Марина дружинина лекарство от контрольной: Книга: «Лекарство от контрольной» — Марина Дружинина. Купить книгу, читать рецензии | ISBN 978-5-4471-4303-9

Содержание

Сказка как жизнь – Weekend – Коммерсантъ

Серия издательства «Эгмонт» «Школа прикола» открылась в 2005 году книгой замечательного детского писателя Артура Гиваргизова «Записки выдающегося двоечника». Затем было издано еще несколько книг все таких же замечательных авторов: Михаила Яснова, Даниила Хармса, Андрея Усачева. Художница Елена Блинова придумала оформление, напоминающее школьную тетрадку: на толстой скобке, с веселыми карандашными иллюстрациями. И вот теперь эта нестандартная серия продолжена тремя прозаическими книжками: «Когда я стану взрослым» Сергея Георгиева, «Прекратите грызть перила!» Сергея Силина и «Лекарство от контрольной» Марины Дружининой.

Сам факт этого издания — шаг довольно смелый: нестандартные книжки в нестандартном оформлении, да еще и отечественных авторов. Хотя все авторы известные и премированные. Сергей Георгиев, например, уже 20 лет пишет детские рассказы и сценарии для мультфильмов, Сергей Силин издал не одну книгу волшебных сказок и повестей, а Марина Дружинина известна как автор стихов для самых маленьких детей.

В серии «Школа прикола» собраны сочинения этих авторов на заданную тему, и тема эта — школа.

Короткие школьные рассказы, конечно, чудесны, потому что они милые, добрые, очень смешные. Но только образ школы в этих книжках получается такой лубочно-советский. Например, в рассказах Сергея Силина математик Петр Алексеевич все время дает своим ученикам контрольные, чтобы самому сидеть и читать книги про Чингачгука. А у Марины Дружининой младший братик вписывает старшему в дневник пятерки за «просмотр боевика «Свисток для крокодила»», а мальчик Вовка самостоятельно мастерит открытку «Любимой бабушке». Того и гляди все наденут красные галстуки и пойдут собирать металлолом. Такого, конечно, не происходит, местные дети в меру хорошие, в меру послушные, в меру хулиганы. «Воспитанный ученик не ломает на переменах столы,— говорится в книжке Силина,— а только стулья».

Тут если и могут возникнуть претензии, то скорее не к авторам, а к детской литературе как таковой, которая, имея симпатичный вид, запах и цвет, в общей массе оказывается достаточно безвкусной. Есть подозрение, что такой ее хочет видеть именно читатель, точнее, родитель, которому важно, чтобы, пережив книжку, ребенок вышел из нее совершенно неиспорченный — такой, как был. Тут каждому свое, но мне лично больше всего понравились рассказы совсем не про школу, завершающие книгу Сергея Георгиева. Там есть, к примеру, история про пса Уголька, который купил себе телевизор, а смотреть по нему нечего — по всем каналам передача про пса, который купил себе телевизор. Или про волка, который выучил в совершенстве заячий язык, а общаться на нем было не с кем: все зайцы, которых он ловил, оказывались страшно неразговорчивыми. Вот вся правда жизни. В телевизоре смотреть нечего, а волки съедят вас, даже если будут знать ваш язык: и правда, что с ними разговаривать?

Сергей Георгиев «Когда я стану взрослым»

Марина Дружинина

«Лекарство от контрольной»

Сергей Силин «Прекратите грызть перила!»


М.: Эгмонт, 2009

Рассказ.

.. — Русский дом в Ереване — Россотрудничество в Армении

‼️ Маугли ждет новых друзей: шоу мыльных пузырей и прощание с Летней школой Русского дома в Ереване ‼️

Маугли, Кот Матроскин и Попугай ожили сегодня в Русском доме в Ереване: прощальный утренник учеников Летней школы был посвящен 85-летию «Союзмультфильма». Впрочем, это был отнюдь не единственный сюрприз, который ребятки подготовили для родителей. А в качестве награды их ждал потрясающий подарок – музыкальное шоу мыльных пузырей и загадывание желаний.

Ведущий специалист по координации образовательно-просветительских программ Русского дома в Ереване Мария Аванесова в начале торжественной церемонии отметила: «Казалось бы, совершенно недавно мы вас приветствовали здесь на открытии нашей Летней школы. Однако завершение программы Летней школы вовсе не означает, что мы с вами прощаемся. Мы стали с ребятами большими друзьями и уверены, что будем еще встречаться, ведь у нас постоянно действуют курсы русского языка. Недавно одна из участниц узнав, что сегодня последний день Летней школы сказала: «А я не все буквы выучила». Так что, те ребята, которые хотят, могут продолжить занятия русским языком с сентября».

Она также сообщила, что участников Летней школы 27 августа ждет экскурсия в Ботанический сад, где будет проведен специальный урок по экологии и климату.

Сегодня же ученики Летней школы Русского дома в Ереване в ходе викторины продемонстрировали отличное знание советских мультиков, сами выступили в образе любимых анимационных героев. Родители с восторгом наблюдали за артистизмом ребятишек, не упускали возможности заснять всё на камеру.

Ведущий специалист по координации научно-методических программ отдела научных, образовательных и гуманитарных проектов Русского дома в Ереване Светлана Самуэлян поблагодарила всех, кто работал в Летней школе Русского дома в Ереване, родителей, преподавателей и самих воспитанников.

«По итогам викторины выиграла как всегда дружба и совершенно прекрасные отношения, которые сложились между нашими ребятами. Если бы не ваши дети, эта программа бы не состоялась. Вы видели по фотографиям, сколько замечательных, изумительных моментов мы пережили вместе с ребятишками. Отдельное спасибо преподавателям русского языка, ведь сейчас по утреннику можно заметить, насколько за такой короткий срок, все за 4 недели, повысился уровень владения устной речью, даже появился очень вкусный русский акцент. Ничто так не улучшает качество речи, как языковая среда. Ребята освоили большой объем материала, и это результат серьезного труда. Наши опытные преподаватели с первого дня находят общий язык со всеми детьми. Мы вас полюбили за этот месяц, большое вам спасибо», — обратилась к подопечным и их родителям Светлана Самуэлян.

Всем преподавателям вручили благодарственные грамоты, а ученикам – сертификаты об участии и подарки. Взбудораженные школьники терпением, как известно, не обладают, уже скоро все кричали от восторга, увидев собственные фото с экскурсии в Планетарий на подаренных чашечках. Неописуемое счастье охватило детвору еще и в ходе шоу мыльных пузырей с загадыванием желаний.

На этом фоне только 12-летней Ирэн Григорян было грустно: «Из-за того, что Летняя школа закончилась, чувствую себя одиноко, не буду видеть больше друзей, которых здесь завела, хотела бы продолжить с ними общение. В следующем году хочу непременно вновь принять участие. Мне тоже больше всего понравились Планетарий и волшебные пузыри, но желание, которое загадала, не скажу, ведь это секрет».

Одиннадцатилетний Юрий Сарибекян, которому досталась роль Маугли, солидарно поддержал подругу. «Мне тоже очень понравилась Летняя школа, а больше всего впечатлили экскурсии, мастер-классы. Хочу, чтобы в следующем году были те же ребята и много других, чтобы и они пришли, чтобы мы все познакомились!» — добавил Юра, запуская мыльный пузырь.

Мама 12-летней Шагане Мкртчян – инженер-атомщик из Мецамора Алина Маргарян – рассказала, что посылает дочь в Летнюю школу Русского дома в Ереване вот уже третий год подряд.

«Очень все нам нравится, пока дочке не исполнилось 14-ти, будем участвовать обязательно. Важность в том, что они в Летней школе изучают русский язык, в обычных школах сейчас так не преподают, как здесь, углубленно и досконально. И очень интересная программа, каждый год детей отводят в разные места, день у них полный и насыщенный мероприятиями. Плюс общее развитие – мультфильмы, сказки. И, конечно, экскурсия на авиабазу Эребуни очень всем понравилась, особенно моей дочке, самолеты, вертолеты, она же никогда не видела это все, ей было очень интересно. И еще пельмени, она была в восторге», — рассказала с улыбкой Алина Маргарян.

А вот Натали Шатворян в этом году впервые записалась в Летнюю школу Русского дома в Ереване. Мать девочки – Кармен Мхитарян – отметила, что они открыли для себя место, которое им действительно понравилось.

«Мы безмерно довольны, впечатлены, ведь каждый день был организован особым образом, они учились новому, в программу было включено и искусство, и наука, и экскурсии, и представления. Дочка очень довольна и уже с нетерпением ждет следующего года, и я точно приведу ее сюда вновь. Бесспорно, буду рекомендовать всем», — сказала женщина.




📌Отметим, Летняя школа при Русском доме в Ереване проводится уже третий год подряд и не открывалась только в прошлом году из-за пандемии коронавируса. Школа действует для детей в возрасте от 6 до 14 лет. В программу Летней школы входят: интерактивные уроки русского языка, мастер-классы по живописи и актерскому мастерству, активные и развивающие игры на свежем воздухе, увлекательные выездные экскурсии. Занятия проводятся 3 раза в неделю.

#РусскийдомЕреван #РоссотрудничествоАрмения #РоссияАрмения #RussianHouse #Rossotrudnichestvo

Марина Дружинина. Рассказы для детей. Произведения и биография — Сказки. Рассказы. Стихи

  

Марина Дружинина. Рассказы для детей. Произведения и биография

 

Список произведений

 
Дразнительное имя
Девочка наоборот
Коварные усы
Про Федю, федину маму и про кое-кого ещё
Для разнообразия
Серые клеточки
Хорошо быть оптимистом!
Батарейки
От приятного к неприятному
Мы с тобой одной крови
Сборы набирают обороты
Непослушные цыплята
Дело чести
А всё из-за смешинки
Мой приятель – супермен
Звезда и капуста
Открытка
Песенка обо всём
Сюрприз
Битва с вампирами
Супержелезяка
Семейное увлечение
Вовкина сдача

Спортивная шоколадка
Очень полезный подарок
Пальцем в небо
Гороскоп
Кому отдать ужин?
Брависсимо!
Звоните, вам споют!
Прыжок фигуристки
Мой весёлый выходной
Кроссворд с продолжением
Объяснительная записка
Ручка и ножка
Лекарство от контрольной
Кто я?
На что намекает котёнок Кузька, когда говорит: «мур-мур-мур!»
Гошка и Мурзилка
Элементарно, Ватсон!
Встреча с известным писателем
Старушка и контролёры
Самая верная примета
Впечатляющие новости
Загадочный букет
 

Читать все рассказы Дружининой
Читать рассказы других авторов
 

Марина Дружинина.

Краткая биография, жизнь и творчество

 
Марина Владимировна Дружинина родилась 31 декабря 1953 года в Москве.
После окончания Московского института стали и сплавов работала инженером, а затем научным сотрудником во Всесоюзном научно-исследовательском институте автоматизации чёрной металлургии. В то же время Дружинина начала серьёзно заниматься литературой.

В 1980 году в «Литературной газете» был напечатан первый рассказ Марины Дружининой «Монолог правдивого человека». Затем последовали другие рассказы, стихи, пародии, афоризмы. В 1992 году за рассказ «Роковой чеснок» М. Дружининой было присвоено звание лауреата конкурса «Золотой телёнок».
В 1981–1984 годах М. Дружинина сотрудничала в качестве корреспондента с газетой «Труд», писала фельетоны.
После рождения сына Марина Дружинина стала писать и для детей. В 1988 году в журнале «Весёлые картинки» появилось первое стихотворение для детей «Подарок». Сотрудничество с «Весёлыми картинками» продолжается и до сих пор.
М. Дружинина является также постоянным автором журнала «Мурзилка», напечатавшим в 1991 году её первый рассказ для детей «Непослушные цыплята».
В 1991 году в издательстве «Детская литература» вышла первая книжка стихов для малышей «Дали Маше погремушку».
В настоящее время М. Дружинина – автор более 80 книг, выпущенных различными издательствами. Это сборники рассказов для детей младшего и среднего школьного возраста, стихи для самых маленьких, обучающая литература в стихотворной и игровой форме для подготовки детей к школе.
Некоторые произведения Марины Дружининой переведены на украинский и финский языки.
За книгу «Мой весёлый выходной» (стихи и рассказы) М. Дружинина награждена дипломом Международной литературной премии «Облака» (2007).
Сборник сказок «Волшебная флейта» был признан Ассоциацией книгоиздателей России лучшей книгой 2007 года для детей и юношества.
М. Дружинина – лауреат Литературной премии имени А. П. Чехова (2009).
——————————————
Рассказы Дружининой для детей.
Читаем бесплатно онлайн
 

Читать онлайн все рассказы Дружининой
Читать рассказы других авторов  

Марина Дружинина — Лекарство от контрольной: читать сказку, рассказ для детей, текст полностью онлайн —

Классный выдался денёк! Уроки закончились рано, погода отличная. Мы ка-а-ак выскочили из школы! Ка-а-ак начали кидаться снежками, прыгать по сугробам и хохотать! Всю жизнь бы так веселился!
Вдруг Владик Гусев спохватился:
– Братцы! Завтра же контроша по математике! Готовиться нужно! – И, отряхиваясь от снега, поспешил к дому.
– Подумаешь, контроша! – Вовка швырнул снежок вслед Владику и развалился на снегу. – Я предлагаю её пр-ропустить!
– Как это? – не понял я.
– А вот так! – Вовка запихнул в рот снег и широким жестом обвёл сугробы. – Вон сколько тут антиконтролина! Препарат сертифицирован! Лёгкая простуда на время контрольной гарантирована! Завтра поболеем – в школу не пойдём! Здо́рово?
– Здо́рово! – одобрил я и тоже принял противоконтрольное лекарство.
Потом мы ещё попрыгали по сугробам, слепили снеговика в виде нашего завуча Михаила Яковлевича, съели по дополнительной порции антиконтролинчика – для верности – и отправились по домам.
Утром я проснулся и сам себя не узнал. Одна щека стала раза в три толще другой, и при этом ужасно болел зуб. Вот тебе и лёгкая простуда на один день!
– Ой, какой флюс! – Бабушка всплеснула руками, увидев меня. – Немедленно к врачу! Школа отменяется! Я позвоню учительнице.
В общем, противоконтрольное средство сработало безотказно. Это, конечно, меня порадовало. Но не совсем так, как хотелось бы. У кого хоть когда-нибудь болели зубы, кто попадал в руки к зубным врачам, тот меня поймёт. А доктор к тому же «утешил» напоследок:
– Зуб поболит ещё пару дней. Так что терпи и не забывай полоскать.
Вечером звоню Вовке:
– Как дела? В трубке раздалось какое-то шипение. Я с трудом разобрал, что это Вовка отвечает:
– У меня голос пропал.
Разговора не получилось.
На следующий день, в субботу, зуб, как и было обещано, продолжал ныть. Каждый час бабушка давала мне лекарство, и я старательно полоскал рот. Болеть ещё и в воскресенье никак не входило в мои планы: мы с мамой собирались идти в цирк.
В воскресенье я вскочил чуть свет, чтоб не опоздать, но мама тут же испортила мне настроение:
– Никакого цирка! Сиди дома и полощи, чтоб к понедельнику выздороветь. Не пропускать же опять занятия – конец четверти!
Я – скорей к телефону, Вовке звонить:
– Твой антиконтролин, оказывается, ещё и антицирколин! Цирк из-за него отменился! Предупреждать надо!
– Он ещё и антикинол! – сипло подхватил Вовка. – Из-за него меня в кино не пустили! Кто же знал, что будет столько побочных действий!
– Думать надо! – возмутился я.
– Сам дурак! – отрезал он.
Короче говоря, мы совсем разругались и отправились полоскать: я – зуб, Вовка – горло.
В понедельник подхожу к школе и вижу: Вовка! Тоже, значит, подлечился.
– Как жизнь? – спрашиваю.
– Отлично! – хлопнул меня по плечу Вовка. – Главное, контрошу-то проболели!
Мы расхохотались и пошли в класс. Первый урок – математика.
– О-о-о, Ручкин и Семечкин! Выздоровели! – обрадовалась Алевтина Васильевна. – Очень хорошо! Скорее садитесь и доставайте чистые листочки. Сейчас будете писать контрольную работу, которую пропустили в пятницу. А мы пока займёмся проверкой домашнего задания.
Вот так номер! Антиконтролин оказался форменным обдурином!
Или, может, дело не в нём?

Рассказы (слушать аудиокнигу бесплатно) — автор Марина Дружинина

07:16

01_А всё из-за смешинки

07:01

02_Батарейки

07:37

03_Битва с вампирами

04:04

04_Брависсимо!

07:01

05_Встреча с известным писателем

11:42

06_Гороскоп

02:43

07_Для разнообразия

04:53

08_Загадочный букет

09:50

09_Дело чести

06:14

10_Звоните, вам споют!

05:19

11_Кому отдать ужин

04:53

12_Кроссворд с продолжением

05:02

13_Лекарство от контрольной

06:07

14_Мой весёлый выходной

05:50

15_Мой приятель супермен

03:54

16_Мы с тобой одной крови

04:18

17_Непослушные цыплята

02:52

18_Объяснительная записка

05:06

19_От приятного к неприятному

05:23

20_Открытка

07:32

21_Пальцем в небо

01:42

22_Песенка обо всём

04:16

23_Самая верная примета

05:50

24_Старушка и контролёры

04:31

26_Элементарно, Ватсон!

07:25

27_Вовкина сдача

04:20

28_Впечатляющие новости

07:03

29_Гошка и Мурзилка

01:39

30_Девочка наоборот

02:09

31_Дразнительное имя

08:56

32_Звезда и капуста

02:58

33_Коварные усы

03:06

35_На что намекает котёнок Кузька, когда говорит мур-мур-мур

03:25

36_Очень полезный подарок

09:02

37_Про Федю, Федину маму и про кое-кого ещё

03:42

38_Прыжок фигуристки

05:42

39_Ручка и ножка

04:19

40_Сборы набирают обороты

03:15

41_Семейное увлечение

03:29

42_Серые клеточки

04:27

43_Спортивная шоколадка

05:46

44_Супер-железяка

03:04

45_Хорошо быть оптимистом

Розыгрыш билетов на конкурс «Живая классика»

дети 22 мая 2014 

Розыгрыш билетов на конкурс «Живая классика»

Проект, в котором дети из 26 стран потрясающе читают отрывки из своих любимых прозаических произведений.

В жюри проекта – Людмила Петрушевская, Григорий Остер, Роман Виктюк и Борис Грачевский, а ведет церемонию знаменитый робот Таспиан.

Ответьте на 10 вопросов (нужно выбрать правильный вариант ответа) и пришлите ответы по мейлу [email protected], в теме письма укажите «Живая классика». В четверг, 29 мая 2014, мы объявим победителей, покорые получит билеты на финал.

1. Что такое «Живая классика»?

А) литературное произведение

Б) выступление пианистов

В) конкурс юных чтецов

 

2. Кто является главным героем рассказа Виктора Драгунского «Все тайное становится явным?»

А) Кот

Б) Мальчик Дениска

В) Милицонер

 

3. Кто автор рассказа «Лекарство от контрольной»?

А) Марина Дружинина

Б) Самуэль Маршак

В) Агния Барто

 

4. Какие произведения можно читать на конкурсе юных чтецов?

А) любые прозаические произведения русской и зарубежной литературы

Б) только стихи

В) только школьную программу

 

5. Как зовут автора книги «Вредные советы»?

А) Григорий Остер

Б) Сергей Георгиев

В) Федор Гаврин

 

6. Какая сказка Ю.К. Олеши стала художественным фильмом, балетом и мультфильмом?

А) Кот в Сапогах

Б) Три орешка для Золушки

В) Три Толстяка

 

7. Какой самый первый этап конкурса юных чтецов «Живая Классика»?

А) Городской

Б) Всероссийский

В) Школьный

 

8. Какое грозное оружие было у Соловья-разбойника?

А) Топот

Б) Свист

В) Кулак

 

9. Какой писатель придумал хоббитов?

А) Джоан Роулинг

Б) Стивен Кинг

В) Джон Толкиен

 

10. Как звали персонажа сказки А.С. Пушкина, который превращался в шмеля, муху и комара?

А) Князь Гвидон

Б) Царь Додон

В) Князь Бидон

Суперфинал и церемония награждения победителей Международного конкурса юных чтецов «Живая классика» состоится 6 июня в 17:00 в театре Et Cetera п/р А. Калягина. Самые талантливые школьники из 26 стран мира будут соревноваться в мастерстве декламации произведений художественной литературы. Строгое жюри, которое в суперфинале возглавит писатель Людмила Петрушевская, отберет лучших из лучших. Также в жюри конкурса войдут телеведущие Андрей Максимов и Светлана Сорокина, писатель Григорий Остер, режиссер Роман Виктюк, директор Государственного литературного музея Дмитрий Бак, режиссер, сценарист, художественный руководитель творческого объединения детского киножурнала «Ералаш» Борис Грачевский.

 

Марина Дружинина. Рассказы для детей. Произведения и биография — Библиотека для детей

Рассказы Марины Дружининой.Полный список произведений.Краткая биография и творчество Дружининой
 
Дразнительное имя
Девочка наоборот
Коварные усы
Про Федю, федину маму и про кое-кого ещё
Для разнообразия
Серые клеточки
Хорошо быть оптимистом!
Батарейки
От приятного к неприятному
Мы с тобой одной крови
Сборы набирают обороты
Непослушные цыплята
Дело чести
А всё из-за смешинки
Мой приятель – супермен
Звезда и капуста
Открытка
Песенка обо всём
Сюрприз
Битва с вампирами
Супержелезяка
Семейное увлечение
Вовкина сдача
Спортивная шоколадка
Очень полезный подарок
Пальцем в небо
Гороскоп
Кому отдать ужин?
Брависсимо!
Звоните, вам споют!
Прыжок фигуристки
Мой весёлый выходной
Кроссворд с продолжением
Объяснительная записка
Ручка и ножка
Лекарство от контрольной
Кто я?
На что намекает котёнок Кузька, когда говорит: «мур-мур-мур!»
Гошка и Мурзилка
Элементарно, Ватсон!
Встреча с известным писателем
Старушка и контролёры
Самая верная примета
Впечатляющие новости
Загадочный букет
 

Читать все рассказы Дружининой. Содержание
Читать рассказы других авторов
 

Марина Дружинина. Краткая биография

 
Марина Владимировна Дружинина родилась 31 декабря 1953 года в Москве.
После окончания Московского института стали и сплавов работала инженером, а затем научным сотрудником во Всесоюзном научно-исследовательском институте автоматизации чёрной металлургии. В то же время Дружинина начала серьёзно заниматься литературой.
В 1980 году в «Литературной газете» был напечатан первый рассказ Марины Дружининой «Монолог правдивого человека». Затем последовали другие рассказы, стихи, пародии, афоризмы. В 1992 году за рассказ «Роковой чеснок» М. Дружининой было присвоено звание лауреата конкурса «Золотой телёнок».
В 1981–1984 годах М. Дружинина сотрудничала в качестве корреспондента с газетой «Труд», писала фельетоны.
После рождения сына Марина Дружинина стала писать и для детей. В 1988 году в журнале «Весёлые картинки» появилось первое стихотворение для детей «Подарок». Сотрудничество с «Весёлыми картинками» продолжается и до сих пор. М. Дружинина является также постоянным автором журнала «Мурзилка», напечатавшим в 1991 году её первый рассказ для детей «Непослушные цыплята».
В 1991 году в издательстве «Детская литература» вышла первая книжка стихов для малышей «Дали Маше погремушку».
В настоящее время М. Дружинина – автор более 80 книг, выпущенных различными издательствами. Это сборники рассказов для детей младшего и среднего школьного возраста, стихи для самых маленьких, обучающая литература в стихотворной и игровой форме для подготовки детей к школе.
Некоторые произведения Марины Дружининой переведены на украинский и финский языки.
За книгу «Мой весёлый выходной» (стихи и рассказы) М. Дружинина награждена дипломом Международной литературной премии «Облака» (2007).
Сборник сказок «Волшебная флейта» был признан Ассоциацией книгоиздателей России лучшей книгой 2007 года для детей и юношества.
М. Дружинина – лауреат Литературной премии имени А. П. Чехова (2009).
——————————————
Рассказы Дружининой для детей.
Читаем бесплатно онлайн
 

Читать онлайн все рассказы Дружининой
Читать рассказы других авторов

(PDF) spe-43 необходим для активации сперматозоидов C. elegans

19

ССЫЛКИ

Arduengo, PM, Appleberry, OK, Chuang, P., L’Hernault, SW, 1998. Семейство белков пресенилина

Член SPE-4 из

локализуется в органелле, происходящей из ER / Golgi, и необходим для правильного цитоплазматического разделения

во время сперматогенеза Caenorhabditis elegans. J Cell Sci. 111 (Pt 24), 3645-54.

Бреннер С., 1974. Генетика Caenorhabditis elegans.Генетика. 77, 71-94.

Chatterjee, I., Richmond, A., Putiri, E., Shakes, DC, Singson, A., 2005. Ген Caenorhabditis elegans spe-

38 кодирует новый четырехпроходный интегральный мембранный белок, необходимый для функции сперматозоидов. при удобрении

. Разработка. 132, 2795-808.

Doitsidou, M., Poole, R.J., Sarin, S., Bigelow, H., Hobert, O., 2010. Идентификация мутанта C. elegans с помощью стратегии одноэтапного полногеномного секвенирования

и стратегии картирования SNP.PLoS One. 5, е15435.

Эллис, Р. Э., 2017. «Постоянство памяти» — гермафродитизм у нематод. Mol Reprod Dev. 84,

144-157.

Эллис, Р. Э., Стэнфилд, Г. М., 2014. Регулирование сперматогенеза и функции сперматозоидов у нематод.

Semin Cell Dev Biol. 29, 17-30.

Фэй Д., Генетическое картирование и манипуляции: Глава 1 — Введение и основы. В: T. C. e. Р. Сообщество,

(ред.), WormBook. WormBook.

Финн, Р.Д., Коггилл, П., Эберхард, Р. Я., Эдди, С. Р., Мистри, Дж., Митчелл, А. Л., Поттер, С. К., Пунта, М.,

,

Куреши, М., Санградор-Вегас, А., Салазар, GA, Tate, J., Bateman, A., 2016. База данных Pfam protein

семей: к более устойчивому будущему. Nucleic Acids Res. 44, Д279-85.

Гелдзилер, Б., Чаттерджи, И., Сингсон, А., 2005. Генетический и молекулярный анализ spe-19, гена

, необходимого для активации сперматозоидов у Caenorhabditis elegans.Dev Biol. 283, 424-36.

Gleason, EJ, Lindsey, WC, Kroft, TL, Singson, AW, L’Hernault S, W., 2006. spe-10 кодирует DHHC-

CRD мембранный белок цинковых пальцев, необходимый для эндоплазматического ретикулума / мембраны Гольджи

Морфогенез во время сперматогенеза Caenorhabditis elegans. Генетика. 172, 145-58.

L’Hernault S., W., Roberts, T. M., Клеточная биология сперматозоидов нематод. В: H. F. Epstein, D. Shakes, Eds.),

Caenorhabditis elegans Современный биологический анализ организма, Vol.48. Academic Press,

Inc., Сан-Диего, 1995, стр. 273-299.

Лэнгмид, Б., Трапнелл, К., Поп, М., Зальцберг, С. Л., 2009. Сверхбыстрое и эффективное с точки зрения памяти выравнивание

коротких последовательностей

ДНК с геномом человека. Genome Biol. 10, R25.

Ленце, Н., Ауэрбах, Д., 2008. Двухгибридная система на основе мембран дрожжей для обнаружения взаимодействий с белками

. Curr Protoc Protein Sci. Глава 19, Раздел 19 17.

Летунич И., Дёркс Т., Борк П., 2015. SMART: последние обновления, новые разработки и статус в 2015 году.

Nucleic Acids Res. 43, Д257-60.

Маккартер, Дж., Бартлетт, Б., Данг, Т., Шедл, Т., 1999. О контроле мейотического созревания ооцитов и овуляции

у Caenorhabditis elegans. Dev Biol. 205, 111-28.

Миллер, М. А., Нгуен, В. К., Ли, М. Х., Косински, М., Шедл, Т., Каприоли, Р. М., Гринштейн, Д., 2001.

Цитоскелетный белок сперматозоидов

, который сигнализирует о созревании мейоза и овуляции ооцитов. Наука. 291,

2144-7.

Миневич, Г., Парк, Д. С., Бланкенберг, Д., Пул, Р. Дж., Хоберт, О., 2012. CloudMap: облачный конвейер

для анализа мутантных геномных последовательностей. Генетика. 192, 1249-69.

Миннити А. Н., Сэдлер К., Уорд С., 1996. Генетический и молекулярный анализ spe-27, гена, необходимого для

спермиогенеза у гермафродитов Caenorhabditis elegans. Генетика. 143, 213-23.

Muhlrad, PJ, Clark, JN, Nasri, U., Sullivan, NG, LaMunyon, CW, 2014. SPE-8, протеин-тирозиновая киназа

, локализуется на мембране сперматидных клеток посредством взаимодействия с другими членами

Сигнальный путь активации сперматид группы SPE-8 у C.elegans. BMC Genet. 15, 83.

Muhlrad, P.J., Ward, S., 2002. В инициации спермиогенеза у Caenorhabditis elegans участвует казеин

киназа 1, кодируемая геном spe-6. Генетика. 161, 143-55.

.CC-BY-NC-ND 4.0 Международная лицензияa

(подтверждено экспертной оценкой) является автором / спонсором, который предоставил bioRxiv лицензию на бессрочную демонстрацию препринта. Он доступен под номером

Владелец авторских прав на этот препринт (который не был этой версией, опубликованной 19 октября 2017 г.).; https://doi.org/10.1101/206441doi: препринт bioRxiv

Меланотические мутанты у дрозофилы: пути и фенотипы

Abstract

Сообщается, что мутации в более чем 30 генах, которые регулируют различные пути и процессы развития, вызывают меланотический фенотип у личинок . Наблюдаемые меланотические массы обычно были связаны с иммунным ответом, опосредованным гемоцитами. Чтобы выяснить, все ли черные массы связаны с клеточным иммунным ответом, мы охарактеризовали меланотические массы от мутантов в 14 генах.Мы обнаружили, что меланотические массы можно подразделить на меланотические узелки, участвующие в инкапсуляции, опосредованной гемоцитами, и на меланизации, которые не инкапсулируются гемоцитами. За редким исключением инкапсуляция осуществляется ламеллоцитами. Инкапсулированные узелки находятся в гемоэле или в ассоциации с лимфатической железой, тогда как меланизации расположены в кишечнике, слюнных железах и трахее. У мутантов cactus мы обнаружили дополнительный вид меланизированной массы, содержащей различные ткани.Развитие этих тканевых агломератов зависит от функции дорсального гена . Наши результаты показывают, что фенотип каждого мутанта не только отражает его связь с конкретным генетическим путем, но также указывает на тканеспецифическую роль отдельного гена.

ПОЛОВИНУ столетия назад меланотические опухоли у личинок и взрослых дрозофилы рассматривались как эквивалент рака и как события контролируемой гистологической дифференцировки, которыми можно было манипулировать генетически.Об участии клеток крови в образовании некоторых меланотических опухолей сообщалось примерно в то же время (Oftedal 1953; Barigozzi 1958; Rizki 1960). Черные меланотические пятна обнаруживаются у ряда различных мутантов, и их взаимозаменяемо называют меланотическими опухолями или псевдоопухолями. Эти «опухоли» обычно не инвазивны и только в некоторых случаях вызывают разрастание опухоли. Поэтому мы используем термин «меланотические массы» для описания фенотипа в целом и «меланотические узелки» и «меланизации» для описания более конкретных фенотипов.

Хорошо задокументированные исследования меланотических масс личинок показали участие иммунного ответа, опосредованного гемоцитами (Rizki and Rizki 1983; Harrison et al. 1995; Rodriguez et al. 1996; Qiu et al. 1998). ; Наппи и др. 2005). Этот клеточный иммунный ответ включает агрегацию клеток, фагоцитоз, инкапсуляцию чужеродного материала и индукцию каскада меланизации (обзоры см. В De Gregorio et al. 2002a; Fossett et al. 2003; Meister and Lagueux 2003; Наппи и Кристенсен 2005). Фагоцитоз осуществляется наиболее многочисленным классом гемоцитов — плазматоцитами. Ламеллоциты, функционирующие в форме инкапсуляции, редко встречаются у здоровых личинок и значительно увеличиваются во время метаморфоза и после заражения. Меланизации / меланогенезу способствует особый тип клеток крови, кристаллические клетки. Кристаллические клетки экспрессируют фермент фенолоксидазу (профенолоксидаза A1), ответственный за запуск каскада меланогенеза, на уровне, ограничивающем скорость (Lebestky et al. 2000; Duvic et al. 2002; Sugumaran 2002; Наппи и Кристенсен 2005). Активация профенолоксидазы частично контролируется ингибитором сериновой протеазы serpin 27A ( Spn27A ). Spn27A Личинки мутанта обнаруживают меланотический фенотип и чрезмерную меланизацию в ответ на иммунный вызов (Nappi et al. 2005). Этот фенотип связан с активацией пути Toll (Tingvall et al. 2001; De Gregorio et al. 2002b; Ligoxygakis et al. 2002а, б; Наппи и др. 2005).

Путь Toll ответственен за образование меланотических масс у Drosophila (Lemaitre et al. 1995). Путь назван в честь трансмембранного рецептора Toll, который при активации контролирует ядерное нацеливание белков Dorsal и Dif Drosophila NF-κB / Rel. Этот путь является основным эффектором врожденного иммунитета, а также участвует в гематопоэзе. Конститутивная активация пути в мутантах с усилением функции Toll или cactus с потерей функции приводит к избыточной пролиферации гемоцитов, в частности ламеллоцитов, что приводит к образованию меланотических узелков (Lemaitre et al. 1995; Qiu et al. 1998; Лавин и Стрэнд 2002). Jak / STAT — еще один сигнальный путь, действующий при врожденном иммунитете и кроветворении. Конститутивная активация этого пути у мутантов Hop Tum приводит к фенотипам, сходным с фенотипами, наблюдаемыми при конститутивной активации Toll , включая избыточную пролиферацию гемоцитов и меланотических узелков (Harrison et al. 1995; Lagueux et al. ). 2000; Луо и др. 2002; Эванс и др. 2003; Meister 2004).

Путь иммунодефицита дрозофилы (IMD) / Relish также участвует в иммунном ответе и имеет связь с образованием меланотических узелков. После иммунного заражения личинок конститутивной экспрессией белка распознавания пептидогликана-LE, функционирующего выше пути IMD, наблюдались меланотические массы в кутикуле и гемолимфе (Takehana et al. 2002).

Активация других путей, таких как Ras / MAPK в гемоцитах экспрессией трансгенов, приводит к пролиферации гемоцитов и образованию меланотических масс (Asha et al. 2003; Zettervall et al. 2004). Есть также несколько мутаций потери функции, приводящих к сходным фенотипам. К ним относятся мутации yantar , участвующие в дифференцировке гемоцитов (Sinenko et al. 2004; Sinenko and Mathey-Prevot 2004), мутации в рибосомном гене rpS6 , которые приводят к злокачественным новообразованиям гемоцитов и аномальному поведению иммунной системы (Watson et al. 1992; Stewart and Denell 1993), black-pearl ( blp ), дальний гомолог DnaJ (Becker et al. 2001), и ген злокачественного новообразования крови l (3) mbn (Konrad et al. 1994). Дополнительные мутанты, приводящие к меланотическим фенотипам, были идентифицированы при генетическом скрининге, и многие из них были связаны с иммунитетом (Watson et al. 1991, 1994; Rodriguez et al. 1996; Zettervall et al. 2004).

Большое количество «онкогенных» мутантов было идентифицировано до эры полногеномного секвенирования и современных методов генного картирования. Наблюдаемые фенотипы приводят к таким названиям генов, как опухолевый ( tu-s ), злокачественное новообразование крови ( mbn-s ) и аберрантный иммунный ответ ( air-s ; обзор в Gateff 1977; Watson et al. 1991, 1994; Линдсли и Зимм 1992). Сообщалось, что более 30 генов, аннотированных геномом, вызывают меланотические фенотипы у личинок. Опухоли в ~ 20 из этих генов не были гистологически охарактеризованы, и участие клеток крови не было установлено. Скорее, обычно предполагается, что все меланотические образования вызваны аномалиями иммунного ответа.

Здесь мы сообщаем о морфологическом и иммуно-гистохимическом анализе меланотических узелков, образованных мутациями в 14 генах, представляющих множество путей и клеточных функций и охарактеризованных в различной степени.Наши эксперименты направлены на понимание того, связаны ли все меланотические фенотипы с клеточным иммунным ответом, обычно связанным с инкапсуляцией гемоцитами. Мы обнаружили, что узелки у половины мутантов окружены клетками крови, в частности ламеллоцитами. Большинство этих мутаций находится в генах, которые, как ранее сообщалось, функционируют в кроветворении и иммунном ответе. Три гена, zfrp8 , Su (var) 205 и spag , имеют меланотические узелки, окруженные гемоцитами, но функция этих генов в кроветворении или иммунитете не установлена.

Интересно, что более половины мутантов продуцируют меланизацию в кишечнике, трахее, кутикуле или слюнных железах, и не было обнаружено гемоцитов, окружающих эти узелки. Это говорит о том, что механизм их образования не включает большинство аспектов клеточного иммунного ответа, за исключением, возможно, меланизации.

Наши результаты показывают, что гистологическое расположение черных масс является надежным первичным показателем, если речь идет о инкапсуляции гемоцитами. В то время как большинство мутантов данного пути демонстрировали сходные фенотипы, мы также наблюдали тканеспецифические эффекты, характерные для отдельных компонентов пути.Это наблюдается, например, в гипоморфных аллелях cact , которые продуцируют меланотические агрегаты, не наблюдаемые в аллелях усиления функции Toll . Наши результаты показывают, что cact может контролировать активность белков Rel в некоторых тканях независимо от Toll.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Штаммы мух:

Мух выращивали на стандартном корме из кукурузной муки / патоки при 21 °. Ложки с подшипником P -элементные вставки spag k12101 , dcp-1 k05606 , dcp-1 02132 , Ark k11509 dcp1 skpA G0037 , skpA G0389 и pr-set7 P {hsneo} 1 , мутации Toll 3 , cact 16 1

901 E1 и хмель Tum , соответствующие аллели дефицита, и драйвер броненосца (arm-GAL4) были получены из Bloomington Stock Center.Специфический драйверный коллаген гемоцитов-жировых тел (cg-GAL4), dronc 2 , dronc 51 , Su (var) 205 02 и Su (var) 205 04 любезно предоставлены C. Дирольф (Массачусетская больница общего профиля, Бостон), А. Бергманн (Техасский университет, Хьюстон), Дж. Абрамс (Юго-западный медицинский центр Техасского университета, Даллас) и Л. Валрат (Университет Айовы, Айова-Сити, Айова), соответственно. . Мух, несущих UAS-EGFP-dl, UAS-ECFP-Dif и UAS-p-Relish, были получены от T. Ip (Массачусетский университет, Вустер, Массачусетс).

Балансировщики с маркировкой GFP использовали для идентификации мутантных личинок. Гомозиготных мутантных личинок собирали на чашках для яйцекладки и инкубировали с дополнительными дрожжами на стандартном корме из кукурузной муки / патоки при 23 °, пока особи не достигли личиночной стадии третьего возраста и не развили меланотические узелки.

Иммуноокрашивание:

Для окрашивания антителами личинок третьего возраста препарировали в фосфатно-солевом буфере (PBS), и ткани, содержащие меланотические узелки, немедленно переносили на предметное стекло.Избыточную жидкость удаляли салфеткой, образцы сушили на воздухе в течение 30 секунд, а затем фиксировали при 80 ° в течение 1 минуты. Слайды выдерживали при -70 ° в течение нескольких дней. Для каждого мутанта анализировали от 10 до 20 личинок. Образцы дополнительно фиксировали в течение 40 мин в 4% параформальдегиде в PBST (PBS, 0,1% Tween 20) и несколько раз промывали PBST. Окрашивание антител выполняли по существу, как описано в Whalen and Steward (1993). Моноклональные антитела к гемезе (h3) и антитела, специфичные к ламеллоцитам (L1), были получены от I.Ando (Центр биологических исследований, Сегед, Венгрия) и использовали в разведении 1: 500. Вторичный Cy-3-конъюгированный антимышиный (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) использовали в соотношении 1: 500. F-актин визуализировали путем инкубации с фаллоидином Alexa488 (Molecular Probes, Юджин, штат Орегон) при 1:80 в течение 2 часов. ДНК окрашивали с помощью Hoechst 33258 (Molecular Probes). Образцы помещали в Vectashield (Vector Laboratories, Burlingame, CA) и исследовали с помощью микроскопа Zeiss Axioplan-2. Изображения гемопоэтических узелков получали с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа Leica DM IRBE.Изображения были проанализированы с помощью программного обеспечения Image Pro Plus и Leica Microsystems и дополнительно обработаны с помощью Adobe PhotoShop.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Анализ меланотических масс:

Мы решили исследовать, действительно ли все меланотические массы вовлечены в клеточный иммунный ответ, в частности, инкапсуляцию массы гемоцитами. Мы также хотели установить, приводят ли мутации в генах, функционирующих в одном процессе или в определенном пути, к образованию меланотических узелков с аналогичными характеристиками.С этой целью мы проанализировали, когда это возможно, по крайней мере, два мутантных аллеля в 14 генах, все из которых, как сообщалось, вызывают меланотические фенотипы. Для этого исследования мы выбрали мутации в Toll и cact , влияющие на путь NF-κB: dronc , Dcp-1 и Ark , участвующие в апоптозе; Pr-Set7 , Su (var) 205 и skpA , функционирующие в организации хроматина; хмель , активирующий путь Jak / STAT; и ряд генов, функции которых подробно не изучены: l (3) mbn , mxc , spag , zfrp8 и dpld (см. Таблицу 1).

ТАБЛИЦА 1

Мутации, вызывающие различные типы меланотических масс

Все меланотические массы были выделены из мутантных личинок третьего возраста. Узелки часто располагаются в гемоцеле (полости тела), но у некоторых мутантов черные образования обнаруживаются в других тканях. Чтобы выяснить, все ли меланотические массы связаны с клетками крови, мы вскрыли меланизированные ткани и определили, экспрессируется ли специфический для гемоцитов маркер Hemese в узелках или вокруг них (Рисунок 1 и Рисунок 2; Куруц et al. 2003). Чтобы выявить форму клеток и размер ядер, мы также окрашивали ткани на нитчатый актин и ДНК.

Рис. 1.—

Меланизации и меланотические узелки. Меланотические узелки, выделенные из гемоэля dronc 2 / dronc 51 (A и B), cact A2 (C и D) и spag k12101 (E и F). Трахея, выделенная из Pr-Set7 20 (G и H; отметьте меланизацию внутри кружков), Su (var) 205 02 / Su (var) 205 04 (I и J; потемнение ткани и меланизированное пятно внутри кругов), узелки в кишечнике наблюдались у dronc 2 / dronc 51 (K и L), mxc 22a-6 (M и N), Ark k11502 (O и P) и dcp-1 k05606 (Q и R).Меланизация клеток слюнных желез в Ark k11502 (S и T). В B, D, F, H, J, L, N, P, R и T ткани окрашивали антигемезой (красный), фаллоидином для F-актина (зеленый) и Hoechst33258 для ДНК (синий). Пруток, 40 мкм.

Рисунок 2.—

Меланотические узелки. Конфокальные сечения, сделанные вблизи поверхности меланизированных узелков, полученных из (A) Hop Tum / + , (B) l (3) mbn E1 / + , (C) Su (var) 205 02 / Su (var) 205 04 , (D) zfrp8 M-1-1 , (E) Toll 10B / + и (F, I и J) какт. А2 .Мышечные и трубчатые структуры обозначены стрелками, а полиплоидные ядра — стрелками в I и J. (G и H) cact A2 и dl 2 . Ткани окрашивали антигемезой (красный), фаллоидином для F-актина (зеленый) и Hoechst33258 для ДНК (синий). В A – H только окрашивание Hemese показано на верхних панелях. Меланизированные очаги обычно не окрашиваются и обозначены звездочками. Пруток, 40 мкм.

Удивительно, но только половина мутантов обнаружила классический меланотический фенотип: узелки, которые расположены в гемоэле и содержат гемоциты, гемезо-положительные клетки (Рисунок 1, A – F и Рисунок 2, Таблица 1).Другие мутации, о которых ранее сообщалось о меланотическом фенотипе, обычно имеют меланизацию, обнаруженную в негематопоэтических тканях, таких как кишечник и слюнные железы, или меланизацию трахеи без участия гемоцитов (см. Рисунок 1, G – T; Таблица 1).

Меланизации в негематопоэтических тканях:

Меланизации в различных областях личиночной кишки наблюдались в mxc , dpld , Dcp-1 и Ark 10 и реже в Ark 10 и реже. кактусов личинок (см. Табл. 1).Расположение и частота меланизаций варьируются у разных мутантов. Ark k11502 гомозиготные мутантные личинки развивают множественные черные пятна вдоль кишечника, а иногда и в слюнных железах, в то время как другие аллельные комбинации Ark показывают только меланизацию кишечника. У большинства гемизиготных и у большого количества гетерозиготных личинок mxc 22a-6 развивается меланизация стенок кишечника. Это также наблюдалось Saget et al. (1998), которые сообщили о сильной меланизации, связанной с кольцом задней кишки в нескольких аллелях mxc .Всего у 30–50% личинок dpld наблюдается меланизация кишечника, тогда как остальные погибают на более ранних стадиях без детектируемого меланотического фенотипа. Аномалии кишечника, а также меланотические фенотипы были ранее описаны для других аллелей dpld (Rodriguez et al. 1996). Несколько мутантных аллелей Dcp-1 также обнаруживают стойкую меланизацию кишечника. Меланизация кишечника обнаруживается у 20–30% личинок cact и dronc вместе с ассоциированными с кровью меланотическими узелками, которые мы обсуждаем ниже.

Меланизация трахеи наблюдалась у двух мутантов: Pr-Set7 20 , нулевая мутация в моно-метитрансферазе гистона h5-K20 и сильная мутация, индуцированная элементом P в Ген skpA ( skpA G0037 ), кодирующий компонент убиквитинлигаз SCF, участвующий в дупликации центросом (Murphy 2003; Karachentsev et al. 2005). Эти два гена демонстрируют самые большие вариации фенотипов среди всех изученных здесь мутантов.Некоторые гомозиготные личинки Pr-Set7 20 имеют меланотические узелки в гемоцеле и кутикуле наряду с меланизацией трахеи. В Pr-Set7 P {hsneo} 1 / Df (3R) red3l меланизация встречается редко и обнаруживается только в кишечнике и кутикуле. Сходный фенотип наблюдается у личинок skpA G0389 , что позволяет предположить, что гистологическое проявление меланотического фенотипа как у Pr-Set7 , так и у skpA , вероятно, зависит от силы аллеля.

Примечательно, что все меланизации, обнаруженные в стенке кишечника, были окружены относительно нормально выглядящей тканью кишечника, которая не экспрессирует маркер Hemese. Более того, Hemese не обнаруживается внутри или вокруг пигментированной трахеи и меланизированной ткани слюнных желез (рис. 1, G – J, S и T). Таким образом, меланизация в этих органах может быть вызвана без активации клеточного иммунного ответа или, точнее, без реакции инкапсуляции.

Меланотические узелки, связанные с гемоцитами:

Примерно у половины наших мутантов все меланотические массы были обнаружены в гемоэле или в ассоциации с лимфатическими узлами, и все они демонстрируют высокие уровни экспрессии гемезы (Рисунок 1, B, D и F. ; Фигура 2).В этом исследовании мы называем этот фенотип «меланотическими узелками».

Критерии классификации меланотических узелков были предложены Watson et al. (1991, 1994). На основании вскрытия узелков и морфологии лимфатических узлов Уотсон и его коллеги разделили мутантов с меланотическим фенотипом на два класса. Мутанты класса 1 производят меланотические узелки как «ответ очевидно нормальной иммунной системы на присутствие аномальных тканей-мишеней», таких как ткань мозга или имагинального диска.Этот процесс часто называют «аутоиммунным ответом» (Watson et al. 1991; Nappi et al. 2004). Класс 2 представляет мутанты «истинной опухоли клеток крови», демонстрирующие чрезмерный рост кроветворных органов, приводящий к скоплениям клеток крови, которые образуют меланотические узелки. Считается, что в обоих классах клеточная иммунная система активируется и запускает инкапсуляцию и меланизацию.

Наша группа меланотических узелков частично состоит из мутантов с четко определенными фенотипами опухолей — hop , l (3) mbn , cact , Toll — и мутантов, у которых меланотический фенотип не был подробно описан before — Su (var) 205 , spag и zfrp8 (аллели и фенотипы перечислены в таблице 1).

Р-индуцированные летальные мутации в spag ( spag k12101 ) вызывают множественные узелки, окруженные гемоцитами (рис. 1B). Лимфатические железы у этих мутантных личинок примерно в два раза больше, чем железы дикого типа. Узелки расположены симметрично вдоль стенки тела и часто заменяют имагинальные диски, предполагая, что образование меланотических узелков может быть спровоцировано иммунным ответом на собственную ткань. Увеличение лимфатических узлов в этом случае может произойти как часть этой аутоиммунной реакции.Таким образом, это единственный проанализированный нами мутант, который может быть включен в гены Watson класса 1. Другой молекулярно охарактеризованный ген класса 1, krz , был описан Roman et al. (2000). Krz экспрессируется в нервной системе и жировом теле, а мутанты имеют меланотические узелки в жировых телах, окруженных гемоцитами.

Все другие мутации с меланотическими узелками, протестированные в нашем исследовании, вызывают чрезмерную пролиферацию гемоцитов и относятся ко 2 классу в соответствии с классификацией Уотсона. RpS6 / air8 и hop являются исходными представителями этого класса (Watson et al. 1991, 1992, 1994). Неизвестно, как мутации в RpS6 / air8 приводят к аберрантному иммунному ответу и чрезмерной пролиферации гемоцитов. Однако известно, что мутации увеличения функции в хмеле ( хмель Tum ), а также экспрессия активированного трансгена хмеля приводят к конститутивной активации пути Jak / STAT, что приводит к образованию гемоцитов. пролиферация, дифференцировка ламеллоцитов и конститутивный иммунный ответ (Luo et al. 2002; Asha et al. 2003; Agaisse and Perrimon 2004; Zettervall et al. 2004). Подобные фенотипы возникают в результате сверхактивации пути Nf-κB / Rel у мутанта с усилением функции Toll 10B и мутанта с потерей функции cact A2 (Qiu et al. 1998 ). Наши результаты подтверждают гематопоэтическое происхождение всех клубеньков, обнаруженных в мутантах хмеля Tum и Toll ( Toll 10B и Toll 3 ), где гемезо-положительные клетки объединяются с образованием масс с одним или множественные меланизированные очаги.Форма клеток в этих массах деформирована, а F-актин увеличен (рис. 2, A и E).

Особняком стоит фенотип меланотических масс, обнаруженных у кактусов, личинок. Около половины меланотических масс являются Hemese-положительными и похожи на узелки, наблюдаемые у мутантов Toll , в то время как другие имеют дополнительные особенности, которые будут обсуждаться ниже.

Меланотические узелки в l (3) mbn , кодирующие белок плазматической мембраны, возникают в результате чрезмерной пролиферации гемоцитов и аномальной дифференцировки этих клеток в гигантские плазматоциты и ламеллоциты.(Конрад и др. 1994; Куруц и др. 2003). Наш анализ показывает, что все меланотические узелки l (3) mbn E1 обнаружены в гемоцеле и покрыты большими плоскими F-актин / гемезо-положительными клетками, натянутыми на поверхность узелков (рис. 2В). Часто гемоциты на поверхности меланизированных узелков окрашиваются антигемезанскими антителами сильнее, чем другие гемоциты (рис. 2). Su (var) 205 узелки похожи на те, что наблюдаются в l (3) mbn , но они связаны с долями лимфатических узлов.Гомозиготные или гемизиготные мутанты zfrp8 (Минахина и др. 2003; С. Минахина, неопубликованные результаты), гомолог PDCD2 млекопитающих (программируемая клеточная смерть-2), также вызывают меланотические узелки в лимфатических узлах. Поскольку узелки, вызванные мутациями в этих двух генах, всегда связаны с лимфатической железой, эти гены могут выполнять важную функцию в кроветворении.

Инкапсуляция меланотических узелков:

Все меланотические образования, обнаруженные в гемоцеле или в ассоциации с лимфатическими узлами, содержат гемоциты.Структура узелков, размер, форма, уровень меланизации и количество окружающей ткани различаются не только между разными мутантами, но и внутри одной личинки. Чтобы дополнительно охарактеризовать ткань, окружающую меланотический узелок, и исследовать, все ли узелки являются результатом инкапсуляции ламеллоцитами, мы использовали, в дополнение к гемоцит-специфическим антителам (Hemese; Рисунок 2), антитело L1, специфичное для ламеллоцитов (Asha и др. 2003; Куруц и др. 2003).Кристаллические клетки трудно обнаружить, потому что они нестабильны и разрушаются, как только они вызвали инициирование каскада меланизации, высвобождая профенолоксидазу (Lanot et al. 2001; Evans and Banerjee 2003).

Клетки, находящиеся в непосредственном контакте с меланизированной тканью в spag , mbn , Hop , Toll и Su (var) 205 мутантных личинок , являются L1-положительными, что указывает на то, что они являются ламеллоцитами (рис. , A – E).Это говорит о том, что инкапсуляция ламеллоцитами и предполагаемая функция кристаллических клеток достаточны для образования меланотических узелков.

Рисунок 3.—

Участие ламеллоцитов в инкапсуляции меланотических узелков. Конфокальное поперечное сечение центральной части меланотических узелков, полученных из (A) l (3) mbn E1 / + , (B) spag k12101 , (C) hop Tum / + , ( D) Toll 3 / + , (E) Su (var) 205 02 / Df (2L) TE29Aa-11 , (F и G) zfrp8 M-1-1 / Df ( 2R) SM183 и (H, I и J) cact 1 и cact G8 .Ткани окрашивали L1-ламеллоцит-специфическими антителами (красный), фаллоидином для F-актина (зеленый) и Hoechst33258 для ДНК (синий). Только окрашивание L1 показано на верхних панелях; меланизированные ткани (обозначенные звездочками) обычно не окрашиваются (A, B, E, G и I), но иногда накапливают маркер L1 (D и F). Пруток, 40 мкм.

В мутантах cact и zfrp8 есть меланотические узелки, окруженные ламеллоцитами (рис. 3, F и I), а также узелки, окруженные другими клетками (рис. 3, G и J).У мутантов cact обнаружены клубеньки трех типов (см. Ниже). Узелки zfrp8 расположены в лимфатической железе, ткани, которая содержит гемоциты на разных стадиях дифференцировки (Lanot et al. 2001; Jung et al. 2005). В этом случае меланизированные ткани могут быть окружены либо дифференцированными ламеллоцитами (рис. 3F), либо небольшими L1-отрицательными прогемоцитами (рис. 3G).

Меланотические образования в кактусе
:

Большинство меланотических узелков во всех аллелях кактуса расположены в гемоцеле.Только половина меланотических узелков cact A2 имеет тот же состав, что и узелки, обнаруженные у мутантов с усилением функции Toll (рис. 3, D и H). Это удивительно, потому что Toll функционирует выше cact в пути Rel, и как в Toll 10B, , и cact A2 белки NF-κB / Rel Dorsal и Dif являются конститутивно ядерными.

Другая половина узелков состоит из тканевых агломератов, которые содержат один или несколько меланизированных очагов, а также трубчатые структуры, возможно, трахеи, висцеральные мышцы и полиплоидные клетки (стрелки и наконечники стрелок на рис. 2, I и J; рис. 3J) .Лишь некоторые агломераты, содержащие меланотические очаги, окружены ламеллоцитами (сравните рис. 3, I и J). Подобные массы с меньшей частотой обнаруживаются у гомозиготных личинок cact G8 и cact 1 .

Дифференциация клеток внутри меланотических масс cact в различные ткани может быть результатом неконтролируемой активации Rel-белка. Чтобы проверить, отвечает ли дорсальный ( dl ) за трансформацию тканей, наблюдаемую у мутантов cact , мы проанализировали клубеньки, полученные от двойных мутантов cact A2 , dl 2 .Множественные кактусы A2 , dl 2 меланотических узелков имеют четкое гематопоэтическое происхождение (рис. 2, G и H). Они расположены в гемоцеле и лимфатических узлах и состоят из больших плоских ламеллоцитов, богатых F-актином, или как ламеллоцитных, так и плазматоцитоподобных клеток. Меланотических агломератов, содержащих разные типы тканей, не наблюдается. Тот факт, что у двойного мутанта фенотип меланотических клубеньков все еще выявляется, но потеря функции dl подавляет образование сложных агломератов, может быть связано с избыточной функцией Dorsal и Dif в гемопоэзе и иммунитете и согласуется с . cact и dl , имеющие дополнительные функции в разработке.

Общая сверхэкспрессия
дорсального является летальной:

Мы пришли к выводу, что повышающая регуляция трех Rel-белков в разных тканях и наблюдение фенотипов, продуцируемых этой сверхэкспрессией, поможет нам понять фенотип потери функции cact . С этой целью мы экспрессировали белки Rel Drosophila, связанные с флуоресцентными пептидами, EGFP-Dorsal, ECFP-Dif и EYFP-Relish (Bettencourt et al. 2004) под контролем arm-GAL4 и cg- Драйвер GAL4 .Флуоресценция, наблюдаемая у личинок, подтвердила, что arm-GAL4 индуцирует практически повсеместную, но низкую экспрессию трансгенов, в то время как cg-GAL4 обеспечивает высокий уровень экспрессии, особенно в гемоцитах и ​​жировом теле (Asha et al. 2003).

Экспрессия трех трансгенов Rel не вызывала образования меланотических узелков, но имела специфические эффекты на жизнеспособность личинок. Экспрессия EYFP-Relish не снижает жизнеспособность личинок и взрослых особей независимо от драйвера.Личинки ECFP-Dif имеют пониженную жизнеспособность (~ 25% жизнеспособности), когда они управляются arm-GAL , но cg-GAL4 ; ECFP-Dif животные жизнеспособны. Активация экспрессии EGFP-dl в иммунных тканях ( CG-GAL4 ) не влияет на жизнеспособность; однако экспрессия EGFP-dl , управляемая arm-GAL4 , вызывает 100% летальность на личиночных стадиях первой и второй возрастных стадий. Этот фенотип напоминает фенотип нулевых аллелей cact , которые также являются летальными на личиночных стадиях первой и второй возрастных стадий (Roth et al. 1991; Qiu et al. 1998) и предполагает, что основная функция Cactus во время постэмбрионального развития заключается в подавлении дорсальной активности в соматических тканях и в регулировании дорсальной функции и функции Dif в иммунном ответе.

ОБСУЖДЕНИЕ

Мы могли разделить меланотические массы на две категории на основе окрашивания гемоцит-специфическим маркером Hemese: (1) меланотические узелки в гемоэле или связанные с лимфатическими узлами, очевидно окруженные клетками крови и (2) Гемез-отрицательная меланизация, расположенная в кишечнике, слюнных железах и трахее.Отсутствие чрезмерного роста ткани и отсутствие гемоцитов, окружающих меланизированные очаги, указывают на то, что они могут быть результатом гибели клеток, возможно, некроза. Неясно, вовлекает ли активация меланизации этих масс кристаллические клетки.

Мутанты в генах, функционирующих при апоптозе, обычно проявляют только меланизацию. Мутанты в Ark , dcp-1 и dronc развивают меланизацию, локализованную в кишечнике (см. Таблицу 1). У мутантов Ark и dcp-1 не наблюдалось никаких доказательств дополнительной гиперплазии лимфатических узлов или чрезмерной пролиферации клеток крови (см. Также Song et al. 1997), но узелки, связанные с лимфатическими железами, иногда наблюдаются у личинок dronc , а у некоторых аллелей Ark меланизированные очаги обнаруживаются в слюнных железах. Эти вариации могут отражать тканеспецифические функции генов апоптоза или могут быть обусловлены генетическим фоном.

Мутации в Pr-Set7 , skpA и Su (var) 205 демонстрируют самую высокую дивергенцию фенотипа. В то время как Su (var) 205 имеет четкий гемопоэтический фенотип, у личинок Pr-Set7 и skpA наблюдается меланизация в других тканях, а расположение меланизированных масс варьирует в разных аллелях.Эта плейотропия может быть объяснена тем фактом, что все три гена участвуют в структуре хроматина и хромосом и, следовательно, могут вмешиваться в основные механизмы поддержания клеток (Murphy 2003; Bushey and Locke 2004; Karachentsev et al. 2005).

Настоящий фенотип меланотических узелков, проявляющийся инкапсуляцией меланотических очагов ламеллоцитами, присутствовал у мутантов с установленными дефектами кроветворения и иммунитета, таких как hop и Toll. Это также наблюдалось у мутантов, у которых не сообщалось о фенотипах развития крови, таких как Su (var) 205 и zfrp8. Обнаружение меланотических узелков в связи с лимфатическими узлами предполагает, что zfrp8 и Su (var) 205 выполняют важную функцию в развитии крови. Интересно, что узелки, обнаруживаемые в лимфатических узлах, часто окружены ламеллоцитами, которых в железах дикого типа очень мало. В отличие от Su (var) 205 , у личинок zfrp8 меланотические капсулы также могут быть образованы L1-отрицательными клетками крови, возможно, прогемоцитами. Эта функция прогемоцитов по типу ламеллоцитов может указывать на то, что эти клетки обладают потенциалом дифференцироваться в ламеллоциты.

Мы отнесли одну новую мутацию, spag , к классу 1 по Watson et al. (1991, 1994), в котором меланотические узелки образуются как аутоиммунный ответ на аномалии имагинальных дисков. Но мы обнаружили, что в целом трудно различить «меланотические опухоли» класса 1 и класса 2, как описано Watson et al . Все меланотические узелки связаны с чрезмерным распространением гемоцитов. Это разрастание и последующие скопления клеток могут распознаваться иммунной системой как «аномальные» и вызывать аутоиммунный ответ.Большинство меланотических узелков окружены ламеллоцитами, подобно инкапсулированию посторонних предметов.

Мутации в генах определенного пути не обязательно приводят к идентичным фенотипам. Это ясно иллюстрируется анализом мутантов Toll и cact . Cact кодирует белок IκB дрозофилы, который контролирует активность факторов транскрипции Rel / Nf-κB Dorsal и Dif. Активация трансмембранного рецептора Toll вызывает деградацию белка IκB Cactus и транслокацию активированных белков Rel в ядра.Следовательно, потеря функции cact и усиление функции Toll , как ожидается, вызовут аналогичные фенотипы в результате повышенной ядерной активности Rel. Действительно, такие мутанты демонстрируют сравнимые дефекты врожденного иммунитета и кроветворения, включая избыточную продукцию гемоцитов и множественные меланотические узелки (Whalen and Steward 1993; Belvin et al. 1995; Belvin and Anderson 1996; Govind 1996; Qiu et al. 1998). ; эта работа).

Кроме того, частичная потеря функции cact приводит к образованию меланотических масс сложного состава.Они часто включают участки клеток, напоминающие соматические ткани, такие как мышцы, трахеи и полиплоидные клетки, типичные для жирового тела и кишечника. Формирование этих тканевых агрегатов подавляется у двойных гомозиготных мутантов cact, dl , что позволяет предположить, что трансформация является результатом неконтролируемой активации дорсального белка NF-κB / Rel.

В отличие от других белков Rel, Dorsal выполняет функции помимо иммунного ответа. Отложенный на материнской основе дорсальный морфоген является вентральным морфогеном и непосредственно активирует и репрессирует большой набор генов, тем самым контролируя формирование различных зародышевых листков.Позже в развитии Dorsal и его ингибитор Cactus функционируют в поддержании иннервации соматических мышц (Cantera et al. 1999; Beramendi et al. 2005). Вероятно, что у поздних эмбрионов и личинок в отсутствие кактуса дорсальный белок конститутивно активен, и это приводит к аномальной экспрессии генов и дифференцировке тканей. Ранее было показано, что эктопическая активация одной из дорсальных мишеней, twist , может активировать мышечный специфический маркер tinmann и вызывать тканевые трансформации, включая дифференцировку мышц (Furlong et al. 2001; Ферлонг 2004).

Почему активация пути Rel у мутантов Toll не вызывает тканевых агрегатов, как это видно на примере cact ? Ответ может заключаться в шаблонах выражения и в различных требованиях Toll и cact . Известно, что паттерн экспрессии Toll не полностью перекрывается с паттерном экспрессии dl и cact. Сообщается, что экспрессия Toll отсутствует в постэмбриональных мышцах и лимфатических узлах (Gerttula et al. 1988; Hashimoto et al. 1991; Nose et al. 1992; Halfon et al. 1995; Kambris et al. 2002; Wang et al. 2005). dl экспрессируется в иммунных тканях и нервно-мышечных соединениях, кишечнике, слюнных железах и трахее (Cantera et al. 1999; Beramendi et al. 2005). Вероятно, что функция Dorsal регулируется во всех этих тканях его цитоплазматическим ингибитором, Cactus, под контролем другого трансмембранного рецептора, возможно, одного из гомологов Toll.

Некоторые ткани личинок особенно чувствительны к неконтролируемой активации дорсального отдела. Это проявляется фенотипом трансформации ткани cact и ранней личиночной летальностью нулевых мутантов cact (Roth et al. 1991). Летальность в тот же период также наблюдается, когда обычно экспрессируется трансген дл .

В заключение мы предлагаем подразделить меланотические фенотипы на три класса в зависимости от обнаружения гемоцитов.Истинные меланотические узелки обычно обнаруживаются у гематопоэтических и иммунных мутантов. Эти узелки обычно представляют собой инкапсуляцию, опосредованную ламеллоцитами. Мутации в нескольких генах образуют меланизации только в негематопоэтических тканях без инкапсуляции. Меланотические массы, состоящие из тканевых агломератов, напоминающих опухоли позвоночных, наблюдаются у какт-мутантов и могут быть вызваны неконтролируемой активностью дорсального белка NF-κB.

Благодарности

Мы благодарим Иштвана Андо, Андреаса Бергманна, Джона Абрамса, Чарльза Диролфа, Лори Валрат и Тони Айп за антитела, мутантных и трансгенных мух.Мы благодарны Корделии Раусколб за полезное обсуждение рукописи. Также благодарим Ле Нгуен и Марину Дружинину за техническую помощь. Эта работа была поддержана грантом Национального института здоровья и Фонда У. Горация Голдсмита.

  • Получено 13 июня 2006 г.
  • Принято 26 июня 2006 г.
  • Авторские права © 2006 Американского генетического общества

Ссылки

  1. Agaisse, H., and N.Perrimon, 2004 Роль передачи сигналов JAK / STAT в иммунных ответах дрозофилы. Иммунол. Ред. 198 : 72–82.

  2. Asha, H., I. Nagy, G. Kovacs, D. Stetson, I. Ando et al. , 2003 Анализ Ras-индуцированной гиперпролиферации в гемоцитах дрозофилы. Генетика 163 : 203–215.

  3. Barigozzi, C., 1958 Меланотические опухоли у дрозофилы. J. Cell. Physiol. 52 : 371–381.

  4. Беккер, С., A. Gehrsitz, P. Bork, S. Buchner and E. Buchner, 2001 Ген черного жемчуга Drosophila определяет новое консервативное семейство белков и необходим для роста и выживания личинок. Ген 262 : 15–22.

  5. Belvin, M. P., and K. V. Anderson, 1996 Консервативный путь передачи сигналов: дорсальный путь Drosophila. Анну. Rev. Cell Dev. Биол. 12 : 393–416.

  6. Belvin, M. P., Y. Jin и K. V. Anderson, 1995 Расщепление белка кактуса опосредует дорсально-вентральную передачу сигналов Drosophila.Genes Dev. 9 : 783–793.

  7. Beramendi, A., S. Peron, A. Megighian, C. Reggiani and R. Cantera, 2005 Ингибитор каппаB-ортолог Cactus необходим для нормальной нервно-мышечной функции у Drosophila melanogaster. Неврология 134 : 397–406.

  8. Bettencourt, R., H. Asha, C. Dearolf и Y. T. Ip, 2004 Гемолимфозависимые и независимые ответы в иммунной ткани дрозофилы. J. Cell. Biochem. 92 : 849–863.

  9. Bushey, D., and J. Locke, 2004 Мутации в Su (var) 205 и Su (var) 3–7 подавляют P -зависимое от элемента молчание у Drosophila melanogaster. Генетика 168 : 1395–1411.

  10. Cantera, R., T. Kozlova, C. Barillas-Mury и F. C. Kafatos, 1999 На структуру и иннервацию мышц влияет потеря спинного мозга у плодовой мушки Drosophila melanogaster. Мол. Клетка. Neurosci. 13 : 131–141.

  11. Chew, S. K., F. Akdemir, P. Chen, W. J. Lu, K. Mills et al. , 2004 Апикальная каспаза dronc управляет запрограммированной и незапрограммированной гибелью клеток у Drosophila. Dev. Ячейка 7 : 897–907.

  12. De Gregorio, E., S. J. Han, W. J. Lee, M. J. Baek, T. Osaki et al. , 2002a Иммуно-чувствительный серпин регулирует каскад меланизации у дрозофилы. Dev. Ячейка 3 : 581–592.

  13. Де Грегорио, Э., P. T. Spellman, P. Tzou, G. M. Rubin и B. Lemaitre, 2002b Пути Toll и Imd являются основными регуляторами иммунного ответа у дрозофилы. EMBO J. 21 : 2568–2579.

  14. Duvic, B., J. A. Hoffmann, M. Meister and J. Royet, 2002 Передача сигналов Notch контролирует спецификацию клонов во время гематопоэза личинок дрозофилы. Curr. Биол. 12 : 1923–1927.

  15. Эванс, К. Дж., И У. Банерджи, 2003 Транскрипционная регуляция гемопоэза у дрозофилы.Blood Cells Mol. Дис. 30 : 223–228.

  16. Эванс, К. Дж., В. Хартенштейн и У. Банерджи, 2003 Толстее крови: законсервированные механизмы кроветворения у дрозофилы и позвоночных. Dev. Ячейка 5 : 673–690.

  17. Fossett, N., K. Hyman, K. Gajewski, S.H. Orkin и R.A. Schulz, 2003 Комбинаторные взаимодействия змеи, лепешки и U-образной формы регулируют приверженность клонов кристаллических клеток во время гематопоэза дрозофилы.Proc. Natl. Акад. Sci. USA 100 : 11451–11456.

  18. Ферлонг, Э. Э., 2004 Интеграция транскрипционных и сигнальных сетей во время развития мышц. Curr. Opin. Genet. Dev. 14 : 343–350.

  19. Ферлонг, Э. Э., Э. К. Андерсен, Б. Налл, К. П. Уайт и М. П. Скотт, 2001 Паттерны экспрессии генов во время развития мезодермы дрозофилы. Наука 293 : 1629–1633.

  20. Гейтфф, Э., 1977 Злокачественные новообразования кроветворной системы у трех мутантов Drosophila melanogaster. Аня. Паразитол. Гм. Комп. 52 : 81–83.

  21. Gerttula, S., Y. S. Jin и K. V. Anderson, 1988 Зиготическая экспрессия и активность гена Toll дрозофилы, гена, необходимого по материнской линии для формирования дорсально-вентрального паттерна эмбриона. Генетика 119 : 123–133.

  22. Govind, S., 1996 Сигнальный путь Rel и фенотип меланотической опухоли Drosophila.Biochem. Soc. Пер. 24 : 39–44.

  23. Halfon, M. S., C. Hashimoto и H. Keshishian, 1995. Toll-ген дрозофилы функционирует зиготически и необходим для правильного развития мотонейронов и мышц. Dev. Биол. 169 : 151–167.

  24. Harrison, D. A., R. Binari, T. S. Nahreini, M. Gilman and N. Perrimon, 1995 Активация киназы Drosophila Janus (JAK) вызывает неоплазию кроветворения и пороки развития.EMBO J. 14 : 2857–2865.

  25. Hashimoto, C., S. Gerttula и K. V. Anderson, 1991 Локализация белка Toll в плазматической мембране синцитиального эмбриона дрозофилы: важность трансмембранной передачи сигналов для формирования дорсально-вентрального паттерна. Разработка 111 : 1021–1028.

  26. Юнг, С. Х., К. Дж. Эванс, К. Уэмура и У. Банерджи, 2005 Лимфатическая железа дрозофилы как модель развития кроветворения.Разработка 132 : 2521–2533.

  27. Камбрис, З., Дж. А. Хоффманн, Дж. Л. Имлер и М. Каповилла, 2002 Тканевая и стадийно-специфическая экспрессия Tolls в эмбрионах дрозофилы. Gene Expr. Паттерны 2 : 311–317.

  28. Караченцев Д., К. Сарма, Д. Рейнберг и Р. Стюард, 2005 PR-Set7-зависимое метилирование гистона h5 Lys 20 действует в репрессии экспрессии генов и имеет важное значение для митоза. Genes Dev.19 : 431–435.

  29. Konrad, L., G. Becker, A. Schmidt, T. Klockner, G. Kaufer-Stillger et al. , 1994 Клонирование, структура, клеточная локализация и возможная функция гена-супрессора опухолей летального (3) злокачественного новообразования крови-1 Drosophila melanogaster. Dev. Биол. 163 : 98–111.

  30. Kurucz, E., C.J. Zettervall, R. Sinka, P. Vilmos, A. Pivarcsi et al. , 2003 Hemese, специфический для гемоцитов трансмембранный белок, влияет на клеточный иммунный ответ у дрозофилы.Proc. Natl. Акад. Sci. USA 100 : 2622–2627.

  31. Lagueux, M., E. Perrodou, E. A. Levashina, M. Capovilla и J. A. Hoffmann, 2000 Конститутивная экспрессия комплемент-подобного белка в мутантах дрозофилы с усилением функции toll и JAK. Proc. Natl. Акад. Sci. USA 97 : 11427–11432.

  32. Lanot, R., D. Zachary, F. Holder, M. Meister, 2001 Постэмбриональный гематопоэз у Drosophila. Dev. Биол. 230 : 243–257.

  33. Laundrie, B., J. S. Peterson, J. S. Baum, J. C. Chang, D. Fileppo et al. , 2003 Смерть зародышевых клеток ингибируется вставками P -элемента, нарушающими вложенную пару генов dcp-1 / pita у Drosophila. Генетика 165 : 1881–1888.

  34. Lavine, M. D., and M. R. Strand, 2002 Гемоциты насекомых и их роль в иммунитете. Насекомое Biochem. Мол. Биол. 32 : 1295–1309.

  35. Лебестки, Т., Т. Чанг, В. Хартенштейн и У. Банерджи, 2000 Спецификация гематопоэтического клона дрозофилы с помощью консервативных факторов транскрипции. Наука 288 : 146–149.

  36. Lemaitre, B., M. Meister, S. Govind, P. Georgel, R. Steward et al. , 1995 Функциональный анализ и регуляция ядерного импорта спинного мозга во время иммунного ответа у Drosophila. EMBO J. 14 : 536–545.

  37. Ligoxygakis, P., N.Pelte, J. A. Hoffmann и J. M. Reichhart, 2002a. Активация Drosophila Toll во время грибковой инфекции сериновой протеазой крови. Наука 297 : 114–116.

  38. Ligoxygakis, P., N. Pelte, C.Ji, V. Leclerc, B. Duvic et al. , 2002b Мутант серпина связывает активацию Toll с меланизацией в защите хозяина дрозофилы. EMBO J. 21 : 6330–6337.

  39. Линдсли, Д. Л. и Г. Г. Зимм, 1992 Геном Drosophila melanogaster .Academic Press, Сан-Диего.

  40. Луо, Х., П. Э. Роуз, Т. М. Робертс и С. Р. Дирольф, 2002 Киназа Hopscotch Jak требует пути Raf для активации и дифференцировки клеток крови у дрозофилы. Мол. Genet. Геномика 267 : 57–63.

  41. Мархольд, Дж., И. Торок, И. Илиопулос, А. Мишра, К. Де Лоренцо и др. , 2000 TPR-содержащий белок спагетти взаимодействует с Hsp90 и необходим для выживания и дифференцировки клеток в имагинальных дисках.Ежегодная конференция по исследованию дрозофил, Американское генетическое общество, Питтсбург.

  42. Мейстер М., 2004 Клетки крови дрозофилы: клоны клеток и роль в защите хозяина. Curr. Opin. Иммунол. 16 : 10–15.

  43. Meister, M., and M. Lagueux, 2003 Drosophila blood cells. Клетка. Microbiol. 5 : 573–580.

  44. Minakhina, S., J. Yang and R. Steward, 2003 Tamo избирательно модулирует ядерный импорт у Drosophila.Гены клеток 8 : 299–310.

  45. Murphy, T. D., 2003 Drosophila skpA, компонент убиквитинлигаз SCF, регулирует дупликацию центросом независимо от накопления циклина E. J. Cell Sci. 116 : 2321–2332.

  46. Наппи, А. Дж., Э. Васс, Д. Малаголи и Ю. Картон, 2004 Влияние паразитарных иммуносупрессивных факторов на клеточный врожденный иммунный и аутоиммунный ответ Drosophila melanogaster.J. Parasitol. 90 : 1139–1149.

  47. Наппи, А. Дж., И Б. М. Кристенсен, 2005 Меланогенез и связанные цитотоксические реакции: приложения к врожденному иммунитету насекомых. Насекомое Biochem. Мол. Биол. 35 : 443–459.

  48. Nappi, A. J., F. Frey and Y. Carton, 2005 Серпин 27A дрозофилы является вероятной мишенью для иммунного подавления опосредованного клетками крови ответа меланотической инкапсуляции. J. Insect Physiol. 51 : 197–205.

  49. Норвуд, Л. Э., С. К. Грейд, Д. Э. Крайдерман, К. А. Хайнс, Н. Фуриасс и др. , 2004 Сохраненные свойства HP1 (Hsalpha). Ген 336 : 37–46.

  50. Нос, А., В. Б. Махаджан и К. С. Гудман, 1992 г. Коннектин: гомофильная молекула клеточной адгезии, экспрессируемая на подмножестве мышц и мотонейронах, которые их иннервируют у дрозофилы. Ячейка 70 : 553–567.

  51. Oftedal, P., 1953 Гистогенез новой опухоли у Drosophila melanogaster и сравнение с опухолями пяти других популяций. Z. Indukt. Abstamm. Vererbungsl. 85 : 408–422.

  52. Peter, A., P. Schottler, M. Werner, N. Beinert, G. Dowe et al. , 2002 Картирование и идентификация основных функций генов на Х-хромосоме дрозофилы. EMBO Rep. 3 : 34–38.

  53. Qiu, P., P. C. Pan and S. Govind, 1998 Роль пути Drosophila Toll / Cactus в гематопоэзе личинок.Разработка 125 : 1909–1920.

  54. Remillieux-Leschelle, N., P. Santamaria and N. B. Randsholt, 2002 Регулирование гематопоэза личинок у Drosophila melanogaster : роль гена multi-sex combs . Генетика 162 : 1259–1274.

  55. Ризки, М. Т., 1960 Образование меланотической опухоли у дрозофилы. J. Morphol. 106 : 147–157.

  56. Ризки, Т.М. и Р. М. Ризки, 1983 г. Изменения поверхности клеток крови у мутантов дрозофилы с меланотическими опухолями. Наука 220 : 73–75.

  57. Родригес А., З. Чжоу, М. Л. Танг, С. Меллер, Дж. Чен и др. , 1996 Идентификация иммунной системы и генов ответа, а также новых мутаций, вызывающих образование меланотической опухоли у Drosophila melanogaster. Генетика 143 : 929–940.

  58. Родригес, А., Х.Оливер, Х. Цзоу, П. Чен, X. Ван и др. , 1999 Dark является гомологом Apaf-1 / CED-4 у дрозофилы и действует в эволюционно законсервированном пути смерти. Nat. Cell Biol. 1 : 272–279.

  59. Родригес, А., П. Чен, Х. Оливер и Дж. М. Абрамс, 2002 г. Безудержная каспазозависимая гибель клеток, вызванная потерей функции Diap1, требует наличия гомолога Drosophila Apaf-1, Dark. EMBO J. 21 : 2189–2197.

  60. Роман, Г., J. He и R. L. Davis, 2000 kurtz , новый невизуальный аррестин, является важным нейральным геном у дрозофилы. Генетика 155 : 1281–1295.

  61. Roth, S., Y. Hiromi, D. Godt and C. Nusslein-Volhard, 1991 кактус, материнский ген, необходимый для правильного формирования градиента дорсовентрального морфогена у эмбрионов дрозофилы. Разработка 112 : 371–388.

  62. Сагет, О., Ф. Форкиньон, П. Сантамария и Н.B. Randsholt, 1998 г. Потребности и цели для продукта гена multi-sex combs в Drosophila melanogaster. Генетика 149 : 1823–1838.

  63. Santamaria, P., and N. B. Randsholt, 1995 Характеристика области Х-хромосомы дрозофилы, включая мульти-половые гребешки (mxc), ген группы Polycomb, который также действует как опухолевый супрессор. Мол. Genet Genet. 246 : 282–290.

  64. Синенко, С.A. и B. Mathey-Prevot, 2004 Повышенная экспрессия тетраспанина дрозофилы, Tsp68C, подавляет аномальную пролиферацию ytr-дефицитных и Ras / Raf-активированных гемоцитов. Онкоген 23 : 9120–9128.

  65. Синенко С.А., Э.Ким Ким, Р. Винн, П. Манфруэлли, И. Андо и др. , 2004 Янтарь, консервативный белок, богатый аргинином, участвует в развитии гемоцитов дрозофилы. Dev. Биол. 273 : 48–62.

  66. Сонг, З., K. McCall и H. Steller, 1997 DCP-1, протеаза гибели клеток дрозофилы, необходимая для развития. Наука 275 : 536–540.

  67. Stewart, M. J., and R. Denell, 1993 Ген рибосомного белка S6 дрозофилы включает 3′-тройное повторение, которое возникает в результате неравного кроссинговера. Мол. Биол. Evol. 10 : 1041–1047.

  68. Sugumaran, M., 2002 Сравнительная биохимия эумеланогенеза и защитная роль фенолоксидазы и меланина у насекомых.Pigment Cell Res. 15 : 2–9.

  69. Takehana, A., T. Katsuyama, T. Yano, Y. Oshima, H. Takada et al. , 2002 Сверхэкспрессия рецептора распознавания образов, белка распознавания пептидогликана-LE, активирует опосредованную imd / relish антибактериальную защиту и каскад пропенолоксидазы у личинок дрозофилы. Proc. Natl. Акад. Sci. США 99 : 13705–13710.

  70. Tingvall, T. O., E. Roos и Y. Engstrom, 2001 Змеиный фактор GATA необходим для начала гуморального иммунного ответа у эмбрионов дрозофилы.Proc. Natl. Акад. Sci. США 98 : 3884–3888.

  71. Wang, J., Y. Tao, I. Reim, K. Gajewski, M. Frasch et al. , 2005 Экспрессия, регуляция и потребность в трансмембранном белке toll во время образования дорсальных сосудов у Drosophila melanogaster. Мол. Клетка. Биол. 25 : 4200–4210.

  72. Watson, K. L., T. K. Johnson и R. E. Denell, 1991 Летальные (1) мутации аберрантного иммунного ответа, приводящие к образованию меланотической опухоли у Drosophila melanogaster.Dev. Genet. 12 : 173–187.

  73. Watson, K. L., K. D. Konrad, D. F. Woods и P. J. Bryant, 1992 Drosophila, гомолог человеческого рибосомного белка S6, необходим для подавления опухоли в гематопоэтической системе. Proc. Natl. Акад. Sci. USA 89 : 11302–11306.

  74. Уотсон, К. Л., Р. У. Джастис и П. Дж. Брайант, 1994 Дрозофила в исследовании рака: первые пятьдесят генов-супрессоров опухоли. J. Cell Sci. 18 (Прил.): 19–33.

  75. Whalen, A. M., and R. Steward, 1993 Диссоциация дорсального комплекса кактус и фосфорилирование дорсального белка коррелируют с ядерной локализацией дорсального. J. Cell Biol. 123 : 523–534.

  76. Xu, D., Y. Li, M. Arcaro, M. Lackey and A. Bergmann, 2005 Несущая CARD каспаза Dronc важна для большинства, но не всех, гибели клеток в процессе развития у Drosophila. Разработка 132 : 2125–2134.

  77. Zettervall, C.J., I. Anderl, M.J. Williams, R. Palmer, E. Kurucz et al. , 2004 Направленный скрининг генов, участвующих в активации клеток крови дрозофилы. Proc. Natl. Акад. Sci. USA 101 : 14192–14197.

  78. Zhou, L., Z. Song, J. Tittel и H. Steller, 1999 HAC-1, гомолог APAF-1 и CED-4 у дрозофилы, участвует в апоптозе, вызванном развитием и радиацией. Мол. Ячейка 4 : 745–755.

  79. Циммерманн, К. К., Дж. Э. Риччи, Н. М. Дроин и Д. Р. Грин, 2002 г. Роль ARK в индуцированном стрессом апоптозе в клетках дрозофилы. J. Cell Biol. 156 : 1077–1087.

Ингибирование агрономически релевантных грибных фитопатогенов тирокидинами, циклическими антимикробными пептидами, выделенными из Bacillus aneurinolyticus

Источники

Jun 13, 1979 · Biophysical Research,

,

, июнь, 13, 1979 · Биохимические и биологические исследования. клинических исследований · RI Lehrer M. E Selsted

20 сентября 1965 · Журнал Американского химического общества · MA RuttenbergL C Craig

1 сентября 1966 · Биохимия · MA RuttenbergL C Craig

24 августа 1966 · Biochimica Et Biophysica Acta · B Mach, CW Slayman

1 января 1995 г. · Природные токсины · JE SmithJ G Anderson

1 апреля 1995 г. · Прикладная и экологическая микробиология · NL Glass, GC Donaldson

1 августа 1994 г. · Mycopathologia · MA KlichJ M Bland

1 февраля 1993 г. · Фотохимия и фотобиология · M EnescuM L Pascu

21 июня 1996 г. · Журнал биологической химии · K ThevissenW F Broekaert

1 января 1996 г. · Микозы · М. КречмарК Дж. Бургер

28 февраля 1998 г. · Исследования нуклеиновых кислот · Дж. Д. Томпсон, Д. Г. Хиггинс

6 марта 1998 г. · Инфекция и иммунитет · Р Бальс, Дж. М. Уилсон

29 января, 1999 · Биохимия и клеточная биология = Biochimie Et Biologie Cellulaire · PM Hwang, HJ Vogel

20 мая 1999 г. · Биополимеры · D Andreu, L. Rivas

21 марта 2001 г. · Противомикробные агенты и химиотерапия · K Lewis

19 июня 2001 г. · Биологические Химия · W van ‘t HofA V Amerongen

29 ноября 2001 г. · Журнал клинической микробиологии · MA PfallerR N Jones

25 января 2002 г. · Природа · Michael Zasloff

6 июня 2002 г. · Молекулярная микробиология · Sabine FillingerChristophe d’ Enfert

31 июля 2002 г. · Ежегодный обзор фитопатологии · Войцех Янисевич, Лиз Корстен

15 ноября 2002 г. · Журнал клеточных наук · Лорелей Б. Сильверман-Гаврила, Роджер Р Лью

12 июля 2003 г. · Архив микробиологии · Лидия Кайзерер Флорентин Маркс

15 июля, 2003 · Обзоры клинической микробиологии · Дж. В. Беннетт, М. Клих

2 сентября 2003 г. · Микробиология · Лорелей Б. Сильверман-Гаврила, Роджер Р. Лью

5 марта 2004 г. · Международный журнал пищевой микробиологии · Давиде Спадаро, Мария Лодовица Гуллино

1 января 1997 г. · Ежегодный обзор фитопатологии · SC KnightD Youle

10 августа 2004 г. · Физиология растений · Роберт Г. Спелбринк · Грегори Х. Хокерман

13 сентября 2005 г. · Генетика и биология грибов: FG & B · Дружинина Ирина С.Кристиан П. Кубичек

13 декабря 2005 г. · Эукариотическая клетка · Кайли Дж. Бойс · Джеймс В. Кронстад

26 января 2006 г. · Аналитическая биохимия · Марина Раутенбах · Ханс Вестерхофф

23 мая 2006 г. · Биоорганическая и медицинская химия · Владимир Фресер

24 августа 2006 г. · BioEss : Новости и обзоры в области молекулярной, клеточной биологии и биологии развития · Шон М. Боуман, Стивен Дж. Фри

27 октября 2006 г. · Противомикробные препараты и химиотерапия · Альберто МуньосХосе Ф. Маркос

13 декабря 2006 г. · Nature Biotechno logy · Роберт Э. У. Хэнкок, Ханс-Георг Саль

28 апреля 2007 г. · Biochimica Et Biophysica Acta · Марина РаутенбахHeinrich C Hoppe

31 августа 2007 г. · Биоорганическая и медицинская химия · Майкл A MarquesClay C Wang

18 сентября 2007 · Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии · Альберто Муньос · Хосе Ф. Маркос

13 ноября 2007 г. · Эволюционная биология BMC · Алексей Дж. Драммонд, Эндрю Рамбаут

16 ноября 2007 г. · Молекулярная биология клетки · Норио Такешита Рейнхард Фишер

15 марта 2008 г. · Журнал биологической химии · Николь Л. ван дер Веерден, Мэрилин А. Андерсон

11 февраля 2009 г. · Микология · Стивен Д. Харрис

10 июля 2009 г. · Биоорганическая и медицинская химия · Барбара М. Шпательф, Марина Раутенбах

8 октября 2009 г. · Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии · Парк Сон-Чхол · Парк Юнкён

30 июня 1939 г. · Журнал экспериментальной медицины · Р.Дж. Дубос

30 апреля 1941 г. · Журнал экспериментальной медицины · Р.Дж. Дубос, Р.Д. Хотчкис s

6 ноября 2009 г. · Молекулярная микробиология · Ульрике Биндер Флорентин Маркс

5 апреля 2011 г. Карин ТевиссенБруно PA Cammue


Цитаты

30 октября 2016 · Биохимия · Марина РаутенбахДж Арнольд Восло

30 октября 2016 · Биохимия · Марина РаутенбахMargitta E Dathe 140003

29 августа 2019 г. · Журнал прикладной микробиологии · JA VoslooM Rautenbach

19 марта 2019 г. · Journal of Peptide Science: официальная публикация Европейского пептидного общества · Деннис Уилкенс Юль-Буркхард Бехингер

12 октября 2018 г.

Leave a Reply

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *