Лефлер. При делении они делятся вдоль. Дифтерийная палочка -- аэробы, имеют набор сахоролитических ферментов, расщепляют глюкозу, иногда крахмал и сахарозу.

Они хорошо устойчивы во внешней среде и на предметах (они могут передаваться через посуду, предметы). Протеолитических ферментов у возбудителя дифтерии нет вообще, потому применяются сложные питательные Среды. Они содержат аминокислоты, витамины и как правило кровь. Основная плотная Среда -- Среда Клауберга, жидкая Среда -- Среда Костюковой. В среду Клауберга входит и эритрацитарная масса и гемолизированная кровь. Обе Среды содержат гелурит калия или натрия. Рост дифтерийной палочки на них -- потемнение (черные полоски на среде Клауберга, а Среда Костюковой-- темнеет) это очень удобно при массовых исследованиях.

Дифтерийные коринобактерии вирулентны в R-форме. Для R-формы характерны шероховатые колонии. По культуральным свойствам выделяют 2 типа: 1) gravis (тяжелый), 2)mitio (легкий). Gravis описывается как цветок маргаритки: круглый выпуклый центр и фестончатый край, радиальная исчерченность по периферии. Mitio -- гладкая выпуклая ко.... с ровными краями. Раньше считалось что gravis вызывает более тяжелое заболевание чем mitio, но это не так такой зависимости нет (зависит только от токсина).

Дифтерийные палочки имеют большое количество антигенов. В нашей стране наиболее распространены 7 антигенных типов. Их можно фаготипировать. Есть циногенные культуры (коринобактерии продуцируют цины 2 типов). Существуют циночувствительные культуры.

Ген токсигенности дифтерийной палочки не находится в хромосоме, а находится в ДНК умеренного фага. Если ДНК такого фага интегрируется в геном дифтерийная палочка начинает продуцировать токсин. Это явление было открыто в 1951 году (сейчас это доказано для возбудителя ботулизма, для некоторых энтеротоксигенных кишечных палочек, для холерного вибриона). Такое явление называется фаговая конверсия. Вообще лизогенная конверсия -- это привнесение профагом информации в бактериальную клетку. Если же профаг приносит факторы вирулентности, то такая конверсия называется фаговой. Токсин дифтерийной палочки -- истинный экзотоксин. Это белок состоящий из 2 субъединиц А и В. А имеет меньшую молекулярную массу, а В большую. Субъединица В отвечает за рецепцию. Когда субъединица В соединилась с клеткой, она остается снаружи, а А -- проникает внутрь клетки где находит фермент амитрансферазу-2, участвующий в синтезе белка. Он характерен для эукариотов. Этого фермента в каждой клетке 1-2 молекулы. Таким образом 1-2 молекулы экзотоксина достаточно чтобы остановить синтез белка в клетке. Токсин дифтерийной палочки очень ядовит. Его минимальная летальная доза для морской свинки весом где-то 235 гр составляет 0.06 микрограмма. Высокая ядовитость противоположна малой

инвазивности. Дифтерийная палочка имеет фактор похожий на гиалуронидазу, гемолизины, корд-фактор. Корд-фактор находят и у туберкулезных палочек. Это вещество которое не дает микробам расходиться друг от друга, склеивает их. Инвазивность дифтерийной палочки несмотря на наличие этих факторов считается нулевой, т.е. палочка попала в организм и не двигается с места.

ФОРМЫ ДИФТЕРИИ.

Самая частая форма дифтерии -- дифтерия зева. На втором месте -- дифтерия зева и носа. На 3мместе -- дифтерия носа. Остальные формы дифтерии -- редкие: дифтерия раны, пупочного кольца, половых органов, ануса, глаза. Лизоцим на дифтерийные палочки вообще не действует. Есть коринобактерия -- нормальный обитатель глаза -- Corinobacterium xerosis. Там где размножается дифтерийная палочка образуется пленка. Эта пленка состоит из чистой культуры дифтерийных микробов которые связаны корд-фактором и фибрином. Микробы в составе этой пленки никуда не распространяются, а распространяется только токсин. Если дифтерийная палочка попала на орган покрытый многослойным эпителием (зев, глотка) то развивается дифтерийное воспаление. При этом пленка плотно связана с подлежащими тканями (при удалении пленки - слизистая разрушается). Если дифтерийная палочка попала на орган покрытый однослойным плоским эпителием (более низкие отделы - гортань, трахея, бронхи) то воспаление будет крупозное. Пленка будет легко отделятся от подлежащей ткани (сама) и может перекрывать дыхательные пути и вызывать асфиксию. Дифтерия опасна также тем что происходит отек гортани и дыхательные пути перекрываются. Есть третья причина асфиксии -- дифтерийный токсин действует на дыхательный центр угнетающе. Пленки надо отсасывать (раньше врачи это делали ртом, сами при этом заражались).

Токсин действует еще на надпочечники и сердечную мышцу, которые фактически не функционируют. Вылечить такого ребенка можно только с помощью противодифтерийных сывороток. Противодифтерийная сыворотка - антитоксическая. Применение ее является противопоказанием для серодиагностики. Применяют для лабораторной диагностики бактериоскопический метод (можно покрасить любой краской, отличия сразу видны) и бактериологический. Сыворотка лошадиная, применяется в огромных дозах до 30000 МЕ. Это примерно 30 мл. Поэтому возможно развитие сывороточной болезни. Поэтому она вводится по Безредко, дают антигистаминные препараты.

ПРЕПАРАТЫ ДЛЯ АКТИВНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ДИФТЕРИИ.

1. Основной препарат -- дифтерийный анатоксин (АД-анатоксин). Он получен из дифтерийного токсина по Романову 0.4% формалином. Он обязательно сорбируется на гидроокиси Al. Так как анатоксин легко растворяется, рассасывается , то нужно создать депо. Вводится под лопатку, т.к медленнее всего рассасывается. 2. АДС-анатоксин -- адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин. 3. АДСМ-анатоксин (М-- минимальный,т.е в очень маленьких дозах антиген (в 4 раза меньше доза). Применяется при аллергии. Вместо одного введения делают два. 4. АКДС - вакцина. Сюда прибавляется убитые коклюшная вакцина, которая создает антимикробный иммунитет. Здесь “А” -- ассоциированная. Очень реактогенный препарат. Если ребенок на 2мгоду жизни не привит, то ему не нужно прививать коклюшную вакцину, т.к коклюш уже не опасен., прививают АДС. Промежуток между вакцинациями АКДС вакцины должен быть не более 6 месяцев. Прививку нельзя делать если ребенок простужен.

ВОЗБУДИТЕЛЬ ТУБЕРКУЛЕЗА.

Относится к семейству Micobacterioceae к порядку Actinomycetoles. Актиномицеты имеют сходство с грибами : они медленно растут на питательных средах, малый диаметр гиф, способны давать ветвящийся рост. Однако есть общее и с бактериями -- во-первых это прокариоты, во-вторых у актиномицетов клеточное стенка такая же как у бактерий, рибосомы, жгутики бактериального типа.

Семейство микобактерий включает около 200 видов. У человека заболевание вызывают Mycobacterium tuberculosis, M. Bovis, M. Afrecanus, M.lepra (возбудитель проказы).

Все микобактерии характеризуются кислотоустойчивостью, которая обусловлена высоким содержанием жировосковых веществ в клеточной стенке микобактерий: это миколовая, туберкулостеариновая, туберкулопальмитиловая кислоты. Эти кислоты встречаются только у туберкулезных палочек. Эти вещества позволяют микобактериям быть устойчивыми в агрессивных средах, устойчивы к высушиванию. В пыли, высохшей мокроте возбудители туберкулеза могут сохранятся до 6 месяцев. Окрасить микобактерии вследствие их кислотоустойчивости также очень трудно. Открыл микобактерию туберкулеза Кох. Красят их по Цилю-Нильсону (окрашиваются в красный цвет).палочки Коха также чуть изогнутые.

Микобактерии облигатные анаэробы, растут в виде поверхностной пленки. У них есть сахаро- протео- и липолитические ферменты. Требовательны к питательным средам, которые должны содержать аспарагин и глицерин. Основная Среда -- Левенштейна-Нейсена. Плотная желточная Среда, содержит малахитовую зелень. Растут микобактерии крайне медленно -- первые признаки роста обнаруживаются к концу 3ейнедели.

Существует большая группа условнопатогенных микобактерий которые вызывают микобактериозы. Микобактероизы часто похожи на туберкулез и на проказу. Есть и группы условно-патогенных микобактерий по способности продуцировать пигмент:

1.фотохромогенные - образуют пигмент на свету

2.скотохромные - независимые

3.нехромогенные и быстрорастущие - вырастают в пределах одной недели. Пигмент оранжево-желтого цвета продуцируется на свету. К быстрорастущим относится М.smegmatis представитель нормальной микрофлоры.

ПАТОГЕНЕЗ. Основное действующее вещество микобактерий туберкулеза -- эндотоксин-аллерген, названный Кохом туберкулином. Основная защита макроорганизма -- клеточная на уровне фагоцитов, на уровне специфических Т-лимфоцитов.

Источник инфекции - больной человек или животное (для М.bovis). механизм передачи аэрозольный, может быть и алиментарным. Почти в 100% туберкулезная палочка вызывает туберкулез легких, иногда ЖКТ, мочеполовой системы, кости - это вторичные процессы.

Если фагоцитоз микобактерий завершенный -- очаг обезвествляется и процесс заканчивается ( в корне правого легкого у каждого из нас есть так называемый очаг Гона). Если фагоцитоз незавершен, образуется специфическая гранулема, появляются гигантские многоядерные клетки Пирогова-Ланганса, в которых много туберкулезных палочек, развивается некроз. В центре гранулемы -- творожистый некроз. Образуется полость --каверна, если она сообщается с наружной средой то туберкулезная палочка будет выходить наружу -- это открытая форма туберкулеза (исследуют мокроту на содержание палочек при открытой форме туберкулеза).

Фтизиатры делят туберкулез на активный и неактивный. Активный туберкулез -- это когда обнаруживается антитела в РСК или в РНГА (реакция связывания комплимента или нагрузочной гемагглютинации). Титр антител очень маленький: диагностический титр 1: 5. Антитела не играют защитной роли.

Также для аллергодиагностики применяют пробу с туберкулином (Манту). Официальное название туберкулина -- протеин-туберкулин-дериват (т.е прозводное кожи) Линкинова.

Проба Манту проводится внутрикожно.

Специфическая профилактика -- вакцина BCG.

Лечение - использавание ПАСК, изониазида, антибиотиков (стрептомицин, канамицин).

superbotanik.net

Материал для исследования при дифтерии

Исследуют слизь или отделяемое из пораженных органов (нос, глотка, глаз). Материал собирают тампоном. Его делают из плотной, негнущейся проволоки длиной 15 см, которую прокалывают через пробку. На одном конце (его в последующем опускают в сухую, чистую пробирку), накручивают вату; на другом, наружном, проволоку загибают в колечко для удобства держания и предупреждения травм рук персонала.

Тампоны, погруженные в пробирки, завертывают в бумагу (по 10 штук) и стерилизуют сухим жаром. Запас тампонов должен быть в лаборатории, в детских учреждениях постоянно.

Чаще всего материал берут из зева и носа. Больной должен широко открыть рот, его язык фиксируют шпателем и стерильным тампоном снимают налет или слизь на границе пораженного участка. По возможности – посев проводить тотчас. Для пересылки в лабораторию следует оберегать тампон от высыхания (пред тем, как брать материал, тампон нужно смочить в стерильном 5 % растворе глицерина или в физиологическом растворе).

Приложение 2

Микробиологическое исследование при дифтерии

Бактериоскопический метод

Мазок, окраска по методу Грамма, Нейссера, Леффлера,

РФ (люминесцентная микроскопия)

Бактериологический метод

Посевы на:

- кровяной агар,

- свернутую сыворотку,

-среду Клауберга (накопление изолированных колоний)

- среду Бучина

Изучение изолированных колоний:

-характер колонии, наличие гемолиза,

-мазки из колоний (окраска по Граму, Нейссеру),

- посев на пестрый ряд,

-определение протеолитической активности,

- проба Пизу на цистиназу,

- проба Закса на уреазу,

- определение токсигенности (РП в агаре, ИФА, ПЦР – обнаружение toxгена)

- реакция агглютинации с типовыми АТ на стекле.

Учет результатов. Идентификация вида. Диагноз.

Приложение № 3.

Дифференцирующие пробы.

Проба Пизу для определения цистиназы

В столбик МПА с цистином уколом засевают изучаемую культуру. Пробирку ставят в термостат при + 370 С. Через 20 – 24 часа по ходу укола среда чернеет и на глубине 1 – 1,5 см от поверхности в среде появляется коричневое облачко (дифтерийные бактерии, расщепляя с помощью цистиназы цистеин, восстанавливают ацетат свинца, добавленный в среду, в сульфит свинца черного цвета).

Дифтероиды никогда не образуют «облачка», хотя могут обусловить (+) слабое почернение среды по ходу укола.

Проба Закса для выявления фермента уреазы.

Их смешивают перед употреблением и вносят в среду в соотношении 1: 9;

1 петлю чистой культуры вносят в среду и тщательно растирают по стенке пробирки;
После 20 – 30 минут инкубации при + 370С наблюдают за изменением цвета среды.

Дифтерийные бактериине изменяют цвета среды, не расщепляют мочевину, т.к. фермента уреазы не имеют.

Дифтероидыс помощью уреазы расщепляют мочевину с образованием аммиака, который щелочит среду и изменяет цвет среды (красный – за счет индикатора – фенолового красного.

Приложение 4

Биохимические свойства дифтерийной палочки и сходных с ней коринебактерий

Виды и биоварианты	Зерна волю тина	Гемо лиз	Ферментация углеводов					Проба на:
Виды и биоварианты	Зерна волю тина	Гемо лиз	Саха роза	Глюко за	Маль тоза	Ман нит	Крах мал	Цисти назу (Пизу)	Уреазу (Закса)
I. C.diphtheriae Биовар V.gravis	+	-	-	К+	К+	-	+	+	-
Биовар V.mitis	+	+	-	К+	К+	-	-	+	-
II. C.Hoffmani	-/+	-	К+	К+	К+	-	-	+/-	+
III. C.xerosis	-/+	-	-	-	-	-	-	-	+

Приложение 5

Схема лабораторной диагностики коклюша.

(материал – слизь из верхних дыхательных путей)