Анализ спинномозговой жидкости [цереброспинальной, ликвора]. Реферат ликвор

2.4 Методы лабораторного исследования ликвора

Оглавление:

1. Введение…………………………………………………………………………..3

2. Лабораторные методы исследования ликвора………………………………….3

   1. Физиология ликвора…………………………………………………………..3

   2. Состав и функции ликвора……………………………………………………3

   3. Преаналитический этап……………………………………………………….7

   4. Методы лабораторного исследования ликвора……………………………..9

      1. Макроскопия ликвора………………………………………………………...9

      2. Микроскопическое исследование ликвора………………………………….10

      3. Общеклиническое исследование ликвора…………………………………...15

      4. Биохимическое исследование ликвора………………………………………22

3. Заключение………………………………………………………………………..31

1. ВВЕДЕНИЕ

Исследования ликвора – это неотъемлемая часть диагностики заболеваний, поражающих центральную нервную систему. Спинномозговая жидкость является непосредственным продолжением внеклеточного и перикапиллярного пространства нервной ткани, поэтому она немедленно реагирует на любые изменения, произошедшие в мозге. По физико-химическим параметрам и клеточному составу ликвора можно судить о характере патологии, ее стадии и контролировать ход лечения. При вирусных инфекциях центральной нервной системы в спинномозговой жидкости обнаруживаются антигены возбудителя, при бактериальных микроскопическим методом выявляются микробные тела, бактериологическим – определяется вид бактерий и их чувствительность к антибиотикам.

Современные возможности лабораторной диагностики существенно расширили объем информации, который можно получить в результате люмбальной пункции. Создание высокочувствительных методов

1. ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ЛИКВОРА

1. Физиология ликвора

Ликвор (спинномозговая жидкость) – это биологическая жидкость, которая омывает структуры центральной нервной системы. Синтез ее происходит в венозных сосудистых сплетениях боковых желудочков головного мозга, откуда по через foramen interventriculare жидкость поступает в III мозговой желудочек. Последний через сильвиев водопровод сообщается с IV желудочком, из которого по срединной и боковой апертурам ликвор переходит в подпаутинное пространство спинного и головного мозга. Незначительная часть жидкости проникает также в субдуральное пространство.

Рисунок 1 – Схема основных путей образования ликвора.

Образование ликвора в боковых желудочках происходит достаточно интенсивно, благодаря чему в их полости создается достаточное давление, чтобы придать току жидкости каудальное направление. Однако, спинномозговую жидкость нельзя приравнять к фильтрату плазмы крови, так как к ней примешивается внеклеточная жидкость нервной ткани, поступающая через эпендиму желудочков. В какой-то мере происходит и обратный процесс – поступление ликвора через эпендиму к нейроцитам и клеткам глии.

Современные радиоизотопные методы исследования позволили установить, что спинномозговая жидкость в течение нескольких минут покидает полость желудочков и в течение 4-8 часов поступает в подпаутинное пространство из цистерн основания мозга. В сутки у взрослого человека секретируется около 500 мл ликвора, количество его в ликвороносных путях составляет 125-150 мл (10-14% от массы головного мозга). В боковых желудочках находится по 10-15 мл жидкости, в III и IV суммарно около 5 мл, в подпаутинном краниальном пространстве – 30 мл, в спинальном – 70-80 мл. В течение суток ликвор сменяется до 3-4 раз у взрослых и до 8-ми раз у детей.

Циркуляция ликвора в субарахноидальном пространстве происходит по системе ликвороносных каналов и подпаутинных ячеек. Ток жидкости ускоряется при изменении положения тела в пространстве и под влиянием мышечных сокращений. На сегодняшний день считается, что ликвор, находящийся в поясничном отделе в течение одного часа перемещается краниально, возможно, что циркуляция происходит в обоих направлениях одновременно.

Отток спинномозговой жидкости на 30-40% происходит через пахионовы грануляции паутинной оболочки в верхний сагиттальный синус, который является частью венозной системы твердой мозговой оболочки. Они появляются у человека в возрасте 1,5 лет, разрастаясь на наружной поверхности паутинной оболочки вдоль крупных пазух и вен. Обращены грануляции в сторону твердой мозговой оболочки и с веществом мозга не соприкасаются. Ликвор скапливается в верхнем сагиттальном синусе, создавая в нем давление на 15-50 мм.рт.ст. выше, чем венозное, за счет чего происходит переход жидкости из ликворных путей в кровеносную систему.

Рисунок 2 – Схема взаимоотношения оболочек головного мозга и грануляций паутинной оболочки (пахионовых грануляций).

1 – твердая мозговая оболочка; 2 – субдуральное пространство; 3 – паутинная оболочка; 4 – подпаутинное пространство; 5 – грануляции паутинной оболочки; 6 – верхний сагиттальный синус; 7 – боковая лакуна; 8 – сосудистая оболочка.

Отток спинномозговой жидкости происходит также по ликвороносным каналам в субдуральное пространство, из которой она поступает в кровеносные капилляры твердой мозговой оболочки и переходит в венозную систему. Кроме того, она частично поступает в лимфатическую систему по периневральным пространствам черепно-мозговых нервов (5-30%), всасывается эпендимой желудочков (10%) и поступает в паренхиму мозга.

2. Состав и функции ликвора

По составу ликвор сходен с плазмой крови и состоит на 90% из воды и 10% сухого остатка. В нем содержатся аминокислоты (20-25), белки (около 14 фракций), ферменты, принимающие участие в метаболизме нервной системы, сахар, холестерин, молочная кислота и около 15 микроэлементов. В ликворе определяются нейромедиаторы: ацетилхолин, норадреналин, дофамин, серотонин; гормоны – мелатонин, эндофины, энкефалины, кинины.

Функции ликвора:

1. Механическая защита структур центральной нервной системы;

2. Экскреторная – с жидкостью удаляются продукты метаболизма;

3. Транспортная – ликвор служит для переноса метаболитов, биологически активных веществ, медиаторов, гормонов;

4. Дыхательная – снабжает кислородом мозговые оболочки и нервную ткань;

5. Гомеостаз – поддерживает стабильное окружение мозга, нивелирует краткосрочные изменения состава крови, поддерживает рН на определенном уровне, осмотическое давление в клетках мозга, обеспечивает нормальную возбудимость ЦНС, создает внутричерепное давление;

6. Иммунная – участвует в создании специфического иммунобиологического барьера ЦНС.

Окончательно функции ликвора не изучены по сей день, поэтому исследовательские научные работы по его изучению продолжаются.

3. Преаналитический этап

Впервые ликвор для исследования получил Квинке в 1891 году, после чего его методика получила широчайшее распространение. Общеклинический анализ спинномозговой жидкости проводится в течение 3-х часов после забора материала, поэтому анализ всего проводят в неотложном порядке. Для получения ликвора в большинстве случаев используют люмбальную пункцию, редко – субокципитальную, интраоперационно – вентрикулярную.

Люмбальную пункцию проводит невролог/анестезиолог-реаниматолог в условиях процедурного кабинета, перевязочной или операционной. Больного укладывают на бок с приведенными коленями к груди, после чего вводят иглу в пространство между 4 и 5-м поясничными позвонками в подпаутинное пространство. Первые пять капель ликвора удаляют, так как в них содержится путевая кровь из поврежденных в процессе манипуляции кровеносных сосудов. Собирают жидкость в 2 стерильные пробирки: одна из них направляется на биохимическое и цитологическое исследования, другая используется для обнаружение фиброзной пленки или сгустка. Если существует необходимость в бактериологическом посеве, ликвором наполняется 3-я пробирка. Без опасности для здоровья у взрослого человека можно забрать 8-10 мл ликвора, у детей 5-7 мл, у грудничков 2-3 мл.

Нельзя встряхивать полученный биоматериал, подвергать его воздействию перепада температур, так как это существо изменяет его показатели. Все пробирки маркируются до начала исследования, нумеруются, после наполнения их плотно закупоривают и немедленно отправляют в лабораторию. В направлении следует указать:

• Фамилию, имя, отчество больного, его возраст;

• Отделение, палату, номер истории болезни;

• Дату, время и место пункции;

• Цель исследования;

• Предположительный или клинический диагноз;

• Данные врача, направившего материал на исследование.

2.4.1. Макроскопическое исследование

Макроскопическое исследование – это вся информация о биоматериале, которую лаборант может получить при помощи органов чувств.

1. Цвет – в норме спинномозговая жидкость бесцветна и по виду не отличается от воды. Цвет ее определяют, сравнивая пробирку с материалом с такой же пробиркой, заполненной водой на белом фоне. Он может изменять при различных патологических процессах:

• красный – примесь неизмененных эритроцитов (эритроцитархия). Определить ее можно при помощи тест-полосок (ГемоФАН), которые имеют 2 шкалы сравнения: одна из них меняет цвет при наличии интактных эритроцитов, другая – при наличии свободного гемоглобина в ликворе;

• ксантохромный (желтый, желто-коричневый, розовый, коричневый) окрас возникает в присутствии оксигемоглобина, метгемоглобина и билирубина;

• розовый цвет ликвору придает оксигемоглобин, освободившийся из лизированных эритроцитов;

• желтый цвет обусловлен высоким содержанием билирубина, который образуется из гемоглобина. Для определения билирубинархии и ее выраженности используют тест-полоски (ИктоФАН), их реагентная зона меняет цвет от бледно-розового до насыщенного розового в зависимости от концентрации билирубина;

• коричневый цвет ликвору придают метгемоглобин и метальбумин, они появляются при наличии инкапсулированных гематом и геморрагий в ЦНС;

• зеленая окраска возникает при выраженной билирубинархии, так как происходит переход билирубина в биливердин – пигмент оливкового цвета. Иногда она обусловлена примесью гноя.

studfiles.net

Исследование спинномозговой жидкости при воспалительных заболеваниях мозга

Смольникова Екатерина Александровна  

Ликвор (цереброспинальная  или спинномозговая жидкость, СМЖ) – биологическая жидкость, необходимая для функционирования ЦНС. Его исследование является одним из важнейших видов лабораторных исследований. Оно складывается из преаналитического этапа (подготовка обследуемого, сбор материала и его доставка в лабораторию), аналитического (собственно выполнение исследования) и постаналитического (расшифровка полученного результата). Только корректное выполнение всех манипуляций на каждом из этих этапов определяет качество анализа.

Спинномозговая жидкость (ликвор) образуется в сосудистых сплетениях желудочков головного мозга. У взрослого  человека одновременно в субархноидальных пространствах и в желудочках мозга циркулирует 110–160 мл ликвора, в спинномозговом канале — 50–70 мл. Ликвор образуется непрерывно со скоростью 0,2–0,8 мл/мин, что зависит от внутричерепного  давления. В сутки у здорового  человека образуется 350–1150 мл спинномозговой жидкости.

Ликвор получают путем  пункции спинномозгового канала, чаще – люмбальной - в соответствии с методикой, хорошо известной невропатологам и нейрохирургам. Первые его капли  удаляют (“путевая” кровь). Затем  ликвор собирают как минимум в 2 пробирки: в обычную пробирку (химическую, центрифужную) для общеклинического и химического анализа, в стерильную – для бактериологического исследования. На бланке направления на исследование СМЖ врач должен указать не только фамилию больного, но и клинический  диагноз и цель исследования.

Следует помнить, что  доставляемые в лабораторию образцы  ликвора должны быть защищены от пергревания  или охлажения, а образцы, предназначенные  для выявления бактериальных  полисахаридов в серогических тестах, следует прогревать на водяной бане в течение 3 мин.

Собственно лабораторное исследование ликвора (аналитический  этап) проводится по всем правилам, принятым в клинической лабораторной диагностике  при анализе любых биологических  жидкостей и включает в себя следующие  этапы:

- макроскопический  анализ - оценка физико-химических  свойств (объем, цвет, характер), - подсчет количества клеток, - микроскопия нативного препарата и цитологическое исследование окрашенного препарата; - биохимическое исследование, - микробиологическое исследование (по показаниям).

Мы находим целесообразным и информативным в ряде случаев  дополнять исследование СМЖ иммунологическими  и, возможно, - другими тестами, значение которых обсуждается в специальной  литературе.

Расшифровка показателей ликвора

Нормальная СМЖ  бесцветна и порозрачна (как дистиллированная вода, по сравнению с которой и  описывают обычно физические свойства ликвора).

Сероватый или серо-зеленый  цвет ликвора обычно обусловлен примесью микробов и лейкоцитов. Красный цвет СМЖ различной интенсивности (эритрохромия) обусловлен примесью эритроцитов, встречающихся  при свежих кровоизлияниях или травме мозга. Визуально пристутствие эритроцитов  обнаруживается при их содержании более 500-600 в мкл.

При патологических процессах  жидкость может быть ксантохромной  – окрашенной в желтый или желто-коричневый цвет продуктами распада гемоглобина. Необходимо помнить и о ложной ксантохромии – окраске ликвора, вызванной лекарственными препаратами. Реже мы встречаем зеленоватый цвет СМЖ (гнойный менингит, абсцесс мозга). В литературе описан и корчневый  цвет ликвора – при прорыве  кисты краниофарингиомы в ликворные  пути.

Мутность ликвора  может быть обусловлена примесью клеток крови или микроорганизмов. В последнем случае мутность можно  удалить центрифугированием. При  содержании в СМЖ повышенного  количества грубодисперсных белков она становится опалесцирующей.

Относительная плотность  спинномозговой жидкости, полученной при люмбальной пункции, 1,006–1,007. При  воспалении мозговых оболочек, травмах  головного мозга относительная  плотность спинномозговой жидкости возрастает до 1,015. Уменьшается она  при гиперпродукции спинномозговой жидкости (гидроцефалия).

При повышенном содержании в ликворе фибриногена происходит образование фибринозной пленки или сгустка, что наблюдается  чаще при туберкулезном менингите. Иногда пробирку с жидкостью оставляют  при комнатной температуре на сутки (если необходимо точно установить – образовалась ли пленка?). При наличии  фибринозной пленки ее переносят  препаровальной иглой на предметное стекло и окрашивают по Цилю-Нильсену или другим методом, для выявления  микобактерий. Нормальная СМЖ на 98-99% состоит из воды.

Тем не менее исследование ее химического состава представляет собой важную задачу. Оно включает определение уровня белка, глюкозы  и хлоридов, а в ряде случаев  дополняется другими показателями.

Белок в ликворе

Более 80% белка СМЖ  поступает из плазмы путем ультрафильтрации.Содержание белка в норме в различных порциях: в вентрикулярном – 0.05-0.15 г/л, цистернальном 0.15-0.25 г/л, люмбальном 0.15-0.35 г/л. Для определения концентрации белка в ликворе может использоваться любой из унифицированных методов (с сульфосалициловой кислотой и сульфатом аммония, и другие). Повышенное содержание белка в ликворе (гиперпротеинархия) может быть обусловлено различными патогенетическими факторами (табл.1).

Изучение белков ликвора  позволяет не только уточнить характер патологического процесса, но и оценить  состояние гемато-энцефалического  барьера. Индикатором для этих целей  может служить альбумин при условии, что его уровень в ликворе  определяется иммунохимическими методами. Определение альбумина проводится в связи с тем, что он, являясь  белком крови, не синтезируется местно и поэтому может являться “маркёром” иммуноглобулинов, проникших из кровотока  вследствие нарушенной проницаемости  барьеров. Одновременное определение  альбумина в сыворотке (плазме) крови  и СМЖ позволяет вычислить  альбуминовый индекс: 

При интактном гемато-энцефалическом барьере этот индекс менее 9, при  его умеренном повреждении - 9-14, при  заметном – 14-30, при тяжелом повреждении - 30-100, а увеличение более 100 указывает  на полное поражение барьера.

В последние годы повышается интерес к специфическим для  ЦНС белкам ликвора – нейронспецифической  енолазе, белку S-100, основному белку  миелина (ОБМ) и некоторым другим. Одним из перспективных среди  них для клинических целей  представляется ОБМ. В нормальном ликворе  он практически отсутствует (его  концентрация не превышает 4 мг/л) и  появляется только в условиях патологии. Этот лабораторный признак не является специфичным для определенных нозологических форм, но отражает размер поражения (ассоциируется  преимущественно с деструкцией  белого вещества). Некоторые авторы считают перспективным определение  ОБМ в ликворе для мониторирования  нейроспида. К сожалению, сегодня  еще сохраняются проблемы, связанные  с прямым определением концентрации данного белка.

Глюкоза в ликворе

Глюкоза содержится в нормальном ликворе в концентрации 2.00-4.18 ммоль/л. Эта величина подвержена значительным колебаниям даже у здорового человека в зависимости от пищевого режима, физической нагрузки, других факторов. Для корректной оценки уровня глюкозы в ликворе рекомендуется одновременно определять ее уровень и в крови, где в норме он в 2 раза выше. Повышенное содержание уровня глюкозы в крови (гипергликоархия) встречается при сахарном диабете, остром энцефалите, ишемических нарушениях кровообращения и других заболеваниях. Гипогликоархия отмечается при менингитах различной этиологии или асептическом воспалении, опухолевом поражении мозга и оболочек, реже – при герпетической инфекции, субарахноидальном кровоизлиянии.

Некоторое преимущество перед глюкозой в качестве диагностического маркера имеет лактат (молочная кислота), поскольку его концентрация в  ликворе (1.2-2.1 ммоль/л) не зависит от таковой в крови. Его уровень  существенно повышается при различных  состояниях, связанных с нарушением энергетического обмена - менингитах, особенно – вызванных грам-положительной  флорой, гипоксии мозга и некоторых  других.

Хлориды в ликворе

Хлориды - содержание в нормальном ликворе - 118-132 ммоль/л.Увеличенние концентрации в СМЖ наблюдается при нарушении их выведения из организма (заболевания почек, сердца), при дегенеративных заболеваниях и опухолях ЦНС. Снижение содержания хлоридов отмечается при энцефалитах и менингитах.

Ферменты  в ликворе

Ликвор характеризуется  низкой активностью содержащихся в  нем ферментов. Изменение активности ферментов в ликворе при различных  заболеваниях носят в основном неспецифический  характер и параллельны описанным  сдвигам в крови в указанных  заболеваниях (табл.2). Иного подхода заслуживает интерпретация изменений активности креатинфосфокиназы (КФК). Данный фермент представлен в тканях тремя фракциями, характеризующихся не только молекулярными различиями, но и характером распределения в тканях: КФК-МВ (миокард), КФК-ММ (мышцы), КФК-ВВ (головной мозг). Если суммарная активность КФК в ликворе не имеет принципиального диагностического значения (она может быть повышенной при опухоли, инфаркте мозга, эпилепсии и других заболеваниях), то фракция КФК-ВВ является довольно специфичным маркером повреждения мозговой ткани и ее активность в СМЖ коррелирует со шкалой Глазго.

Число клеток и цитограмма ликвора

При исследовании биологических  жидкостей, и СМЖ в том числе, обычно подсчитывают число клеток и  цитограмму в мазках, окрашенных азурэозином (по Романовскому-Гимза, Нохту, Паппенгейму). Подсчет клеточных элементов  в ликворе (определение цитоза) производят с помощью камеры Фукс-Розенталя, предварительно разводя его реактивом  Самсона в 10 раз. Использование именно данного красителя, а не какого-либо иного. позволяет окрашивать клетки в течение 15 мин и сохранять  клетки неизмененными до 2 часов.

Количество клеток во всей камере делят на 3, так получают цитоз в 1 мкл. Для большей точности считают цитоз в трех камерах. При отсутствии камеры Фукс-Розенталя  можно воспользоваться камерой  Горяева, подсчитав клетки по всей сетке  также в трех камерах, результат  умножают на 0.4. До сих пор встречаются  разночтения в единицах измерения  цитоза – количество клеток в камере, в 1 мкл или 1 л. Вероятно, целесообразно  все же выражать цитоз количеством  клеток в мкл. Для подсчета числа  лейкоцитов и эритроцитов в СМЖ  могут быть использованы и автоматизированные системы.

Увеличение содержания клеток в СМЖ (плеоцитоз) появляется чаще при воспалительных заболеваниях, в меньшей степени – при  раздражении мозговых оболочек. Наиболее выраженный плеоцитоз отмечается при  бактериальной инфекции, грибковых  поражениях мозга и туберкулезном  менингите. При эпилепсии, арахноидите, гидроцефалии, дистрофических процессах  и некоторых других заболеваниях ЦНС цитоз остается нормальным.

Окрашивание клеток нативного  препарата реактивом Самсона  позволяет достаточно достоверно дифференцировать клетки. Но более точная их морфологическая  характеристика достигается после  фиксации и окраски приготовленных цитологических препаратов. Современный  подход к подготовке таких препаратов предполагает использование цитоцентрифуги. Однако, даже в США ими оснащены только 55% лабораторий. Поэтому на практике используется более простой способ – осаждение клеток на предметное стекло. Препараты должны быть хорошо высушены на воздухе, а потом окрашены.

В окрашенном препарате  ведут подсчет клеточных элементов. Они представлены преимущественно  клетками крови (чаще – лимфоциты  и нейтрофилы, реже - моноциты, эозинофилы, базофилы), могут встретиться плазматические и тучные клетки, макрофаги, зернистые шары (дегенеративные формы особого вида макрофагов – липофагов в состоянии жировой дегенерации), клетки арахноэндотелия, эпиндимы. Морфология всех этих клеточных элементов обычно хорошо известна врачам лабораторной диагностики и детально описана во многих руководствах. Уровень плеоцитоза и характер цитограммы ликвора позволяют уточнить характер патологического процесса (табл.3).

Нейтрофильный лейкоцитоз чаще сопровождает острую инфекцию (локальные  и диффузные менингиты). Эозинофилия  СМЖ наблюдается достаточно редко  – при эхинококкозе мозга, эозинофильном  менингите. Эозинофилия ликвора  не коррелирует как правило с  числом эозинофилов в крови. Лимфоцитарный  плеоцитоз ликворе встречается  при вирусных менингитах, рассеянном склерозе, в хронической фазе туберкулезного менингита, после операций на оболочках  мозга. При патологических процессах  со стороны ЦНС отмечается полиморфизм  лимфоцитов, среди которых встречаются  активированные. Для них характерно наличие обильной бледноватой цитоплазмы с единичными азурофильными гранулами, некоторые клетки имеют отшнуровку или фрагментацию цитоплазмы (клазматоз). Плазматические клетки появляются в  цитограмме при вирусном или бактериальном  менингите, вялотекущих воспалительных процессах, в период выздоровления  при нейросифилисе. Моноциты, подвергающиеся в ликворе дегенерации быстрее  лимфоцитов, наблюдаются при рассеянном склерозе, прогрессирующем панэнцефалите, хронических вялотекущих воспалительных процессах. Макрофаги – “санитары” ликвора, появляются при кровоизлияниях, инфекциях, травматических и ишемических  некрозах.

myunivercity.ru

Анализ спинномозговой жидкости [цереброспинальной, ликвора]

Содержание (план)

Норма спинномозговой жидкости

Состав спинномозговой жидкости резко отличается от состава крови, так как гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) лишь избиратель­но проницаем для определенных веществ. Таким образом, ЦНС является забарьерным органом, в связи с чем имеет соб­ственную иммунологическую систему (Т- и В-лимфоциты, иммуноглобулины в СМЖ).

В норме она бесцветна, прозрачна, содержит в 1 мм3 3-5 клеток (не более одного нейтрофилоцита, остальные — лимфоциты), 0,2-0,45 г/л белка, 70% которого составляют альбумины и 30%— глобулины.

Исследование спинномозговой жидкости

Оценка спинномозговой жидкости проводится визуально и лабораторно.

Исследование клеточного состава СМЖ надо проводить не позже чем через 1-2 ч после ее получения, так как насту­пает лизис клеток.

Визуально оценивается цвет и прозрачность. Для улавливания легких изменений ука­занных качеств лучше их определять, держа рядом на белом фоне 2 пробирки — со СМЖ и водой.

Кровь в спинномозговой жидкости

Кровянистый цвет, сочетающийся с изменениями прозрачности, характерен для массивного субарахноидального кровоизлияния (обыч­но вследствие разрыва аневризмы сосудов артериального круга основания мозга) либо для геморрагического инсульта с прорывом крови в желудочковую систему мозга.

При центрифугировании такой спинномозговой жидкости в осадке определя­ются свежие эритроциты. Через 1-2 ч начинается гемолиз эритроцитов, и осадка при центрифугировании уже может не быть. Впрочем, если люмбальная пункция производится через 1 —3 ч после остро­го нарушения мозгового кровообращения (ОНМКД то СМЖ может оказаться еще неизмененной, так как кровянистый ликвор не достиг поясничной цистерны. В дальнейшем гемо­глобин распадается, в конечном итоге до билирубина, в связи с чем СМЖ приобретает желтоватый оттенок (ксантохромия), а через 6-7 дней СМЖ вновь становится бесцветной.

Спинномозговая жидкость при менингите

Значительное увеличение содержания клеток в спинномозговой жидкости (плеоцитоз) при нормальном или незначительном увеличе­нии белка (клеточно-белковая диссоциация) характерно для менингита. Легкое снижение прозрачности СМЖ — опалес­ценция — бывает при небольшом плеоцитозе — 50-100 кле­ток в 1 мм3 с преобладанием нейтрофилоцитов.

При увеличении цитоза до 200 клеток, также в основном за счет нейтрофилоцитов, ликвор приобретает мутный вид, а при увеличении их до 1000 в 1 мм3 — гнойный.

При лимфоцитарном плеоцитозе спинномозговой жидкости остается прозрач­ной и лишь при большом плеоцитозе выглядит опалесциру­ющей.

Спинномозговая жидкость при других заболеваниях

Преходящий минимальный лейкоцитоз (до 20 клеток в 1 мм3) бывает проявлением раздражения мозговых оболо­чек и встречается при менингизме и энцефалитической ре­акции у детей, при инсульте, после миелографии.

Помимо лимфоцитов, в СМЖ могут обнаруживаться еди­ничные эпендимациты (нейроэпителиальные клетки, высти­лающие стенки желудочков).

В патологических ситуациях иногда могут обнаруживать­ся раковые клетки, а именно при канцероматозе оболочек мозга (метастазы при раке легких, молочной железы и др.). Кроме того, может меняться морфология клеток СМЖ. Так, пикноз ядер лимфоцитов характерен для вирусной инфекции ЦНС, крупные внутриядерные включения — для герпетиче­ского энцефалита, пенистость цитоплазмы — для ганглиозидозов и пр.

Абсолютное или относительное увеличение концен­трации белка по отношению к цитозу (белково-клеточная диссоциация) обычно оказывается следствием нарушения нормальной ликвороциркуляции в результате воздействия внутричерепных или экстрамедуллярных опухолей, а также возникать при состояниях, сопровождающихся нарушени­ем проницаемости ГЭБ — травматических поражений ЦНС, ишемии мозга и др.

В ряде случаев содержание общего белка может быть нор­мальным, но меняется его состав. Так, повышенное содер­жание олигоклональных глобулинов обнаруживается при рассеянном склерозе и нейролюэсе.

Для рассеянного склероза и воспалительной полирадикулоневропатии характерно повышение IgG. Однако это наблюдается и при общих, и при иммунологических заболе­ваниях, сопровождающихся повышением IgG в сыворотке крови. Материал с сайта http://wiki-med.com

Определение pH

Важное значение могут иметь данные определения pH СМЖ, уровня в ней хлоридов, натрия и, в особенности, глю­козы. В норме содержание последней в спинномозговой жидкости почти вдвое ниже, чем в крови. Падение уровня глюкозы в спинномозговой жидкости при со­ответствующей клиничекой картине заболевания и умерен­ном лимфоцитарном плеоцитозе особенно характерно для туберкулезного менингита, хотя оно иногда встречается и при хореоменингите. Снижение уровня глюкозы при бак­териальных и грибковых поражениях ЦHC, а также при карциноматозном менингите, видимо, не имеет существенного клинического значения.

Концентрация глюкозы

Некоторое снижение концентрации глюкозы в СМЖ мо­жет иметь место и при воспалительных сосудистых церебраль­ных процессах (системный и люэтический васкулит), а также при субарахноидальном кровоизлиянии

Микроскопическое исследование

При острых бактериальных менингитах необходимо проведение окраски по Граму, что дает возможность не­медленно подобрать адекватную терапию. Осуществля­ется также окраска для выявления микобактерий туберку­леза и криптококков.

Микробиологическое исследование

Немаловажные сведения может дать посев СМЖ с последующим микробиологическим иссле­дованием.

При необходимости используются серологические тесты на бактериальные, вирусные и грибковые антигены.

• анализ из спинно-мозговой жидкости

• цереброспинальная жидкость время анализа

• анализ спинномозговой жидкости при инфекции

• как сделать спиномозговую жидкость в кдл

• исследование ликвора истинный цитоз

wiki-med.com

Персональный сайт - Ликвор

ИССЛЕДОВАНИЕ СПИННОМОЗГОВОЙ ЖИДКОСТИ (ЛИКВОРА)

Физиология ликворообразования.

Головной и спинной мозг хорошо защищены плотным костным покровом – черепной коробкой и позвоночником.

К внутренней поверхности костей черепа прилегает плотная фиброзная твёрдая мозговая оболочка, под которой находится паутинная оболочка, покрывающая в виде очень тонкого прозрачного бесструктурного листка, головной мозг. Книзу эта оболочка переходит в паутинную оболочку спинного мозга. Вся поверхность мозга окутана разветвлённой сетью сосудов, заключённых в мягкую мозговую оболочку, покрывающую ткань мозга в глубине борозд, щелей и ямок. Паутинная оболочка переходит с одной возвышенности на другую, образуя различной величины подпаутинные вместилища. Наиболее крупные из них получили название цистерн.

Между паутинной и мягкой оболочкой и находится так называемое подпаутинное (субарахноидальное) пространство. Оно заполнено ликвором и является единым для головного и спинного мозга.

Спинномозговая жидкость (цереброспинальная жидкость, ликвор) циркулирует между оболочками мозга, в его желудочках, цистернах и в спинномозговом канале.

Ликвор образуется в желудочках мозга из плазмы крови благодаря процессам фильтрации, секреции и осмоса. Из желудочков ликвор поступает в цистерны мозга и в субарахноидальное пространство. Затем через кровеносные капилляры всасывается в венозную и частично лимфатическую систему.

За сутки образуется от 400 до 600 мл ликвора. Циркуляция её происходит непрерывно; в субарахноидальных пространствах содержится одновременно 100-150 мл ликвора.

Функции ликвора

Ликвор – это своеобразная биологическая жидкость, необходимая для функционирования мозга и выполняющая защитную функцию.

Ликвор является средой для обмена веществ между мозгом и кровью, носителем питательных веществ от кровеносных сосудов к нервным клеткам, это место выделения продуктов жизнедеятельности мозговой ткани. Мозг не имеет лимфатической системы, и продукты метаболизма удаляются через капиллярный кровоток.

Ликвор можно рассматривать как растворитель некоторых веществ, которые транспортируются от одного участка мозга к другому, например: из гипоталамуса к гипофизу.

Ликвор необходим для регуляции дыхательной активности и кровообращения. Например: изменение концентрации Ca, K, Mg и других микроэлементов в ликворе приводит к нарушению дыхания, кровяного давления, изменяется частота сердечных сокращений и др.

Физиологическое значение ликвора:

- механическая защита мозга от ударов и сотрясений о кости черепа,

- доставка питательных веществ нервным клеткам,

- экскреция, т.е. выделение некоторых метаболитов мозга,

- служит транспортным средством для гормонов и других веществ,

- поддерживает постоянство окружающей среды мозга (гомеостаз),

- осуществляет функцию специфического иммунобиологического барьера.

Таким образом, ликвор выполняет важную роль в процессах жизнедеятельности мозговой ткани.

Методы извлечения ликвора

Для исследования ликвор получают путём прокола – пункции. Пункцию всегда производит врач в условиях операционной, специальной иглой, которая вводится в подпаутинное пространство.

Прокол делают в строго определённых местах:

1. Между III и IV поясничными позвонками – поясничная (люмбальная) пункция.

2. Между затылочной костью и II шейным позвонком, в большую цистерну мозга – подзатылочная (субокципитальная) или цистерная пункция.

3. В месте сочленения височной, лобной и теменной костей – желудочковая (вентрикулярная) пункция.

Из иглы ликвор вытекает свободно. Её собирают в 2 пробирки, хотя общее количество её чаще всего невелико (не более 10 мл). С полученным материалом следует обращаться очень бережно, так как пункция довольно тяжёлая манипуляция для больного. После прокола он должен находиться на строго постельном режиме в течение 2-3 дней.

Так как ликвор обладает выраженными цитолитическими свойствами, он должен быть доставлен в лабораторию и исследован немедленно после его взятия. При продолжительном его хранении при комнатной температуре происходит разрушение форменных элементов. При охлаждении менингококки и другие возбудители инфекционных заболеваний могут погибнуть. В лаборатории тотчас делают посев на питательные среды и производят бактериоскопические, биохимические и серологические исследования, определяют также физические свойства, цитоз, изучают морфологию клеток.

Исследование состава и свойств ликвора имеет диагностическое значение при заболеваниях ЦНС и мозговых оболочек, таких, как энцефалиты (воспаления головного мозга), менингиты (воспаления твёрдой мозговой оболочки), арахноидиты (воспаления паутинной оболочки), сифилис мозга, опухоли, травмы и другие заболевания.

1. Количество. Количество извлечённого ликвора зависит от цели пункции и состояния больного. Для обычного исследования берут 8-10 мл, у детей 5-7 мл, у грудных детей 2-3 мл ликвора.

2. Цвет. Для определения цвета ликвор сравнивают с дистиллированной водой на белом фоне.

- Нормальный ликвор – бесцветная, прозрачная жидкость, макроскопически трудно отличимая от дистиллированной воды.

- Ксантохромия – кофейно-жёлтый цвет ликвора, его дают продукты распада гемоглобина, освобождённые из лизированных эритроцитов.

В зависимости от механизма возникновения ксантохромии различают:

А) застойную – появляется вследствие застоя крови в мозговых сосудах и изменений проницаемости стенок сосудов, эта ксантохромия сопровождается значительным увеличением белков в ликворе.

Б) геморргагическую – развивается при попадании крови в ликворное пространство, в таких случаях должно пройти определённое время до появления ксантохромии, через 2 –12 часов выявляется оранжевая ксантохромия, через 2-4 дня жёлтая.

Ксантохромия может быть также при желтухах (в том числе и у новорождённых) и при субарахноиадальном введении пеницилина.

- Эритроцитрахия (кровавый ликвор).

Различают:

А) артефактную – эритроциты попадают в ликвор во время пункции – при этом первая порция кровавая, а остальные нет.

Б) истинную, вызываемую кровоизлияниями в ликворную систему при инсульте, опухолях, травмах, при этом все порции ликвора одинаково окрашены.

- Зеленовато-жёлтый, серо-зелёный, сероватый цвет ликвора обусловлен большим содержанием в ликворе лейкоцитов. Наблюдается при гнойных менингитах и абсцессах мозга.

3. Прозрачность. В норме ликвор прозрачен (для определения прозрачности ликвор сравнивают с дистиллированной водой). Помутнение ликвора от лёгкой опалесценции до выраженной мутности наблюдается при резком увеличении содержания клеточных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, микроорганизмов) и повышенном содержании общего белка.

Мутность определяют на чёрном фоне.

Мутность, обусловленная форменные элементами крови, после центрифугирования исчезает, а связанная с наличием микроорганизмов – остаётся.

Степень мутности выражается в 4-х крестной системе:

- лёгкая опалесценция +

- лёгкое помутнение ++

- мутность +++

- хлопья мути ++++

4. Относительная плотность. Измеряется пикнометром - ареометром малого размера.

Для люмбального ликвора норма - 1,005 - 1,009

Для субокципитального - 1,003 - 1,007

Для вентрикулярного 1,002 - 1,004

Повышается относительная плотность при менингитах, уремии, сахарном диабете, черепно-мозговых травмах.

5. Фибриновая сетка. Для обнаружения фибринозной плёнки ликвор оставляют в пробирке до образования «мешочка».

При воспалении мозговых оболочек вследствие значительного увеличения количества грубодисперсных белков (глобулинов и фибриногена) на поверхности ликвора, если его отстоять, образуется нежная паутинообразная фибриновая сеточка. При большом содержании фибриногена образуется плёнка в виде желеобразного сгустка или ликвор свёртывается.

Фибриновая сетка является важным диагностическим признаком. Наблюдается у больных с гнойным менингитом, туберкулёзным менингитом, опухолями ЦНС, мозговой геморрагией, компрессией и др.

6. Запах. Ликвор в норме не имеет запаха. Запах появляется при некоторых патоогических состояниях:

- При уремической коме – ликвор приобретает запах аммиака.

- При диабетической коме – запах ацетона.

7. рН ликвора. В норме среда слабощелочная – рН = 7,35-7,4.

При патологических состояниях существенно не изменяется, определяется с помощью универсальных индикаторных бумажек.

Микроскопическое исследование ликвора

Определение общего количества клеток ликвора (цитоза)

Определение цитоза следует производить как можно скорее после пункции (в течение 30 минут), так как клетки ликвора очень быстро разрушаются.

В норме ликвор беден клеточными элементами. В 1 мл можно обнаружить 0-3-5 лимфоцитов, поэтому их подсчитывают в счётных камерах большей ёмкости, чем для подсчёта клеток крови (в камере Фукса-Розенталя).

Определение цитоза (клеточного состава)

Принцип: при помощи микроскопа в счётной камере Фукса-Розенталя подсчитывают число лейкоцитов в ликворе после разрушения эритроцитов.

Реактивы: реактив Самсона (30 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл карболовой кислоты, 2 мл спиртового раствора фуксина, доливают дистиллированной водой до 100 мл).

Ход определения:

1. Размешать ликвор в пробирке.

2. В меланжер до метки 1 набирают реактив Самсона.

3. До метки 11 набирают ликвор.

Раствор уксусной кислоты гемолизирует возможную примесь эритроцитов, фуксин подкрашивает лейкоциты (ядра клеток окрашиваются в красновато-фиолетовый цвет), карболовая кислота консервирует их.

4. Перемешивают ликвор с реактивом, прокатывая меланжер между ладонями, и оставляют на 15-30 минут для прокрашивания.

5. Первую каплю из меланжера выпускают в фильтровальную бумажку, перемешивают камеру Фукса-Розенталя, которая состоит из 16 больших квадратов, каждый из которых разграфлён на 16 маленьких - всего 256 квадратиков.

6. Считают лейкоциты во всех 256 квадратиков и полученное число делят на 3,2 (объём камеры). Результат соответствует количеству лейкоцитов в 1 мкл ликвора.

Норма цитоза:

Люмбальный ликвор - 7-10 в камере

Цистернальный ликвор - 0-2 в камере

Желудочковый ликвор - 1-3 в камере

Клиническое значение:

Повышенный цитоз - плеоцитоз. Наблюдается при воспалительных поражениях оболочек мозга - менингитах, арахноидитах и органических поражениях вещества мозга (опухоль, сифилис, абсцесс), а также при травмах, кровоизлияниях.

У детей цитоз выше, чем у взрослых.

Подсчёт цитограммы (по Возной)

1. Ликвор центрифугируют 7-10 минут, после надосадочную жидкость сливают.

2. Осадок выливают на предметное стекло, слегка покачивая его для равномерного распределения жидкости на поверхности стекла.

3. Мазок высушивают при комнатной температуре в течение суток.

4. Фиксируют 5 минут в метиловом спирте или 15 минут в этиловом.

5. Красят раствором азур-эозина, разведённого в 5 раз в течение 1 часа.

6. Микроскопируют с иммерсионным маслом.

В норме в ликворе встречаются только лимфоциты.

При патологических состояниях встречаются все виды лейкоцитов, арахноэндотелиальные макрофаги, опухолевые клетки, плазматические клетки, полибласты. Макрофаги появляются после кровоизлияния в ЦНС, при распаде опухоли.

Химическое исследование ликвора

Определение белка в ликворе

Белки – важная составная часть ликвора. Их количественное и качественное отклонение от нормы указывает на органическое поражение ЦНС.

Глобулиновые реакции

Проба Панди.

Унифицированный метод определения глобулинов карболовой кислотой.

Принцип: осаждение глобулинов, появление преципитата (мути), при добавлении к насыщенному раствору карболовой кислоты жидкости, содержащей белок.

Реактивы: насыщенный раствор карболовой кислоты (100 г карболовой кислоты растворяют в 1 л воды, встряхивают и оставляют на стуки в термостате при температуре 370С, затем раствор выдерживают 5-6 суток при комнатной температуре). Для постановки реакции используют надосадочную жидкость.

После пребывания при комнатной температуре в течение 7 дней надосадочную жидкость сливают и используют.

Ход определения:

На часовое стекло, помещённое на чёрную бумагу, наливают 1 мл реактива и по краю наслаивают 1-2 капли ликвора.

Оценка полученных результатов:

Оценка производится по 4-х крёстной системе:

При положительном результате в месте соприкосновения реактива с ликвором образуется молочно-белое облачко, переходящее в муть от лёгкой опалесценции до хлопьев.

Образование хлопьев (значительное помутнение) ++++, умеренное +++, заметная опалесценция ++, лёгкая опалесценция +, отсутствие помутнения (-).

Проба Нонне-Апельта

Унифицированный метод определения глобулинов

Принцип: соли в определённой концентрации избирательно осаждают глобулины.

Реактивы: насыщенный раствор сульфата аммония.

Ход определения:… Продолжение »

bioximia.narod.ru

Смотрите также

• 
  Реферат кинезиология
• 
  Гироскоп реферат
• 
  Эндоскоп реферат
• 
  Фторхинолоны реферат
• 
  Реферат фторхинолоны
• 
  Реферат компрессы
• 
  Реферат галактоземия
• 
  Геркулес реферат
• 
  Реферат социолингвистика
• 
  Реферат трихинелла
• 
  Реферат тепловизоры