Микроскопические методы исследования в микробиологии. Микроскопические методы исследования реферат

МЕТОДЫ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ | Бесплатные курсовые, рефераты и дипломные работы

ЧАСТЬ ПЕРВАЯ.

ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ.

ГЛАВА 1.

МЕСТО МИКРООРГАНИЗМОВ СРЕДИДРУГИХ ЖИВЫХ

СУЩЕСТВ

КЛАССИФИКАЦИЯ ИСИСТЕМАТИКА

Зрительное восприятие объектов окружающего мира является од­ним из наиболее важных способов его познания Однако, человечес­кий глаз видит объекты величиной около 0,1 мм, а различает детали в объектах размером не менее 1 мм В то же время существует целый мир живых существ, разных по своей природе, строению, свойствам, кото­рые вследствие своих малых размеров недоступны зрению человека Такие живые существа называют микроорганизмами. Разли­чаются три царства, эукариоты, прокариоты, вирусы.

Эукариоты (греч eu — хорошо, karyon — ядро) — высшие микроорганизмы Клетка эукариот имеет истинное ядро (лат — nucleus). отделенное от цитоплазмы ядерной мембраной и содержащее двойной набор … хромосом. Клетки эукариотов делятся как по типу митоза, так и по типу мейоза, в их цитоплазме содер­жатся эндоплазматическая сеть, митохондрии или хлоропласты. В цитоплазме эукариотов содержатся 80S-рибосомы (S — константа седиментации, харак­теризующая размер частиц) Все эукариоты — аэробы.

Прокариоты, напротив, не имеют истинною ядра — у них нуклеоид, содержащий ДНК, не отделен от цитоплаз­мы ядерной мембраной и свободно располагается в цитоплазме. Деление прокариотических клеток происходит по типу амитоза. Цитоплазма содержит 70S-рибосомы, которые меньше по раз­меру, чем рибосомы в цитоплазме эукариотов. Строение клеточных мембран и жгутиков у прокариотов иное, а клеточная стенка содержит полимерное соединение – пептидогликан, которого нет у эукариотов. Среди прокариотов есть аэробы и анаэробы.

Эти различия имеют практическое значение. Так, избирательность действия на микроорганизмы антибиотиков объясняется различиями в структуре прокариотов и эукариотов. Например, пенициллин действу­ет на клетки, содержащие пептидогликан, тетрациклины — на функцию 70S-рибосом, а полиеновые антибиотики, например, нистатин, — на кле­точную мембрану эукариотов.

Согласно современной классификации микроорганизмов, к царс­тву эукариотов относятся простейшие и грибы (табл. 1). Все прокариоты относятся к отделу Bacteria, вирусы составляют особое царство ви­русов (Vira). В нашей схеме прокариоты разделены на актиномицеты, спирохеты, собственно бактерии, микоплазмы, риккетсии, хламидии, так как эти группы микробов отличаются по структуре и физиологическим свойствам. Среди прокариотов актиномицеты имеют черты сходства с грибами, а спирохеты — с простейшими. В том порядке, в каком в данной схеме расположены отдельные группы прокариотов, наблюдается умень­шение размеров клеток, упрощение структуры и уменьшение способно­сти к самостоятельному существованию. Бактерии осуществляют свой собственный обмен веществ и способны жить и размножаться вне организма хозяина. Микоплазмы лишены клеточной стенки и могут жить только в изотонической и гипертонической среде, риккетсии — строгие внутриклеточные паразиты: они способны к биосинтезу своего белка, но не могут самостоятельно осуществлять процесс дыхания. Хламидии по своим размерам близки к вирусам и являются строгими внутрикле­точными паразитами, способны к биосинтезу белка но, подобно риккетсиям, являются "дыхательными паразитами".

Вирусы не только наиболее малы по размерам, но и по своим био­логическим свойствам настолько отличаются от микроорганизмов, что выделены в особое царство Vira.

Распределением живых существ по группам в зависимости от об­щих признаков занимается биологическая систематика или таксоно­мия (греч. taxis — порядок, nomos — закон). По Международному Кодек­су номенклатуры бактерий имеются следующие категории царства прокариотов: отдел, класс, порядок, семейство, вид. Название вида у микроорганизмов дают по биноминальной (двойной) номенклатуре, предложенной Карлом Линнеем для высших организмов. Первое сло­во обозначает род и пишется с прописной буквы, второе слово — видо­вое название микроба и пишется с строчной буквы. Например, Corynebacterium diphtheriae — возбудитель дифтерии. При повторном упоминании названия в данном тексте принято сокращать родовое название до начальной буквы, например, С. diphtheriae.

Современная таксономия микроорганизмов основана на морфоло­гии, биохимических и физиологических признаках. Более точным яв­ляются современные методы геносистематики, основанные на изуче­нии состава ДНК.

Наиболее общепризнанным среди микробиологов руководством для систематики прокариотов является определитель американского микробиолога Bergy. Первое издание определителя было опубликова­но в 1923 году. После смерти Берги вышло еще несколько изданий. Грибы, простейшие и вирусы не включены в определитель.

В 

ГЛАВА 2. МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Бактерии

Бактерии — это одноклеточные прокариотные микроорганизмы. Ве­личина их измеряется в микрометрах (мкм). Бактерии не отличаются разнообразием форм. Различают три основные формы: шаровидные бактерии — кокки, палочковидные и извитые. Кроме того, существуют промежуточные формы (рис. 2).

Кокки(греч. kokkos — зерно) имеют шаровидную или слегка вытя­нутую форму. Различаются между собой в зависимости от того, как они располагаются после деления. Одиночно расположенные кокки — мик­рококки, расположенные попарно — диплококки. К патогенным диплококкам относятся пневмококки, имеющие ланцетовидную форму, и бо­бовидные диплококки — менингококки и гонококки. Стрептококки де­лятся в одной плоскости и после деления не расходятся, образуя цепоч­ки (греч. streptos — цепочка). Патогенные стрептококки являются возбу­дителями гнойно-воспалительных заболеваний, ангины, рожи, скарла­тины. Тетракокки образуют сочетания из четырех кокков в результате деления в двух взаимно перпендикулярных плоскостях, сарцины (лат. sarcio — связывать) образуются при делении в трех взаимно перпендику­лярных плоскостях и имеют вид скоплений по 8-16 кокков. Стафило­кокки в результате беспорядочного деления образуют скопления, напо­минающие гроздь винограда (греч. staphyle — виноградная гроздь). Сре­ди них есть патогенные виды, вызывающие гнойно-воспалительные и септические заболевания.

Палочковидныебактерии (греч. bacteria — палочка), способные образовывать споры, называют бациллами в том случае, если спора не шире самой палочки, и клостридиями, если диаметр споры превышает диаметр палочки. Палочки, неспособные к спорообразованию, называют бактери­ями. Палочковидные бактерии, в отличие от кокков, разнообразны по ве­личине, форме и расположению клеток: короткие (1 -5 мкм) толстые, с зак­ругленными концами бактерии кишечной группы; тонкие, слегка изогну­тые палочки туберкулеза; располагающиеся под углом тонкие палочки дифтерии; крупные (3-8 мкм) палочки сибирской язвы с "обрубленными" концами, образующие длинные цепочки — стрептобациллы. К извитым формам бактерий относятся вибрионы, имеющие слегка изогнутую форму в виде запятой (холерный вибрион) и спириллы, состоящие из нескольких завитков. К извитым формам также относятся кампилобактеры, похожие под микроскопом на крылья летящей чайки.

Структура бактериальной клетки. Структурные элементы бактери­альной клетки можно условно разделить на: а) постоянные структурные элементы — имеются у каждого вида бактерий, в течение всей жизни бакте­рии; это клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, нуклеоид; б) непостоянные структурные элементы, которые способны обра­зовывать не все виды бактерий, а те бактерии, которые образуют их, могут терять их и вновь приобретать в зависимости от условий существования. Это капсула, включения, пили, споры, жгутики.

Клеточная стенка покрывает всю поверхность клетки. У грамположительных бактерий клеточная стенка более толстая: до 90% — это полимерное соединение пептидогликан, связанный с тейхоевыми кис­лотами, и слой белка. У грамотрицательных бактерий клеточная стенка тоньше, но сложнее по составу: состоит из тонкого слоя пептидогликана, липополисахаридов, белков; она покрыта наружной мембраной. Наружная мембрана грамотрицательных бактерий является барьером для некоторых антибиотиков, в том числе таких, которые получены в последнее время. Возможно, что этим можно объяснить, почему с не­давнего времени в возникновении внутрибольничных инфекций все воз­растающую роль играют грамотрицательные бактерии, такие как ки­шечная палочка, синегнойная палочка. Ранее первенство в этой области принадлежало стафилококкам.

Клеточная стенка выполняет важную биологическую роль: прида­ет бактерии определенную форму, защищает ее от воздействий окру­жающей среды, участвует в транспорте питательных веществ и про­дуктов обмена. В то же время пептидогликан клеточной стенки явля­ется мишенью для действия пенициллина и других антибиотиков, которые нарушают процесс формирования полимерного пептидогликана. Отсюда понятно, почему пенициллины действуют преимуществен­но на грамположительные бактерии, причем на молодые растущие клетки.

Значение клеточной стенки в сохранении определенной формы и в защите от окружающей среды наглядно демонстрируется на примере сферопластов и протопластов, которые образуются при разрушении клеточной стенки под действием пенициллина или лизоцима. Пол­ностью или частично лишенные клеточной стенки, они имеют сфери­ческую форму, могут выживать только в гипертонической среде и не­способны к размножению. L-формы бактерий — это бактерии, полнос­тью или частично утратившие клеточную стенку, но сохранившие спо­собность к размножению. Свое название они получили в честь инсти­тута имени Листера в Англии, где были впервые получены. Не имея клеточной стенки, они также приобретают сферическую форму. L-фор­мы возникают и в естественных условиях, длительно сохраняются в организме человека и играют важную роль в патогенезе некоторых инфекционных заболеваний.

Цитоплазматическая мембрана расположена непосредственно под клеточной стенкой. Она обладает избирательной проницаемостью, и бла­годаря этому регулирует водно-солевой обмен клетки, транспорт пита­тельных веществ в клетку и выведение наружу продуктов обмена. В этих процессах участвуют ферменты пермеазы. Кроме того, здесь имеются ферменты, осуществляющие биологическое окисление.

Цитоплазматическая мембрана путем инвагинации внутрь клетки образует мембранные структуры — мезосомы. Геном клетки (ДНК) свя­зан с мезосомой, и отсюда начинается процесс репликации ДНК при делении клетки.

Цитоплазма — внутреннее гелеобразное содержимое бактериальной клетки, пронизано мембранными структурами, создающими жест­кую систему. В цитоплазме содержатся рибосомы (в которых осуще­ствляется биосинтез белков), ферменты, аминокислоты, белки, рибонуклеиновые кислоты.

Нуклеоид — это хромосома бактерий, двойная нить ДНК, коль­цевидно замкнутая, связанная с мезосомой. В отличие от ядра эукариотов, нить ДНК свободно располагается в цитоплазме, не имеет ядерной оболочки, ядрышка, белков-гистонов. Нить ДНК во много раз длиннее самой бактерии (например, у кишечной палочки длина хро­мосомы более 1 мм).

Помимо нуклеоида, в цитоплазме могут находиться внехромосомные факторы наследственности, называемые плазмидами. Это ко­роткие кольцевидные нити ДНК, прикрепленные к мезосомам.

Включения содержатся в цитоплазме некоторых бактерий в виде зерен, которые можно обнаружить при микроскопии. Большей частью это запас питательных веществ. Например, у дифтерийных палочек на концах видны зерна волютина, и это является важным признаком для определения этого вида бактерий. Вместе с тем это могут быть и скоп­ления неорганических веществ, например, серы, и продукты бактери­ального метаболизма.

Пили (лат. pili — волоски) иначе реснички, фимбрии, бахромки, вор­синки — короткие нитевидные отростки на поверхности бактерий. Пили общего типа (common pili) в количестве нескольких сотен равномерно покрывают бактерию. Они осуществляют прикрепление (адгезию) бак­терии к клетке хозяина и участвуют в питании. Половые пили (sex-пили) имеют внутри канал и образуются только клетками-донорами. Они обеспечивают конъюгацию у бактерий и переход ДНК из одной клетки в другую.

Споры образуют среди патогенных бактерий только палочки — ба­циллы и клостридии. Споры бактерий не являются способом разм­ножения, поскольку из одной клетки формируется только одна спора. Биологическая роль спор — сохранение вида в неблагоприятных усло­виях внешней среды.

Превращение бактериальной клетки в спору происходит при по­падании бактерии во внешнюю среду, чаще всего — в почву. Спора формируется внутри клетки, затем вегетативное тело лизируется. Об­разование споры происходит в течение суток. Споры чрезвычайно ус­тойчивы и могут длительное время сохранять жизнеспособность: де­сятками лет остаются живыми в почве споры возбудителей сибирской язвы, столбняка, ботулизма. Они не погибают при 100°С, убить их можно только автоклавированием, сухим жаром при 160-170°С в течение 1-2 часов, или с помощью спороцидных химических веществ. При попадании в благоприятные условия (оптимальная температура, достаточная влажность, наличие питательных веществ) происходит про­растание спор в вегетативные формы. Прогревание спор при 100°С вызывает их тепловую активацию с последующим прорастанием. Это явление используется при стерилизации дробными методами.

Спорообразование — одно из свойств, характерное для определенных видов бактерий. Форма и расположение споры внутри клетки являются постоянным признаком вида и могут быть использованы для его идентификации. Форма спор бывает круглой или овальной. Расположение центральное — у бацилл сибирской язвы, субтерминальное (ближе к одному из концов) — у клостридий ботулизма и газовой анаэробной инфекции, терминальное (на конце) — у клостридий столб­няка. Для окраски спор применяют способ Ожешки, основанный на их кислотоустойчивости.

Жгутики. Многие виды бактерий способны передвигаться благо­даря наличию жгутиков. Из патогенных бактерий только среди пало­чек и извитых форм имеются подвижные виды. Жгутики представляют собой тонкие эластичные нити, длина которых у некоторых видов в несколько раз больше длины тела самой бактерии. Число и располо­жение жгутиков является характерным видовым признаком бактерий. Различают бактерии: монотрихи — с одним жгутиком на конце тела, лофотрихи — с пучком жгутиков на конце, амфитрихи, имеющие жгути­ки на обоих концах, и перитрихи, у которых жгутики расположены по всей поверхности тела. К монотрихам относится холерный вибрион, к перитрихам — сальмонеллы брюшного тифа.

Жгутики настолько тонки, что не видны в световом микроскопе. Их можно видеть в электронном микроскопе, а также при специальных способах окраски, когда толщину жгутика искусственно увеличивают: при помощи танина достигают набухания жгутикового белка, а затем обрабатывают азотнокислым серебром или красителем, который осе­дает на жгутиках, увеличивая их толщину. Можно косвенно судить о наличии жгутиков, наблюдая подвижность живых бактерий в препа­ратах "раздавленной" или "висячей" капли. Определение подвижнос­ти у бактерий является важным диагностическим признаком, и при по­вседневной практической работе удобно применять метод посева. В столбик полужидкого питательного агара уколом производится посев бактерий. Неподвижные бактерии растут по ходу укола, а у подвиж­ных наблюдается диффузный рост.

Капсула — наружный слизистый слой, который имеется у многих бактерий. У одних видов он настолько тонок, что обнаруживается толь­ко в электронном микроскопе — это микрокапсула. У других видов бак­терий капсула хорошо выражена и видна в обычном оптическом мик­роскопе — это макрокапсула. Капсула обычно состоит из полисахаридов, а у палочки сибирской язвы — из полипептидов

Одни бактерии образуют капсулу только в организме хозяина, на­пример, пневмококки, палочка сибирской язвы, палочка чумы; другие постоянно сохраняют ее, — это капсульные бактерии, например, клебсиеллы. Капсула защищает бактерии от фагоцитоза и антител, поэтому в инфекционном процессе она играет роль одного из факторов патогенности, обеспечивающего антифагоцитарную активность возбудителя болезни. Наличие капсулы является дифференциальным признаком для оп­ределения вида таких микробов, как пневмококк, палочка сибирской язвы, клебсиеллы пневмонии, которые образуют макрокапсулу, види­мую в световом микроскопе. Для обнаружения капсулы применяют спо­соб окраски по Бурри-Гинсу: при этом на темном фоне туши видны ок­рашенные фуксином бактерии, окруженные бесцветной капсулой.

Микоплазмы

Микоплазмы относятся к прокариотам, размеры их 125-200 нм. Это наиболее мелкие из клеточных микробов, величина их близка к преде­лу разрешающей способности оптического микроскопа. У них отсут­ствует клеточная стенка, и в этом отношении они близки к L-формам бактерий. С отсутствием клеточной стенки связаны характерные осо­бенности микоплазм. Они не имеют постоянной формы, поэтому встре­чаются сферические, овальные, нитевидные формы. Так как микоплазмы не образуют пептидогликана, они нечувствительны к пенициллинам и другим антибиотикам, избирательно подавляющим синтез этого вещества.

Микоплазмы широко распространены в природе. Их можно выде­лить из почвы, сточных вод, от животных и человека. Существуют и патогенные виды: Mycoplasma pneumoniae является возбудителем рес­пираторных заболеваний. Условно-патогенные Микоплазмы также иг­рают роль в развитии заболеваний: M.hominis — заболеваний мочепо­лового тракта, M.arthritidis — ревматоидного артрита. Из рода уреаплазм патогенными являются Ureaplasma urealyticum, вызывающие за­болевания мочеполовых органов.

Риккетсии

Риккетсии — прокариотные микробы, получили свое название в память американского микробиолога Говарда Тейлора Риккетса, погибшего в ре­зультате лабораторного заражения сыпным тифом. Риккетсии сходны с бактериями по клеточному строению и структуре, а с вирусами их сближа­ет строгий внутриклеточный паразитизм. Они не могут размножаться вне живых клеток хозяина, так как не синтезируют дыхательные ферменты и поэтому неспособны к самостоятельному биологическому окислению. В от­личие от вирусов, они содержат оба вида нуклеиновых кислот — ДНК и РНК — и осуществляют процесс биосинтеза белков.

Для риккетсий характерен плеоморфизм, то есть в зависимости от ус­ловий существования у них изменяется морфология. В благоприятных для размножения условиях это кокковидные формы (300-400 нм) или короткие палочки, в условиях, когда процесс роста происходит быстрее, чем размно­жение, преобладают длинные палочки и нитевидные формы.

Многие виды риккетсий вызывают заболевания человека, называемые риккетсиозами. Это Rickettsia prowazekii (риккетсий Провацека) — возбуди­тель эпидемического сыпного тифа и Coxiella burneti (коксиелла Бернета) -возбудитель Ку-лихорадки.

Хламидии

Хламидии — мелкие прокариотные микробы, сходные по химичес­кому составу с грамотрицательными бактериями. Это строгие внут­риклеточные паразиты, так как не образуют АТФ и потому не спо­собны к самостоятельному процессу биологического окисления, т.е. это "энергетические паразиты". Вне клеток хозяина хламидии представля­ют собой элементарные тельца сферической формы размером 300 нм. В клетке хозяина они превращаются в более крупные ретикулярные тель­ца, которые делятся и образуют микроколонии хламидии, которые мож­но видеть в клетке в виде включений. Образовавшиеся в результате элементарные тельца выходят из клетки и совершают новый цикл в других клетках. Патогенные для человека виды: Chlamydia psittaci -возбудитель орнитоза, источником которого являются птицы; C.trachomatis — возбудитель трахомы, поражающей конъюнктиву глаз и хламидиозного уретрита — заболевания, передающегося половым пу­тем; C.pneumoniae — возбудитель воспаления легких.

Актиномицеты

Актиномицеты — одноклеточные микроорганизмы, относятся к прокариотам. Их клетки имеют такую же структуру, как бактерии: кле­точную стенку, содержащую пептидогликан, цитоплазматическую мем­брану; в цитоплазме расположены нуклеоид, рибосомы, мезосомы, внутриклеточные включения. Поэтому патогенные актиномицеты чувс­твительны к антибактериальным препаратам. В то же время они име­ют сходную с грибами форму ветвящихся переплетающихся нитей, а некоторые актиномицеты, относящиеся к семейству стрентомицет, раз­множаются спорами. Другие семейства актиномицет размножаются путем фрагментации, то есть распада нитей на отдельные фрагменты.

Актиномицеты широко распространены в окружающей среде, осо­бенно в почве, участвуют в круговороте веществ в природе. Среди актиномицетов есть продуценты антибиотиков, витаминов, гормонов. Большинство антибиотиков, применяемых в настоящее время, проду­цируется актиномицетами. Это стрептомицин, тетрациклин и другие.

Патогенные представители актиномицетов вызывают у человека актиномикоз и нокардиоз. Это Actinomyces israelli, Nocardia asteroides и другие. Возбудители актиномикоза вне организма, на питательной среде представляют собой длинные ветвящиеся нити, местами распа­дающиеся на фрагменты. В организме человека патогенные актиноми­цеты образуют друзы — переплетающиеся нити в центре с отдельными отходящими в виде лучей нитями по периферии. Отсюда название: ак­тиномицеты — лучистые грибы. Концы нитей, погруженные в ткань, утол­щены, ослизнены и имеют иной химический состав, и, подобно капсу­ле бактерий, защищают микроб от фагоцитоза.

Спирохеты.

Спирохеты относятся к прокариотам. Имеют признаки, общие как с бактериями, так и с простейшими микроорганизмами. Это од­ноклеточные микробы, имеющие форму длинных тонких спирально изогнутых клеток, способны к активному движению. В неблагоприят­ных условиях некоторые из них могут переходить в форму цисты.

Исследования в электронном микроскопе позволили установить структуру клеток спирохет. Это цитоплазматические цилиндры, окру­женные цитоплазматической мембраной и клеточной стенкой, содер­жащей пептидогликан. В цитоплазме находятся нуклеоид, рибосомы, мезосомы, включения. Под цитоплазматической мембраной располо­жены фибриллы, обеспечивающие разнообразное движение спирохет — поступательное, вращательное, сгибательное.

Сапрофитные спирохеты имеются в окружающей среде. Несколь­ко непатогенных видов являются постоянными обитателями организ­ма человека. Патогенные для человека виды относятся к трем родам: Treponema, Borrelia, Leptospira. Они различаются по форме и рас­положению завитков. Трепонемы состоят из 8-12 одинаковых по ве­личине завитков, положение которых при движении не меняется. Боррелии образуют 5-8 завитков, меняющихся при движении подобно дви­жению змейки. Лептоспиры состоят из 40-50 очень мелких постоянных завитков, концы изогнуты в виде крючков и имеют утолщения. При движении концы лептоспир изгибаются в разные стороны, причем об­разуются форму в виде русской буквы С или латинской S. Спирохеты за исключением боррелий, плохо воспринимают анилиновые красители, поэтому их окрашивают по Романовскому-Гимза. По лучше всего на­блюдать спирохеты в живом виде в темном поле зрения.

Патогенные представители спирохет: Treponema pallidum — вызывает сифилис, Borrelia recurrentis — возвратный тиф, Borrelia burgdorferi — болезнь Лайма, Leptospira interrogans — лептоспироз.

Грибы.

Грибы (Fungi, Mycetes) — эукариоты, низшие растения, лишенные хлорофилла, в связи с чем они не синтезируют органические соедине­ния углерода, то есть это гетеротрофы, имеют дифференцированное ядро, покрыты оболочкой, содержащей хитин. В отличие от бактерий, грибы не имеют в составе оболочки пептидогликана, поэтому нечув­ствительны к пенициллинам. Для цитоплазмы грибов характерно при­сутствие большого количества разнообразных включений и вакуолей.

Среди микроскопических грибов (микромицетов) имеются однок­леточные и многоклеточные микроорганизмы, различающиеся между собой по морфологии и способам размножения. Для грибов характер­но разнообразие способов размножения: деление, фрагментация, поч­кование, образование спор — бесполых и половых.

В 

При микробиологических исследованиях наиболее часто прихо­диться сталкиваться с плесенями, дрожжами и представителями сбор­ной группы так называемых несовершенных грибов.

Плесениобразуют типичный мицелий, стелющийся по питатель­ному субстрату. От мицелия вверх подымаются воздушные ветви, ко­торые оканчиваются плодоносящими телами различной формы, несущими споры.

Мукоровые или головчатые плесени (Mucor) — одноклеточные гри­бы с шаровидным плодоносящим телом, наполненным эндоспорами.

Плесени рода Aspergillus — многоклеточные грибы с плодоносящим телом, при микроскопии напоминающим наконечник лейки, разбрыз­гивающей струйки воды; отсюда название "леечная плесень". Некото­рые виды аспергилл используются в промышленности для производства лимонной кислоты и других веществ. Есть виды, вызывающие заболе­вания кожи и легких у человека — аспергиллезы.

Плесени рода Penicillum, или кистевики — многоклеточные грибы с плодоносящим телом в виде кисточки. Из некоторых видов зеленой плесени был получен первый антибиотик — пенициллин. Среди пенициллов есть патогенные для человека виды, вызывающие пенициллиоз. Различные виды плесеней могут быть причиной порчи пищевых про­дуктов, медикаментов, биологических препаратов.

Дрожжи— дрожжевые грибы (Saccharomycetes, Blastomycetes) име­ют форму круглых или овальных клеток, во много раз крупнее бакте­рий. Средний размер дрожжевых клеток приблизительно равен попе­речнику эритроцита (7-10 мкм). Отличительной морфологической осо­бенностью дрожжей является отсутствие нитевидного мицелия и обыч­ное размножение почкованием. На поверхности материнских клеток возникают отростки, которые, отделившись затем от материнской клет­ки, превращаются в самостоятельные новые особи. Кроме почкова­ния, истинные дрожжи могут размножаться половым способом, обра­зуя аски — половые споры.

Большинство видов дрожжей непатогенны. Их способность вызы­вать брожение широко используется в промышленности — в хлебопе­чении, виноделии, в получении спиртов и витаминов. Существуют па­тогенные дрожжевые грибы, вызывающие заболевания, например, Blastomyces dermatitidis — возбудитель бластомикоза, Pneumocystis carinii — возбудитель пневмоцистоза легких.

Несовершенные грибыне имеют специальных органов плодоноше­ния. К ним относятся дрожжеподобные грибы и дерматомицеты.

Дрожжеподобные грибы, подобно истинным дрожжам, представля­ют собой круглые или овальные клетки, размножающиеся почковани­ем. Но есть два существенных признака, по которым их отличают при проведении микробиологических исследований: дрожжеподобные гри­бы, в отличие от истинных дрожжей, образуют псевдомицелий и не образуют половых спор. Дрожжеподобные грибы рода Candida мо­гут быть обнаружены на слизистых оболочках здоровых людей. У новорожденных и грудных детей, у ослабленных больных они вызывают кандидоз — поражение слизистых оболочек, кожи, внутренних органов. Это заболевание может возникнуть вследствие экзогенного заражения. Но чаще кандидоз развивается как эндогенная инфекция при длитель­ном лечении антибиотиками широкого спектра действия, которые, бу­дучи направлены против бактерий — возбудителей заболевания, попутно подавляют рост бактерий — представителей нормальной микрофлоры организма, что ведет к дисбактериозу. Будучи эукариотамй, грибы Кандида нечувствительны к антибактериальным антибиотикам. Ос­вободившись от антагонистического влияния бактерий, они безудерж­но размножаются и вызывают кандидозы. Наиболее часто возбудите­лями кандидозов у человека являются виды Candida albicans, C.tropicalis и другие.

Дерматомицеты являются возбудителями заболеваний кожи (греч. derma — кожа), волос, ногтей. Это трихофитон — возбудитель трихофи-тии, эпидермофитон — возбудитель эпидермофитии, микроспорой — воз­будитель микроспории, ахорион — возбудитель парши. В волосах, че­шуйках кожи, соскобах ногтей отрезки мицелия дерматомицстов хо­рошо видны, так как сильно преломляют свет.

Простейшие

Простейшие — Protozoa (греч. proto — начало, zoa — животное) — эукариоты, микроскопические одноклеточные животные организмы. По сравнению с бактериями характеризуются более сложным строением. У них имеются примитивные органы, такие, как ротовое и анальное отверстие, сократительные вакуоли, мионемы. Ядро диф­ференцированное. Оболочки, обособленной от протоплазмы, простей­шие не имеют, хотя некоторые из них образуют пелликулу за счет уп­лотнения наружного слоя протоплазмы. Движение простейших осу­ществляется при помощи разных механизмов: перемещением протоплаз­мы, образующей псевдоподии (амебы), наличием жгутиков (жгутико­вые) или ресничек (реснитчатые). При размножении проходят слож­ные циклы развития, с чередованием полового и бесполого цикла, в организме основного хозяина — переносчика инфекции и промежуточ­ного хозяина — человека или животного. При этом на разных стадиях развития разные формы одного и того же микроорганизма могут на­столько отличаться друг от друга, что против них применяются разные химиотерапевтические препараты. Например, на половые и бесполые формы плазмодиев малярии избирательно действуют разные препара­ты.

Среди амеб патогенной для человека является дизентерийная аме­ба (Entamoeba histolytica), первооткрыватель ее — Ф.А. Леш (1875 г.). К жгутиковым относятся: лямблии — Lamblia intestinalis (Д.Ф. Лямбль, 1859 г.), трихомонады — Trichomonas hominis, обитатель кишечного тракта, Trichomonas vaginalis — паразит урогенитального тракта, возбудитель распространенного заболевания человека; лейшмании — Leshmania tropica, L.donovani, L.braziliensis; трипаносомы — Trypanosoma gambiense. К классу споровиков, названных так по одной из стадий развития, относят четыре вида плазмодиев малярии и токсоплазмы -Toxoplasma gondii — возбудитель токсоплазмоза. К реснитчатым отно­сится кишечный балантидий — Balantidium coli.

Изучение морфологии простейших может производиться в живом состоянии, при этом можно наблюдать их движение. Для исследования в окрашенном виде простая окраска непригодна, так как она не по­зволяет выявить сложную структуру этих микроорганизмов. Приме­няется метод окраски по Романовскому-Гимза, дифференцирующий от­дельные элементы клетки.

В 

ГЛАВА 3.

МЕТОДЫ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

МИКРОБОВ

В 

Методы микроскопического исследования используют для изуче­ния формы и структуры клетки, подвижности микробов.

refac.ru

Реферат - Микроскопические методы исследования.

В зависимости от цели различают цитологический метод, биопсию и бактериологическое исследование.

Цитологический методоснован на изучении структурных особенностей клеточных элементов и их конгломератов. Материалом для цитологического исследования могут быть мазок — отпечаток, мазок-перепечаток, мазок — соскоб с поверхности слизистой оболочки, эрозии, язвы, свищей пародонтальных карманов, а также осадок промывной жидкости, использованной для полоскания полости рта, и пунктат участка.

Биопсия — прижизненное иссечение тканей для микроскопического исследования с диагностической целью. Биопсию проводят в тех случаях, когда установить диагноз с помощью других методов не удается, а также при необходимости подтверждения клинических предположений.

Бактериологической исследование – бактериоскопия материала, получаемого с поверхности слизистой оболочки полости рта, язв, эрозии. Это исследование проводят в тех случаях, когда нужно уточнить причину поражения слизистой оболочки при специфических заболеваниях, гнойных процессах, для определения байиллоносительства.

Биохимическое исследование крови, мочи и др.исследование на содержание глюкозы проводят при клиническом подозрении на сахарный дибет (сухость во рту, хронический рецидивирующий кандидоз, болезни пародонта и др.).

4. Перечень практических работ, наглядных пособий и ТСО:

Фильмы, муляжи, таблицы.

5. Практическая работа:

Название практической работы:

— профилактический осмотр, опрос и сбор анамнеза;

— заполнение карты пациента

Цель работы:научиться проводить профилактический осмотр.

Методика выполнения работы:

Необходимые материалы: карта обследования, шариковая ручка, перчатки, маска, лоток с набором стандартных инструментов.

Порядок выполнения работы:

1.РѕРїСЂРѕСЃ

2.Профилактический осмотр

3.Заполнение карты обследования

Результаты работы и критерии оценки:грамотно заполненная карта обследования.

В 

6. Перечень вопросов для проверки исходного уровня знаний:

1. Деонтологические принципы в стоматологии.

2.Стоматологическую документацию.

3.Основные методы обследования.

4.Основные жалобы пациентов на терапевтическом стоматологическом приеме.

5.Алгоритм осмотра пациента врачом стоматологом.

6.Индексы, оценивающие гигиеническое состояние полости рта, кариесрезистентность эмали, состояние пародонта..

7.Аппаратурные методы обследования .

8.Рентгенологические методы исследования

9.Лабораторные методы исследования

10. Функциональные методы исследования

11. Гистологические методы исследования

12. Иммунологические методы исследования.

13. Цитологические методы исследования

7. Перечень вопросов для проверки конечного уровня знаний:

· Основные методы обследования

· Дополнительные методы обследования

· Функциональные методы

· Лабораторные методы

8.Хронокарта учебного занятия:

• Ор­га­ни­за­ци­он­ная часть (при­вет­ст­вие, за­пол­не­ние жур­на­ла по­се­ще­ний за­ня­тий, оцен­ка внеш­не­го РІРёВ­РґР° сту­ден­та, со­стоя­ния ме­ди­цин­ской оде­ж­ды, на­ли­чия ме­ди­цин­ских пер­ча­ток, за­щит­ных ма­сок, оч­ков, смен­ной РѕР±СѓВ­РІРё) – 5 РјРёРЅСѓС‚.
• Оп­ре­де­ле­ние пре­по­да­ва­те­лем те­мы за­ня­тия, це­ли за­ня­тия Рё за­дач, на­прав­лен­ных РЅР° её вы­пол­не­ние – 5 РјРёВ­РЅСѓС‚.
• РћРїСЂРѕСЃ сту­ден­тов – 35 РјРёВ­РЅСѓС‚.

• Приём пациентов — са­мо­стоя­тель­ная ра­бо­та сту­ден­тов (кон­троль Рё по­мощь пре­по­да­ва­те­ля), про­дол­жи­тель­ность это­го эта­па – 2 часа 35 РјРёРЅСѓС‚.
• Кон­троль вы­пол­не­ния прак­ти­че­ской час­ти, заполнение истории болезни – 15 РјРёРЅСѓС‚
• Подведение итогов занятия, за­да­ние РЅР° РґРѕРј – 5 РјРёВ­РЅСѓС‚.

9.Самостоятельная работа студентов:

· Перечислить основные жалобы больных на терапевтическом приеме

· Описание функциональных методов исследования (№2)

· Докончить схему (№4)

· Расположить в правильной последовательности (№5)

· Докончить схему (№6)

· Заполнить таблицу (№7,8)

· Составить алгоритм описания рентгенограммы

· Ответить на тестовые задания (№10)

10.Перечень учебной литературы к занятию:

· Максимовский Ю.М. с соавт. Терапевтическая стоматология. М., 2002, с. 76-115

· Боровский Е.В. с соавт. Терапевтическая стоматология. М., 1997, с. 63-103.

· Муравьянникова Ж.Г. Профилактика стоматологических заболеваний. Ростов н/Д, 2007, с.66-81.

· Рединова Т.Л. с соавт. Диагностика в терапевтической стоматологии. Ростов н/Д, 2006, 4-117

· Безруков В.М. Справочник по стоматологии. — М., Медицина, 1998. — 656 с.

· Пахомов Г.Н. Основы организации стоматологической помощи населе­ нию. — М., Медицина, 1983. — 206 с.

· Сборник нормативных документов по организации стоматологической по­ мощи. — М., Грантъ, 1999. — 527 с.

В 

www.ronl.ru

Микроскопические методы исследования в микробиологии

Микроскопические методы исследования представляют собой способы изучения разнообразных объектов с использованием специального оборудования. Оно позволяет рассматривать строение веществ и организмов, величина которых находится за границами разрешающей способности человеческого взгляда. В статье проведем краткий анализ микроскопических методов исследования.

Общие сведения

Современные методы микроскопического исследования используют в своей практике разные специалисты. Среди них вирусологи, цитологи, гематологи, морфологи и прочие. Основные методы микроскопического исследования известны достаточно давно. В первую очередь это световой способ рассмотрения объектов. В течение последних лет активно вводятся в практику и другие технологии. Так, популярность приобрели фазово-контрастный, люминесцентный, интерференционный, поляризационный, инфракрасный, ультрафиолетовый, стереоскопический метод исследования. Все они базируются на разнообразных свойствах света. Кроме этого, широко используются электронно-микроскопические методы исследования. Эти способы позволяют отобразить объекты с помощью направленного потока заряженных частиц. Стоит отметить, что такие приемы изучения применяются не только в биологии и медицине. Достаточно популярен микроскопический метод исследования металлов и сплавов в промышленности. Такое изучение позволяет оценивать поведение соединений, вырабатывать технологии для минимизации вероятности разрушения и усиления прочности.

Световые способы: характеристика

Такие микроскопические методы исследования микроорганизмов и других объектов базируются на различной разрешающей способности оборудования. Немаловажными факторами при этом является направленность луча, особенности самого объекта. Последний, в частности, может быть прозрачным или непрозрачным. В соответствии со свойствами объекта, меняются физические свойства светового потока – яркость и цвет, обусловленные амплитудой и длиной волны, плоскость, фаза и направленность распространения волны. На использовании этих характеристик и строятся разные микроскопические методы исследования.

Специфика

Для изучения световыми способами объекты, как правило, окрашивают. Это позволяет выявить и описать те или иные их свойства. При этом необходимо, чтобы ткани были фиксированными, поскольку окраска выявит определенные структуры исключительно в убитых клетках. В живых элементах краситель обосабливается в виде вакуоли в цитоплазме. Она не прокрашивает структуры. Но с помощью светового микроскопа можно исследовать и живые объекты. Для этого используется витальный способ изучения. В таких случаях применяется темнопольный конденсор. Он встраивается в световой микроскоп.

Изучение неокрашенных объектов

Оно осуществляется с помощью фазово-контрастной микроскопии. Этот способ базируется на дифракции луча в соответствии с особенностями объекта. В процессе воздействия отмечается изменение фазы и длины волны. В объективе микроскопа присутствует полупрозрачная пластинка. Живые или фиксированные, но не окрашенные объекты из-за своей прозрачности почти не изменяют цвет и амплитуду луча, проходящего сквозь них, провоцируя только сдвиг волновой фазы. Но при этом, пройдя через объект, световой поток отклоняется от пластинки. В итоге между лучами, пропущенными сквозь объект, и входящими в световой фон, появляется разность волновой длины. При определенном ее значении возникает визуальный эффект – темный объект будет четко виден на светлом фоне либо наоборот (в соответствии с особенностями фазовой пластинки). Для его получения разность должна составлять не меньше 1/4 длины волны.

Аноптральный способ

Он является разновидностью фазово-контрастного метода. Аноптральный способ предполагает использование объектива со специальными пластинками, которые меняют только цвет и яркость фонового света. Это существенно расширяет возможности изучения неокрашенных живых объектов. Применяется фазово-контрастный микроскопический метод исследования в микробиологии, паразитологии при изучении растительных и животных клеток, простейших организмов. В гематологии этот способ используется для расчета и определения дифференцировки элементов крови и костного мозга.

Интерференционные приемы

Эти микроскопические методы исследования решают в целом те же задачи, что и фазово-контрастные. Однако в последнем случае специалисты могут наблюдать только контуры объектов. Интерференционные микроскопические методы исследования позволяют изучать их части, выполнять количественную оценку элементов. Это возможно благодаря раздвоению светового луча. Один поток проходит сквозь частицу объекта, а другой – мимо. В окуляре микроскопа они сходятся и интерферируют. Возникающая разность фаз может определяться по массе разных клеточных структур. При последовательном ее измерении с заданными показателями преломления можно установить толщину нефиксированных тканей и живых объектов, содержание белков в них, концентрацию сухого вещества и воды и пр. В соответствии с полученными данными специалисты получают возможность косвенно оценивать проницаемость мембран, активность ферментов, клеточный метаболизм.

Поляризация

Она осуществляется с помощью призм Николя или пленчатых поляроидов. Их помещают между препаратом и источником света. Поляризационный микроскопический метод исследования в микробиологии позволяет изучать объекты с неоднородными свойствами. В изотропных структурах быстрота распространения света не зависит от выбранной плоскости. При этом в анизотропных системах скорость изменяется в соответствии с направленностью света по поперечной либо продольной оси объекта. В случае если величина преломления вдоль структуры будет больше, чем вдоль поперечной, создается двойное положительное лучепреломление. Это свойственно многим биологическим объектам, у которых обнаруживается строгая молекулярная ориентация. Они все являются анизотропными. К этой категории, в частности, относятся миофибриллы, нейрофибриллы, реснички в мерцательном эпителии, коллагеновые волокна и прочие.

Значение поляризации

Сравнение характера лучевого преломления и показателя анизотропии объекта дает возможность оценивать молекулярную организацию структуры. Поляризационный метод выступает как один из гистологических способов анализа, используется в цитологии и пр. В свете можно изучать не только окрашенные объекты. Поляризационный метод дает возможность исследовать неокрашенные и нефиксированные – нативные – препараты тканевых срезов.

Люминесцентные приемы

Они базируются на свойствах некоторых объектов давать свечение в сине-фиолетовом участке спектра или в УФ-лучах. Многие вещества, например белки, некоторые витамины, коферменты, лекарственные средства, наделены первичной (собственной) люминесценцией. Другие объекты начинают светиться при добавлении флюорохромов – специальных красителей. Эти добавки избирательно или диффузно распространяются на отдельные клеточные структуры или химические соединения. Это свойство легло в основу использования люминесцентной микроскопии при гистохимических и цитологических исследованиях.

Области использования

Применяя иммуно-флуоресценцию, специалисты обнаруживают вирусные антигены и устанавливают их концентрацию, идентифицируют вирусы, анти тела и антигены, гормоны, разнообразные продукты метаболизма и так далее. В этой связи при диагностике герпеса, эпидемического паротита, вирусного гепатита, гриппа и прочих инфекций используются люминесцентные методы исследования материалов. Микроскопический иммуно-флуоресцентный способ позволяет распознавать опухоли злокачественного характера, определять ишемические участки в сердце на ранних этапах инфаркта и пр.

Использование ультрафиолета

Оно основывается на способности ряда веществ, включенных в живые клетки, микроорганизмы или фиксированные, но неокрашенные, прозрачные при видимом свете ткани поглощать УФ-лучи определенной длины волн. Это характерно, в частности, для высокомолекулярных соединений. К ним относят белки, ароматические кислоты (метилаланин, триптофан, тирозин и пр.), нуклеиновые кислоты, пирамидиновые и пуриновые основания и так далее. Ультрафиолетовая микроскопия позволяет уточнить локализацию и количество этих соединений. При изучении живых объектов специалисты могут наблюдать изменения процессов их жизнедеятельности.

Дополнительно

Инфракрасная микроскопия используется при исследовании непрозрачных для света и УФ-лучей объектов посредством поглощения их структурами потока, длина волны которого 750-1200 нм. Чтобы применить этот способ нет необходимости предварительно подвергать препараты химической обработке. Как правило, инфракрасный метод используется в антропологии, зоологии и прочих биологических отраслях. Что касается медицины, то этот способ применяют преимущественно в офтальмологии и нейроморфологии. Изучение объемных объектов осуществляется с помощью стереоскопической микроскопии. Конструкция оборудования позволяет выполнять наблюдение левым и правым глазом под различным углом. Непрозрачные объекты исследуются при сравнительно небольшом увеличении (не более 120 раз). Стереоскопические способы используются в микрохирургии, патоморфологии, в судебной медицине.

Электронная микроскопия

Она используется для изучения структуры клеток и тканей на макромолекулярном и субклеточном уровнях. Электронная микроскопия позволила сделать качественный скачок в сфере исследований. Этот способ широко применяется в биохимии, онкологии, вирусологии, морфологии, иммунологии, генетике и прочих отраслях. Значительное усиление разрешающей способности оборудования обеспечивается потоком электронов, которые проходят в вакууме сквозь электромагнитные поля. Последние, в свою очередь, создаются специальными линзами. Электроны обладают способностью проходить сквозь структуры объекта либо отражаться от них с отклонениями под разными углами. В результате создается отображение на люминесцентном экране прибора. При просвечивающей микроскопии получается плоскостное изображение, при сканирующей, соответственно, объемное.

Необходимые условия

Стоит отметить, что перед тем, как пройти электронное микроскопическое исследование, объект подвергается специальной подготовке. В частности, используется физическая либо химическая фиксация тканей и организмов. Секционный и биопсийный материал, кроме этого, обезвоживают, внедряют в эпоксидные смолы, разрезают алмазными или стеклянными ножами на ультратонкие срезы. Затем их контрастируют и изучают. В сканирующем микроскопе исследуются поверхности объектов. Для этого на них напыляют специальные вещества в вакуумной камере.

fb.ru

Современные методы микроскопических исследований — реферат

Рис. 5. Электронограмма лейкоцита и фагоцитируемой им бактерии, полученная при сканирующей электронной микроскопии; ×20000.

Некоторые виды современных микроскопов

Фазово-контрастный  микроскоп (аноптральный микроскоп) служит для исследования прозрачных объектов, которые не видны на светлом поле и не подлежат окрашиванию из-за возникновения аномалий в исследуемых образцах.

Интерференционный микроскоп дает возможность исследовать объекты с низкими показателями преломления света и чрезвычайно малой толщины.

Ультрафиолетовый  и инфракрасный микроскопы предназначены для исследования объектов в ультрафиолетовом или инфракрасном участке светового спектра. Они снабжены флюоресцентными экраном, на котором формируется изображение исследуемого препарата, фотокамерой с чувствительным к этим излучениям фотоматериалом или электронно-оптическим преобразователем для формирования изображения на экране осциллоскопа. Длина волны ультрафиолетовой части спектра составляет 400--250 нм, поэтому в ультрафиолетовом микроскопе можно получить более высокое разрешение, чем в световом, где освещение осуществляется видимым световым излучением с длиной волны 700--400 нм. Преимуществом этого М. является также то, что невидимые в обычном световом микроскопе объекты становятся видимыми, поскольку поглощают УФ-излучение. В инфракрасном микроскопе наблюдение объектов ведется на экране электронно-оптического преобразователя или фотографируется. С помощью инфракрасной микроскопии изучают внутреннюю структуру непрозрачных объектов.

Поляризационный микроскоп позволяет выявлять неоднородности (анизотропию) структуры при изучении строения тканей и образований в организме в поляризованном свете. Освещение препарата в поляризационном микроскопе осуществляется через поляризатор-пластинку, которая обеспечивает прохождение света в определенной плоскости распространения волн. Когда поляризованный свет, взаимодействуя со структурами, изменяется, то структуры резко контрастируют, что широко используют в медико-биологических исследованиях при изучении препаратов крови, гистологических препаратов, шлифов зубов, костей и т. д.

Люминесцентный  микроскоп (МЛ-2, МЛ-3) предназначен для исследования люминесцирующих объектов, что достигается при освещении последних с помощью УФ-излучения. Наблюдая или фотографируя препараты в свете их видимой возбужденной флюоресценции (т. е. в отраженном свете), можно судить о структуре исследуемого образца, что используется в гистохимии, гистологии, микробиологии и при иммунологических исследованиях. Прямое окрашивание люминесцентными красителями позволяет более четко выявлять такие структуры клеток, которые трудно рассмотреть в световом микроскопе.

Рентгеновский микроскоп используется для исследования объектов в рентгеновском излучении, поэтому такие микроскопов снабжены микрофокусным рентгеновским источником излучения, преобразователем рентгеновского изображения в видимое -- электронно-оптическим преобразователем, формирующим видимое изображение на осциллографической трубке или на фотопленке. Рентгеновские микроскопы имеют линейное разрешение до 0,1 мкм, что позволяет исследовать тонкие структуры живого вещества.

Электронный микроскоп предназначен для исследования сверхтонких структур, неразличимых в световых микроскопах. В отличие от светового, в электронном микроскопе разрешение определяется не только явлениями дифракции, но и различными аберрациями электронных линз, которые практически невозможно корригировать. Наводка микроскопа, в основном, производится диафрагмированием за счет применения малых апертур электронных пучков.

В 

Заключение

Чего же можно ждать  от микроскопии завтрашнего дня? На решение каких задач можно рассчитывать? Прежде всего – распространение на все новые и новые объекты. Достижение атомарного разрешения, безусловно, является крупнейшим завоеванием научной и технической мысли. Однако не будем забывать, что это достижение распространяется лишь на ограниченный круг объектов, помещенных к тому же в весьма специфические, необычные и сильно воздействующие условия. Поэтому необходимо стремиться распространить атомарное разрешение на широкий круг объектов.

Со временем можно ожидать  привлечения «на работу» в  микроскопах другие заряженные частицы. Ясно, однако, что этому должны предшествовать поиски и разработка мощных источников таких частиц; кроме того, создание микроскопов нового типа будет определяться появлением конкретных научных задач, в решение которых именно эти  новые частицы внесут решающий вклад.

Будут совершенствоваться микроскопические исследования процессов в динамике, т.е. происходящих непосредственно  в микроскопе или в сочлененных  с ним установках. К таким процессам  относятся испытания образцов в  микроскопе (нагрев, растяжение и т.д.) непосредственно во время анализа  их микроструктуры. Здесь успех будет  обусловлен, в первую очередь, развитием  техники высокоскоростной фотографии и повышением временного разрешения детекторов (экранов) микроскопов, а  также использованием мощных современных  компьютеров.

В 

В 

В 

В 

В 

В 

В 

В 

В 

В 

В 

В 

Список использованной литературы

1. Малая медицинская энциклопедия. — М.: Медицинская энциклопедия. 1991—96 гг.
2. Первая медицинская помощь. — М.: Большая Российская Энциклопедия. 1994 г.
3. Энциклопедический словарь медицинских терминов. — М.: Советская энциклопедия. — 1982—1984 гг.
4. http://dic.academic.ru/
5. http://ru.wikipedia.org/
6. www.golkom.ru
7. www.avicenna.ru
8. www.bionet.nsc.ru

В 

В 

yaneuch.ru

МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ - PDF

Транскрипт

1 БЕЛГОРОДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ЮРИДИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА СУДЕБНОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ И КРИМИНАЛИСТИКИ РЕФЕРАТ ПО ФИЗИКЕ НА ТЕМУ: МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Выполнила студентка группы _ очного отделения Магомедова Асият Укаиловна Белгород

2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ Сущность и задачи микроскопов Система показателей микроскопических методов Эффективность использования микроскопических методов...9 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

3 ВВЕДЕНИЕ В современной науке и технике чтобы исследовать следы и иные вещественные доказательства используют множество различных методов. Больше всего используют микроскопические. Огромное значение имеют криминалистические средства и методы в раскрытии преступных действий. Благодаря им обнаруживают и изымают невидимые следы, получают розыскную и доказательственную информацию, облегчают поиск тайников. В последнее время появились новые криминалистические средства- приборы для использования вещественных доказательств при производстве следственных действий. Вдобавок к ним появились приборы для работы на месте взрыва, пожара, дорожно - транспортного происшествия, для поиска цветных и черных металлов, для о1бнаружения фальшивых денег и т. д. В последние годы произошли немаловажные изменения этой техники. За очень долгую историю своего применения, микроскопия стала очень эффективным методом получения судебных доказательств. Даже простой осмотр различных предметов под микроскопом выявляет множество деталей, являющиеся важными для проведения следствия. Микроскопические методы используются в различных науках. Они являются одними из важнейших методов исследования следов преступления и иных вещественных доказательств. Это объясняется широким кругом решаемых задач этим методом. Основу микроскопических методов исследования составляет световая и электронная микроскопия. В практической и научной деятельности, используют и фазово-контрастные, ультрафиолетовые, инфракрасные, люминесцентные, поляризационные, интерференционные, стереоскопические микроскопии. 3

4 1.1.Сущность и задачи микроскопических методов исследования следов В криминалистике часто используются различные приборы для исследования мельчайших частиц. Важнейшими из них является микроскоп. В 1590 году в городе Мидделбурге Иоанн Липперсгей и Захариус Янсенвпервые получили знания о микроскопе, изобретенные на основе оптики. Микроскоп сложный оптико-механический прибор для получения увеличенного изображения объектов или деталей их структуры, невидимых невооруженным глазом. С помощью него глаз может увидеть детали объекта, расстояние между которыми составляет не менее чем 0,08 мм.а в 1624 году Галилео Галилей представляет свой основной микроскоп с уменьшенными габаритами под названием "оккиолино" (маленький глаз). Этот микроскоп начал быстро распространятся после того, как он улучшенную и сконструированную им зрительную трубу, стал использовать как стандартный микроскоп, изменяя расстояние между объективом и окуляром. Также было проделано множество попыток по выявлению оптических свойств изогнутых поверхностей, которые были известны Евклиду и Птоломею. В 16 веке Леонардо да Винчи и Мауролико показали, что мельчайшие объекты лучше изучать с помощью лупы. Поначалу появились простые микроскопы, которые состояли из одного объектива, а затем были изобретены более сложные, имеющие, кроме объектива, еще и окуляр. В начале 18 в. в России появились микроскопы,где Эйлер придумал методы расчета оптических узлов микроскопа. А в 1827 г. Амичи применил в микроскопе иммерсионный объектив. Объективы, влияющие на увеличение с малым фокусным расстоянием, у которых численная величина апертуры больше0,95,называются иммерсионными. В конце 18 начале 19 в. была предложена идея и сделан расчет бесцветных объективов для микроскопа, благодаря чему улучшились их оптические качества, а увеличение объектов, через микроскоп, выросло с 500 до 1000 раз. Первый электронный микроскоп изобретенный в

5 английским оптиком Сорби позволил получить размеры до 0,1 0,01 нм. Также важную роль в улучшении оптических систем микроскопа и микроскопической техники сыграли: И.П. Кулибин, М. В. Ломоносов, А.А. Лебедев, С.И. Вавилов, В.П. Линник, Л.И. Мандельштам, Д.Д. Максутов и др. История микроскопии это история бесконечных поисков человека, который стремился разгадать тайну природы. В современной науке микроскопы используют для увеличения объектов и обеспечения видимого сравнения двух препаратов. Объем изображения препарата занимающий поле зрения микроскопа, помогает нам соотнести свойства этих объектов [8]. Интерференционный микроскоп позволяет изучать объекты с малой толщиной и низкими показателями преломления света. В этом микроскопе луч света разделяется на две части, одна из которой проходит через исследуемый объект, а другая мимо оптической ветви. Ультрафиолетовый и инфракрасный микроскопы предназначены для исследования объектов в инфракрасном или ультрафиолетовом участке светового спектра. Фазово-контрастный микроскоп- микроскоп с помощью которого исследуются прозрачные объекты, невидимые на светлом поле и содержащие отклонения в ходе проведения исследования из за которых не может быть произведено окрашивание. Он широко применяется при микроскопическом анализе мочи, онкологических препаратов тканей и т.д. Поляризационный микроскоп позволяет увидеть различные свойства структуры при изучении строения тканей и образований в организме в поляризованном свете. Люминесцентный микроскоп служит для исследования люминесцирующих объектов, с помощью УФ-излучений. Рентгеновский микроскоп помогает нам исследовать объекты в рентгеновском излучении, поэтому такие микроскопы обладают 5

6 рентгеновским источником излучения. Эти микроскопы имеют линейное разрешение до 0,1 мкм, с помощью которых исследуют тонкие структуры живого вещества. Сканирующий микроскоп предназначен для непрерывного исследования препарата на выбранном участке построчно. Электронный микроскоп предназначен для исследования очень тонких структур, неразличимых в световых микроскопах. При помощи микроскопов, оснащенных современными оборудованиями, исследователь может не только запечатлеть изображения объектов, но и проводить его анализ[4]. 1.2.Система показателей микроскопических методов Микроскопические методы широко применяются при проведении экспертиз. Часто при исследовании человеческого тела и его частей, для нахождения особенностей, а также для установления зависимости повреждений и уровня расположения их. Такие исследования проводятся с помощью лупы. Выделяют множество видов луп. Наиболее распространенной является дактилоскопическая, с помощью которой исследуют отпечатки пальцев рук. Для исследования текстильных тканей применяют специальную текстильную лупу. Стереоскопическая и операционная микроскопия предназначена для рассмотрения объекта без всякой обработки под микроскопом, входе экспертизы различных повреждений на одежде. Поэтому возникает возможность изучать мелкие детали повреждений, устанавливать их происхождение. Также стереоскопическая микроскопия позволяет нам увидеть предмет объемным за счет рассматривания его двумя глазами. Множество микроскопов, которые используются для исследования следов, являются стереоскопическими. 6

7 Микроскоп применяется в тех случаях, когда недостаточно увеличения полученное лупой. Также в науке используют двойные микроскопы, с помощью которых изучают криминалистические объекты. Например, при исследования следов оружия на пулях и гильзах. Он состоит из двух частей оптической системы: одна из которых служит для проектирования на исследуемую поверхность изображения щели, а другая для ее наблюдения. Изображение щели на гладких поверхностях имеет вид ровной светлой полоски, а на неровных вид ломаной линии. Двойной микроскоп позволяет измерять и их высоту[3]. В криминалистике применяют и металлографический микроскоп, с помощью которого изучают кристаллические структуры изделий из металлов, разделение штрихов карандаша и копировальной бумаги при исследовании документов. При расследовании преступлений эксперты сталкиваются с такой ситуацией, что на месте происшествия отсутствуют следы преступления. Но все же в местах происшествия всегда остаются микpocлeды различных материалов и веществ, которые являются важными для раскрытия преступления. Их значение увеличивалось с развитием различных методов анализа объектов с меньшей массой. Благодаря современным технико-криминалистическим средствам и влиянию научнотехнического прогресса на экспертные методы на сегодняшний день мы имеем возможность успешно изымать, обнаруживать, закреплять и исследовать различные микрообъекты и в результате этого получать недоступную информацию. В области научных знаний о следах, наблюдаются следообразования и придают значение созданию свойств материалов. Задача следообразования состоит в том, что при взаимодействии веществ и материалов с другими объектами, они не выделяют внешнего строения. С помощью присоединения или отделения веществ следообразующего объекта, а также разрушения изменения его структуры, формируется следообразование. За счет взаимодействия следообразующих объектов выявляются особенности их структуры и состава. Таким образом, 7

8 изменение внутренних и внешних свойств объекта за счет источника, называют следом материала. Источник бывает вещественный, который передает вещество и импульс энергии, и невещественный, передающий только импульс энергии. Все это говорит нам о характере следов материалов, который устанавливает такие условия как: связь объекта с расследуемым делом; характер воздействия и его отдельные характеристики; соответствие отображения отображаемому; связь вещественного объекта; механизм взаимодействия объектов в расследуемой ситуации; природа влияния механическое, химическое ирт.д.; создание связи между признаком и совершением преступления[9]. Криминалистическое исследование материалов и веществ проводят для обнаружения и осмотра следственных действий. Эти вещества и материалы являются важными для раскрытия дела. Ими выступают такие предметы как: массы материалов, веществ; набор предметов; а также виды последних: волокна, лакокрасочные материалы и покрытия, и т.д. При изъятии микроследов материалов или веществ на месте происшествия должен находится специалист. В Момент когда нашли микрочастицу, необходимо предостеречься мер, которые исключают потерю микрочастицы и включения посторонних. Распространителями микрочастиц могут быть такие объекты как: одежда, обувь преступника и потерпевшего, тело, холодное оружие и другие орудия причиняющие травмы; и поврежденные объекты. Используя специальные методы и технические приборы, осуществляется поиск микрочастиц, которые создают условия освещения и изменение света с использованием светофильтров. Найденные вещества и частицы материалов фиксируют. Сбор микрочастиц выполняют прямым путем отделения от следонесущей поверхности. Метод сбора микрочастиц устанавливается специалистом в зависимости от свойств материала или вещества. Весь процесс исследуемых частиц является криминалистической экспертизой 8

9 (КЭМВИ).Чтобы выявить распространителей микрообъектов используют современные методы микроанализа. Эти методы помогают установить объем микроколичества таких веществ, как следы взрыва, наркотики и т.п. Особенность КЭМВИ состоит в множестве объектов, принятых в области техники, науки, отрасли промышленного производства: взаимодействие объектов, как элементов вещественной обстановки раскрытия дела; конкретное совпадение объекта разных объемов; существенные признаки свойственные объекту и подлежащие изменению внешних и внутренних факторов. Осуществление задач требует определенного подхода, системного анализа объектов сложной структуры, объединения знаний естественно-технического и научного свойства. Благодаря общим закономерностям происходит распознавание методики и устанавливается взаимодействие между объектами КЭМВИ. В настоящее время в экспертно-криминалистических учреждениях используют микроскопы, которые оснащены телекамерами и персональными компьютерами, и за счет них получают изображение сравниваемых объектов на телеэкране, а также изучают объекты в поляризованном свете Эффективность проведения микроскопических методов Раскроем особенности этих методов. Путем микроскопического исследования собирают материал из зараженных мест, вызывающие подозрение. Например, прямой кишки, шейки матки, предстательной железы, цервикального канала, уретры, и др. Разумно и проведение комплексной микроскопии окрашенного и нативного препаратов. Микроскопия нaтивнoгo препарата определяет количество трихомонад в нативном препарате, т.е. исследует неокрашенный свежий материал. Для 9

10 его приготовления, смешивают исследуемый препарат с каплей изотонического раствора хлорида натрия и накрывают стеклом, микpocкoпиpуя при увеличении окуляра 7 и объектива 40. Фазово-контрастная микроскопия дает увидеть структуру и четкое движения трихомонад. Из за активной утраты движения трихомонад, материал исследуют сразу после взятия. За счет вида болезни, зависимости трихомонад и работы специалиста, который проводит исследование, чувствительность этого метода трансформируется. В окрашенных материалах содержание трихомонад больше, чем в нативных, с учетом подвижных и неподвижных особей. Окрашенные препараты употребляют на наличие воспалительного процесса. Все же эффективность микроскопического метода исследования в целом недостаточная. В отличии от других методов, он имеет слабую чувствительность (от 36% до 82%). Анализ результата зависит во многом от опыта работы специалиста, соблюдения условий сбора материала и качества мазка. Ошибочные результаты микроскопических исследований определяют: низкотитражными препаратами, которые содержат большое количество клеток эпителия, лейкоцитов и различного материала из очага поражения; различными видами трихомонад формы; принятием эпителиальных клеток, макрофагов и других клеточных элементов за трихомонады; потерей влагалищными трихомонадами свойственной подвижности, извлеченных из организма человека; потерей форм во время закрепления и окрашивания, создающий трудности для распознавания. Люминесцентная микроскопия позволяет легко найти трихомонады, которые дают типичное свечение в УФ-лучах, при обработке высушенного мазка люминофорома. На сегодняшний день этот метод практически не используют. Он полезен только для выявления неподвижных форм возбудителя, но полученные результаты сравнивают с результатами других методов. Электронная микроскопия исследует формы объектов с помощью 10

11 электронов, которые позволяют изучить структуру этих объектов. Электронная микроскопия применяется в области морфологии, иммунологии, биохимии, онкологии, медицинской генетике, микробиологии, вирусологии. Благодаря электронной микроскопии был открыт ряд неизвестных клеточных органелл, таких как лизосомы, цитоскелет, микротрубочки, структуры, рибосомы, характерные для отдельных видов клеток. Также с помощью электронной микроскопии были раскрыты тончайшие механизмы развития болезней. Исследования строения материи замедляют способности электронных микроскопов. Но это способствовало расширению информации, получаемую за счет электронной микроскопии. Наблюдение структурного течения в клетке, подтвердило наличие одного из основных методологических принципов современной биологии диалектическое единство структуры и функции. Электронная микроскопия требует подготовки на исследование объектов, от которой зависят возможности метода. Основным критерием электронно-микроскопических исследований является закрепление тканей с наибольшим сохранением их прижизненного строения. Электронная микроскопия является одной из востребованных техниккак в практической, так и в научнойдеятельности. Поскольку электронные микроскопы имеются не во всех лабораториях и материал в кратчайшие сроки необходимо закрепить и перевезти, исследователи решили провести сравнение двух определенных растворов. Для этого взяли осмиевый фиксатор и фиксатор, содержащий 4% параформ и 0,2% глутаральдегид на фосфатном буфере с рн 7,4. Большой разницы при изучении органов и тканей после закрепления в этих растворах не имелось, но какие то отличия по качеству и составу все же нашлись. В ткань проходят четырехокись осмия и глутаровый альдегид на 0,1-0,5 мм примерно за 1 1,5 часа, но для некоторых тканей оно может возрастать до 4 часов или до мин. Также встречаются случаи, где допускается увеличение до одного дня. Широко применяется закрепление материала в глyтapoвoм альдегиде. Главное для 11

12 устраненияa yтoлитичecкиx измeнeний в образце - большая скорость проникновения в ткани. При глyтapaльдeгиднoй фиксации приемлемое состояние ультраструктурных компонентов клеток наблюдается на глубину не более 1мм, в то время как пapaфopмaльдeгидный фиксатор сохраняет для электронно-микроскопического исследования всю ткань образца в объеме 3,5 см. Таким образом, фиксирующий раствор на основе глyтapoвoгo альдегида и пapaфopмaповышает срок сохранения в не модифицированном виде тканей и органов, что влияет на эффективное исследование и может применяться при необходимости в экспертной практике. 12

13 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК 1. Надеждин С.В. Теоретические основы современных методов микроскопии: Надеждин С.В., Федорова М.З., Буржинская; БелГУ, с.вам ррро2.соболь С.А. История микроскопа и микроскопических исследований: АНьСССР,ь1949.о-л606ос. оооо3.оhttp://otherreferats.allbest.ru/medicine/ html [Методы микроскопии].волк 4. [Методы микроскопии]. 5.оhttp://nsau.edu.ru/images/vetfac/images/ebooks/microbiology/stu/bacter/ microscop.htm [Микроскоп и его исследования]. волк6.оhttp://ru.wikipedia.org/wiki[микроскопы]. длоо7.оhttp://vuzirossii.ru/index/metody_i_sredstva_predvaritelnogo_i_ehkspertn ogo_issledovanija/0-38[методы и средства предварительного исследования вещественных доказательств]. 8.http://www.vita-club.ru/micros1.htm [История микроскопа]. ммм9.оhttp://yandex.ru/yandsearch?win=112&clid= &text[исследование материалов]. 13

14 14

docplayer.ru

Курсовая работа - Микроскопические методы исследования.

В зависимости от цели различают цитологический метод, биопсию и бактериологическое исследование.

Цитологический методоснован на изучении структурных особенностей клеточных элементов и их конгломератов. Материалом для цитологического исследования могут быть мазок — отпечаток, мазок-перепечаток, мазок — соскоб с поверхности слизистой оболочки, эрозии, язвы, свищей пародонтальных карманов, а также осадок промывной жидкости, использованной для полоскания полости рта, и пунктат участка.

Биопсия — прижизненное иссечение тканей для микроскопического исследования с диагностической целью. Биопсию проводят в тех случаях, когда установить диагноз с помощью других методов не удается, а также при необходимости подтверждения клинических предположений.

Бактериологической исследование – бактериоскопия материала, получаемого с поверхности слизистой оболочки полости рта, язв, эрозии. Это исследование проводят в тех случаях, когда нужно уточнить причину поражения слизистой оболочки при специфических заболеваниях, гнойных процессах, для определения байиллоносительства.

Биохимическое исследование крови, мочи и др.исследование на содержание глюкозы проводят при клиническом подозрении на сахарный дибет (сухость во рту, хронический рецидивирующий кандидоз, болезни пародонта и др.).

4. Перечень практических работ, наглядных пособий и ТСО:

Фильмы, муляжи, таблицы.

5. Практическая работа:

Название практической работы:

— профилактический осмотр, опрос и сбор анамнеза;

— заполнение карты пациента

Цель работы:научиться проводить профилактический осмотр.

Методика выполнения работы:

Необходимые материалы: карта обследования, шариковая ручка, перчатки, маска, лоток с набором стандартных инструментов.

Порядок выполнения работы:

1.РѕРїСЂРѕСЃ

2.Профилактический осмотр

3.Заполнение карты обследования

Результаты работы и критерии оценки:грамотно заполненная карта обследования.

В 

6. Перечень вопросов для проверки исходного уровня знаний:

1. Деонтологические принципы в стоматологии.

2.Стоматологическую документацию.

3.Основные методы обследования.

4.Основные жалобы пациентов на терапевтическом стоматологическом приеме.

5.Алгоритм осмотра пациента врачом стоматологом.

6.Индексы, оценивающие гигиеническое состояние полости рта, кариесрезистентность эмали, состояние пародонта..

7.Аппаратурные методы обследования .

8.Рентгенологические методы исследования

9.Лабораторные методы исследования

10. Функциональные методы исследования

11. Гистологические методы исследования

12. Иммунологические методы исследования.

13. Цитологические методы исследования

7. Перечень вопросов для проверки конечного уровня знаний:

· Основные методы обследования

· Дополнительные методы обследования

· Функциональные методы

· Лабораторные методы

8.Хронокарта учебного занятия:

• Ор­га­ни­за­ци­он­ная часть (при­вет­ст­вие, за­пол­не­ние жур­на­ла по­се­ще­ний за­ня­тий, оцен­ка внеш­не­го РІРёВ­РґР° сту­ден­та, со­стоя­ния ме­ди­цин­ской оде­ж­ды, на­ли­чия ме­ди­цин­ских пер­ча­ток, за­щит­ных ма­сок, оч­ков, смен­ной РѕР±СѓВ­РІРё) – 5 РјРёРЅСѓС‚.
• Оп­ре­де­ле­ние пре­по­да­ва­те­лем те­мы за­ня­тия, це­ли за­ня­тия Рё за­дач, на­прав­лен­ных РЅР° её вы­пол­не­ние – 5 РјРёВ­РЅСѓС‚.
• РћРїСЂРѕСЃ сту­ден­тов – 35 РјРёВ­РЅСѓС‚.

• Приём пациентов — са­мо­стоя­тель­ная ра­бо­та сту­ден­тов (кон­троль Рё по­мощь пре­по­да­ва­те­ля), про­дол­жи­тель­ность это­го эта­па – 2 часа 35 РјРёРЅСѓС‚.
• Кон­троль вы­пол­не­ния прак­ти­че­ской час­ти, заполнение истории болезни – 15 РјРёРЅСѓС‚
• Подведение итогов занятия, за­да­ние РЅР° РґРѕРј – 5 РјРёВ­РЅСѓС‚.

9.Самостоятельная работа студентов:

· Перечислить основные жалобы больных на терапевтическом приеме

· Описание функциональных методов исследования (№2)

· Докончить схему (№4)

· Расположить в правильной последовательности (№5)

· Докончить схему (№6)

· Заполнить таблицу (№7,8)

· Составить алгоритм описания рентгенограммы

· Ответить на тестовые задания (№10)

10.Перечень учебной литературы к занятию:

· Максимовский Ю.М. с соавт. Терапевтическая стоматология. М., 2002, с. 76-115

· Боровский Е.В. с соавт. Терапевтическая стоматология. М., 1997, с. 63-103.

· Муравьянникова Ж.Г. Профилактика стоматологических заболеваний. Ростов н/Д, 2007, с.66-81.

· Рединова Т.Л. с соавт. Диагностика в терапевтической стоматологии. Ростов н/Д, 2006, 4-117

· Безруков В.М. Справочник по стоматологии. — М., Медицина, 1998. — 656 с.

· Пахомов Г.Н. Основы организации стоматологической помощи населе­ нию. — М., Медицина, 1983. — 206 с.

· Сборник нормативных документов по организации стоматологической по­ мощи. — М., Грантъ, 1999. — 527 с.

В 

www.ronl.ru

Смотрите также

• 
  Личная гигиена школьника реферат
• 
  Информационная культура личности реферат
• 
  Зона арктических пустынь реферат
• 
  Выделительная система человека реферат
• 
  Выдающиеся спортсмены россии реферат
• 
  Виды инвестиционных проектов реферат
• 
  Бунин иван алексеевич реферат
• 
  Экологически значимая информация реферат
• 
  Реферат кейнсианская экономическая теория
• 
  Электропривод постоянного тока реферат
• 
  Фердинанд де соссюр реферат