Контрольная работа александрова 10 класс: Oops… Page Not Found! | Ошибка 404

Алгебра 10 класс. Контрольные работы. Глизбург В.И.

Сборник контрольных работ составлен в полном соответствии с УМК А. Г. Мордковича и П. В. Семенова по алгебре и началам математического анализа для 10-х классов с углубленным изучением математики.
Каждая из девяти контрольных работ составлена в шести вариантах: первый и второй варианты ориентированы на классы с недельной нагрузкой 4 ч, третий и четвертый варианты — 5 ч, пятый и шестой варианты — 6 ч. Выбор вариантов для проведения контрольной работы, равно как количество выбранных вариантов, — дело учителя. Этот выбор зависит и от того количества часов в неделю, которыми располагает педагог, и от уровня подготовленности класса.
Каждый вариант контрольной работы выстроен по одной схеме: задания базового (обязательного) уровня — до первой черты, задания уровня выше среднего — между первой и второй чертой, задания повышенной сложности — после второй черты. Шкала оценок за выполнение контрольной работы может выглядеть так: за успешное выполнение заданий до первой черты — оценка 3; за успешное выполнение заданий базового уровня и одного дополнительного (после первой или после второй черты) — оценка 4; за успешное выполнение заданий трех уровней — оценка 5.

При этом оценку не рекомендуется снижать за одно неверное решение в первой части работы (допустимый люфт).
Если какая -либо контрольная работа представляется вам чересчур сложной или, напротив, чересчур простой для вашего класса, внесите соответствующие коррективы, но при этом постарайтесь сохранить саму концепцию контрольной работы.
 

СОДЕРЖАНИЕ
Предисловие 3
Контрольная работа № 1 4

Контрольная работа № 2 10
Контрольная работа № 3 16
Контрольная работа № 4 22
Контрольная работа № 5 28
Контрольная работа № 6 34
Контрольная работа № 7 40
Контрольная работа № 8 46
Контрольная работа № 9 52
Ответы 58

В пособии приведено примерное тематическое планирование курса алгебры и начал анализа для 10 класса (профильного уровня) и контрольные работы в шести вариантах по всем темам курса. Каждая работа имеет три уровня сложности.

Решебник к сборнику самостоятельных работ по алгебре и началам анализа для 10 класса Александровой ОНЛАЙН

Решение самостоятельных работ по алгебре и началам математического анализа из сборника для 10 класса Александровой Л. А. Рукопись. — 2014.
Настоящее пособие содержит решения самостоятельных работ из сборника «Александрова Л. А. Алгебра и начала математического анализа. 10 класс. Самостоятельные работы для учащихся общеобразовательных учреждений / Л. А. Александрова ; под ред. А. Г. Мордковича. — 4-е изд., испр. и доп. — М. : Мнемозина, 2008. — 127 с.»
Пособие адресовано родителям, которые смогут проконтролировать правильность решения, а в случае необходимости помочь детям в выполнении домашней работы по математике.

Внимание! Рукопись не проверялась, возможны ошибки!

Содержание
Глава 1. Числовые функции
§ 1. Определение числовой функции и способы ее задания С-1
§ 2. Свойства функций С-2
§ 3. Обратные функции С-3
Глава 2. Тригонометрические функции
§ 4. Числовая окружность С-4, 5
§ 5. Числовая окружность на координатной плоскости С-6
Контрольная работа М І

§ 6. Сиснус и косинус, тангенс и котангенс С-7, 8
§ 7. Тригонометрические функции числового аргумента С-9
§ 8. Тригонометрические функции углового аргумента С-10
§ 9. Формулы приведения С-11
§ 10. Функция у = sin х, ее свойства и график С-12
§ 11. Функция у = cos х, ее свойства и график С-13
§ 12. Периодичность функций С-14
§ 13. Преобразование графиков тригонометрических функций С-15, 16
§ 14. Функция у = tg х, ctg х, ее свойства и графики С-17

Глава 3. Тригонометрические уравнения
§ 15. Арккосинус и решение уравнения cos t = а С-18

§ 16. Арксинус и решение уравнения sin t = а С-19
§ 17. Арктангенс и решение уравнения tg t = а
Арккотангенс и решение уравнения С-20
§ 18. Тригонометрические уравнения С-21—23

Глава 4. Преобразование тригонометрических выражений
§ 19. Синус и косинус суммы и разности аргументов С-25, 26
§ 20. Тангенс суммы и разности аргументов С-27
§ 21. Формулы двойного аргумента С-28, 29

§ 22. Преобразование суммы тригонометрических функций в произведение С-30
§ 23. Преобразование произведения тригонометрических функций в сумму С-31
Преобразование выражения A sin х + В cos х к виду С sin (х + t) С-32*
Глава 5. Производная
§ 24. Предел последовательности С-33
§ 25. Сумма бесконечной геометрической прогрессии С-34
§ 26. Предел функции С-35
§ 27. Определение производной С-36
§ 28. Вычисление производных С-37—40
§ 29. Уравнение касательной к графику функции 2 ч С-41, 42
§ 30. Применение производной для исследования функций на монотонность и экстремумы С-43, 44
§ 31. Построение графиков функций С-45
§ 32. Применение производной для отыскания наибольшего и наименьшего значений функций на промежутке С-46
§ 33. Задачи на отыскание наибольшего и наименьшего значений величин С-47
Итоговое повторение С-48

ВНИМАНИЕ! Все права на публикацию рукописей принадлежат сайту gdz.math-helper.ru. Копирование и распространение материалов запрещено!

Алгебра и начала анализа. Самостоятельные работы. 10 класс — Александрова Л. | 122.37

Стоимость товара может отличаться от указанной на сайте!
Наличие товара уточняйте в магазине или по телефону указанному ниже.

г. Липецк, пл.Плеханова, д. 7

8 (4742) 47-02-53

г. Воронеж, ул. Г. Лизюкова, д. 66 а

8 (473) 247-22-55

г. Воронеж, ул. Ленинский проспект д.153

8 (473) 223-17-02

г. Воронеж, ул. Хользунова, д. 35

8 (473) 246-21-08

г. Лиски, ул. Коммунистическая, д.7

8 (47391) 2-22-01

г. Воронеж, ул. Пушкинская, 2

8 (473) 300-41-49

г. Липецк, ул.Стаханова,38 б

8 (4742) 78-68-01

г. Воронеж, Московский пр-т, д. 129/1

8 (473) 269-55-64

ТРЦ «Московский Проспект», 3-й этаж

▶▷▶ алгебра 10 класс контрольная работа александрова л

▶▷▶ алгебра 10 класс контрольная работа александрова л

Интерфейс	Русский/Английский
Тип лицензия	Free
Кол-во просмотров	257
Кол-во загрузок	132 раз
Обновление:	01-12-2018

алгебра 10 класс контрольная работа александрова л — Yahoo Search Results Yahoo Web Search Sign in Mail Go to Mail» data-nosubject=»[No Subject]» data-timestamp=’short’ Help Account Info Yahoo Home Settings Home News Mail Finance Tumblr Weather Sports Messenger Settings Want more to discover? Make Yahoo Your Home Page See breaking news more every time you open your browser Add it now No Thanks Yahoo Search query Web Images Video News Local Answers Shopping Recipes Sports Finance Dictionary More Anytime Past day Past week Past month Anytime Get beautiful photos on every new browser window Download Александрова Л А Алгебра и начала математического анализа edu-libcom/izbrannoe/aleksandrova-l-a-algebra-i Cached алгебра 10 класс александрова , алгебра александров, алгебра александрова , алгебра л а александрова , александрова алгебра ответы, самостоятельные работы по алгебре александрова , читать Учебник Алгебра 8 класс Л А Александрова (2009 год vklasseonline › … › Алгебра Сборник контрольных для семиклассника Учебник Алгебра 8 класс Л А Александрова Контрольные работы 2009 года размещен на нашем портале и доступен, как для скачивания так и для просмотра в режиме онлайн Алгебра 10 класс Самостоятельные работы Александрова skachaj24ru/algebra- 10 -klass-samostoyatelnye Cached Алгебра 10 класс Контрольные работы / Глизбург Архиваторы и другие офисные программы для просмотра файлов pdf, djvu, fb2, doc, rtf Алгебра 10 Класс Контрольная Работа Александрова Л — Image Results More Алгебра 10 Класс Контрольная Работа Александрова Л images Учебник Алгебра 9 класс Л А Александрова (2010 год vklasseonline › … › Алгебра Полный и качественный учебник Алгебра 9 класс Л А Александрова 2010 Контрольные работы скачать онлайн Доступно на ваших смартфонах Самостоятельные работы по алгебре 10 класс Александрова ответы gdz-na-5com › Алгебра › 10 класс На этой странице Вы найдете онлайн ответы к учебнику Алгебра и начала математического анализа 10 класс Самостоятельные работы Александрова Л А ГДЗ ЛОЛ за 7 класс по Алгебре Александрова Л А контрольные gdzlol/algebra/7-klass/kontrolnie-raboti Cached автор: Александрова Л А Выполнения задания за 7 класс по Алгебре Александрова Л А контрольные работы , от издательства: Мнемозина 2017 ФГОС, не простое занятие Решебник задач и ГДЗ по Алгебре 9 класс Александрова Л А gdz-putinanet/9-klass-algebra-kontrolnie-raboti Cached Решебник задач и ГДЗ по Алгебре 9 класс Александрова Л А Базовый уровень ГДЗ Алгебра 9 класс Александрова Л А ГДЗ по Алгебре 9 класс Контрольные работы Базовый уровень ГДЗ: Контрольные работы по алгебре 7 класс : Александрова Л А yougdzcom/exesizephp?id=414 Cached ОПИСАНИЕ ГДЗ(готовое домашнее задание) Пособие содержит примерное тематическое планирование курса алгебры для 7 класса и контрольные работы в четырех вариантах по всем темам курса Контрольные работы Александрова 8 класс ответы ГДЗ gdz-na-5com › Алгебра › 8 класс На этой странице Вы найдете ответы к учебнику по Алгебра 8 класс Контрольные работы Александрова Л А 2009 г ГДЗ контрольные работы по алгебре 9 класс Александрова Л А gdzru/class-9/algebra/kontrolnie-raboti Cached ГДЗ: Спиши готовые домашние задания контрольные работы по алгебре за 9 класс , решебник Александрова Л А, Базовый уровень ФГОС, онлайн ответы на gdzru Promotional Results For You Free Download | Mozilla Firefox ® Web Browser wwwmozillaorg Download Firefox — the faster, smarter, easier way to browse the web and all of Yahoo 1 2 3 4 5 Next 40,400 results Settings Help Suggestions Privacy (Updated) Terms (Updated) Advertise About ads About this page Powered by Bing™

• а также в целях выборочной проверки знаний школьников по определенной теме Работы
• 2008 127 с Читать ещё Алгебра и начала математического анализа 10 класс Самостоятельные работы для учащихся общеобразователь- ных учреждений / л А Александрова : под ред А r Морд- ковича -4-e изд
• в качестве обучающих работ

в качестве обучающих работ

но и приведены решения задач и уравнений Не стоит воспринимать предлагаемый решебник

• Базовый уровень ФГОС
• как для скачивания так и для просмотра в режиме онлайн Алгебра 10 класс Самостоятельные работы Александрова skachaj24ru/algebra- 10 -klass-samostoyatelnye Cached Алгебра 10 класс Контрольные работы / Глизбург Архиваторы и другие офисные программы для просмотра файлов pdf
• как для скачивания так и для просмотра в режиме онлайн Алгебра 10 класс Самостоятельные работы Александрова skachaj24ru/algebra- 10 -klass-samostoyatelnye Cached Алгебра 10 класс Контрольные работы / Глизбург Архиваторы и другие офисные программы для просмотра файлов pdf

Яндекс Яндекс Найти Поиск Поиск Картинки Видео Карты Маркет Новости ТВ онлайн Знатоки Коллекции Музыка Переводчик Диск Почта Все Ещё Дополнительная информация о запросе Показаны результаты для Нижнего Новгорода Москва 1 Решебник к сборнику самостоятельных работ по алгебре math-helpernet › Вариант 4 c-29 10 класс Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Решение самостоятельных работ по алгебре и началам математического анализа из сборника для 10 класса Александровой Л А Рукопись — 2014 Настоящее пособие содержит решения самостоятельных работ из сборника » Александрова Л А Алгебра и начала математического анализа 10 класс Читать ещё Решение самостоятельных работ по алгебре и началам математического анализа из сборника для 10 класса Александровой Л А Рукопись — 2014 Настоящее пособие содержит решения самостоятельных работ из сборника » Александрова Л А Алгебра и начала математического анализа 10 класс Самостоятельные работы для учащихся общеобразовательных учреждений / Л А Александрова ; под ред А Г Мордковича — 4-е изд, испр и доп — М : Мнемозина, 2008 — 127 с» Пособие адресовано родителям, которые смогут проконтролировать правильность решения, а в случае необходимости помочь детям в выполнени Скрыть 2 ГДЗ по Алгебре 10 класс Контрольные работы Глизбург gdz-freeru › Алгебра › 9 Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Выберите контрольную работу КР №1 В1 КР №1 В2 КР №1 В2 КР №1 В3 КР №1 В4 КР №1 В4 КР №2 В1 КР №2 В2-3 КР №2 В4 Школьники, которым тяжело дается такой предмет, как алгебра, всегда могут найти ответы в ГДЗ по Алгебре : 10 класс , » Контрольные работы «, Глизбург ВИ Здесь не только есть ответы на Читать ещё Выберите контрольную работу КР №1 В1 КР №1 В2 КР №1 В2 КР №1 В3 КР №1 В4 КР №1 В4 КР №2 В1 КР №2 В2-3 КР №2 В4 КР №3 В1 КР №3 В1 КР №3 В2 Кр №3 В3 кр №3 В3 кр №3 В4 кр №4 В1 кр №4 В2 кр №4 В3 кр №4 В4 кр №5 В1 кр №5 В2 кр №5 В3 кр №5 В4 кр №6 В1 кр Школьники, которым тяжело дается такой предмет, как алгебра, всегда могут найти ответы в ГДЗ по Алгебре : 10 класс , » Контрольные работы «, Глизбург ВИ Здесь не только есть ответы на все вопросы, но и приведены решения задач и уравнений Не стоит воспринимать предлагаемый решебник, как очередную шпаргалку, это скорее пособие для высокой самоподготовки и проверки собственных знаний Скрыть 3 Алгебра и начала математического анализа, 10 класс nasholcom › 2014031176222/algebra…nachala…10-klass… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте В пособии приведено примерное Планирование курса алгебры и начал математического анализа для 10 и 11-го классов (базового уровня) и Контрольные работы в четырех вариантах для 10 -го класса Каждая работа имеет три уровня сложности Примеры Сумма бесконечной геометрической прогрессии Читать ещё В пособии приведено примерное Планирование курса алгебры и начал математического анализа для 10 и 11-го классов (базового уровня) и Контрольные работы в четырех вариантах для 10 -го класса Каждая работа имеет три уровня сложности Примеры Сумма бесконечной геометрической прогрессии равна 4, а сумма квадратов ее членов равна 48 Скрыть 4 ГДЗ по Алгебре за 10 класс самостоятельные работы MegaReshebaru › gdz/algebra/10-klass…aleksandrova Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Подробный решебник (ГДЗ) по Алгебре для 10 класса самостоятельные работы , Авторы учебника: Александрова Л А Базовый уровень ГДЗ Контрольные работы алгебра 10 класс Глизбург ВИ базовый уровень Читать ещё Подробный решебник (ГДЗ) по Алгебре для 10 класса самостоятельные работы , Авторы учебника: Александрова Л А Базовый уровень Рекомендуемые решебники ГДЗ учебник алгебра 10 -11 класс А Г Мордкович базовый уровень ГДЗ Задачник алгебра 10 -11 класс АГ Мордкович базовый уровень ГДЗ Контрольные работы алгебра 10 класс Глизбург ВИ базовый уровень ГДЗ учебник алгебра 10 класс Мордкович АГ базовый и углубленный уровень ГДЗ Задачник алгебра 10 класс Мордкович АГ базовый и углубленный уровень ГДЗ Контрольные работы алгебра 10 класс Глизбург ВИ базовый и углубленный уровень ГДЗ Самос Скрыть 5 n А АЛЕКСАНДРОВА Алгебра и начала school6m-skru › files/matematika/материал…работы… Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Алгебра и начала математического анализа 10 класс Самостоятельные работы для учащихся общеобразователь- ных учреждений / л А Александрова : под ред А r Морд- ковича -4-e изд, испр и доп — — M Мнемозина, 2008 127 с Читать ещё Алгебра и начала математического анализа 10 класс Самостоятельные работы для учащихся общеобразователь- ных учреждений / л А Александрова : под ред А r Морд- ковича -4-e изд, испр и доп — — M Мнемозина, 2008 127 с ISBN 978-5-346-01113-2 данное пособие предназначено для общеобразовательных классов , обучающихся курсу алгебры и начал математического анализа по учебе- ному комплекту А r Мордковича Пособие содержит материал для проведения самостоятельных работ по каждой теме и может быть ис- пользовано учителем для осуществления текущего контроля знаний, умений и навыков школьников, в Скрыть pdf Посмотреть Сохранить на ЯндексДиск 6 Александрова Л А Алгебра и начала математического edu-libcom › …aleksandrova-l-a-algebra-i…10-klass… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Александрова Л А Алгебра и начала математического анализа 10 класс Предлагаемые самостоятельные работы можно использовать в общеобразовательных классах для текущего контроля знаний, умений и навыков учащихся, в качестве обучающих работ , а также в целях выборочной Читать ещё Александрова Л А Алгебра и начала математического анализа 10 класс Самостоятельные работы для учащихся общеобразовательных учреждений / Л А Александрова ; под ред А Г Мордковича — 4-е изд, испр и доп — М, 2008 Предлагаемые самостоятельные работы можно использовать в общеобразовательных классах для текущего контроля знаний, умений и навыков учащихся, в качестве обучающих работ , а также в целях выборочной проверки знаний школьников по определенной теме Работы , отмеченные знаком *, предназначены только для профильных классов Скрыть 7 ГДЗ по алгебре для 10 класса самостоятельные работы GdzPutinaru › …algebre/10-klass…raboti…aleksandrova Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте ГДЗ по алгебре 10 класс самостоятельные работы Александрова Л А Базовый уровень ГДЗ к контрольным работам по алгебре за 10 класс Глизбург, Базовый и углубленный уровень можно скачать здесь Читать ещё ГДЗ по алгебре 10 класс самостоятельные работы Александрова Л А Базовый уровень автор: Александрова Л А Заходите, не пожалеете! Тут отличные гдз по алгебре самостоятельные работы для 10 класса , Александрова Л А от Путина Очень удобный интерфейс с решениями ГДЗ к учебнику по алгебре 10 -11 класса Мордкович, Базовый уровень можно скачать здесь ГДЗ к задачнику по алгебре 10 -11 класса Мордкович, базовый уровень можно скачать здесь ГДЗ к контрольным работам по алгебре за 10 класс Глизбург, Базовый и углубленный уровень можно скачать здесь ГДЗ к самостоятельным работам по алгебре за 10 класс Александрова , Базовый и углубленный уровень можно скачать здесь С-2 Варианты Скрыть 8 Самостоятельные и контрольные работы Алгебра easyenru › load…10_klass…kontrolnye…algebra…klass… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Самостоятельные работы составлены Александровой , контрольные работы Неограниченная бесплатная загрука материала Самостоятельные и контрольные работы Алгебра и начала анализа, 10 класс доступна всем пользователям Разработка находится в разделе Математика 10 класс и Читать ещё Самостоятельные работы составлены Александровой , контрольные работы — Л АГлизбургом под редакцией автора УМК АГМордковича © Коломина Наталья Николаевна Неограниченная бесплатная загрука материала Самостоятельные и контрольные работы Алгебра и начала анализа, 10 класс доступна всем пользователям Разработка находится в разделе Математика 10 класс и представляет собой проверка знаний Скачать материал 29Mb Загрузка началась Скрыть 9 Алгебра 10 класс контрольная работа Александрова л — смотрите картинки ЯндексКартинки › алгебра 10 класс контрольная работа александрова л Пожаловаться Информация о сайте Ещё картинки 10 ГДЗ за 10 класс по Алгебре Александрова | Гдз от gdzim GDZim › 10 класс › Алгебра › …-urovni-aleksandrova Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте ГДЗ 10 класс Алгебра самостоятельные работы Александрова ГДЗ содержит верные и подробные ответы с несколькими вариантами решения по Алгебре за 10 класс , автор издания: Александрова Л А самостоятельные работы Базовый и Читать ещё ГДЗ 10 класс Алгебра самостоятельные работы Александрова Описание решебника автор: Александрова Л А ГДЗ содержит верные и подробные ответы с несколькими вариантами решения по Алгебре за 10 класс , автор издания: Александрова Л А самостоятельные работы Базовый и углубленный уровень С нами учебный процесс станет лучше! Скрыть Решения Глизбург ВИ» Алгебра 10 класс Контрольные newgdzcom › Решебники 10 класс › Контрольные работы Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Контрольные работы Категория 10-2: учебники 10 класс Категория 10-3: алгебра 10 класс «Хотят провести» академия » Клермон-Ферран, лицей Иосиф-Constant Проект состоит в создании устройства, поддержку, как комплексный и поэтапный доступ для создания или восстановления бизнеса Читать ещё Контрольные работы Тема: начала математического анализа 2014 Категория 10-2: учебники 10 класс Категория 10-3: алгебра 10 класс «Хотят провести» академия » Клермон-Ферран, лицей Иосиф-Constant Проект состоит в создании устройства, поддержку, как комплексный и поэтапный доступ для создания или восстановления бизнеса Он поставляется в трех уровнях : осознание и открытие, обучение и тестирование, сопровождение на создание или восстановление Скрыть Вместе с « алгебра 10 класс контрольная работа александрова л » ищут: алгебра 11 класс алгебра и начала математического анализа 10 класс алгебра и начала математического анализа 10 класс колягин учебник гдз геометрия 10 класс алгебра 9 класс алгебра 10 -11 класс учебник алгебра 10 класс физика 10 класс алгебра 8 класс русский язык 10 класс 1 2 3 4 5 дальше Браузер Для безопасных прогулок в сети 0+ Установить

▶▷▶ ответы на контрольные работы по алгебре л.

а.александровой▶▷▶ ответы на контрольные работы по алгебре л.а.александровой

Интерфейс	Русский/Английский
Тип лицензия	Free
Кол-во просмотров	257
Кол-во загрузок	132 раз
Обновление:	09-11-2018

ответы на контрольные работы по алгебре лаалександровой — Yahoo Search Results Yahoo Web Search Sign in Mail Go to Mail» data-nosubject=»[No Subject]» data-timestamp=’short’ Help Account Info Yahoo Home Settings Home News Mail Finance Tumblr Weather Sports Messenger Settings Yahoo Search query Web Images Video News Local Answers Shopping Recipes Sports Finance Dictionary More Anytime Past day Past week Past month Anytime Get beautiful photos on every new browser window Download Самостоятельные работы по алгебре 11 класс Александрова ответы gdz-na-5com › Алгебра › 11 класс Самостоятельные работы по алгебре 11 класс Александрова ответы На этой странице Вы найдете онлайн ответы к учебнику Алгебра и начала математического анализа 11 класс алгебра контрольные решения 8 класса автор александрова wwwboomleru/ контрольные -решения-8 Cached Авторы, издание: Л А Александрова (при участии Мордкович А Г)ГДЗ по алгебре за 8 класс ЛА Александровой поможет верно решить все задания контрольной работы Поэтому ответы на контрольные работы по алгебре для 8 Ответы На Контрольные Работы По Алгебре Лаалександровой — Image Results More Ответы На Контрольные Работы По Алгебре Лаалександровой images Контрольные работы по алгебре 7 класс Александрова ответы gdz-spishycom/algebra/7-klass/algebra-7-klass Cached И конечно же, таким же обязательным является наличие у родителей гдз, ведь не зная ответы на упражнения, проверка домашней работы перестанет иметь смысл Самостоятельные работы по алгебре 7 класс Александрова ответы mnogo-reshebnikovcom › 7 класс › Алгебра Главная » 7 класс » Алгебра » Самостоятельные работы по алгебре 7 класс Александрова ответы Смотреть решебник (готовое домашние задание) онлайн по алгебре за 7 класс Контрольные работы Александрова 8 класс ответы gdz-spishycom/algebra/8-klass/kontrolnye-raboty Cached Видя готовые ответы перед собой постоянно, ребенок ничего не добьется На них нужно посматривать только после выполнения работы , пусть она сделана неуверенно, пусть в ней есть ошибки, для Самостоятельная работа по алгебре 8 класс александрова ответы webkanotillwordpresscom/2015/03/21 Cached ответы на все задания по Александрова скачать решебник по алгебре 7 класс, самостоятельные работы по алгебре александрова, А алгебра 8 класс александрова самостоятельные работы ответы wwwboomleru/ работы — ответы Cached самостоятельные работы АлександроваРешебник по Алгебре Самостоятельные работы Базовый уровень для 8 класса, авторы учебника : Александрова ЛА на 2017-2018 год Самостоятельные работы по алгебре 10 класс Александрова ответы g-d-ztv/algebra/10-klass/samostoyatelnye-raboty-po Cached Учителям математики и ученикам восьмого класса предстоит на уроках алгебры регулярно открывать не только учебник, но и использовать дополнительные материалы ЛА Александрова, АГ Мордкович 2010 — Алгебра, 8 класс mydomashkaru/gdz/8-klass-algebra/la-aleksandrova-ag Cached Поэтому ответы на контрольные работы по алгебре для 8 классов Александровой ЛА, школьник найдёт без проблем Решебник к сборнику контрольных работ по алгебре для 7 класса math-helperru/izbrannoe/reshebnik-k-sborniku Cached ГДЗ к сборнику Ершовой, Голобородько Самостоятельные и контрольные работы по алгебре для 11 класса ОНЛАЙН Решебник к сборнику контрольных работ по алгебре для 10 класса (авт Promotional Results For You Free Download | Mozilla Firefox ® Web Browser wwwmozillaorg Download Firefox — the faster, smarter, easier way to browse the web and all of Yahoo 1 2 3 4 5 Next 775 results Settings Help Suggestions Privacy (Updated) Terms (Updated) Advertise About ads About this page Powered by Bing™

• Мнемозина задачник
• от издательства Мнемозина 2017 ГДЗ содержит все ответы на вопросы и поможет Вам правильно выполнить домашнее задание Читать ещё Здесь вы найдете контрольные работы по Алгебре 7 класса авторы: Александрова Л А
• просто переписывая готовые ответы и решения с ГДЗ по алгебре

Мнемозина самостоятельные работы Александрова Л А

Мнемозина теория Мордкович АГ

• издание: Л А Александрова (при участии Мордкович А Г)ГДЗ по алгебре за 8 класс ЛА Александровой поможет верно решить все задания контрольной работы Поэтому ответы на контрольные работы по алгебре для 8 Ответы На Контрольные Работы По Алгебре Лаалександровой — Image Results More Ответы На Контрольные Работы По Алгебре Лаалександровой images Контрольные работы по алгебре 7 класс Александрова ответы gdz-spishycom/algebra/7-klass/algebra-7-klass Cached И конечно же
• А алгебра 8 класс александрова самостоятельные работы ответы wwwboomleru/ работы — ответы Cached самостоятельные работы АлександроваРешебник по Алгебре Самостоятельные работы Базовый уровень для 8 класса
• smarter

ответы на контрольные работы по алгебре лаалександровой — Все результаты ГДЗ Алгебра 8 класс ЛА Александрова, АГ Мордкович 2010 mydomashkaru/gdz/8-klass-algebra/la-aleksandrova-ag-mordkovichhtml Похожие Выполнение контрольных работ по алгебре в 8 классе занимает много времени старшеклассников и требует ответственности На помощь могут Решебник к сборнику контрольных работ по алгебре для 8 класса 21 янв 2015 г — Решения контрольных работ по алгебре из сборника для 8 класса Александровой Л А Рукопись — 2015 Настоящее пособие содержит Решебник к сборнику контрольных работ по алгебре для 9 класса 21 янв 2015 г — Решения контрольных работ по алгебре из сборника для 9 класса Александровой Л А Рукопись — 2015 Настоящее пособие содержит Картинки по запросу ответы на контрольные работы по алгебре лаалександровой «id»:»LBOv7v5PfXoByM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:63,»oh»:826,»ou»:» «,»ow»:600,»pt»:»math-helperru/wp-content/uploads/2015/01/Alexandr»,»rh»:»math-helperru»,»rid»:»hVxMr34bvhAI-M»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»math-helperru»,»th»:98,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcQtReJI7H9gmfCFnEqscDf2owz4FmbP7—ErTix8r4IRLMjbowaq4_rx28″,»tw»:71 «id»:»bW4ih3eEXl53qM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:64,»oh»:823,»ou»:» «,»ow»:600,»pt»:»math-helperru/wp-content/uploads/2015/01/Alexandr»,»rh»:»math-helperru»,»rid»:»hVxMr34bvhAI-M»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»math-helperru»,»th»:97,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcSOCnMo33lLQaCD2t-FcOMvAul0ovTkRedl6kQopcPs2UWC68UbASA-dg»,»tw»:71 «id»:»o6myAuVUkypm1M:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:63,»oh»:826,»ou»:» «,»ow»:600,»pt»:»math-helperru/wp-content/uploads/2015/01/Alexandr»,»rh»:»math-helperru»,»rid»:»hVxMr34bvhAI-M»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»math-helperru»,»th»:98,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcRSwgZWJi18KHc_6T6h5klAjt6l4d2M99UE90w9OPjhly0zqRn4X3kD1mI»,»tw»:71 «id»:»8a60uK6vyAkisM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:63,»oh»:826,»ou»:» «,»ow»:600,»pt»:»math-helperru/wp-content/uploads/2015/01/Alexandr»,»rh»:»math-helperru»,»rid»:»iTTbnWGzBiA0OM»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»math-helperru»,»th»:98,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcS6YfcIciG7LJpCthITJxii_39k_kTPG6PfBP8njE2odYmATy_poxfzck0″,»tw»:71 «id»:»nNaQAPK6OMPHrM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:63,»oh»:826,»ou»:» «,»ow»:600,»pt»:»math-helperru/wp-content/uploads/2015/01/Alexandr»,»rh»:»math-helperru»,»rid»:»hVxMr34bvhAI-M»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»math-helperru»,»th»:98,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcTHLd79xEhcs4CMw33fAork0JmXhuG-Is9b82CM7dcr5cxJdlW-IwA7TQ»,»tw»:71 «id»:»txujBatdbhPQUM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:63,»oh»:822,»ou»:» «,»ow»:598,»pt»:»math-helperru/wp-content/uploads/2015/01/Alexandr»,»rh»:»math-helperru»,»rid»:»iTTbnWGzBiA0OM»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»math-helperru»,»th»:98,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcQOZQdIBkdIdEMb8VSc2jjuZN2UWRfAkyTPENE8w6yupF7R2xg0lOK05aA»,»tw»:71 «cr»:6,»id»:»b_iUkskhNQEGSM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:61,»oh»:823,»ou»:» «,»ow»:600,»pt»:»math-helperru/wp-content/uploads/2015/01/Alexandr»,»rh»:»math-helperru»,»rid»:»hVxMr34bvhAI-M»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»math-helperru»,»th»:97,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcQXSHdJb1MpX4m8gIwpiTRIrXFiJaUiqOkdJY0BRx3UQK6fCfPIjpHQ2Q»,»tw»:71 «id»:»LkYq_5XReC_oRM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:63,»oh»:826,»ou»:» «,»ow»:600,»pt»:»math-helperru/wp-content/uploads/2015/01/Alexandr»,»rh»:»math-helperru»,»rid»:»iTTbnWGzBiA0OM»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»math-helperru»,»th»:98,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcShNFSpU_pWrh5bPoqNAQii80L5R3J70r46sMqheTvqNBJKZgD25JTePdQ»,»tw»:71 «id»:»8G1lydAEy4aPJM:»,»ml»:»600″:»bh»:90,»bw»:65,»oh»:707,»ou»:» «,»ow»:500,»pt»:»math-helperru/wp-content/uploads/2015/01/Aleksand»,»rh»:»math-helperru»,»rid»:»hVxMr34bvhAI-M»,»rt»:0,»ru»:» «,»sc»:1,»st»:»math-helperru»,»th»:99,»tu»:» \u003dtbn:ANd9GcRzXTtRN3-3Zzj5bz_kuFf35YTjMJNU8rZBukCKwEMANqeTFAvBGTLKpfw»,»tw»:70 Другие картинки по запросу «ответы на контрольные работы по алгебре лаалександровой» Жалоба отправлена Пожаловаться на картинки Благодарим за замечания Пожаловаться на другую картинку Пожаловаться на содержание картинки Отмена Пожаловаться Все результаты ГДЗ по Алгебре 7 класс Контрольные работы Александрова ЛА gdz-freeru/gdz/Al7/9 Похожие Предстоящая контрольная по алгебре наверняка лишала спокойного сна не одного ученика Но сегодня можно воспользоваться помощью отличного ГДЗ по алгебре 8 класс контрольные работы Александрова › Алгебра › 8 класс Похожие Замечательный педагог Александрова Лидия Александровна создала сборник КР к комплекту А Г Мордковича 8 класс ФГОС по алгебре В методичке ГДЗ по алгебре 7 класс контрольные работы Александрова › Алгебра › 7 класс Похожие ГДЗ контрольные работы по алгебре 7 класс Александрова Мнемозина Подготовка к аттестации по алгебре уже начинается, число контрольных работ , В пособии Александровой Лидии Александровны приводятся в 4 гдз по контрольным работам 7 класс алгебра александрова ответы wwwunivemedubr/gdz-po-kontrolnym-rabotam-7-klass-algebra-aleksandrova-otvet Алгебра Сборник контрольных для семиклассника Учебник Алгебра 8 класс ЛА Александрова Контрольные работы 2009 года размещен на нашем решебник на контрольные работы алгебра 8 класс лаалександрова sns-russiaru//reshebnik-na-kontrolnye-raboty-algebra-8-klass-l_a_aleksandrovaxm Алгебра Сборник контрольных для семиклассника Учебник Алгебра 8 класс ЛА Александрова Контрольные работы 2009 года размещен на нашем Ответы@MailRu: Помогите найти решебник Алгебра 8 класс › Добро пожаловать Похожие 1 ответ 6 нояб 2012 г — Смотрите на этих wwwallengru http:// bookstr200net/ ▷ контрольные работы по алгебре 8 класс александрова ла wwwhkdrustvohr//kontrolnye-raboty-po-algebre-8-klass-aleksandrova-l_a_-resheb контрольные работы по алгебре 8 класс александрова ла решебник — Все результаты ГДЗ по алгебре 8 класс контрольные работы Александрова гдз контрольные работы по алгебре 7 класс александрова решение magnachipcom/userfiles/20181030121347xml 30 окт 2018 г — Алгебра Сборник контрольных для семиклассника Учебник Алгебра 8 класс ЛА Александрова Контрольные работы 2009 года гдз по контрольные работы алгебра 8 класс александрова ответы и wwwdesignbateriecz//gdz-po-kontrolnye-raboty-algebra-8-klass-aleksandrova-otv Алгебра Сборник контрольных для семиклассника Учебник Алгебра 8 класс ЛА Александрова Контрольные работы 2009 года размещен на нашем ▷ решение контрольных работ по алгебре 9 класс александрова wwwdesignbateriecz//reshenie-kontrolnykh-rabot-po-algebre-9-klass-aleksandrova 9 класс › Алгебра Подробный решебник ГДЗ к контрольным работам по алгебре 9 класс Александрова ЛА 2014, онлайн ответы на домашнюю работу Александрова ЛА Алгебра 9 класс Контрольные работы wwwstudmedru › Абитуриентам › Экзамены по математике Александрова Л А Алгебра Контрольные работы Дидактические материалы; Контрольные и самостоятельные работы; Краткие решения; Ответы контрольные работы по математике 7 класс ответы александрова kiteclassru/files/kontrolnye-raboty-po-matematike-7-klass-otvety-aleksandrovaxml 6 дней назад — Алгебра Сборник контрольных для семиклассника Учебник Алгебра 8 класс ЛА Александрова Контрольные работы 2009 года контрольные работы по алгебре 7 класс александрова ла ответы wwwdmvilijalt//kontrolnye-raboty-po-algebre-7-klass-aleksandrova-l_a_-otvetyx контрольные работы по алгебре 7 класс александрова ла ответы — Yahoo Search Results Yahoo Web Search Sign in Mail Go to Mail» data-nosubject=»[No гдз по алгебре 7 класс для контрольных работ александрова ответы mirskpl//gdz-po-algebre-7-klass-dlia-kontrolnykh-rabot-aleksandrova-otvetyxml Контрольные работы по алгебре 7 класс Александрова , ответы ൠ решения задач на , ГДЗ для рабочих тетрадей ЗДЕСЬ Александрова Л А Алгебра 7 Решебник к задачнику по алгебре 8 класс часть 2 Мордкович — ГДЗ › ГДЗ › 8 класс › Алгебра › Мордкович АГ Похожие Решения к задачнику для 8 класса, автора Мордкович А Г по алгебре с ГДЗ Контрольные работы алгебра 8 класс Александрова Л А базовый уровень ГДЗ к пособию Алгебра 7 класс Контрольные работы gdzbestru/online/algebra/aleksandrova7k/html/P1html Похожие по алгебре для 7 класса, контрольные работы , автор Александрова ГДЗ к пособию: » Алгебра 7 класс Контрольные работы «, Александрова Л А Пояснения к фильтрации результатов Мы скрыли некоторые результаты, которые очень похожи на уже представленные выше (28) Показать скрытые результаты Некоторые результаты поиска могли быть удалены в соответствии с местным законодательством Подробнее Ссылки в нижнем колонтитуле Россия — Подробнее… Справка Отправить отзыв Конфиденциальность Условия Аккаунт Поиск Карты YouTube Play Новости Почта Контакты Диск Календарь Google+ Переводчик Фото Ещё Документы Blogger Hangouts Google Keep Подборки Другие сервисы Google

Яндекс Яндекс Найти Поиск Поиск Картинки Видео Карты Маркет Новости ТВ онлайн Музыка Переводчик Диск Почта Коллекции Все Ещё Дополнительная информация о запросе Показаны результаты для Нижнего Новгорода Москва 1 ГДЗ по алгебре 7 класс контрольные работы eurokiorg › …algebra…kontrolnye-raboty-po-algebre… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте ГДЗ контрольные работы по алгебре 7 класс Александрова Мнемозина В 7 классе ученики начинают изучать алгебру , требования к математической подготовке возрастают Не все ученики радостно встречают предмет, некоторым освоить премудрости алгебры удается с великим трудом С введением ФГОС Читать ещё ГДЗ контрольные работы по алгебре 7 класс Александрова Мнемозина В 7 классе ученики начинают изучать алгебру , требования к математической подготовке возрастают Не все ученики радостно встречают предмет, некоторым освоить премудрости алгебры удается с великим трудом С введением ФГОС требования к уровню знаний становятся жесткими, семиклассникам о неотвратимости ГИА в будущем твердят строгие учителя Подготовка к аттестации по алгебре уже начинается, число контрольных работ , проверочных тестов увеличивается Скрыть 2 Решебник к сборнику контрольных работ по алгебре для math-helpernet › …po-algebre-dlya…aleksandrovoy-l… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Решения контрольных работ по алгебре из сборника для 9 класса Александровой Л А Рукопись Контрольные работы для учащихся общеобразовательных учреждений / Л А Александрова ; под Добавить комментарий Отменить ответ Читать ещё Решения контрольных работ по алгебре из сборника для 9 класса Александровой Л А Рукопись — 2015 Настоящее пособие содержит решения контрольных работ из сборника » Александрова Л А Алгебра 9 класс Контрольные работы для учащихся общеобразовательных учреждений / Л А Александрова ; под ред А Г Мордковича — 3-е изд, испр и доп — М : Мнемозина, 2010 — 32 с» Сборник контрольных работ предназначен для тех учителей математики, которые используют в своей преподавательской деятельности УМК, созданный авторским коллективом под руководством А Г Мордковича Внимание! Рукопись Добавить комментарий Отменить ответ Скрыть 3 ГДЗ по алгебре за 7 класс контрольные работы OnlineGdzru › Все предметы › Алгебра › kontrolnie-raboti… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Здесь вы найдете контрольные работы по Алгебре 7 класса авторы: Александрова Л А , от издательства Мнемозина 2017 ГДЗ содержит все ответы на вопросы и поможет Вам правильно выполнить домашнее задание Читать ещё Здесь вы найдете контрольные работы по Алгебре 7 класса авторы: Александрова Л А , от издательства Мнемозина 2017 ГДЗ содержит все ответы на вопросы и поможет Вам правильно выполнить домашнее задание ГДЗ к учебнику по алгебре за 7 класс Мордкович АГ можно скачать здесь ГДЗ к самостоятельным работам по алгебре за 7 класс Александрова Л А можно скачать здесь ГДЗ контрольным работам по алгебре за 7-9 классы Мордкович АГ (углублённый уровень) можно скачать здесь ГДЗ к задачнику по алгебре за 7 класс Мордкович АГ (углублённый уровень) можно скачать здесь ГДЗ к самостоятельным работам п Скрыть 4 ГДЗ по алгебре за 7 класс контрольные работы GDZru › class-7/algebra/kontrolnie-raboti… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Автор : Александрова Л А Издательство: Мнемозина ГДЗ: Спиши готовые домашние задания контрольные работы по алгебре за 7 класс, решебник Александрова Л А , Базовый уровень ФГОС, онлайн ответы на GDZRU Рекомендуем посмотреть Алгебра 7 класс задачник Автор: АГ Читать ещё Автор : Александрова Л А Издательство: Мнемозина ГДЗ: Спиши готовые домашние задания контрольные работы по алгебре за 7 класс, решебник Александрова Л А , Базовый уровень ФГОС, онлайн ответы на GDZRU Рекомендуем посмотреть Алгебра 7 класс задачник Автор: АГ Мордкович издательство: Мнемозина Алгебра 7 класс самостоятельные работы Автор: Александрова Л А издательство: Мнемозина Алгебра 7-9 класс контрольные работы Автор: Мордкович АГ издательство: Мнемозина Алгебра 7 класс задачник, углубленный уровень Авторы: АГ Мордкович, НП Николаев издательство: Мнемозина Алгебра 7 кл Скрыть 5 ГДЗ Алгебра 7 класс Контрольные работы Решебник uchebenet › ГДЗ › 7 класс › Алгебра › Александрова Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Ответы для гдз по учебнику Алгебра 7 класс Контрольные работы 2018 год от автора Александрова издательства Мнемозина Материалы пособия были разработаны Александровой Л А для мониторинга усвоения учебной программы К каждой теме курса прилагается ряд заданий, представленный Читать ещё Ответы для гдз по учебнику Алгебра 7 класс Контрольные работы 2018 год от автора Александрова издательства Мнемозина Материалы пособия были разработаны Александровой Л А для мониторинга усвоения учебной программы К каждой теме курса прилагается ряд заданий, представленный в четырех вариантах Зачастую родители приобретают детям этот сборник для самостоятельной внеклассной работы и для подготовки к контрольным срезам Вспомогательное пособие по предмету В методичке материал поделен на три уровня по степени сложности Чтобы получить отличную оценку, ребенок должен решить все три Скрыть 6 ГДЗ Алгебра 8 класс Л А Александрова , АГ Мордкович MyDomashkaru › …8-klass-algebra/la-aleksandrova-ag… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Выполнение контрольных работ по алгебре в 8 классе занимает много времени старшеклассников и требует ответственности Поэтому ответы на контрольные работы по алгебре для 8 классов Александровой Л А , школьник найдёт без проблем Останется только радоваться оценке, которая принесёт Читать ещё Выполнение контрольных работ по алгебре в 8 классе занимает много времени старшеклассников и требует ответственности На помощь могут прийти родители, только их знаний часто не хватает В этом случае необходимо зайти на сайт Моя домашка, где любой учащийся сможет найти ответ на вопрос или задание Поэтому ответы на контрольные работы по алгебре для 8 классов Александровой Л А , школьник найдёт без проблем Останется только радоваться оценке, которая принесёт положительные эмоции Другие решебники по Алгебра для 8 классa ЮН Макарычев 2009 ЮН Макарычев; Под ред СА Теляковского — 17-е изд Скрыть 7 ГДЗ: Контрольные работы по алгебре 7 класс yougdzcom › Контрольные работы Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Сборник включает 8 контрольных работ по курсу алгебры для 7 класса Каждая из них представлена в четырех вариантах Алгебра 7 класс: Контрольные работы Авторы: Александрова Л А Издательство: Мнемозина 2017 год Читать ещё Сборник включает 8 контрольных работ по курсу алгебры для 7 класса Каждая из них представлена в четырех вариантах Последняя работа является итоговой Она охватывает содержание всего годичного курса алгебры и проводится при наличии соответствующих возможностей в период завершающего повторения Алгебра 7 класс: Контрольные работы Авторы: Александрова Л А Издательство: Мнемозина 2017 год Задания: открыть список Итоговая контрольная работа Вариант 1 Вариант 2 Вариант 3 Вариант 4 Контрольная работа № 1 Вариант 1 Вариант 2 Скрыть 8 Ответы на контрольные работы по Алгебре лаАлександровой — смотрите картинки ЯндексКартинки › ответы на контрольные работы по алгебре Пожаловаться Информация о сайте Ещё картинки 9 ГДЗ по Алгебре за 7 класс контрольные работы MegaReshebaru › …algebra/7-klass/kontrolnie-raboti… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте автор: Александрова Л А Подробный решебник (ГДЗ) по Алгебре для 7 класса контрольные работы , Авторы учебника: Александрова Л А Базовый уровень Рекомендуемые решебники ГДЗ Задачник алгебра 7 класс АГ Читать ещё автор: Александрова Л А Подробный решебник (ГДЗ) по Алгебре для 7 класса контрольные работы , Авторы учебника: Александрова Л А Базовый уровень Рекомендуемые решебники ГДЗ Задачник алгебра 7 класс АГ Мордкович базовый уровень ГДЗ Самостоятельные работы алгебра 7 класс Александрова Л А базовый уровень ГДЗ Контрольные работы алгебра 7-9 класс Мордкович АГ углубленный уровень ГДЗ Задачник алгебра 7 класс АГ Мордкович углубленный уровень ГДЗ Самостоятельные работы алгебра 7 класс Александрова Л А углубленный уровень ГДЗ Контрольные работы алгебра 7 класс Александрова Л А базовы Скрыть 10 Александрова Л А Алгебра 7 класс Контрольные edu-libcom › izbrannoe/aleksandrova…algebra…klass… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Контрольные работы для учащихся общеобразовательных учреждений / Л А Александрова ; под ред А Г Мордковича Сборник включает 8 контрольных работ по курсу алгебры для 7-го класса Каждая из них представлена в четырех вариантах Последняя работа является итоговой Она охватывает Читать ещё Контрольные работы для учащихся общеобразовательных учреждений / Л А Александрова ; под ред А Г Мордковича — 3-е изд, испр и доп — М, 2009 Сборник включает 8 контрольных работ по курсу алгебры для 7-го класса Каждая из них представлена в четырех вариантах Последняя работа является итоговой Она охватывает содержание всего годичного курса алгебры и проводится при наличии соответствующих возможностей в период завершающего повторения В конце пособия приведено примерное тематическое планирование из расчета 3 часа в неделю Похожие публикации Мордкович А Г, Александрова Л А и др Скрыть ГДЗ за 7 класс по Алгебре Александрова | Гдз от gdzim GDZim › 7 класс › Алгебра › kontrolnie-raboti… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте ГДЗ содержит верные и подробные ответы с несколькими вариантами решения по Алгебре за 7 класс, автор издания: Александрова Л А контрольные работы Базовый уровень С нами учебный процесс станет лучше! Читать ещё ГДЗ содержит верные и подробные ответы с несколькими вариантами решения по Алгебре за 7 класс, автор издания: Александрова Л А контрольные работы Базовый уровень С нами учебный процесс станет лучше! Рекомендуемые решебники задачник АГ Мордкович, Мнемозина самостоятельные работы Александрова Л А , Мнемозина контрольные работы Мордкович АГ, Мнемозина задачник, углубленный уровень АГ Мордкович, Мнемозина самостоятельные работы Александрова Л А , Мнемозина контрольные работы Александрова Л А , Мнемозина задачник Мордкович АГ, Мнемозина теория Мордкович АГ, Мнемозина Контрольна Скрыть Контрольные работы Александрова 8 класс ответы ГДЗ GDZ-na-5com › algebra…kontrolnye-raboty…otvety-gdz Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте На этой странице Вы найдете ответы к учебнику по Алгебра Данное учебное пособие содержит решение контрольных работ в четырех вариантах по всем темам курса, которые представлены в учебнике алгебры Александровой Л А , а также Читать ещё На этой странице Вы найдете ответы к учебнику по Алгебра 8 класс Контрольные работы Александрова Л А 2009 г Данное учебное пособие содержит решение контрольных работ в четырех вариантах по всем темам курса, которые представлены в учебнике алгебры Александровой Л А , а также примерное тематическое планирование курса алгебры в 8-м классе общеобразовательных российских школ Этот решебник будет полезен всем ученикам, так как он позволяет проконтролировать правильность решения всех домашних заданий по алгебре , а также потренироваться перед контрольной , решая аналогичные примеры и задачи Скрыть ГДЗ по Алгебре за 7 класс контрольные работы egdzru › Решебники › Все предметы › Алгебра › kontrolnie-raboti… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте ГДЗ к контрольным работам по алгебре за 7 класс Александрова Л А можно скачать здесь Сборник готовых домашних заданий (ГДЗ) контрольные работы по Алгебре за 7 класс, решебник Александрова Л А самые лучшие ответы от EGDZRU Читать ещё ГДЗ к контрольным работам по алгебре за 7 класс Александрова Л А можно скачать здесь ГДЗ к учебнику по алгебре за 7 класс Мордкович АГ (задачник) можно скачать здесь ГДЗ к учебнику по алгебре за 7 класс Мордкович АГ (теория) можно скачать здесь Контрольная работа № 1 Варианты Сборник готовых домашних заданий (ГДЗ) контрольные работы по Алгебре за 7 класс, решебник Александрова Л А самые лучшие ответы от EGDZRU Скрыть ГДЗ по Алгебре 7 класс Контрольные работы gdz-freeru › Алгебра › 9 Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Контрольные работы Александрова Л А — Ваша самостоятельная работа на 5+ Предстоящая контрольная по алгебре наверняка лишала спокойного сна не Поэтому, просто переписывая готовые ответы и решения с ГДЗ по алгебре , вы ситуацию не спасете Важно не только иметь «отлично» по Читать ещё Контрольные работы Александрова Л А — Ваша самостоятельная работа на 5+ Предстоящая контрольная по алгебре наверняка лишала спокойного сна не одного ученика Но сегодня можно воспользоваться помощью отличного помощника и стать просто асом в столь сложной науке Поэтому, просто переписывая готовые ответы и решения с ГДЗ по алгебре , вы ситуацию не спасете Важно не только иметь «отлично» по домашнему заданию, но и суметь повысить уровень собственных заданий, чтобы именно на контрольной работе быть уверенным в правильности выбранного решения Подготовка к контрольной должна быть обязательно Скрыть ГДЗ решебник к контрольным работам по алгебре gdzgoorg › 9-klass/302-algebra…kontrolnye-raboty… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Незаменимым помощником для подготовки к экзаменам, самостоятельным работам , тестам является сборник ГДЗ к контрольным работам по алгебре для 9 класса Александровой Контрольные работы по алгебре 7 класс Александрова GDZ-spishycom › algebra/7-klass…kontrolnye-raboty… Сохранённая копия Показать ещё с сайта Пожаловаться Информация о сайте Александрова Лидия Александровна Контрольные работы по алгебре 7 класс Александрова , ответы ൠ решения задач на, ГДЗ для рабочих тетрадей ЗДЕСЬ Контрольная работа Алгебра – Поможем написать! Курсовые работы Дипломные работы Рефераты Все работы абв-консультациирф › платные-услуги Не подходит по запросу Спам или мошенничество Мешает видеть результаты Информация о сайте реклама От 800р для Вуза! Контрольная работа Алгебра Контактная информация +7 (920) 158-01-26 круглосуточно Заказ контрольной работы – Любые предметы и темы Скидки Цены Заказать работу Задать вопрос student82ru Не подходит по запросу Спам или мошенничество Мешает видеть результаты Информация о сайте реклама Нужна контрольная ? Горят сроки сдачи? Тогда вам точно сюда: Контактная информация +7 (978) 005-26-25 пн-вс 9:00-20:00 Вместе с « ответы на контрольные работы по алгебре лаалександровой » ищут: ответы на контрольные работы по русскому языку 3 класс крылова часть 1 ответы на контрольные работы по английскому языку 3 класс spotlight ответы на контрольные работы по английскому языку 7 класс spotlight ответы на контрольные работы по русскому языку 2 класс крылова часть 1 ответы на контрольные работы по математике 5 класс мерзляк ответы на контрольные работы по математике 6 класс виленкин ответы на контрольные работы по алгебре 7 класс ответы на контрольные работы по английскому языку 4 класс афанасьева ответы на контрольные работы по математике 6 класс мерзляк ответы на контрольные вопросы по геометрии 7-9 класс погорелов 1 2 3 4 5 дальше Браузер Ускоряет загрузку файлов при медленном соединении 0+ Скачать

Алгебра и начала анализа.

10 класс. Контрольные работы (профильный уровень). Глизбург В.И. 2007 г

 

АЛГЕБРА И НАЧАЛА АНАЛИЗА 

10 КЛАСС 

КОНТРОЛЬНЫЕ РАБОТЫ (ПРОФИЛЬНЫЙ УРОВЕНЬ). 

ГЛИЗБУРГ В.И.

2007 г.

Скачать бесплатно пособие в формате DjVu можно по ссылке ниже (кнопка).

 

 

 

 

 

Пособие доступно для скачивания в формате DjVu.

Если на Вашем компьютере не установлена программа для просмотра файлов DjVu,

то можно скачать программу здесь:

 

 

  Пособие содержит примерное тематическое планирование курса в трех вариантах — из расчета 4,5,6 часов в неделю на изучение курса алгебры и начал анализа в 10 классе профильной школы. Каждая из девяти контрольных работ составлена в шести вариантах.

Задумка автора состояла в следующем: первый и второй варианты ориентированы на классы с недельной нагрузкой 4 ч, третий и четвертый варианты — 5ч, пятый и шестой варианты — 6ч. Выбор вариантов для проведения контрольной работы, равно как и количество выбранных вариантов, — дело учителя. Этот выбор зависит и от того количества часов в неделю, которыми располагает педагог, и от уровня подготовленности класса.

  Каждый вариант контрольной работы выстроен по одной схеме: задания базового (обязательного) уровня — до первой черты, задания уровня выше среднего — между первой и второй чертой, задания повышенной сложности — после второй черты. Шкала оценок за выполнение контрольной работы может выглядеть так: за успешное выполнение заданий до первой черты — оценка 3; за успешное выполнение заданий базового уровня и одного дополнительного (после первой или после второй черты) — оценка 4; за успешное выполнение заданий трех уровней — оценка 5. При этом оценку не рекомендуется снижать за одно неверное решение в первой части работы (допустимый люфт).

  Если какая-либо контрольная работа представляется вам чересчур сложной или, напротив, чересчур простой для вашего класса, внесите соответствующие коррективы, но при этом постарайтесь сохранить саму концепцию контрольной работы. 

< Предыдущая		Следующая >

Экзамены и государственная итоговая аттестация (ГИА) по математике

Экзамены и государственная итоговая аттестация (ГИА) по математике — 10 класс учебникиГДЗ

тесты и ГИА

справочникидля учителя

• 1000 вопросов и ответов — Математика — Учебное пособие для поступающих в ВУЗы — Сергеев И.Н.
• 400 задач з математичних олiмпiад. 8-11 класи, 1998
• Алгебра і початки аналізу, Завдання для контрольних робіт, 10 клас, Академічний рівень, Чепурна Т.В., 2010
• Алгебра і початки аналізу. 10 клас. Профільний рівень. Збірник завдань для контролю знань. Гальперина А.Р., Золотарева И.А.
• Алгебра и начала анализа — 10-11 класс — Задачник — Мордкович А.Г.
• Алгебра и начала анализа — 10-11 класс — Контрольные работы — Мордкович А.Г., Тульчинская Е.Е.
• Алгебра и начала анализа, 10 класс, Задачник, Часть 2, Профильный уровень, Мордкович А.Г., 2007
• Алгебра и начала анализа, 10 класс, Методические рекомендации, Тест, Сорокина Н.Н.
• Алгебра и начала анализа, 10 класс, Часть 2, Задачник, Мордкович А.Г., 2007
• Алгебра и начала анализа, 10-11 класс, Дидактические материалы, Зив Б.Г., Гольдич В.А., 2008
• Алгебра и начала анализа, 10-11 класс, Дидактические материалы, Зив, Гольдич, 2008
• Алгебра и начала анализа, 10-11 классы, задания на готовых чертежах, Милованов Н.Ю., 2015
• Алгебра и начала анализа, 8-11 класс, Звавич Л.И., Шляпочник Л.Я., Чинкина М.В., 2002
• Алгебра и начала анализа. 10 класс. Сборник задач и контрольных работ. Мерзляк А.Г., Полонский В.Б., Рабинович Е.М., Якир М.С. 2010
• Алгебра и начала анализа. 10 класс. Часть 2. Задачник для учащихся общеобразовательных учреждений. Мордкович А.Г., 2009
• Алгебра и начала анализа. Контрольные работы. 10 класс. Глизбург В.И. 2007
• Алгебра и начала анализа. Тесты. 10-11 класс. Алтынов П.И., 1997
• Алгебра и начала математического анализа, 10 класс, Дидактические материалы, Соломин В.Н., Столбов К.М., Пратусевич М.Я., 2010
• Алгебра и начала математического анализа, 10 класс, Задачник, Часть 2, Мордкович А.Г., 2009
• Алгебра и начала математического анализа, 10 класс, Контрольные работы в новом формате, Дудницын Ю.П., Семенов А.В., 2011
• Алгебра и начала математического анализа, 10 класс, Контрольные работы, Глизбург В.И., 2007
• Алгебра и начала математического анализа, 10 класс, Контрольные работы, Глизбург В.И., 2009
• Алгебра и начала математического анализа, 10 класс, Контрольные работы, Глизбург В. И., 2014
• Алгебра и начала математического анализа, 10 класс, Часть 2, Задачник, Опечатки и исправления, Мордкович А.Г., 2009
• Алгебра и начала математического анализа, 10-11 класс, Задачник, Часть 2, Мордкович А.Г., 2009
• Алгебра и начала математического анализа, Дидактические материалы, 10 класс, Шабунин М.И., 2011
• Алгебра и начала математического анализа, тематические тесты, 10 класс, базовый и профильный уровни, Шепелева Ю.В., 2012
• Алгебра и начала математического анализа, Тематические тесты, 10 класс, Базовый уровень. Ткачева М.В., 2012
• Алгебра и начала математического анализа. 10 класс. Дидактические материалы. Шабунин М.И., Ткачёва М.В., Фёдорова Н.Е., Газарян Р.Г. 2010
• Алгебра и начала математического анализа. 10 класс. Контрольные работы. Глизбург В.И. 2007
• Алгебра и начала математического анализа. 10 класс. Самостоятельные работы. Александрова Л.А., 2008
• Алгебра и начала математического анализа. 10-11 классы. Часть 1. Задачник для учащихся общеобразовательных учреждений. Мордкович А.Г., Николаев Н.П. 2009
• Алгебра и начала математического анализа. 10-11 классы. Часть 2. Задачник для учащихся общеобразовательных учреждений. Мордкович А.Г., Семенов П.В., 2009
• Алгебра и начала математического анализа. Дидактические материалы для 10 класса. Потапов М.К., Шевкин А.В. 2008
• Алгебра и начала математического анализа. Дидактические материалы. 10 класс. Потапов М.К., Шевкин А.В. 2011
• Алгебра и начало анализа, 10 класс, Диагностическая работа, Варианты МА00101-МА00106, 2016
• Алгебра. 10 класс. Диагностическая работа. Вариант 1-2. По учебнику Алимова Ш.А., Калягина Ю.М., Мордковича А.Г. 2010
• Алгебра. 10 класс. Диагностическая работа. Вариант 1-2. По учебнику Алимова Ш.А., Колягина Ю.М., Мордковича А.Г. 2009
• Алгебра. 10 класс. Диагностическая работа. Вариант 1-2. По учебнику Колмогорова А.Н. 2009
• Алгебра. 10 класс. Диагностическая работа. Вариант 1-2. По учебнику Колмогорова А.Н. 2010
• Алгебра. 10 класс. Диагностическая работа. Вариант 1-2. По учебнику Мордковича А.Г. 2009
• Алгебра. 10 класс. Диагностическая работа. Вариант 1-2. По учебнику Мордковича А.Г. 2010
• Алгебра. 10 класс. Диагностическая работа. Вариант 1-2. По учебнику Никольского С.М. 2009
• Алгебра. 10 класс. Диагностическая работа. Вариант 1-2. По учебнику Никольского С.М. 2010
• Алгебра. Проверочные работы с элементами тестирования. 10 класс. Старостенкова Н.Г. 2000
• Высшая математика — Решебник — Зимина О.В., Кириллов А.И., Сальникова Т.А.
• Геометрические решения негеометрических задач — Генкин Г.З.
• Геометрия, 10 класс, Дидактические материалы, Зив Б.Г., 2009
• Геометрия, 10 класс, Рабочая тетрадь, Глазков Ю.А., Юдина И.И., Бутузов В.Ф., 2010
• Геометрия, 10 класс, Рабочая тетрадь, Глазков Ю.А., Юдина И.И., Бутузов В. Ф., 2013
• Геометрия, 10-11 класс, Дидактические материалы, Смирнова И.М., Смирнов В.А., 2007
• Геометрия, 10-11 класс, Рабочая тетрадь, Глазков Ю.А., Юдина И.И., Бутузов В.Ф., 2013
• Геометрия, 8-11 класс, Пособие для школ и классов с углубленным изучением математики, Звавич Л.И., Чинкина М.В., 2000
• Геометрия, дидактические материалы, 10 11 классы, пособие для общеобразоватнльных организаций, Евстафьева Л.П., 2014
• Геометрия, Дидактические материалы, 10 класс, Зив Б.Г., 2009
• Геометрия, дидактические материалы, 10 класс, пособие для общеобразовательных организаций, Панщина В.А., 2014
• Геометрия, Дидактические материалы, 10-11 класс, Смирнова И.М., 2007
• Геометрия, Задачі та вправи на готових кресленнях, 10-11 класс, Рабінович Ю.М., 2006
• Геометрия. 10 класс. Задачник. Потоскуев Е.В., Звавич Л.И. 2004
• Геометрия. 10 класс. Рабочая тетрадь. Глазков Ю.А., Юдина И.И., Бутузов В.Ф. 2010
• Геометрия. 10 класс. Сборник задач и заданий для тематического оценивания. Мерзляк А.Г., Полонский В.Б., Рабинович Е.М., Якир М.С. 2001
• Геометрия. 10 класс. Сборник задач и контрольных работ. Мерзляк А.Г., Полонский В.Б., Рабинович Е.М., Якир М.С. 2010
• Геометрия. 10-11 класс. Тесты. Алтынов П.И. 2001
• Геометрия. 7-9 класс. Тесты. Алтынов П.И. 1998
• Геометрия. Дидактические материалы. 10-11 класс. Смирнова И.М., Смирнов В.А. 2007
• Геометрия. Задачи и упражнения на готовых чертежах. 10-11 класс. Рабинович Е.М. 2006
• Геометрия. Карточки. 10 класс. Для уровневого обучения. Дудницын Ю.П., Кронгауз В.Л. 1997
• Дидактические материалы по алгебре и математическому анализу с ответами и решениями. 10-11 класс. Рыжик В.И., Черкасова Т.Х., 2008
• Дидактические материалы по алгебре и математическому анализу с решениями, 10-11 класс, Рыжик В.И., Черкасова Т.Х., 2008
• Дидактические материалы по алгебре и началам анализа для 10 класса. Ивлев Б.М., Саакян С.М., Шварцбурд С.И.,1988
• Дидактические материалы по алгебре, 10-11 класс, Зив Б.Г., Гольдич В.А., 2013
• Дидактические материалы по геометрии, 10 класс, С углубленным изучением математики, Рыжик В.И., 1998
• Задания по алгебре и математическому анализу, 9-11 класс, Доброва О.Н., 1996
• Задания по алгебре и математическому анализу. 9-11 класс. Доброва О.Н. 1996
• Задачи и упражнения на готовых чертежах, 10-11 классы, Геометрия, Рабинович Е. М., 2006
• Задачи к урокам геометрии, 7-11 класс, Зив Б.Г., 1998
• Задачи по геометрии, 7-11 класс, Зив Б.Г., Мейлер В.М., Баханский А.Г., 2003
• Задачи по стереометрии, 10-11 класс, Шлыков В.В., Валаханович Т.В., 1998
• Збірник задач з геометрії. 10-11 класс. Лоповок Л.М. 1993
• Контрольные и проверочные работы по алгебре, 10 класс, Методическое пособие, Звавич Л.И., Шляпочник Л.Я., Козулин Б.В., 2002
• Контрольные и проверочные работы по алгебре. 10 класс. Звавич Л.И., Шляпочник Л.Я., Козулин Б.В. 2002
• Контрольные и проверочные работы по геометрии, 7-11 класс, Медяник А.И., 1996
• Контрольные работы по алгебре и началам анализа, 10 класс, Дудницын Ю.П., Кронгауз В.Л., 2007
• Контрольные работы по геометрии, 10 класс, Дудницын Ю.П., Кронгауз В.Л., 2009
• Математика для старшеклассников, Задачи повышенной сложности, Супрун В.П., 2009
• Математика для старшеклассников, Нестандартные методы решения задач, Супрун В.П., 2009
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа №1, 2012
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа, 2012
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа, Демонстрационный вариант, СПО, 2016
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа, Для Юго-Западного округа, 2011
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа, Инженерный класс, Спецификация, 2016
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа, По Алимову Ш. А., 2011
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа, По Колмогорову А.Н., 2011
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа, По Мордковичу А.Г., 2011
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа, По Никольскому С.М., 2011
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа, Спецификация, 2016
• Математика, 10 класс, Диагностическая работа, Тригонометрия, Варианты МА00201-МА00204, 2016
• Математика, 10 класс, Итоговая контрольная работа, 2016
• Математика, 10 класс, Итоговая работа, Варианты 00301-00304, 2014
• Математика, 10 класс, Итоговая работа, Варианты 00401-00402, 16.05.2014
• Математика, 10 класс, Итоговая работа, Варианты МА00501-МА00504, 2016
• Математика, 10 класс, Контрольная работа
• Математика, 10 класс, Краевая диагностическaя pабoтa, 2016
• Математика, 10 класс, Профильный экзамен, 2016
• Математика, 10 класс, Тематическая диагностическая работа, Теория вероятностей и статистика, Варианты МА00401-МА00404, 2016
• Математика, 10 класс, Тесты для промежуточной аттестации и текущего контроля, Лысенко Ф. Ф., Кулабухов С.Ю., 2011
• Математика, 10 класс, Тесты для промежуточной аттестации и текущего контроля, Лысенко, Кулабухов, 2011
• Математика, 10 класс, Тренировочная работа, Варианты МА00301-МА00310, 2016
• Математика, 10 класс, Тренировочная работа, Варианты МА00601-МА00616, 2016
• Математика, алгебра и начала математического анализа, геометрия. Алгебра и начала математического анализа. 10 класс. Самостоятельные работы для учащихся общеобразовательных организаций (базовый и углублённый уровни, Александрова Л.А., Мордкович А.Г., 2015
• Математика, Областные олимпиады, 8-11 класс, Агаханов Н.X., Богданов И.И., Кожевников П.А., 2010
• Математика, Олимпиада Курчатов, 10 класс, Отборочный этап, 2013
• Математика. Алгебра. Начала математического анализа. Задачник. 10-11 класс. Шабунин М.И., Прокофьев А.А., Олейник Т.А., Соколова Т.В. 2009
• Математические олимпиадные работы, 5-11 классы, Фарков А., 2010
• Математические олимпиады в школе, 5-11 классы, Фарков А. В., 2009
• Математический анализ для решения физических задач — Шубин М.А.
• Методы решения интегральных уравнений: Справочник — Манжиров А.В., Полянин А.Д.
• Нестандартные задачи по математике, Алгебра, 7-11 класс, Галкин Е.В., 2004
• Олимпиады по Механике, Задачи и решения, 7-11 классы, 2010
• Полный сборник решений задач для поступающих в ВУЗы — группа А — Сканави М.И. — 2003
• Полный сборник решений задач для поступающих в ВУЗы — группа Б — Книга 1 — Сканави М.И. — 2003
• Полный сборник решений задач для поступающих в ВУЗы — группа Б — Книга 2 — Сканави М.И. — 2003
• Полный сборник решений задач для поступающих в ВУЗы — группа В — Сканави М.И. — 2003
• Практические занятия по высшей математике — Численное решение алгебраических и трансцендентных уравнений, матричное исчисление, векторный анализ и интегрирование линейных дифференциальных уравнений первого порядка с частными производными — Каплан И. А.
• Пятьдесят занимательных вероятностных задач с решениями — Ф. Мостеллер
• Решебник — Высшая математика — Зимина О.В., Кириллов А.И., Сальникова Т.А.
• Решебник — Высшая математика — Специальные разделы — Под ред. Кириллова А.И.
• Решение сложных и нестандартных задач по математике — Голубев В.И.
• Решение экзаменационных задач по математике — 11 класс — Дорофеев Н.В., Сапожников А.А., Шубин Е.С.
• Самостоятельные и контрольные по геометрии, 10-11 класс, Ершова А.П., Голобородько В.В., 2003
• Самостоятельные и контрольные работы по алгебре и геометрии для 10 класса. Голобородько В.В., Ершова А.П., 2004
• Самостоятельные и контрольные работы по алгебре и началам анализа для 10-11 классов. Ершова А.П., Голобородько В.В. 2005
• Самостоятельные и контрольные работы по алгебре и началам анализа, 10-11 класс, Ершова А.П., Голобородько В.В., 2013
• Самостоятельные и контрольные работы по алгебре и началам анализа. 10-11 класс. Ершова А.П., Голобородько В.В. 2005
• Самостоятельные и контрольные работы по алгебре и началам математического анализа, 10 класс, Ершова А.П., Нелин Е.П., 2013
• Самостоятельные и контрольные работы по геометрии, 10 класс, Ершова А.П., Голобородько В.В., 2013
• Сборник задач по алгебре и началам анализа, 10-11 класс, Карп А.П., 1995
• Сборник задач по алгебре и началам анализа. 10-11 класс. Карп А.П. 1995
• Сборник задач по алгебре и элементарным функциям. 9-10 класс. Худобин А.И., Худобин Н.И., Шуршалов М.Ф. 1966
• Сборник задач по геометрии, 10 класс, Шлыков В.В., Валаханович Т.В., 2010
• Сборник задач по геометрии, 10-11 класс, Калинин А.Ю., Терёшин Д.А., 2011
• Сборник задач по математике для поступающих в ВУЗы с решениями — Геометрия — под. ред. Сканави М.И.
• Сборник задач по математике с решениями, 8-11 класс, Егерев В.К., Зайцев В.В., Кордемский Б.А., 2012
• Сборник задач по математике с решениями, 8-11 класс, Сканави М. И., 2012
• Сборник задач по математике Стэнфордского университета: с подсказками и решениями — Дж.Пойа, Д.Килпатрик
• Сборник задач по тригонометрии. 9-10 класс. Стратилатов П.В. 1965
• Сборник решений задач для поступающих в ВУЗы — Сканави М.И.
• Сборник старинных задач по элементарной математике с историческими экскурсами и подробными решениями — Чистяков В.Д.
• Современная элементарная алгебра в задачах и решениях — Гашков С.Б.
• Стереометрия, Задачник к школьному курсу, 10 — 11 класс, Гайштут А.Г., Литвиненко Г.Н., 1998
• Тематические тесты по математике, 10 класс, Быков А.А., 2006
• Тестовые материалы для оценки качества обучения, Алгебра и начала анализа, 10-11 класс, Крайнева Л.Б., 2013
• Тесты по алгебре и началам анализа, 10 класс, Глазков Ю.А., Варшавский И.К., Гаиашвили М.Я., 2010
• Тесты по геометрии, 10 класс, Глазков Ю.А., Боженкова Л.И., 2012
• Тетрадь-конспект по алгебре и началам анализа для 10 класса, Ершова А. П., Голобородько В.В., Крижановский А.Ф., 2014
• Тригонометрия. Задачник к школьному курсу. 8-11 класс. Мерзляк А.Г., Полонский В.Б., Рабинович Е.М., Якир М.С. 1998
• Факультативный курс по математике: Решение задач — Учебное пособие для 10 класса — Шарыгин И.Ф.
• Элементарная математика. Учебное пособие для старшеклассников и абитуриентов. Часть 1. Хорошилова Е.В., 2010
• Элементарная математика. Учебное пособие для старшеклассников и абитуриентов. Часть 2. Хорошилова Е.В., 2010

наименований, автором которых является «Александров, профессор Василий»

Кол-во наименований: 75 .

Артикул

Макки, Г. Т., Варгезе, Б. и Александров, В. Н. (2010) Переход от традиционных контрольных точек к многоагентным подходам. Международный журнал компьютерной теории и инженерии, 2 (5). С. 701-705. ISSN 1793-821X

Варгезе Б. , Макки Г. и Александров В.(2010) Внедрение интеллектуальных ядер с использованием виртуализации процессора для обеспечения отказоустойчивости. Процедуры информатики, 1 (1). С. 2197-2205. ISSN 1877-0509 DOI: https://doi.org/10.1016/j.procs.2010.04.246

Варгезе Б., Макки Г. и Александров В. (2010) Триадные представления познания в интеллектуальных агентах и ​​интеллектуальных ядрах для обеспечения отказоустойчивости. Журнал интеллектуальных вычислений, 1 (1). стр.38-48. ISSN 0976-9013

Кремонези П., Туррин Р. и Александров В.Н. (2009) Моделирование влияния неоднородности узлов на производительность сетевых приложений. Сетевой журнал, 4 (9). С. 837-854. ISSN 1796-2056 DOI: https://doi.org/10.4304/jnw.4.9.837-854

Джеймисон, Р., Хаффиджи, А. и Александров, В. (2008) Иммерсивная кооперативная психологическая виртуальная среда (ICPVE). Конспект лекций по информатике, 5103. С. 438-445. ISSN 0302-9743 978-3-540-69388-8

Бранфорд, С., Сахин, К., Тандаван, А., Вейхраух, К., Александров, В. Н. и Димов, И. Т. (2008) Методы Монте-Карло для матричных вычислений на сетке. Компьютерные системы будущего поколения — Международный журнал методов и приложений теории сетевых вычислений, 24 (6). С. 605-612. ISSN 0167-739X doi: https: // doi.org / 10.1016 / j.future.2007.07.006

Димов И., Александров В., Папанчева Р. и Вейхраух К. (2007) Численное решение больших задач линейной алгебры методом Монте-Карло. Конспект лекций по информатике, 4487. С. 747-754. ISSN 0302-9743 9783540725831

Weihrauch, C., Dimov, I., Branford, S. и Александров, В. (2006) Сравнение вычислительной стоимости алгоритма Монте-Карло и детерминированного алгоритма для вычисления билинейных форм степеней матриц. Конспект лекций по информатике, 3993. С. 640-647. ISSN 0302-9743 3-540-34383-0

Хаффаги А., Рамсами П., Джеймисон Р. и Александров В.А. (2006) Создание и управление интерактивными виртуальными средами. Конспект лекций по информатике, 3992. С. 595-602. DOI: https://doi.org/10.1007/11758525_80

Димов И., Александров В., Бранфорд С.и Weihrauch, C. (2006) Анализ ошибок алгоритма Монте-Карло для вычисления билинейных форм степеней матриц. Конспект лекций по информатике, 3993. С. 632-639. ISSN 0302-9743 3540343830

Аль-Халифа, А., МакКриндл, Р. и Александров, В. (2006) Иммерсивное моделирование открытой хирургии. Конспект лекций по информатике, 3991. С. 868-871. ISSN 0302-9743 3-540-34379-2

Рамсами, П. , Хаффаги, А., Джеймисон, Р., Александров, В.А. (2006) Использование тактильных ощущений для улучшения погружения в виртуальную среду. Международная конференция по компьютерным наукам.

Аль-Халифа, А., Маккриндл, Р.Дж., Шарки, П.М. и Александров В.А. (2006) Использование виртуальной реальности для медицинской диагностики и обучения. Международный журнал по инвалидности и человеческому развитию, 5 (2). 187 -193.

Урметзер Ф., Тандаван А., Александров В.А. и Роберт А.Дж. (2006) Визуальные редакторы рабочих процессов: критический обзор с точки зрения пользователей. Производственные системы и информационная инженерия, 4. 21 — 32.

Каллея, С., Бруин, Р.П., Такер, М.Г., Дав, М.Т., Тайер, Р.П., Бланшард, Л.Дж., Клиз ван Дам, К., Аллан, Р.Дж., Чепмен, К., Эммерих, В., Уилсон, Д.Г., Бродхольт, Дж. , Тандаван А. и Александров В. (2005) Совместная грид-инфраструктура для молекулярного моделирования: мини-сеть eMinerals как прототип интегрированного компьютера и сети данных. Молекулярное моделирование, 35 (5). С. 303-313. DOI: https://doi.org/10.1080/08927020500067195

Льюис, Дж. Дж., Хасан, С. М. и Александров, В. Н. (2005) Виртуальная среда для совместной работы для сложных вычислений. Вычислительная техника и информатика, 24 (1).С. 67-83. ISSN 1335-9150

Аль-Халифа, A.H., McCrindle, R.J. и Александров В. (2005) различных стратегий медицинского моделирования в единой совместной иммерсивной виртуальной среде. Видение, видео и графика (Eurographics 2005). 77-84. ISSN 3³⁵⁷⁶

Тандаван, А., Сахин, Ч., Александров, В. (2005) Опыт работы с инструментарием Globus в AIX и развертывание крупномасштабной модели загрязнения воздуха в качестве сетевого сервиса. Материалы Cracow Grid Workshop ’04. 412 — 418.

Льюис, Дж. Дж., Хасан, С. М., Александров, В. Н., Дав, М. Т. и Каллея, М. (2005) Инструмент для совместного использования многоадресных приложений — Упрощение виртуальной организации eMinerals. Конспект лекций по информатике, 3516. С. 359-366. ISSN 0302-9743 3540260447

Александров В.Н., Атанасов Э., Димов, И., Брэнфорд, С., Тандаван, А. и Вираух, К. (2005) Параллельные гибридные алгоритмы Монте-Карло для матричных вычислений. Конспект лекций по информатике, 3516. 752 — 759. DOI: https://doi.org/10.1007/11428862_102

Льюис, Дж. Дж., Сипос, Г., Урметцер, Ф., Александров, В. Н. и Кацук, П. (2005) Коллективный грид-портал P-GRADE. Конспект лекций по информатике, 3516.С. 367-374. ISSN 0302-9743 3-540-26044-7 DOI: https://doi. org/10.1007/b136575

Дав, М. Т., Каллея, С., Бруин, Р. П., Вакелин, Дж., Такер, М. Г., Льюис, Дж. Дж., Хасан, С. М., Александров, В. Н., Киган, М., Тайер, Р. П., Тодоров, И. Т., Уилсон, ПБ , Альфредссон, М., Прайс, Г.Д., Чепмен, К., Эммерих, В., Уэллс, С.А., Мармьер, А., Паркер, С.К. и Ду, З. (2005) Сотрудничество eMinerals: инструменты и опыт. Молекулярное моделирование, 31 (5).329 — 337. DOI: https://doi.org/10.1080/08927020500066163

Бранфорд, С., Вейрах, К., Александров, В. (2005) Разреженный параллельный гибридный алгоритм Монте-Карло для матричных вычислений. Конспект лекций по информатике, 3516. С. 743-751. ISSN 0302-9743

Александров В., Овчарц В., Томсен П. Г. и Златев З. (2004) Параллельные прогоны большой модели загрязнения воздуха на сетке компьютеров Sun. Математика и компьютеры в моделировании, 65. С. 557-577.

Александров В., Тандаван А. и Кацук П. (2004) Использование P-GRADE для вычислений методом Монте-Карло в распределенной среде. Конспект лекций по информатике (№ 3039). С. 475-482.

Александров В., Златев З. (2004) Использование параллельных методов Монте-Карло в крупномасштабном моделировании загрязнения воздуха. Конспект лекций по информатике (3039). С. 491-498.

Александров, В. Н., Димов, И. Т., Караиванова, А., Тан, К., Дж. К. (2003) Параллельные алгоритмы Монте-Карло для поиска информации. Математика и компьютеры в моделировании, 62 (3-6). С. 289-295. ISSN 0378-4754

Раздел книги или отчета

Варгезе Б., Макки Г.Т. и Александров В.Н. (2010) Обработка отказов одного узла с помощью агентов в компьютерных кластерах. В: Материалы Международного симпозиума 2010 г. по оценке производительности компьютерных и телекоммуникационных систем. Международное общество моделирования и симуляции, Сан-Диего, США, стр. 96-101. ISBN 9781565553408

Варгезе Б., Макки Г. и Александров В. (2010) Интеллектуальные агенты для отказоустойчивости: от многоагентного моделирования до реализации на основе кластеров. В: 2010 24-я Международная конференция IEEE по передовым информационным сетям и семинарам по приложениям (WAINA). IEEE, стр. 985-990. ISBN 9781424467013 DOI: https://doi.org/10.1109/WAINA.2010.21

Варгезе Б., Макки Г. и Александров В. (2010) Реализация интеллектуальных агентов на кластерах на основе MPI. В: Материалы мультиконференции по моделированию Spring Simulation 2010 (SpringSim ’10).ACM, Нью-Йорк, США, артикул № 79. ISBN 9781450300698 DOI: https://doi. org/10.1145/1878537.1878620

Дунк, А., Джеймисон, Р. и Александров, В. (2008) Динамические виртуальные среды с использованием действительно простого объединения. В: Bubak, M., Dongarra, J., VanAlbada, G.D. и Sloot, P.M.A. (ред.) Вычислительная наука: международная конференция по вычислительной науке 2008. Конспект лекций по информатике, 5103.Springer-Verlag, Берлин, стр. 429-437. ISBN 9783540693888

Аль-Халифа, А.Х., Вольф, Р., Александров, В.Н. и Робертс, Д.Дж. (2005) Пример : Взаимодействие с объемными медицинскими наборами данных в сетевых средах CAVE. В: Визуализация и анализ данных 2005. Труды SPIE, 5669 (350). SPIE Press. DOI: https://doi.org/10.1117/12.587633

Александров, В.и Караиванова А. (2005) Нахождение наименьшего собственного значения обратным методом Монте-Карло с уточнением. В: Sunderam, V.S., VanAlbada, G.D., Sloot, P.M.A. и Dongarra, J.J. (ред.) Вычислительная наука — Iccs 2005, Pt 3. Конспект лекций по информатике, 3516. Springer-Verlag Berlin, Берлин, стр. 766-774. ISBN 0302-9743 3-540-26044-7

Сипос Г., Льюис Г. Дж., Кацук Н. и Александров В.Н. (2005) Порталы для совместной работы, ориентированные на рабочие процессы. В: Sloot, P. M. A., Hoekstra, A. G., Priol, T., Reinefeld, A. и Bubak, M. (ред.) Достижения в сетевых вычислениях — например, 2005 г. Конспект лекций по информатике, 3470. Springer-Verlag Berlin, Берлин, стр. 434-443. ISBN 0302-9743 3-540-26918-5

Льюис, Дж. Дж., Хасан, С. М. и Александров, В. Н. (2004) Создание совместной среды для продвинутых вычислений. В: Бадер Д. А. и Хохар А. А. (ред.) Параллельные и распределенные вычислительные системы. Международное общество компьютерных технологий и их приложений (Isca), Роли, стр. 497-502. ISBN 1880843528

Александров В., Александров Н. С., Бхана И. и Джонсон Д. (2004) Сеть электронного обучения: одноранговый подход. В: Компьютерный дизайн соответствует компьютерному обучению. Kluwer Academic, стр.133-142.

Александров В., Лю Б. (2003) Гибридные методы Монте-Карло для вычисления матриц. В: Численные методы и приложения. Конспект лекций по информатике, 2542. НЕ УКАЗАНО, стр. 73-82.

Предмет конференции или семинара

Варгезе Б., Макки Г. и Александров В. (2010) Кластерная реализация отказоустойчивого параллельного алгоритма сокращения с использованием вычислений роя-массива. В: Шестая международная конференция по автономным и автономным системам, 2010 г. , 7-13 марта 2010 г., Канкун, Мексика, стр. 30-36.

Варгезе Б., Макки Г.Т. и Александров В.Н. (2009) Можно ли создать самоуправляемые параллельные вычислительные системы? В: Конференция Школы системной инженерии, Университет Рединга, Рединг, Соединенное Королевство.

Джонсон Д., Мид А. и Александров В. Н. (2009) Легковесный веб-портал суперкомпьютеров для вывода филогенетических деревьев. В: 5-я Международная конференция IEEE по семинарам по электронным наукам, 2009 г., Оксфорд, Великобритания.

Александров Н.С., Александров В. и Рамирес-Веларде Р. (2008) Разработка интегрированного процесса обучения для сред Web 3.0 для образования. В: Интерактивная компьютерная обучающая конференция (ICL 2008).

Александров Н.С., Александров В. и Рамирес-Веларде Р. (2008) Создание интерактивных трехмерных миров для обучения. В: ICL.

Кремонези П., Туррин Р. и Александров В. (2008) Моделирование влияния неоднородности узлов на производительность реального грид-приложения. В: Международный симпозиум по оценке производительности компьютерных и телекоммуникационных систем, 2008 г., Эдинбург, Великобритания.

Додия Дж., Александров В. (2008) Помощь в навигации для навигации в виртуальных средах: таксономия и обзор. В: 18-я Международная конференция по искусственной реальности и телексистенции (ICAT 2008), Иокогама, Япония.

Додия Дж., Александров В. (2008) Использование слуховых сигналов для помощи в поиске пути в виртуальной среде: музыка помогает при выборе маршрута. В: Симпозиум ACM по программному обеспечению и технологиям виртуальной реальности, Бордо, Франция, 2008 г. DOI: https://doi.org/10.1145/1450579.1450615

Сахин, К. , Вейхраух, К., Димов, И. и Александров В. (2008) Совместная рабочая среда для крупномасштабной модели окружающей среды. В: 6-я Международная конференция по крупномасштабным научным вычислениям (LSSC 2007), Созополь, Болгария.

Джеймисон, Р., Хаффиджи, А., Рамсами, П. и Александров, В. (2007) Лес данных: совместная версия. В: 7-я Международная конференция по вычислительной науке (ICCS 2007), Пекин, Китай.

Рамсами, П., Хаффеги А. и Александров В. (2007) Общий интерфейс управления для сетевых тактильных виртуальных сред. В: 7-я Международная конференция по вычислительной науке (ICCS 2007), Пекин, Китай.

Хаффиджи А., Александров В. (2007) Текстовое общение в виртуальных средах для взаимодействия в реальном мире. В: 13-я Международная конференция по моделированию мультимедиа (MMM 2007), Сингапур.

Джеймисон, Р. и Александров В. (2007) Лес данных: многомерная визуализация. В: 11-я Международная конференция по визуализации информации (IV 2007 г.), Цюрих, Швейцария. DOI: https://doi.org/10.1109/IV.2007.9

Рамсами П., Джеймисон Р., Хаффаги А., Аль-Халифа А., Александров Н.С. и Александров В.А. (2006) Улучшение процесса обучения за счет интеграции иммерсивных систем виртуальной реальности. В: Proceedings of ICL 2006, Филлах, Австрия.

Урметзер Ф., Бейкер М.А., Александров В.А. (2006) Методы исследования для выявления требований пользователей электронных исследований. В: All Hands Meeting 2006, Ноттингем, Соединенное Королевство.

Урметцер Ф., Льюис Г., Александров В.А. и Кацук П. (2006) Тестирование программного обеспечения для совместной работы: разработка среды тестирования для программного обеспечения для совместной работы. В: Proceedings, Cracow Grid Workshop 05, Academic Computer Center, CYFRONET AGH.

Урметзер Ф., Льюис Г., Хасан М. и Александров В.А. (2006) Программное обеспечение для тестирования сетки: разработка распределенного устройства записи экрана для тестирования интерфейса и удобства использования. В: CHEP 06, Мумбаи, Индия.

Аль-Халифа, А., Маккриндл, Р.Дж., Шарки, П.М. и Александров В.А. (2006) Использование виртуальной реальности для медицинской диагностики и обучения. В: Proc. 6-я Международная конференция по проблемам инвалидности, виртуальной реальности и связанных технологий, Эсбьерг, Дания, 193–200.

Ларсен Э.М., Александров Н.С. и Александров В. (2005) Создание виртуальных организаций для электронного обучения. В: Proceedings of the Interactive Computer-aided Learning 05 Addendum, Villach, Austria.

Аль-Халифа, А. Х., МакКриндл, Р. Дж. И Александров, В. Н. (2005) Комбинированная реализация различных методов медицинского моделирования в совместной иммерсивной виртуальной среде. В: Международная конференция по моделированию, симуляции и методам визуализации 2005 г. (MSV ’05), Лас-Вегас, Северная Каролина, США.

Аль-Халифа, А. Х., МакКриндл, Р. Дж. И Александров, В. Н. (2005) Различные подходы к моделированию медицинских приложений в совместных виртуальных средах CAVE. В: Центральноевропейская конференция по мультимедиа и виртуальной реальности 2005 (Eurographics 2005).

Александров, Э.С., Александров В. Н., Бхана И. М. и Джонсон Д. (2005) Сеть электронного обучения: интеграция электронной педагогики с новыми технологиями. В: Proc. Приложения к конференции «Интерактивное компьютерное обучение 05», 2005 г., Филлах, Австрия.

Сахин К., Тандаван А. и Александров В. Н. (2005) Включение сетки датской модели загрязнения воздуха Эйлера. В: Высокопроизводительные вычисления и коммуникации: Первая международная конференция, HPCC 2005, Сорренто, Италия.

Хасан С.М., Льюис Г.Дж., Александров В.Н., Голубь М.Т. и Такер М. (2005) Инструмент общего доступа к многоадресным приложениям для набора инструментов Access Grid. В: Proceedings of the UK e-Science All Hands Meeting 2005, Nottingham.

Александров Н.С., Рамирес Р., Александров В.Н. (2005) Новые педагогические парадигмы, способствующие смешанному и совместному обучению. В: Proceedings of the Interactive Computer-aided Learning 05 Addendum, Villach, Austria.

Хаффиджи А., Джеймисон Р., Антез К. и Александров В. (2005) Инструменты для совместной разработки приложений виртуальной реальности. В: Международная конференция по вычислительным наукам, Атланта, Джорджия, США.

Цао Ч., Лю К., Александров В., Петерс С. и Ган Р. (2005) Использование семиотики организации в моделировании систем закупок. В: Материалы 11-й Азиатско-Тихоокеанской конференции по менеджменту, Тайвань.

Сипос, Г., Льюис, Г.Дж., Кацук, П., Александров, В.Н. (2005) Порталы совместной работы, ориентированные на рабочие процессы. В: Proc. Европейской грид-конференции, Амстердам, Нидерланды.

Дав, М. Т., Артачо, Э., Уайт, ТО, Брюин, Р. П., Такер, М. Г., Мюррей-Раст, П., Аллан, Р. Дж., Клиз ван Дам, К., Смит, В., Тайер, Р. П., Тодоров, ИТ, Эммерих, В., Чепмен, К., Паркер, С.К., Мармье, А., Александров, В.Н., Льюис, Г.Дж., Хасан, С.М., Тандаван, А., Райт, К., Кэтлоу, CRA, Бланшар, М., Де Лиу, Н.Х., Ду, З., Прайс, Г.Д., Бродхольт, Дж. И Альфредссон , М. (2005) Проект eMinerals: разработка концепции виртуальной организации для поддержки совместной работы над моделированием окружающей среды в молекулярном масштабе. В: Proceedings of the UK e-Science All Hands Meeting 2005, Nottingham.

Дав, М.Т., Уайт, Т.О., Брюин, Р.П., Такер, М.Г., Каллея, С., Артачо, Э., Мюррей-Раст, П., Тайер, Р. П., Тодоров, И.Т., Аллан, Р.Дж., Клиз ван Дам, К., Чепмен, К., Смит, В., Эммерих , W., Parker, SC, Lewis, GJ, Hasan, SM, Thandavan, A., Alexandrov, VN, Blanchard, M., Wright, K., Catlow, CRA, de Leeuw, NH, Alfredsson, M., Price , Г.Д. и Бродхольт, Дж. (2005) escience юзабилити: опыт eMinerals. В: Proceedings of the UK e-Science All Hands Meeting 2005, Nottingham.

Голубь, М., Александров, В., Льюис, Г. и Хасан, С.М. (2004) Инструменты для совместной работы в поддержку виртуальной организации eMinerals. В: Протоколы собрания всех рук, Ноттингем.

Плакс, Т. П., Мегсон, Г. М., Каденас Медина, Дж. О. и Александров, В. Н. (2003) Процессор линейной алгебры, использующий методы Монте-Карло. В: Международная конференция MAPLD, 2003 г., 9-11 сентября 2003 г., Вашингтон, округ Колумбия, США.

Голубь, М.T., Calleja, M., de Leeuw, N.H., Allan, R. J., van Dam, K.K., Alexandrov, V.N., Thandavan, A., и Hasan, S.M. (2003) Окружающая среда на молекулярном уровне: проект испытательного стенда. В: Proceedings of UK e-Science All Hands Meeting 2003.

Забронировать

Александров, В. (2009) Расширенные масштабируемые алгоритмы для сложных архитектур. ACM International Conference Proceeding Series, 433. ACM.ISBN 9781605589862 DOI: https://doi.org/10.1145/1731740.1731746

Александров В. Н., ван Альбада Г. Д., Слоот П. М. и Донгарра Дж., Ред. (2006) Вычислительные науки: ICCS 2006. Том 1-4. Springer. ISBN 9783540343790 DOI: https://doi.org/10.1007/11758525

Сипос, Г., Немет, К., Льюис, Г.Дж., Александров, В.Н., Кацук, П. (2005) Выполнение грид-приложений на основе рабочих процессов с помощью портала P-GRADE для совместной работы. Труды собрания всех участников британской электронной науки 2005 г. НЕОПРЕДЕЛЕННЫЕ.

Александров, В. Н., Донгарра, Дж. Дж., Джулиано, Б. А., Реннер, Р. С. и Тан, К. Дж. К., ред. (2001) Вычислительные науки — ICCS 2001: Международная конференция Сан-Франциско, Калифорния, США, 28–30 мая 2001 г. Труды, часть I. Конспект лекций по информатике, 2073. Springer, pp1306. ISBN 3540422323

Александров, В.Н., Донгарра, Дж. Дж., Джулиано, Б. А., Реннер, Р. С. и Тан, К. Дж. К., ред. (2001) Вычислительные науки — ICCS 2001: Международная конференция Сан-Франциско, Калифорния, США, 28–30 мая 2001 г. Труды, часть II. Конспект лекций по информатике, 2074 г. Спрингер, стр 1069. ISBN 3540422331

Этот список был создан сб, 20 февраля, 06:42:13 2021 UTC .

Реокклюзия артерии у больных с инсультом, получавших внутривенное введение тканевого активатора плазминогена

Реферат

Справочная информация: Повторная окклюзия артерии систематически не изучалась, несмотря на тот факт, что 13% пациентов в испытании rt-PA Национального института неврологических заболеваний и инсульта ухудшились после первоначального улучшения, что позволяет предположить, что повторная окклюзия может быть причиной плохого клинического исхода у некоторых из этих пациентов.

Методы: Пациенты с последовательным инсультом, получавшие внутривенное введение тканевого активатора плазминогена (TPA) в течение 3 часов, и окклюзию средней мозговой артерии (MCA) M1 или M2 на транскраниальной допплерографии (TCD) до TPA наблюдались в течение 2 часов после Болюс TPA. Повторная окклюзия определялась как уменьшение тромболизиса при ишемии головного мозга на ≥1 балл и отсутствие кровотечения при повторной компьютерной томографии. Шкала инсульта NIH (NIHSS) и модифицированная шкала Рэнкина (mRS) были получены неврологом независимо от TCD.

Результаты: Шестьдесят пациентов со средним баллом по шкале NIHSS перед болюсом 16 (диапазон от 6 до 28, 90% с ≥10 баллами) получили болюс TPA через 130 ± 32 минуты (в среднем 120 минут, 58% в течение первых 2 часов) . Реканализация была полной у 18 (30%), частичная — у 29 (48%) и отсутствовала у 13 (22%) пациентов. Реокклюзия произошла у 34% пациентов с любой начальной реканализацией (16/47): у 4 из 16 пациентов с полной реканализацией (22%) и у 12 из 29 пациентов с частичной реканализацией (41%). Повторная окклюзия была обнаружена у четырех пациентов (25%) до болюса TPA, у трех (19%) через 30 минут после болюса, у трех (19%) к концу инфузии и у шести (37%) через 60-120 минут. . До повторной окклюзии у этих пациентов медиана времени реканализации была более ранней: 130 против 180 минут после начала инсульта по сравнению с пациентами, которые реканализировали без повторной окклюзии ( p = 0,01). Средний балл prebolus по NIHSS в группе повторной окклюзии составил 13,5 против 17 (покой, NS), тогда как через 2 и 24 часа их баллы по NIHSS были выше: 14 против 9 и 16 против 6 баллов ( p ≤ 0.04). Ухудшение с последующим улучшением на ≥4 балла по шкале NIHSS произошло у 8 из 16 (50%) пациентов с повторной окклюзией по сравнению с 10% (остальные) ( p <0,05). Внутрибольничная летальность составила 25 против 3% ( p <0,0001). Через 3 месяца хороший результат (оценка mRS от 0 до 1) был достигнут у 8% пациентов без реканализации, у 33% пациентов с повторной окклюзией и у 50% пациентов со стабильной реканализацией ( p ≤ 0,05). летальность составила 42% без ранней реканализации, 33% после повторной окклюзии и 8% у пациентов со стабильной реканализацией ( p ≤ 0.05).

Выводы: Ранняя повторная окклюзия встречается у 34% пациентов, получавших TPA, при любой начальной реканализации, что составляет две трети ухудшений после улучшения. Реокклюзия чаще возникает у пациентов с более ранней и частичной реканализацией, что приводит к ухудшению неврологического статуса и более высокой внутрибольничной летальности. Однако пациенты с реокклюзией имеют лучшие отдаленные результаты, чем пациенты без какой-либо ранней реканализации.

МЕТАСПЕЙС: общественная база знаний о пространственных метаболомах в здоровье и болезнях

Введение

Метаболиты, липиды и другие небольшие молекулы играют важную структурную, энергетическую и регулирующую роль практически во всех клеточных процессах ¹ .Их локализация специфична для отдельных клеток, типов клеток, тканей и органов, регулируется во времени и пространстве и в то же время регулирует гомеостаз в здоровье и репрограммирование при болезни ² . Изучение роли метаболитов в их естественном пространственном контексте является границей исследований метаболизма, которые недавно привели к захватывающим открытиям в области рака ³ , иммунитета ⁴ , микробиома ⁵ и исследований стволовых клеток ⁶ . Однако пространственные исследования метаболизма сложны и вряд ли могут быть выполнены с использованием традиционных методов метаболомики или визуализации.Благодаря этому спросу, пространственная метаболомика превратилась в междисциплинарный подход, сочетающий нецелевое обнаружение метаболитов in situ с вычислительными подходами, помогающими интерпретировать сгенерированные большие пространственные данные.

Известной технологией пространственной метаболомики является масс-спектрометрия с визуализацией (МС с визуализацией), при которой анализируются масс-спектры из растра пикселей по срезу ткани, причем каждый масс-спектр представляет относительное содержание молекул в соответствующем пикселе. Последние достижения в области отбора проб с поверхности, масс-спектрометрии и биоинформатики сделали визуализацию МС методом выбора для пространственной метаболомики в различных биомедицинских и фармакологических приложениях ^7–10 . Визуализирующий МС имеет пространственное разрешение, близкое к одноклеточному, 1,4 мкм на коммерческом оборудовании ¹¹ , пропускную способность для анализа среза ткани за минуты ¹² , высокую специфичность при использовании высокого разрешения по массе ¹³ , чувствительность к обнаруживать небольшие молекулы при физиологических микромолярных концентрациях ¹⁴ и способность обнаруживать различные классы молекул, включая аминокислоты, промежуточные продукты метаболизма центрального углерода, свободные жирные кислоты, различные липиды и нейротрансмиттеры ¹⁵ .До недавнего времени прогрессу и применению визуализации МС препятствовало отсутствие алгоритмов идентификации метаболитов, а именно для связывания пиков ионов и изображений с соответствующими молекулами. Недавно мы обратились к этой проблеме и опубликовали метод достоверной аннотации метаболитов ¹³ .

Здесь мы представляем METASPACE, общедоступную базу знаний о пространственных метаболомах в состоянии здоровья и болезней, созданную большим сообществом пользователей (рис. 1a).Краеугольным камнем METASPACE является вычислительный механизм для аннотации метаболитов, который ищет метаболиты, липиды и другие небольшие молекулы в наборе данных для визуализации MS. Механизм оценивает коэффициент ложного обнаружения (FDR) аннотаций метаболитов, который обеспечивает контроль качества и, как показано в других комиксах ¹⁶ , делает аннотированные пространственные метаболомы сопоставимыми между наборами данных, экспериментами и лабораториями ¹³ . Мы создали удобное веб-приложение для отправки данных и интерактивного исследования аннотированных изображений метаболитов.Публикуя свои результаты публично, пользователи METASPACE совместно создали и постоянно пополняют базу знаний о пространственных метаболомах.

Рисунок 1.

METASPACE — это основанная сообществом база знаний о пространственных метаболомах на основе изображений МС, которая объединяет облачный движок для аннотации метаболитов и веб-приложение для визуализации, исследования и обмена аннотированными изображениями метаболитов. А . Концепция и рабочий процесс METASPACE. Б-Э . Количество представлений и свойства представленных наборов данных. Ф . Гистограмма предполагаемого охвата визуализирующей МС (количество аннотаций в наборе данных при FDR 10%). Г . Гистограмма предполагаемого динамического диапазона визуализации МС (соотношение между интенсивностями наиболее и наименее интенсивных аннотаций для каждого набора данных). H. Гистограмма распространенности аннотаций (количество наборов данных, в которых молекула была аннотирована FDR 10%). Я . Снимок экрана веб-приложения METASPACE, показывающий распределение глутатиона в срезе всего тела мыши, предоставленный Матье Годеном, Сервье (ссылка на набор данных, ссылка на показанное изображение метаболита). J. Скриншот веб-приложения, на котором показаны все наборы данных из срезов всего тела, предоставленные одной лабораторией, здесь — фармацевтической компанией Servier (ссылка).

Результаты

Механизм

В основе METASPACE лежит высокоэффективный механизм, реализующий наш недавний метод аннотации метаболитов на основе MS1 для визуализации MS ¹³ (рис. 1a). Движок имеет открытый исходный код и использует технологии вычислений больших данных для масштабируемой параллельной обработки в облачной среде (https: // github.com / metaspace2020). После получения набора данных МС для визуализации в центроидном формате imzML ¹⁷ , движок просматривает молекулы из более чем десяти общедоступных баз данных метаболомики или липидомики, включая HDMB ¹⁸ , ChEBI ¹⁹ , LIPID MAPS ²⁰ , SwissLipids ²¹ и предоставляет молекулярные аннотации на уровне молекулярной формулы (Уровень 2 согласно Инициативе стандартов метаболомики ²² ). Аннотирование набора данных размером 10 ГБ занимает менее 10 минут в облачном кластере по умолчанию.Для каждой аннотации метаболита механизм предоставляет его молекулярную формулу, ионный аддукт и изображение иона метаболита. Важно отметить, что он также предоставляет все изомерные молекулярные структуры, соответствующие этой формуле, в проверенной базе данных, что помогает понять изомерную неоднозначность результатов. Оценка соответствия метаболит-сигнал (MSM) ранжирует молекулярные формулы по их вероятности ¹³ . Расчетное значение FDR количественно определяет достоверность результатов и делает их сопоставимыми между наборами данных.Важно отметить, что аннотации, контролируемые FDR, служат для контроля качества, поскольку механизм не предоставляет аннотаций или предоставляет лишь несколько аннотаций для наборов данных низкого качества, например когда масс-спектры смещены или неправильно откалиброваны ¹³ . В целом, этот механизм обеспечивает быстрый и всесторонний поиск метаболитов, липидов и малых молекул в данных визуализации МС и, обеспечивая еще недостающую емкость, устраняет разрыв между технологией визуализации МС и биомедицинскими приложениями.

База знаний

База знаний METASPACE — это общедоступный ресурс, содержащий общедоступные результаты работы механизма аннотаций, причем каждый набор данных включает аннотации метаболитов, изображения метаболитов и связанные метаданные.Пользователи могут опубликовать результаты либо во время отправки, либо позже. По состоянию на январь 2019 года база знаний включает более 6 миллионов изображений метаболитов от более чем 140 участников из более чем 70 лабораторий, которые уже представили более 3200 общедоступных наборов данных срезов тканей различных организмов (человека, мыши, крысы и т. Д.) И органов (печень, мозг). , грудь и т. д.), а также другие образцы (рис. 1b-d). METASPACE включает данные всех основных технологий МС для получения изображений сверхвысокого разрешения (MALDI-, DESI-, IR-MALDESI-, в сочетании с анализаторами Orbitrap и FTICR) и протоколы подготовки образцов с различными представленными матрицами MALDI (рис. 1e).Каждый набор данных снабжен метаданными (дополнительный рисунок S1), описывающими образец, подготовку образца и масс-спектрометрию, которые позволяют выполнять поиск, фильтрацию или крупномасштабный анализ. Доступ к базе знаний можно получить либо интерактивно через веб-приложение, либо программно (см. «Python-client» на https://github.com/metaspace2020/metaspace).

База знаний METASPACE, представляющая собой большой набор данных из различных лабораторий, помогает понять современное состояние визуализации МС. Ключевым преимуществом визуализации МС для нецелевого анализа является высокий молекулярный охват (или количество и типы молекул, обнаруживаемые в одном эксперименте).Используя METASPACE, мы количественно оценили охват как количество аннотаций на набор данных при FDR 10% и продемонстрировали, что действительно, визуализирующая MS имеет высокий охват, обнаруживая до 10 ³ аннотаций, причем наиболее распространенные числа находятся в небольших сотнях (рисунок 1f). . Мы также количественно оценили динамический диапазон визуализации МС как соотношение между интенсивностями наиболее и наименее распространенных аннотированных молекул и продемонстрировали, что визуализирующая МС имеет динамический диапазон до 5 порядков величины с наиболее распространенными значениями около 10 ³ ( Рисунок 1g). Другой вопрос, ответ на который в противном случае требует обширных экспертных знаний или литературного поиска, заключается в том, поддается ли обнаружению конкретная молекула с помощью визуализации МС и насколько сложно ее обнаружить. Используя METASPACE, можно запросить молекулу либо по ее имени, либо по молекулярной формуле; последнее рекомендуется во избежание двусмысленности в названиях молекул. Например, поиск глутатиона в FDR 10% дает 519 аннотаций из 18 лабораторий (ссылка на изображения глутатиона). Интересно, что гистограмма молекулярной распространенности показывает, что глутатион является одной из наиболее распространенных молекул в METASPACE (рис. 1h).Для сравнения, поиск креатинина при FDR 10% возвращает только 26 аннотаций (ссылка на все изображения креатинина), которые указывают на то, что обе молекулы поддаются обнаружению, но креатинин вряд ли будет обнаружен в данных. Дальнейшее изучение метаданных может показать типы образцов и технологий (например, источник, полярность или матрица MALDI), которые содержат или помогают обнаружить интересующую молекулу.

Веб-приложение

Основным способом доступа к METASPACE является веб-приложение для интерактивного исследования и совместного использования пространственных метаболомов (http: // metaspace2020.eu / # / annotations). Веб-приложение можно открыть в любом веб-браузере для отправки данных, доступа к результатам, просмотра молекулярных изображений, наложения на них изображения микроскопа, выполнения молекулярного поиска и поиска по метаданным, фильтрации наборов данных по их метаданным, организации собственных наборов данных в проекты, а также для обмена проекты, наборы данных или отдельные изображения с использованием постоянных ссылок (рис. 1i-j). Не считая нашей команды, веб-приложение ежемесячно обслуживает 10 000–25 000 просмотров страниц или 600–1000 сеансов, причем большинство посетителей из США (30%), Германии (24%), Франции (7%) и Великобритании ( 7%) (дополнительный рисунок S2).На рисунке 2 приведены основные сценарии изучения изображений метаболитов в METASPACE, иллюстрирующие их изображениями различных кишечных метаболитов из срезов тканей всего тела животных. Учитывая интересующую молекулу (например, таурохолевая кислота, желчная кислота, солюбилизирующая жиры в кишечнике; рис. 2а), можно просматривать другие молекулярные изображения из того же набора данных для поиска совместно локализованных (например, аргинина, известного кишечного метаболита; рис. 2b) . Затем можно визуализировать структурно связанные молекулы в том же наборе данных (например,грамм. аргинил-аспартат; Рисунок 2в).

Рис. 2.

Сводка ключевых сценариев исследовательского анализа изображений метаболитов в базе знаний METASPACE, как показано на различных кишечных метаболитах в разделах модели всего тела на животных. A. Таурохолевая кислота, желчная кислота, солюбилизирующая жиры в кишечнике, имеет соответствующую локализацию. B. Аргинин, известный кишечный метаболит, можно найти в том же наборе данных по его совместной локализации с таурохолевой кислотой. С. Дипептид аргиниласпартата, молекула, структурно подобная аргинину, обнаруживает аналогичную локализацию, что потенциально указывает на метаболизм аргинина в кишечнике. D. Локализация тарохолевой кислоты в кишечнике в другом наборе данных является дополнительным подтверждением ее связи с этой анатомической областью. E. Гликохолевая кислота, другая желчная кислота, также обнаруживает локализацию в кишечнике крысы. Данные предоставлены Ширин Шахиди-Латам, Genentech (ссылка), Марком Бокхартом, Университет штата Северная Каролина (ссылка), и Матье Годен, Сервье (ссылка).Оценка совместной локализации, как описано в разделе «Методы». MCS Tanimoto означает максимальное общее расстояние Танимото между молекулярными структурами.

Чтобы подтвердить связь между интересующей молекулой (например, таурохолевой кислотой) и анатомической или гистологической областью, можно визуализировать ее локализацию в другом наборе данных (например, локализация таурохолевой кислоты в кишечнике в другом наборе данных; рис. 2d). Дальнейшее изучение других наборов данных может выявить молекулы, которые похожи по структуре, но связаны с одной и той же анатомической областью (например,грамм. гликохолевая кислота, желчная кислота, обнаруживается в кишечнике на срезе всего тела крысы; Рисунок 2д).

Изучение пространственных метаболомов на уровнях тканей и органов

В тематическом исследовании мы исследовали, как визуализирующее содержимое METASPACE может генерировать или поддерживать гипотезы о локализации молекул в определенных органах. Мы начали анализ с изучения данных срезов моделей всего тела на животных, которые изначально использовались для разработки лекарств. Для проверки мы подготовили, визуализировали и исследовали срез ткани, имитирующий органы, содержащий шесть лунок, залитых желатином, каждая из которых содержала гомогенированную ткань мыши из одного из шести органов (печень, сердце, мышцы, легкие, почки и мозг) в соответствии с ранее опубликованными протокол ²³ .

Сначала мы исследовали молекулярные изображения глутатиона (GSH), основного эндогенного антиоксиданта, широко распространенного в METASPACE (рис. 3а). В срезах всего тела мыши и крысы GSH локализуется преимущественно в печени, а также в слюнных железах, легких, стенке кишечника и семенниках. Интересно, что GSH обнаружил отчетливую локализацию в глазу на срезе всего тела крысы. Анализ среза ткани, имитирующей органы, подтвердил высокое содержание в печени по сравнению с другими органами со следами в легких и сердце.Это подтверждает сообщения о том, что GSH в основном синтезируется в печени ²⁴ с высокой (до 7 мМ) концентрацией в этом органе ²⁵ . Известно, что GSH в изобилии присутствует в семенниках, выполняя различные функции, от антиоксидантной защиты половых клеток до вклада в синтез белка и мейоз ²⁶ . GSH в глазах поддерживает гидратацию и защищает от химического и окислительного стресса ²⁷ . Затем мы исследовали пространственные аспекты баланса между GSH и окисленным глутатионом (GSSG), который имеет решающее значение для гомеостаза.В разрезе всего тела мыши, по сравнению с GSH, GSSG имеет более сильную связь с печенью. Ткань, имитирующая органы, показывает GSSG только в печени. При сравнении локализации GSH и GSSG в срезе печени крысы, проанализированном с высоким пространственным разрешением (20 мкм), GSH и GSSG обнаруживают совершенно разные и взаимодополняющие локализации (рис. 3e). Эти изображения, вероятно, распознают локализацию GSH внутри клеток, где происходят его синтез и окисление, и внеклеточную локализацию продуцируемого GSSG, перекачиваемого во внеклеточный компартмент ^{25, 28} .

Рисунок 3.

Два тематических исследования, изучающих пространственные метаболомы на уровнях тканей и органов для глутатиона ( A-E ) и лизофосфатидилэтаноламина LysoPE (22: 6), эстерифицированной формы докозагексаеновой кислоты (DHA). Глутатион (GSH) локализуется в печени, слюнной железе, семенниках, кишечнике и легких, как показано на срезах всего тела мыши ( A ) и крысы ( B ) и тканях, имитирующих органы ( D ). . C. Окисленный глутатион (GSSG) локализуется преимущественно в печени. E. Данные более высокого пространственного разрешения для печени крысы показывают различные и дополнительные локализации GSH и GSSG, вероятно, отражающие их ожидаемые внутриклеточные и внеклеточные концентрации; масштабная линейка 500 мкм. Ф-Х. LysoPE (22: 6) локализуется в головном мозге, глазах, спинном мозге, печени и сердце срезов всего тела мыши ( F ) и ткани, имитирующей органы ( G ). H. Изображения с более высоким пространственным разрешением показывают локализацию LysoPE (22: 6) в сером веществе мозга. И-Дж. Изображения высокого содержания DHA в мозге и глазах срезов всего тела мыши. K. LysoPC (22: 6), другой липид, хранящий DHA, менее специфичен для мозга. Данные предоставлены Матьё Годен, Сервье (A, B, C, F, I, J,), Кристина Гонсалес, EMBL (D, G), Марина Рейтер, Sanofi (E GSH, E GSSG), Sheerin Shahidi-Latham, Genentech (F, K), Шейн Эллис, M4I (H), Марио Компауэр, JLU Giessen (H), Майкл Беккер, Bruker (H). Шкала для a-c , f, i-k 10 мм; шкала для h 1 мм.У каждого изображения своя шкала интенсивности.

Затем мы исследовали молекулярные изображения лизофосфатидилэтаноламина LysoPE (22: 6). Этот липид, иногда называемый LysoPE-DHA, особенно интересен, потому что он представляет собой этерифицированную докозагексаеновую кислоту (DHA), преобладающую полиненасыщенную жирную кислоту омега-3 с многочисленными функциями в познании, раке, воспалении и иммунитете ²⁹ . LysoPE (22: 6) обнаруживает различные локализации в головном мозге срезов всего тела мыши со следами в глазах, печени, сердце и спинном мозге (рис. 3b).Орган-миметическая ткань также показывает самую высокую концентрацию LysoPE (22: 6) в головном мозге с более низкой интенсивностью в печени, почках и сердце. Изображения с более высоким пространственным разрешением из разных лабораторий воспроизводимо ассоциируют LysoPE (22: 6) в сером веществе. Это согласуется с сообщениями о том, что DHA является наиболее распространенной полиненасыщенной жирной кислотой в головном мозге ³⁰ и что при пересечении гематоэнцефалического барьера она быстро включается в фосфолипиды, в частности, в фосфатидилэтаноламины ³¹ . Молекулярные изображения DHA в срезах всего тела подтверждают это, а также подчеркивают его локализацию в сетчатке, где DHA, как известно, играет структурные и защитные роли ³² . Мы также исследовали молекулярные изображения лизофосфатидилхолина LysoPC (22: 6) или LysoPC-DHA, другой запасной молекулы DHA (рис. 3b, также другие изображения в METASPACE). Интересно, что локализация LysoPC-DHA кардинально отличается от LysoPE-DHA с интенсивностью не только во всем мозгу и глазах, но также в мышцах, печени, почках и сердце.Можно предположить, что это связано с ролью LysoPC-DHA как носителя DHA ³³ . Однако LysoPC-DHA не был обнаружен в кровеносных сосудах (см. Локализацию карнитина в том же участке), что может указывать на другую преобладающую функцию LysoPC-DHA в этих органах.

Крупномасштабный анализ пространственных метаболомов

Используя молекулярную сеть METASPACE, мы демонстрируем, как крупномасштабный анализ больших полуструктурированных данных из METASPACE помогает вывести биологически релевантные знания (рисунок 4, дополнительный рисунок S3). Организация сети из двух отдельных частей, каждая из которых содержит наборы данных, собранные с использованием отрицательной или положительной ионной полярности (рисунок 4a, дополнительный рисунок S4), предполагает, что полярность ионов является основным фактором молекулярного содержания при визуализации МС. Каппа-анализ Коэна подтвердил, что полярность ионов действительно является наиболее предсказуемым фактором, а следующие факторы — лаборатория и орган (каппа 0,95, 0,85 и 0,77 соответственно; дополнительная таблица S1). Это согласуется с другими нецелевыми масс-спектрометрическими анализами, в которых сообщается, что 90% малых молекул обнаруживаются только в режиме одной полярности ионов ³⁴ Обратите внимание, что в METASPACE факторы метаданных могут быть смешаны и должны интерпретироваться с осторожностью (например,грамм. данные для лимфатического узла пока предоставлены только одной лабораторией). Однако для некоторых органов, в частности для мозга, METASPACE уже содержит достаточное количество образцов, позволяющих отличить его от других органов, как показано в подсети образцов мозга из 26 лабораторий (рис. 4b).

Рисунок 4.

Масштабный анализ пространственных метаболомов в METASPACE. A. Молекулярная сеть METASPACE, показывающая все наборы данных, организованные по их молекулярному сходству.Узел представляет один набор данных. Ребро соединяет два набора данных с молекулярным сходством более 0,35. Наборы данных окрашены выбранным органом. B. Подсеть, связанная с мозгом, представляющая данные из 27 лабораторий. C. Подсеть наборов данных, содержащих N-ацетиласпарагиновую кислоту. D. Локализация N-ацетиласпарагиновой кислоты в срезе всего тела мыши; шкала 10 мм. См. Дополнительные рисунки S3-S6 для увеличения изображения. Данные в D предоставлены Ширин Шахиди-Латам, Genentech (ссылка).

Используя tf-idf моделирование, мы обнаружили характерные и уникальные для мозга молекулярные маркеры молекул: 3-O-сульфогалактозилцерамид (d36: 0), фосфатидилэтаноламин PE (P-38: 1), фосфосерин PS (36: 1). , ганглиозиды GM1 (38: 1) и (36: 0) и сложные эфиры холестерина (дополнительная таблица S2). Кроме того, мы провели анализ обогащения для определения характерных молекулярных классов. Для данных, проанализированных в режиме отрицательных ионов, это были сульфатиды, фосфатидилинозитолы, LysoPE, PE, моноацилглицерофосфаты (LysoPA и CPA), PS и фосфатидилглицерины среди других классов (дополнительная таблица S3).Для режима положительных ионов это были сфингомиелины и другие фосфинголипиды и фосфатидилглицерофосфаты (дополнительная таблица S4). Интересно, что одни и те же диацилглицерофосфаты (фосфатидные кислоты PA (32: 0), PA (36: 4), PA (34: 2), PA (34: 1), PA (36: 2)) были обнаружены и оказались характерными в обоих режимах. Было обнаружено, что фосфатидилхолины характерны для обоих режимов с ок. в два раза выше оценка обогащения и количество обнаружений в положительном режиме. Мы также обнаружили органоспецифические маркеры для почек, легких, печени и глаз (см. Дополнительную таблицу S2).Маркерами почек были: L-карнитин (или изомер), бетаин (или изомеры), 3-O-сульфогалактозилцерамид (d34: 1), сульфат холестерина, уридин (или псевдоуридин) и ганглиозид GM2 (d44: 0). Маркерами для печени были: линолевая кислота (или конъюгированная линолевая кислота), диацилглицерин DG (34: 1) и желчная кислота. С продолжающимся ростом METASPACE мы ожидаем получить достаточно данных для создания всеобъемлющих органоспецифичных молекулярных атласов для этих и других органов.

Молекулярная сеть METASPACE может помочь исследовать связи между метаболитами и заболеванием.На рисунке 4c показана подсеть, показывающая только наборы данных, содержащие N-ацетиласпарагиновую кислоту (NAA). NAA является второй по распространенности аминокислотой в головном мозге ³⁵ , что проиллюстрировано ее локализацией в срезе всего тела мыши (рис. 4d). Интересно, что NAA была обнаружена не только в головном мозге, но и в двух когортах рака яичников: лабораторией Takats, Имперский колледж Лондона, и лабораторией Эберлина, Техасский университет в Остине. Это, вместе с тем фактом, что NAA не была обнаружена этими лабораториями в других когортах рака (рис. 4c), указывает на его потенциальную связь с раком яичников. Это подтверждает недавний отчет, связывающий NAA с уменьшением выживаемости пациентов с высокозлокачественным серозным раком яичников ³⁶ .

Скрининг лекарств и их метаболитов

METASPACE помогает аннотировать и исследовать изображения не только эндогенных, но и экзогенных молекул, особенно лекарств или других биоактивных соединений, необходимых при разработке лекарств. По состоянию на январь 2019 года семь фармацевтических компаний публично предоставили 101 набор данных (ссылка на все наборы данных). В качестве примера мы изучили опубликованный набор данных, который первоначально использовался для пространственного количественного определения лекарств в печени крысы ¹⁴ (ссылка на набор данных, рисунок 5).Используя METASPACE, мы воспроизвели исходные результаты ¹⁴ , показывающие, что эрлотиниб в печени животных, получавших кассету, и оланзапин, получал как кассетную, так и дискретную дозу. Более того, при поиске метаболитов оланзапина в базе данных ¹⁸ DrugBank (рис. 5b) мы обнаружили метаболиты оланзапина (изомерный 7-гидроксиоланзапин и 2-гидроксиметилоланзапин, а также 4′-N-десметилоланзапин), о которых не сообщалось в оригинальная публикация (рис. 5c).Их присутствие в срезах печени, но не в ткани, имитирующей стандарты лекарственного средства, подтверждает ожидаемый метаболизм оланзапина in vivo . Эти изображения могли быть пропущены либо из-за целенаправленного поиска только оланзапина, либо из-за меньшей интенсивности метаболитов по сравнению с оланзапином (на один и два порядка соответственно). Это тематическое исследование демонстрирует потенциал METASPACE в поддержке разработки лекарств, а также в создании дополнительной ценности из предоставленных общедоступных данных.

Рисунок 5.

METASPACE помогает локализовать лекарство и их метаболиты в тканях. A : Оптическое изображение срезов печени пяти животных, включая контроль, кассетную дозу 2 ч после и 6 ч, дискретное (только оланзапин) 2 ч и 6 ч, а также срез ткани, имитирующей печень, со стандартами лекарств; адаптировано из оригинальной публикации ¹⁴ B : Метаболизм оланзапина согласно данным DrugBank (https://www. drugbank.ca/drugs/DB00334). C : Молекулярные изображения, представленные в исходной публикации ¹⁴ и полученные с помощью METASPACE, показывают, что METASPACE обнаруживает не только оланзапин, но и его in vivo метаболиты .Данные предоставлены John Swales и Nicole Strittmatter, AstraZeneca (ссылка на изображения оланзапина и его метаболитов). Масштабная линейка 20 мм.

Онлайн-методы

Механизм аннотаций

Механизм аннотаций — это высокопроизводительная реализация нашего вычислительного метода аннотации метаболитов, опубликованного ранее ¹³ . Дизайн движка следует парадигме устойчивых распределенных наборов данных и реализован с использованием инфраструктуры Apache Spark и привязки pySpark.Механизм развертывается в облаке Amazon Web Services и использует кластер из нескольких облачных инстансов, обычно три инстанса AWS c4.2xlarge, каждый с 8 виртуальными ЦП и 15 ГиБ памяти. Движок с открытым исходным кодом, доступен на GitHub (https://github. com/metaspace2020/metaspace, репозиторий «движок») и разработан командой профессиональных разработчиков программного обеспечения, следуя современным методам разработки программного обеспечения, включая гибкую разработку, модульное тестирование, интеграционное тестирование. и обзор кода. Механизм принимает в качестве входных данных набор данных МС центроидированной визуализации в формате imzML ¹⁷ , молекулярную базу данных, включая молекулярные формулы и ионные аддукты.Для каждого иона механизм прогнозирует его тонкую изотопную структуру с учетом разрешающей способности, обеспечиваемой при отправке, и использует допуск 3 ppm для извлечения m / z-изображений четырех основных пиков из файла imzML. Для аннотации метаболомики и липидомики доступно несколько молекулярных баз данных. База данных человеческого метаболизма, HMDB, ¹⁸ используется в качестве базы данных по умолчанию при скрининге метаболитов в образцах моделей человека и животных. Мы также подготовили HMDB-эндогенную версию HMDB, которая содержит только те молекулы, которые помечены в HMDB как эндогенные (свойство HMDB «Источник» равно «Эндогенный»), чтобы уменьшить вероятность ложноположительных результатов при скрининге на эндогенные метаболиты. Другая импортированная база данных, Chemical Entities of Biological Interest, ChEBI, ¹⁹ , рекомендуется для интеграции результатов с другими -omics, поскольку ее химические объекты организованы в химическую онтологию, связанную с GeneOntology, UniProt и базой данных ферментов BRENDA. Для аннотирования липидов мы импортировали базы данных LIPID MAPS ²⁰ и SwissLipids ²¹ . По запросам пользователей мы также импортировали базы данных по конкретным видам, такие как PAMDB для метаболитов Pseudomonas aeruginosa ⁴⁵ и ECMDB для Escherichia coli ⁴⁶ .

База знаний и веб-приложение

База знаний METASPACE — это набор общедоступных результатов аннотаций метаболитов, предоставленных пользователями. В основе базы знаний лежит облачное программное обеспечение, которое объединяет следующие сервисы, работающие индивидуально и взаимодействующие друг с другом через REST API с использованием интерфейса GraphQL: 1) механизм аннотации метаболитов, описанный ранее, 2) сервис, содержащий и предоставляющий молекулярные базы данных , 3) веб-приложение для отправки данных, а также просмотра и обмена результатами, и 4) API для программного доступа к аннотациям и метаданным («engine», «mol-db», «webapp», «python-client» репозитории на https: // github. com / metaspace2020 / metaspace соответственно). Важным компонентом базы знаний, который обеспечивает повторное использование данных в будущем, являются метаданные, предоставленные для каждого набора данных во время подачи (дополнительный рисунок МЕТАДАННЫЕ). Требуемые метаданные включают информацию об образце (организм, орган, состояние), подготовке образца (стабилизация образца, модификация ткани, матрица MALDI, напыление матрицы), масс-спектрометрии (источник, анализатор, разрешающая способность по массе) и контактную информацию участника (лаборатория , ФИО, главный исследователь).Хранение результатов аннотации метаболитов организовано для устойчивой обработки больших данных и включает реляционную базу данных PostgreSQL для согласованного хранения и поисковую систему ElasticSearch для быстрого выполнения запросов и доступа. По оценкам, ElasticSearch как минимум в 10 раз быстрее PostgreSQL для нашего типа и размера данных. Этот высокопроизводительный доступ особенно полезен, поскольку база знаний включает в себя большое количество аннотаций (более 6 миллионов по состоянию на январь 2019 года). Для выгрузки данных мы используем сервис выгрузки больших данных, который перезапускается в случае прерывания соединения.Файлы imzML хранятся в хранилище Amazon S3. Веб-приложение реализовано с использованием инфраструктуры JavaScript Vue.js и обеспечивает отправку данных, просмотр аннотаций, поиск или фильтрацию, а также визуализацию изображений ионов и другой диагностической информации. Веб-приложение использует TypeScript для повышения стабильности и повышения производительности при работе с кодовой базой. GraphQL, язык запросов и обработки данных, используется в качестве интерфейса между службами для предоставления API для веб-приложения, а также для программного доступа к базе знаний.RabbitMQ используется для организации очереди и синхронизации сервисов.

Мы предоставляем возможности управления данными, при которых пользователь должен пройти аутентификацию для отправки и обработки своих личных данных. Пользователи из одной лаборатории могут быть организованы в группы администраторами групп и обмениваться своими личными данными друг с другом. Пользователи также могут организовывать свои данные в проекты, которые могут быть как частными, так и общедоступными. Это позволяет пользователям организовывать данные по связанным экспериментам, а также обмениваться наборами данных для публикации путем создания проекта и совместного использования всех наборов данных из этого проекта с помощью URL-адреса.

Регулярные снимки базы знаний, включая все общедоступные результаты аннотаций, доступны по адресу https://github.com/metaspace2020/pixel-annot-export.

Tf-idf моделирование наборов данных

Для интеллектуального анализа данных мы представили наборы данных METASPACE как векторы в молекулярном пространстве. Вдохновленные подходами обработки естественного языка к кластеризации, классификации и поиску текстовых документов ⁴⁷ , мы смоделировали наборы данных METASPACE как «документы» и молекулярные формулы, аннотированные в наборе данных как «слова».Для каждой молекулярной формулы, аннотированной в наборе данных, мы вычислили статистику (tf-idf), обратную частоте документа , которая количественно определяет, насколько характерна молекулярная формула для этого набора данных по сравнению со всеми другими наборами данных METASPACE. Статистика tf-idf определяется как tfidf ( m, d, D ) = tf ( m, d ) * idf ( m, D ), где m — молекулярная формула, d — это набор данных, а D — это набор всех наборов данных METASPACE.«Частота» каждой молекулярной формулы m («слово» или «термин») в наборе данных d («документ») была определена как обратно пропорциональная значению FDR F , связанному с m дюйм. d: tf ( m, d ) = 100 — F , где F принимает значения 5%, 10%, 20% или 50%. Мы определили idf ( м, D ) как log _n отношения между количеством всех наборов данных D в METASPACE и количеством тех наборов данных, в которых молекулярная формула m была аннотирована с помощью FDR. 50%.В результате мы представили каждый набор данных как вектор tf-idf в пространстве всех молекулярных формул, аннотированных в METASPACE. Библиотека Python gensim v2.3.0 использовалась для расчета векторов tf-idf.

Количественная оценка влияния параметров метаданных на молекулярное содержание

Мы разработали следующий подход для количественной оценки того, насколько параметр метаданных (например, полярность ионов, лаборатория, организм, орган или матрица MALDI) влияет на молекулярное содержание связанных данных.Сначала для каждого параметра метаданных M (например, органа) мы рассмотрели его значения (например, «мозг», «почки» и т. Д.). Для каждого набора данных мы нашли его набор данных первого ближайшего соседа (NN) среди всех наборов данных в соответствии с косинусным сходством в пространстве tf-idf. Результатом этого поиска стали так называемые NN-пары наборов данных. Мы вычислили p _NN , процент NN-пар наборов данных, имеющих одинаковое значение параметра метаданных M (например, для набора данных «мозг» его набор данных NN также является набором данных «мозг»). Затем для каждого набора данных мы случайным образом выбрали другой набор данных, в результате чего были получены так называемые случайные пары. Мы вычислили p _random , процент тех случайных пар, у которых совпадают значения параметра метаданных M . В качестве меры предсказуемости параметра метаданных M во всех наборах данных мы использовали каппу Коэна x = 1 — (1 — p _NN ) / (1 — p _random ) ⁴⁸ . Каппа Коэна — это статистика, подобная фактору обогащения, которая сравнивает наблюдаемую точность с ожидаемой.Каппа Коэна компенсирует случайную вероятность и учитывает различное количество значений параметров и неравномерный размер групп, таким образом, производя значения, сопоставимые между различными параметрами метаданных. Каппа Коэна принимает значения от -1 до 1, и чем выше значение параметра метаданных M , тем выше предсказуемость этого параметра на основе данных или тем выше влияние параметра M на молекулярную структуру. содержание данных.

Сеть подобия данных

Мы разработали молекулярный сетевой подход для представления всех общедоступных наборов данных METASPACE в виде сети на основе их молекулярного содержания.После моделирования всех наборов данных с помощью tf-idf молекулярное сходство между двумя наборами данных было определено как косинусное сходство между их векторами tf-idf. Наборы данных с подобием более 0,35 были соединены краями и визуализированы в программе Cytoscape.

Характерные молекулы

Чтобы найти характерные молекулярные формулы для конкретного набора данных, мы рассмотрели его молекулярные формулы с самыми высокими значениями tf-idf. Чтобы найти характерные молекулярные формулы для группы наборов данных (например,грамм. для конкретного органа) мы рассматривали формулы с наивысшими средними значениями по группе значений tf-idf.

Анализ обогащения молекулярных классов

Чтобы найти молекулярные классы, обогащенные молекулярными формулами, аннотированными в группе наборов данных (например, характерных для определенного органа), мы разработали следующий анализ обогащения на основе моделирования tf-idf. Мы рассмотрели молекулярную таксономию ClassyFire, которая доступна для всех молекул в HMDB ⁴⁹ .Для каждого молекулярного класса C и группы наборов данных G мы определили показатель обогащения как, где | C | — количество молекулярных формул в классе C , M — это набор всех молекулярных формул в METASPACE, tfidf (m, G) — средний балл tf-idf молекулярной формулы m по наборам данных в G и , пробо ( м, C ) = | si ( м, C ) | * | si ( м ) | ⁻¹ — вероятность того, что молекула m относится к классу C с учетом ее структурных изомеров, с | si ( м, C ) | число структурных изомеров молекулы m в классе C и | si ( м ) | число структурных изомеров молекулы m .

Оценка совместной локализации

Чтобы найти ионы, совместно локализованные в наборе данных для интересующего иона, мы использовали следующий метод. Для ионов, аннотированных в наборе данных с FDR <= 50%, мы применили удаление горячих точек путем квантильной пороговой обработки с квантилем 0,99. Затем мы рассчитали оценку совместной локализации как попарное косинусное сходство между пиксельными векторами интенсивности для каждых двух ионов в наборе данных с использованием библиотеки Python gensim v2.3.0 и посчитали верхние ионы наиболее похожими на интересующий ион.

Протеомный скрининг амилоидных белков

Abstract

Несмотря на обширные исследования, прогресс в выяснении биологических функций амилоидов и их роли в патологии в значительной степени сдерживается из-за отсутствия универсальных и надежных биохимических методов для их открытия. Все биохимические методы, разработанные до сих пор, позволяли идентифицировать только амилоидообразующие белки, богатые глутамином / аспарагином, или белки, содержащие амилоиды, которые образуют большие отложения.В этой статье мы представляем протеомный подход, который может позволить идентифицировать широкий спектр амилоид-образующих белков независимо от конкретных особенностей их последовательностей или уровней экспрессии. Этот подход основан на выделении белковых фракций, обогащенных агрегатами амилоида, путем седиментации путем ультрацентрифугирования в присутствии сильных ионных детергентов, таких как саркозил или SDS. Затем осажденные белки разделяют либо с помощью 2D-разностного гель-электрофореза, либо с помощью SDS-PAGE, если они нерастворимы в буфере, используемом для 2D-разностного гель-электрофореза, после чего их идентифицируют с помощью масс-спектрометрии.Мы подтвердили этот подход, обнаружив известные прионы дрожжей и белки млекопитающих с установленной способностью к образованию амилоида, а также выявили дрожжевые белки, образующие нерастворимые в детергенте агрегаты в присутствии человеческого хантингтина с расширенным полиглутаминовым доменом. Примечательно, что, за одним исключением, все эти белки содержали участки, богатые глутамином / аспарагином, что позволяет предположить, что их агрегаты возникли из-за перекрестного посева при полимеризации гентингтином человека. Важно отметить, что хотя подход был разработан на дрожжевой модели, его можно легко применить к любому организму, что представляет собой эффективный и универсальный инструмент для скрининга амилоидных белков.

Образец цитирования: Нижников А.А., Александров А.И., Рыжова Т.А., Миткевич О.В., Дергалев А.А., Тер-Аванесян М.Д., и др. (2014) Протеомный скрининг амилоидных белков. PLoS ONE 9 (12): e116003. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116003

Редактор: Илья В. Баскаков, Медицинский факультет Мэрилендского университета, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 9 октября 2014 г .; Принята к печати: 2 декабря 2014 г .; Опубликован: 30 декабря 2014 г.

Авторские права: © 2014 Nizhnikov et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Авторы подтверждают, что все данные, лежащие в основе выводов, полностью доступны без ограничений. Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: Работа поддержана Программой молекулярной и клеточной биологии Российской академии наук (MDT), грантами Российского фонда фундаментальных исследований (APG № 13-04-01247 и AIA, AAD, MDT). № 14-04-00073) и грант СПб.Правительство Санкт-Петербурга для молодых докторов наук (ААН). Авторы выражают признательность Санкт-Петербургскому государственному университету за исследовательские гранты (0.37.696.2013 и 1.50.2543.2013). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Растущее количество открытий демонстрирует, что амилоиды могут быть функциональной формой белка у широкого круга организмов, от бактерий до млекопитающих. Однако интерес к таким белковым агрегатам по-прежнему в основном вызван их отношением к патологиям человека и животных. На сегодняшний день идентифицировано более 30 амилоидов, связанных с заболеваниями человека [1]. Наиболее распространенными среди этих расстройств являются болезни Альцгеймера, Паркинсона, Хантингтона, сахарный диабет 2 типа и некоторые формы спиноцеребеллярной атаксии и катаракты [2], [3]. Отдельную группу этих заболеваний составляют прионные заболевания, вызываемые инфекционной амилоидной формой прионного белка, называемой PrP ^Sc [4].Самовоспроизводящиеся прионные амилоиды были также описаны у низших эукариот, дрожжей Saccharomyces cerevisiae [5] — [14] и мицелиальных грибов Podospora anserina [15], у которых они определяют нехромосомно наследуемые фенотипы. Примечательно, что, несмотря на значительный прогресс в открытии амилоидов, большинство из них было обнаружено путем анализа белков с последовательностями, аналогичными известным образующим амилоид белков [6], [9], или с помощью трудоемких, а иногда и очень сложных генетических скринингов на факторы, определяющие неменделирующие черты [7], [8], [11], [12]. Это говорит о том, что разработка надежного и универсального биохимического подхода для быстрой идентификации новых амилоид-образующих белков важна и своевременна.

На сегодняшний день биохимические подходы, используемые для идентификации новых амилоидных белков, основаны на их общей способности образовывать нерастворимые агрегаты. Например, прионная форма PrP была обнаружена как главный протеазо-резистентный белковый компонент инфекционных высокомолекулярных агрегатов, выделенных с помощью ультрацентрифугирования [16].Бета-амилоидный пептид (Aβ) был экстрагирован из фракции белкового осадка, полученного из гомогената мозга пациента, умершего от болезни Альцгеймера [17]. К сожалению, такие подходы можно использовать только для идентификации амилоидов, образующих большие отложения.

Общим свойством амилоидных агрегатов является устойчивость к различным детергентам [18] — [20]. Амилоидная природа таких нерастворимых в детергентах агрегатов подтверждается тем фактом, что они часто содержат общие амилоидные эпитопы для связывания ДНК-аптамера [21]. Высокая устойчивость амилоидов к обработке детергентами позволяет выделять амилоид из лизатов дрожжевых клеток путем седиментации в присутствии SDS [22]. Проверка этого метода, проведенная для приона дрожжей [ PSI ⁺ ] (прионная форма Sup35), продемонстрировала его пригодность для идентификации белков, образующих относительно обильные амилоиды. Альтернативный подход, основанный на разделении нерастворимых в SDS амилоидов по их неспособности проникать в полиакриламидный гель и последующей масс-спектрометрии, позволил идентифицировать прионные белки Rnq1 и Ure2, которых меньше, чем Sup35 [23].Тем не менее, оба эти метода позволяют идентифицировать только белки, содержащие амилоиды, которые устойчивы к обработке SDS, в то время как некоторые амилоиды, которые не обогащены остатками Q или N, такие как амилоиды Aβ (1-40aa), растворимы в присутствии SDS [24].

Здесь мы представляем новый протеомный подход для скрининга амилоидных белков, называемый PSIA (протеомный скрининг для идентификации амилоидных белков). Этот подход может использовать SDS или саркозил для выделения амилоида.Мы показываем, что использование саркозила (N-лауроилсаркозинат натрия) вместо SDS для очистки амилоидных агрегатов позволяет выделить амилоиды, которые не выдерживают обработки SDS, что делает этот подход более универсальным, чем те, которые были разработаны ранее. Этот подход был подтвержден на дрожжевой модели путем обнаружения прионных белков и амилоид-образующих белков млекопитающих. Мы также идентифицировали несколько дрожжевых белков, которые образуют нерастворимые в детергенте агрегаты в ответ на экспрессию человеческого хантинтина с расширенным полиглутаминовым доменом.

Результаты

Идентификация дрожжевых прионов и амилоидных белков млекопитающих

Подход

PSIA, разработанный в этом исследовании, состоит из трех основных этапов: выделение устойчивых к детергентам агрегатных фракций (DRAF), отделение белков от DRAF и идентификация разделенных белков. Принципиальная схема подхода представлена ​​на рис. 1. Последовательные этапы PSIA описаны в соответствующих разделах материалов и методов.

Во-первых, мы проверили эффективность нашего подхода к обнаружению белка Rnq1, который является структурной детерминантой дрожжевого приона [ PIN ⁺ ] [7] и человеческого пептида Aβ (1-40 аминокислотных остатков), меченного GFP (далее по тексту обозначаемый как Aβ-GFP), который, как известно, образует амилоидоподобные агрегаты в дрожжевых клетках как в присутствии, так и в отсутствие [ PIN ⁺ ] [25].DRAF из штамма BY4742 [ PIN ⁺ ], экспрессирующего Aβ-GFP, и из его производного [ pin ^—], экспрессирующего неслитый белок GFP, выделяли с использованием 1% SDS. DRAF из тестируемых и контрольных образцов солюбилизировали в буфере UTC (8 М мочевина, 2 М тиомочевина, 4% CHAPS и 30 мМ TrisHCl pH 8,5). Белки из штаммов [ PIN ⁺ ] / Aβ-GFP и [ pin ^— ] / GFP метили флуоресцентными красителями Cy5 и Cy3 соответственно, затем образцы смешивали и анализировали с помощью двумерного разностного геля. электрофорез (2D-DIGE) (рис.2А) [26]. Белки, присутствующие только в тестовом образце ([ PIN ⁺ ] / Aβ-GFP), имеют псевдо-красный цвет, тогда как белки из контрольного образца ([ pin ^— ] / GFP) имеют псевдо-зеленый цвет. Желтые пятна соответствуют белкам, присутствующим как в тестовых, так и в контрольных образцах. Интересно, что масс-спектрометрический анализ показал, что красные пятна соответствуют Rnq1 (рис. 2A, таблица 1 и таблица S1). Множественные пятна, соответствующие Rnq1, могут появляться из-за его небольшого протеолиза или дифференциальной посттрансляционной модификации, такой как фосфорилирование.Идентификация Rnq1 показывает, что подход относительно чувствителен, так как Rnq1 не является распространенным белком (~ 1000 молекул белка на клетку) [27] . Мы также идентифицировали белки Ape1, Ape4 и Gas1, представленные в штаммах [ PIN ⁺ ] / Aβ-GFP и [ pin ^— ] / GFP (желтые пятна) (рис. 2A, таблица 1 и S1. Стол). Примечательно, что отсутствие красных пятен, соответствующих Aβ-GFP, подтверждает предыдущие данные, указывающие на то, что обработка SDS солюбилизирует агрегаты этого белка [24].

Рисунок 2. 2D-DIGE-изображение белков SDS- (A) или саркозил-нерастворимых (B) агрегатов, выделенных из штамма BY4742 [ PIN ⁺ ], экспрессирующего Aβ-GFP, и из его [ pin ^— ] производное, экспрессирующее неслитый GFP.

Пятна, соответствующие белкам из клеток [ PIN ⁺ ], экспрессирующих Aβ-GFP, окрашены в красный цвет, а белки из GFP-содержащих клеток (контроль) — зеленые. Желтые пятна соответствуют белкам, присутствующим в обоих сравниваемых образцах.Указаны белки, идентифицированные масс-спектрометрией. Идентификационные данные представлены в таблице 1 (агрегаты, нерастворимые в SDS) и 2 и 3 (агрегаты, не растворимые в саркозиле). Масс-спектры идентифицированных белков приведены в таблицах S1 – S3 соответственно.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116003.g002

Амилоидогенные белки могут образовывать полимеры, чувствительные к SDS при комнатной температуре, но устойчивые к обработке более мягким детергентом, саркозилом. Напр., Pub1 образует SDS-чувствительные, но устойчивые к саркозилу агрегаты в клетках [ PSI ⁺ ] [28].На основании этого мы выделили DRAF из клеточных лизатов штаммов [ PIN ⁺ ] / Aβ-GFP и [ pin ^— ] / GFP с использованием 3% саркозила. Последующий анализ 2D-DIGE позволил детектировать Aβ-GFP, а также Rnq1, таким образом показывая, что оба белка образуют саркозил-нерастворимые агрегаты (фиг. 2B, таблица 2 и таблица S2). Примечательно, что, в отличие от SDS, обработка саркозилом привела к обнаружению многочисленных желтых пятен, которые соответствуют белкам, присутствующим как в тестируемых, так и в контрольных образцах (рис.2Б). Однако важно, что наш сравнительный подход позволил легко различать белки, которые присутствовали только в тестовом образце (красные пятна), и белки, образующие устойчивые к детергентам комплексы, присутствующие как в тестовых, так и в контрольных образцах (желтые пятна). Таким образом, многочисленные желтые пятна не будут мешать идентификации нового приона или амилоидного белка, если контрольный образец его не содержит. Мы идентифицировали все белки, соответствующие желтым пятнам на рис. 2В. Из них только Ape1, Ape4 и Gas1 произошли из агрегатов, устойчивых как к саркозилу, так и к SDS.Удивительно, но большинство белков, образующих саркозил-нерастворимые комплексы, были компонентами каталитического ядра 20S протеасомы. Список всех идентифицированных белков представлен в Таблице 3 и Таблице S3.

Подобно Aβ-GFP, мышиный PrP (90–231 аминокислотных остатков) и его слияние на С-конце с GFP (PrP-GFP) образуют амилоидоподобные полимеры в дрожжевых клетках независимо от [ PIN ⁺ ] [21], [25]. Это позволило нам проверить, позволяет ли PSIA обнаруживать амилоидную форму PrP-GFP. Что касается клеток, экспрессирующих Aβ-GFP, то DRAF были выделены из штамма BY4742 [ PIN ⁺ ], экспрессирующего PrP-GFP, и его [ pin ^—] варианта, экспрессирующего неслитый GFP, с использованием 1% SDS или 3% саркозил. Красные пятна, соответствующие белкам Rnq1 и PrP-GFP, были обнаружены только в образце из штамма [ PIN ⁺ ] / PrP-GFP, обработанного саркозилом (рис. 3, таблица 2 и таблица S2), тогда как как Также было показано выше для Aβ-GFP, обработанные SDS DRAF, выделенные из этого штамма, не содержали PrP-GFP (данные не показаны). Это показывает, что саркозил позволяет идентифицировать более широкий спектр амилоидов, чем SDS. Примечательно, что желтые пятна на фиг. 3 имеют такое же распределение, как и на фиг. 2В.

Рисунок 3.2D-DIGE-изображение белков саркозил-нерастворимых агрегатов, выделенных из штамма BY4742 [ PIN ⁺ ], экспрессирующего PrP-GFP, и из его производного [ pin ^—], экспрессирующего неслитый GFP.

Пятна, соответствующие белкам из клеток [ PIN ⁺ ], экспрессирующих PrP-GFP, являются красными, а пятна из GFP-содержащих клеток (контроль) — зелеными. Желтые пятна соответствуют белкам, присутствующим в обоих сравниваемых образцах. Идентификационные данные представлены в таблице 2; масс-спектры представлены в таблице S2.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116003.g003

Затем мы проверили, позволяет ли PSIA обнаруживать белок Sup35, который лежит в основе другой прионной детерминанты дрожжей, [ PSI ⁺ ]. Для этого мы сравнили нерастворимые в саркозиле фракции, выделенные из штамма GT81-1C [ PSI ⁺ ] [ PIN ⁺ ], который содержит Sup35 и Rnq1 в прионной форме, и из его свободных от прионов [ фунтов на кв. ^— ] [ pin ^— ] производная.Как и в предыдущем эксперименте, мы обнаружили Rnq1, полученный из лизата штамма [ PSI ⁺ ] [ PIN ⁺ ] (красные точки на рис. 4A). Неожиданно в геле не наблюдали красных пятен, соответствующих Sup35, что позволяет предположить, что прионные полимеры Sup35 нерастворимы в буфере UTC, используемом для 2D-DIGE. Чтобы проверить эту возможность, осадок, нерастворимый в UTC, собирали, растворяли путем кипячения в стандартном буфере для образцов SDS-PAGE с 2% SDS и анализировали с помощью SDS-PAGE. Масс-спектрометрический анализ разделенных белков выявил Sup35 в штамме [ PSI ⁺ ] [ PIN ⁺ ] в значительных количествах, которые можно легко обнаружить с помощью окрашивания кумасси бриллиантовым синим (рис. 4B, таблица 4 и S4). Стол). Таким образом, Sup35 образует амилоидные полимеры, устойчивые не только к сильным ионным детергентам, но и к хаотропным агентам, присутствующим в буфере UTC, что позволяет предположить, что анализ агрегатов, нерастворимых в буфере UTC, является необходимым этапом, который позволяет идентифицировать более широкий спектр амилоидогенных белков.В отличие от Sup35, несколько других белков были идентифицированы в лизатах обоих сравниваемых штаммов и, следовательно, могут представлять собой компоненты белковых комплексов, конститутивно присутствующих в дрожжевых клетках, которые нерастворимы в саркозиле и буфере UTC.

Рисунок 4. 2D-DIGE-изображение белков нерастворимых саркозилом агрегатов, выделенных из штамма GT81-1C [ PSI ⁺ ] [ PIN ⁺ ] и его штамма [ psi ^— ] [ штифт ^— ] производная (А).

Пятна, соответствующие белкам из [ PSI ⁺ ] [ PIN ⁺ ] лизата и [ psi ^— ] [ pin ^— ] контроля, красные и зеленые, соответственно, в то время как желтые пятна соответствуют белкам, присутствующим в обоих сравниваемых образцах. SDS-PAGE изображение белков из тех же DRAF, которые были нерастворимы в буфере UTC (B). Указаны белки, идентифицированные масс-спектрометрией. Mr — маркеры молекулярной массы белков. Идентификационные данные представлены в таблице 4; масс-спектры представлены в таблице S4.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116003.g004

Идентификация белков, полимеризация которых засевается хантингтином человека с расширенным трактом polyQ

Известно, что амилоидные полимеры хантингтина могут связывать клеточные амилоидогенные белки путем индукции их полимеризации. Например, было показано, что полимеры мутантного гентингтина человека, образующиеся в дрожжевых клетках, вызывают затравочную полимеризацию Sup35 и некоторых других испытанных амилоидогенных белков [28], [29]. Перекрестная полимеризация белков-хозяев наблюдалась также в клетках млекопитающих с полимерами удлиненных белков polyQ [30] — [34]. Здесь мы использовали подход PSIA для объективной идентификации дрожжевых белков, образующих нерастворимые в детергенте амилоидоподобные агрегаты в клетках, экспрессирующих мутантный гентингтин человека. Для этого мы сравнили белковый состав нерастворимых в детергенте агрегатов, очищенных из клеток штамма 74-D694, экспрессирующих склонный к агрегации хантинтин с расширенным polyQ (103Q), и из контрольных клеток, экспрессирующих неагрегирующийся хантингтин с коротким polyQ (25Q), оба С-конец помечен GFP [35].Чтобы ограничить количество неамилоидогенных белков в DRAF, мы использовали SDS в процедурах очистки, хотя, как было показано выше, это могло привести к недооценке количества агрегирующих белков. Принимая во внимание наблюдение, что агрегаты хантингтина трудно растворить, мы солюбилизировали их обработкой муравьиной кислотой [36] перед добавлением буфера UTC. Белки, инкубированные в буфере UTC, разделяли на растворимые и нерастворимые фракции центрифугированием. Растворимые белки, полученные из лизатов с 103Q-GFP и 25Q-GFP, окрашивали флуоресцентными красителями и анализировали с помощью 2D-DIGE.Белки, идентифицированные в 103Q-GFP-экспрессирующих клетках, были 103Q-GFP, Pub1, Sgt2, Rpn10, Def1 и Bmh3 (фиг. 5A, таблица 5 и таблица S5). Примечательно, что, как и большинство прионных белков дрожжей, идентифицированные белки, за исключением Sgt2, содержат области, которые явно обогащены остатками Q и / или N. Интересно, что 103Q-GFP был идентифицирован в пятнах разной подвижности. То же самое наблюдалось для хантинтина, выделенного из клеток млекопитающих [20], [37], скорее всего, из-за опосредованного трансглутаминазой ковалентного перекрестного сшивания мономеров хантингтина.Важно отметить, что активность трансглутаминазы также была продемонстрирована в S. cerevisiae [38], [39]. Белки, нерастворимые в буфере UTC, разделяли с помощью SDS-PAGE и идентифицировали масс-спектрометрией. Помимо 103Q-GFP, мы обнаружили Sup35 (рис. 5B, таблица 5 и таблица S5), как и ожидалось [28]. Таким образом, амилоид 103Q-GFP вызывает появление нерастворимых в SDS агрегатов по крайней мере шести дрожжевых белков, пять из которых имеют очевидные Q / N-богатые домены.

Рисунок 5. Идентификация белков, образующих нерастворимые в SDS агрегаты в клетках, экспрессирующих 103Q-GFP.

2D-DIGE изображение белков агрегатов, выделенных с помощью SDS (A). Пятна, соответствующие белкам из клеток, экспрессирующих 103Q-GFP и 25Q-GFP (контроль), имеют красный и зеленый цвет соответственно. SDS-PAGE изображение белков из тех же DRAF, которые были нерастворимы в буфере UTC (B). Mr — маркеры молекулярной массы белков. Указаны белки, идентифицированные масс-спектрометрией. Идентификационные данные представлены в Таблице 5 и Таблице S5.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116003.g005

Обсуждение

Подход PSIA, разработанный в этой работе, позволил нам обнаружить все тестируемые белки с хорошо установленной способностью к образованию амилоида, такие как прионные белки Rnq1 и Sup35 дрожжей, а также PrP, Aβ и мутантный хантингтин млекопитающих, меченные GFP. Примечательно, что полученные результаты зависели от детергента, использованного для выделения амилоида. Использование либо SDS, либо саркозила позволило обнаружить Rnq1, Sup35 и Q103-GFP, тогда как PrP-GFP и Aβ-GFP были обнаружены только с использованием саркозила, поскольку их агрегаты не устойчивы к обработке SDS.Растворимость в 1% SDS ранее была показана для агрегатов Aβ, образующихся у млекопитающих [24]. Таким образом, использование саркозила для выделения агрегатов позволяет идентифицировать амилоидные белки, которые нельзя выделить с использованием SDS. Также стоит подчеркнуть, что наши результаты позволяют по-новому взглянуть на устойчивость амилоидов к детергентам и растворителям (Таблица 6). Единственная характеристика, общая для всех испытанных амилоидов, — это устойчивость к обработке 3% саркозилом при комнатной температуре. Кроме того, некоторые амилоиды, такие как прионные полимеры Sup35, нерастворимы в буфере UTC, используемом для 2D-DIGE, который содержит хаотропные агенты, и даже в муравьиной кислоте, но могут эффективно растворяться при кипячении в присутствии 2% SDS. Это усложняет метод, поскольку для солюбилизации различных амилоидов потребуются разные растворители. Еще одно ограничение PSIA состоит в том, что чрезвычайно кислые и основные белки не могут быть обнаружены с помощью 2D-DIGE. Таким образом, небольшая часть белков, растворимых в UTC, исключается из анализа.

Примечательно, что выбор цвета, обеспечиваемый процедурой 2D-DIGE в PSIA, делает этот подход особенно удобным для идентификации белков, полученных из агрегатов, которые отличаются в сравниваемых образцах, таких как прионные белки или белки амилоидов, появление которых связано с патологией.В самом деле, помимо белков, обнаруженных для подтверждения этого подхода, таким образом были идентифицированы шесть белков, связанных с хантингтином, для двух из которых, Pub1 и Def1, способность образовывать амилоидные фибриллы была показана ранее [9].

Следует отметить, что использование саркозила в PSIA не очень хорошо подходит для идентификации конститутивных амилоидов, которые могут присутствовать как в тестируемых, так и в контрольных образцах. Это связано с тем, что обработка саркозилом не солюбилизирует некоторые белковые комплексы неамилоидной природы.Большинство предполагаемых неамилоидных белков представляют собой протеасомные компоненты, что указывает на устойчивость каталитического ядра 20S протеасомы дрожжей к 3% саркозилу, а не на их амилоидное происхождение. Ранее было показано, что протеасома устойчива к некоторым неионным детергентам, таким как Triton X-100 [40]. Однако другие белки, особенно те, которые получены из наиболее стабильных агрегатов, устойчивых к такому сильному детергенту, как SDS, например Gas1, Ape1 и Ape4 могут представлять белки конститутивных амилоидов.Конечно, во всех случаях необходим набор дополнительных экспериментальных анализов, чтобы проверить, действительно ли новый белок-кандидат, идентифицированный с помощью PSIA, является амилоидогенным или ведет себя как прион.

Разработанный подход также позволил расширить работу по характеристике способности амилоидов индуцировать полимеризацию эндогенных дрожжевых белков. Ранее было показано, что полимеры белков с протяженными доменами polyQ, в том числе мутантный хантингтин человека, вызывают появление нерастворимых в SDS агрегатов некоторых хромосомно-кодируемых Q / N-богатых белков [28], [41], [42].Здесь мы показываем, что амилоиды мутантного хантингтина человека вызывают появление нерастворимых в SDS агрегатов по крайней мере шести белков-хозяев, Def1, Pub1, Rpn10, Bmh3, Sgt2 и Sup35. Примечательно, что, за одним исключением, все эти белки содержат участки, богатые Q или Q / N разной длины, что подтверждает наше предположение о том, что такие белки могут взаимозависимо образовывать амилоиды [28]. Однако может показаться удивительным, что среди множества дрожжевых Q / N-обогащенных белков только они образовывали детектируемые агрегаты в ответ на появление амилоидов мутантного хантингтина.Понятно, что способность белка к агрегации должна зависеть от уровня его экспрессии, однако, за исключением Sup35, идентифицированные белки экспрессируются лишь умеренно (Таблица 5). Тем не менее белки, обогащенные Q и N, могут отличаться друг от друга своей внутренней склонностью к полимеризации, и обнаруженные белки могут быть среди тех, которые наиболее склонны к полимеризации. За исключением Sup35, полимеризация которого существенно способствует токсичности мутантного хантингтина у дрожжей [41] — [43], другие идентифицированные белки не являются необходимыми, и поэтому их инактивация, опосредованная полимеризацией, скорее модулирует, чем вызывает цитотоксический эффект.В подтверждение этого, делеция гена DEF1 снижает токсичность хантинтина у дрожжей [44], в то время как Def1, как было показано, колокализуется с агрегатами хантинтина [45]. Sgt2 был также обнаружен во включениях хантингтина [46] и был предложен в качестве сенсора амилоида [47]. Ранее не было показано, что Rpn10 и Bmh3 взаимодействуют с полимерами хантингтина, однако Bmh2, который очень похож на Bmh3, был обнаружен в агрегатах хантинтина [46] и, как было показано, играет роль в токсичности хантингтина посредством образования агресом [48].Обнаружение того, что многие функционально неродственные белки образуют полимеры в ответ на появление амилоидов хантингтина, может объяснить разнообразие поражений, типичных для патологии Хантингтона, особенно с учетом того, что такие полимеры могут секвестрировать другие белки, которые взаимодействуют с этими полимерами, как было ранее показано. в дрожжевой модели белка Sup45, который связывается с амилоидными полимерами Sup35 [42], [43], [49].

Другой недавно опубликованный подход к идентификации амилоидных белков, названный TAPI (Техника очистки и идентификации амилоидов), основан на неспособности устойчивых к SDS агрегатов мигрировать в полиакриламидный гель, если не кипятить образец [23].Однако кажется, что селективность TAPI недостаточно высока и, следовательно, белки, которые, по всей вероятности, не образуют устойчивых к детергентам комплексов, также захватываются в верхней части геля. В пользу этого были идентифицированы неперекрывающиеся наборы неприонных белков в [ PSI ⁺ ] [ PIN ⁺ ] и [ psi ^— ] [ pin ^— ] клетки. Примечательно, что TAPI и PSIA привели к идентификации различных дрожжевых белков, связанных с хантингтином, среди которых только один белок, Pub1, был идентифицирован в обоих скринингах.Однако большинство белков, выявленных с помощью PSIA в клетках, экспрессирующих мутантный хантингтин, содержат Q / N-богатые домены и были включены в список потенциальных прионных белков [50], в то время как только два, Pub1 и Ynl208w, из белков, идентифицированных с помощью TAPI, имеют этот класс. Наконец, в отличие от PSIA, TAPI не идентифицировал Sup35 среди белков, полимеризация которых перекрестно засевается мутантным хантингтином, несмотря на то, что он является основным источником его токсичности для дрожжей [41] — [43].

В заключение мы хотели бы подчеркнуть, что валидация подхода, разработанного в этой работе, продемонстрировала его эффективность для обнаружения всех протестированных белков с известной способностью к образованию амилоида и позволила идентифицировать новые белки, полимеризация которых перекрестно засевается мутантными человеческий хантингтин.Взятые вместе, результаты этой работы демонстрируют, что PSIA может не только значительно облегчить идентификацию амилоидных белков во всех протеомах, что необходимо для дальнейшего выяснения роли амилоидов в регуляции клеточных процессов, патогенеза и старения, но также может обеспечить эффективный инструмент для выявления новых прионных белков.

Материалы и методы

Штаммы, условия роста и плазмиды

Штаммы дрожжей вместе с их генотипами перечислены ниже: GT81-1C, MATa ade1–14 his3-Δ200 leu2–3,112 lys2–801 trp1–289 ura3–52 [ PSI ⁺ ] [ PIN ⁺ ] [51]; GT159, MATa ade1-14 his3 leu2 lys2 trp1- Δ ura3 [ psi ^— ] [ PIN ⁺ ] [52]; BY4742, MATα his3 -Δ 1 leu2 -Δ 0 lys2 -Δ 0 ura3 -Δ 0 [ psi ^— ] [ PIN ⁺ ] (Invitrogen) и их [ psi ^— ] [ pin ^— ] производные, полученные отверждением [ PIN ⁺ ] и [ psi ⁺ ] обработкой гидрохлоридом гуанидина; 74-D694, MATa ade1-14 his3 -Δ 200 trp1-289 ura3-52 leu2-3,112 [ psi ^— ] [ PIN ⁺ ] [53].Культуры дрожжей выращивали при 30 ° C в жидком или твердом состоянии (YPD, 1% дрожжевой экстракт, 2% пептон, 2% глюкоза) или синтетическом (SC, 0,67% азотного основания дрожжей, 2% глюкозы с добавлением необходимых аминокислот. ) средства массовой информации. Промотор GAL1 / 10 индуцировали, как описано [42].

Мультикопийные плазмиды URA3 pGPD-PrP (90–231) -GFP [54] и pU-Aβ-GFP [25] экспрессируют под контролем промотора GPD фрагмент PrP хомяка (90–231 а.о.) и человеческий бета-амилоидный пептид (1-40 аминокислотных остатков), соответственно, оба С-конца слиты с GFP (зеленый флуоресцентный белок).Мультикопийные плазмиды URA3, , 103Q-GFP и 25Q-GFP [35] кодируют первый экзон гена хантингтина человека с 103 или 25 кодонами глутамина, слитыми в рамке считывания с GFP-кодирующей последовательностью. Экспрессия генов, кодирующих 103Q-GFP и 25Q-GFP, из этих плазмид находится под контролем индуцибельного промотора GAL1 / 10 . Трансформацию ДНК дрожжей, обработанных ацетатом лития, проводили, как описано [55].

Выделение устойчивых к моющим средствам агрегатных фракций

Подробный протокол всей процедуры показан на правой панели рис.1. Дрожжевые клетки лизировали в трис-буферном физиологическом растворе (TBS) (30 мМ Трис-HCl, pH 7,4, 150 мМ NaCl) с добавлением 10 мМ PMSF и полного ингибитора протеазы (Roche) путем взбивания стеклянными шариками. Полученные лизаты предварительно очищали (2500 g, 10 мин, 4 ° C), а затем фракционировали ультрацентрифугированием (151000 g, 2 часа, 4 ° C). Гранулы, содержащие белковые полимеры, ресуспендировали в TBS с 200 мкг / мл РНКазы A, инкубировали в течение 15 минут и обрабатывали 3% саркозилом в течение 5 минут, все при комнатной температуре. В некоторых случаях, как описано в разделе «Результаты», 3% саркозила заменяли 1% SDS.Затем устойчивые к детергентам белковые комплексы отделяли от мономерных белков ультрацентрифугированием при 151000 g, 8 часов, 4 ° C (16 ° C в случае обработки SDS) через подушку 25% сахароза-TBS с 0,3% саркозила (или 0,1% SDS, если для лечения использовался SDS). Гранулы суспендировали в TBS с 0,05% твина-20 и снова осаждали при 151000 г (2 ч, 4 ° C) для удаления ионных детергентов. Описанная процедура основана на [22] с модификациями, которые включают использование саркозила вместо SDS, а также пропуск одной стадии центрифугирования в присутствии детергента и добавление стадии центрифугирования для удаления ионных детергентов из конечного продукта. пеллеты.

Солюбилизация и мечение белков

Гранулы (10 мкл) растворяли в буфере UTC (8 M мочевина, 2 M тиомочевина, 4% CHAPS и 30 мМ TrisHCl pH 8,5) в течение 2 часов при комнатной температуре (рис. 1, левая панель) и анализировали с помощью 2D- ДИЖ. Белки, нерастворимые в буфере UTC, собирали центрифугированием (12000 g, 15 мин, комнатная температура) и использовали для дальнейшего анализа. Для анализа агрегатов хантингтина перед ресуспендированием в буфере UTC осадки дегидратировали, промывая ацетоном 3 раза (осадок ресуспендировали в 1 мл ацетона, центрифугировали 2 мин при 13400 g и супернатант удаляли), сушили на воздухе 30 мин, а затем растворяли в 300–1000 мл муравьиной кислоты, в зависимости от размера исходного осадка, для дезагрегации хантинтина [36].Ресуспензию способствовала обработка легким ультразвуком (амплитуда 30%, импульс 2 секунды, отдых 3 секунды в течение 30 секунд, наконечник 3 мм) на ультразвуковом гомогенизаторе VCX130 (Sonics, США). Затем муравьиную кислоту удаляли с помощью роторного вакуумного испарителя. Растворимые в буфере UTC белки из тестовых и контрольных образцов метили по остаткам лизина с помощью Cy5 и Cy3 (CyDye DIGE Fluor, N-гидроксисукцинимид-активированные эфиры, BioDye, Россия) соответственно, согласно рекомендациям производителя. Количество меченых белков оценивали с помощью SDS-PAGE.

Разделение белков

Белки, растворимые в буфере UTC, разделяли с помощью 2D-DIGE [26]. Для этого изоэлектрофокусирование проводили с использованием стеклянных капилляров (18 мм) в 4% ПААГ (2,4% CHAPS / NP40, 8 М мочевина, 2% амфолины 3–10 (BioRad)). Затем гели из пробирок извлекали, инкубировали (10 мин) в уравновешивающем буфере (40% (мас. / Об.) Глицерин, 125 мМ TrisHCl, 3% (мас. / Об.) SDS, 65 мМ DTT (pH 6,8)) и разделяли SDS-PAGE в градиентном геле (8–16%). Для обнаружения флуоресценции красителя использовали сканер лазерной флуоресценции (Fuji).Длины волн возбуждения и эмиссии для Cy3 и Cy5 составляли 532/580 и 635/670 нм, соответственно, на которые не влияет флуоресценция GFP (488/509 нм) слитых белков, используемых в этом исследовании. После этого гели повторно окрашивали нитратом серебра [56], и представляющие интерес белковые пятна вырезали и сохраняли для масс-спектрометрического анализа.

Белки, нерастворимые в буфере UTC, кипятили в стандартном буфере для образцов SDS-PAGE, разделяли с помощью SDS-PAGE (12% гель) и окрашивали кумасси бриллиантовым синим R-250 (BioRad).Полосы белка из гелей вырезали и подвергали той же процедуре масс-спектрометрии, что и в случае пятен из 2D-гелей.

Идентификация белков

Срезы геля дважды промывали деионизированной водой и один раз промывали 40% ацетонитрилом в 50 мМ растворе бикарбоната аммония. Затем проводили дегидратацию в 100% ацетонитриле с последующим удалением жидкости и сушкой гелевых срезов на воздухе. Высушенные образцы инкубировали в течение 4 ч с 5 мкл раствора 5 мкг / мл трипсина (Promega) для секвенирования, 100 мМ бикарбоната аммония (pH 7.0) при 37 ° С. Пептиды экстрагировали 5 мкл 0,5% трифторуксусной кислоты в воде. Масс-спектрометрический анализ пептидов выполняли с использованием масс-спектрометра Ultraflextreme MALDI-TOF / TOF (Bruker Daltonics, DE), оснащенного неодимовым лазером (354 нм) в рефлекторежиме (диапазон масс 700–4500 m / z). Матрица представляла собой α-циано-4-гидроксикоричную кислоту. Списки пиков были созданы с помощью программного обеспечения flexAnalysis 3.2 (Bruker Daltonics). Белки были идентифицированы с помощью программного обеспечения Mascot версии 2.4.2 (Matrix Science, http: // www.matrixscience.com) в базе данных Национального центра биотехнологической информации (NCBI). Допуски по массе были установлены на значения по умолчанию. Модификации (пропионамидометилирование остатков цистеина и частичное окисление метионина) были разрешены для массового поиска отпечатков пальцев. Допускалось одно пропущенное расщепление. Идентификационные данные сравнивали с расположением соответствующих белков в геле.

Благодарности

Авторы выражают признательность Санкт-Петербургскому государственному университету за возможность использования возможностей Научно-исследовательского ресурсного центра молекулярных и клеточных технологий СПбГУ.Петербургский государственный университет. 2-ДИГЭ и масс-спектрометрия были выполнены на АЗС им. А.Н. Институт физико-химической биологии им. Белозерского МГУ. Особая благодарность Э.А. Галкина.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: AAN AIA TAR OVM MDT APG. Проведены эксперименты: AAN AIA TAR OVM AAD. Проанализированы данные: AAN AIA TAR OVM MDT APG. Написал статью: AAN AIA MDT APG.

Ссылки

1. 1.Сайпе Дж. Д., Бенсон М. Д., Буксбаум Дж. Н., Икеда С., Мерлини Дж. И др. (2012) Номенклатура белков амилоидных фибрилл: рекомендации 2012 года Номенклатурного комитета Международного общества амилоидоза. Амилоид 19: 167–70.
2. 2. Морено-Гонсалес И., Сото С. (2011) Неправильно свернутые белковые агрегаты: механизмы, структуры и потенциал передачи болезней. Semin Cell Dev Biol 22: 482–7.
3. 3. Bhak G, Choe Y, Paik S (2009) Механизм амилоидогенеза: фибрилляция, зависимая от нуклеации, против фибрилляции с двойным концом.BMB Reports 42: 541–51.
4. 4. Prusiner SB (1982) Частицы новых белковых инфекций вызывают скрейпи. Наука 216: 136–44.
5. 5. Wickner RB (1994) [ URE3 ] в качестве измененного белка Ure2: доказательства наличия аналога приона в Saccharomyces cerevisiae . Science 264: 566–69.
6. 6. Sondheimer N, Lindquist S (2000) Rnq1: эпигенетический модификатор функции белка у дрожжей. Mol Cell 5: 163–72.
7. 7. Derkatch IL, Bradley ME, Hong JY, Liebman SW (2001) Прионы влияют на внешний вид других прионов: история [ PIN ].Ячейка 106: 171–82.
8. 8. Derkatch IL, Bradley ME, Zhou P, Chernoff YO, Liebman SW (1997) Генетические факторы и факторы окружающей среды, влияющие на появление de novo приона [ PSI ⁺ ] в Saccharomyces cerevisiae . Генетика 147: 507–19.
9. 9. Alberti S, Halfmann R, King O, Kapila A, Lindquist S (2009) Систематический обзор идентифицирует прионы и освещает особенности последовательности прионогенных белков. Cell 137: 146–58.
10. 10. Patel BK, Gavin-Smyth J, Liebman SW (2009) Дрожжевой глобальный транскрипционный корепрессорный белок Cyc8 может размножаться как прион. Nat Cell Biol 11: 344–9.
11. 11. Suzuki G, Shimazu N, Tanaka M (2012) Прион дрожжей Mod5 способствует приобретенной лекарственной устойчивости и выживанию клеток в условиях стресса окружающей среды. Наука 336: 355–9.
12. 12. Рогоза Т., Гогинашвили А., Родионова С., Иванов М., Викторовская О. и др. (2010) Неменделирующая детерминанта [ ISP ⁺ ] у дрожжей представляет собой находящуюся в ядре прионную форму глобального регулятора транскрипции Sfp1.Proc Natl Acad Sci USA 107: 10573–77.
13. 13. Du Z, Park KW, Yu H, Fan Q, Li L (2008) Недавно идентифицированный прион, связанный с фактором ремоделирования хроматина Swi1 в Saccharomyces cerevisiae . Нат Генет 40: 460–5.
14. 14. Halfmann R, Wright JR, Alberti S, Lindquist S, Rexach M (2012) Образование прионов дрожжевым нуклеопорином GLFG. Прион 6: 391–9.
15. 15. Coustou V, Deleu C, Saupe S, Begueret J (1997) Белковый продукт гена гетерокарионной несовместимости het-s гриба Podospora anserina ведет себя как аналог приона.Proc Natl Acad Sci USA 94: 9773–8.
16. 16. McKinley MP, Bolton DC, Prusiner SB (1983) Устойчивый к протеазе белок является структурным компонентом приона скрепи. Cell 35: 57–62.
17. 17. Glenner GG, Wong CW (1984) Болезнь Альцгеймера: первоначальный отчет об очистке и характеристике нового цереброваскулярного амилоидного белка. Biochem Biophys Res Commun 120: 885–90.
18. 18. Перец Д., Супаттапон С., Джайлс К., Вергара Дж., Фрейман Ю. и др.(2006) Инактивация прионов кислым додецилсульфатом натрия. J Virol 80: 322–31.
19. 19. Крындушкин Д.С., Александров И.М., Тер-Аванесян М.Д., Кушниров В.В. (2003) Прионные агрегаты дрожжей [ PSI ⁺ ] образованы небольшими полимерами Sup35, фрагментированными Hsp104. J Biol Chem 278: 49636–43.
20. 20. Мицуи К., Дои Х., Нукина Н. (2006) Протеомика агрегатов полиглутамина. Методы в Enzymol 412: 63–76.
21. 21. Миткевич О.В., Кочнева-Первухова Н.В., Сурина Е.Р., Беневоленский С.В., Кушниров В.В. и др.(2012) ДНК-аптамеры, обнаруживающие общие амилоидные эпитопы. Прион 6: 400–6.
22. 22. Кушниров В.В., Александров И.М., Миткевич О.В., Шкундина И.С., Тер-Аванесян М.Д. (2006) Очистка и анализ прионных и амилоидных агрегатов. Методы 39: 50–5.
23. 23. Крындушкин Д.С., Припузова Н., Бернетт Б.Г., Шумакер Ф. (2013) Ненаправленная идентификация прионов и амилоид-образующих белков из клеток дрожжей и млекопитающих. J Biol Chem 288: 27100–11.
24. 24. Coalier KA, Paranjape GS, Karki S, Nichols MR (2013) Стабильность форм агрегации амилоида-β (1–42) на ранней стадии.Biochim Biophys Acta 1834: 65–70.
25. 25. Рубель А.А., Рыжова Т.А., Антонец К.С., Чернов Ю.О., Галкин А.П. (2013) Идентификация последовательностей PrP, необходимых для взаимодействия между полимерами PrP и пептидом Aβ в дрожжевом тесте. Прион 7: 469–76.
26. 26. Unlu M, Minden JS (1997) Различный гель-электрофорез: метод одного геля для обнаружения изменений в экстрактах белков. Электрофорез 18: 2071–7.
27. 27. Ghaemmaghami S, Huh WK, Bower K, Howson RW, Belle A и др.(2003) Глобальный анализ экспрессии белка в дрожжах. Природа 425: 737–41.
28. 28. Ураков В.Н., Вишневская А.Б., Александров И.М., Кушниров В.В., Смирнов В.Н. и др. (2010) Взаимозависимость образования амилоида в дрожжах: последствия для полиглутаминовых нарушений и биологических функций. Прион 4: 45–52.
29. 29. Derkatch IL, Uptain SM, Outeiro TF, Krishnan R, Lindquist SL, et al. (2004) Влияние Q / N-богатых, polyQ и non-polyQ амилоидов на образование de novo приона [ PSI ⁺ ] в дрожжах и агрегацию Sup35 в vitro .Proc Natl Acad Sci USA 101: 12934–9.
30. 30. Nucifora FC, Sasaki M, Peters MF, Huang H, Cooper JK и др. (2001) Вмешательство хантинтина и атрофина-1 в опосредованную CBP транскрипцию, приводящее к клеточной токсичности. Наука 291: 2423–8.
31. 31. Яманака Т., Миядзаки Х., Ояма Ф., Куросава М., Васизу С. и др. (2008) Мутантный хантингтин снижает экспрессию HSP70 за счет секвестрации фактора транскрипции NF-Y. EMBO J 27: 827–39.
32. 32. Яманака Т., Тосаки А., Миядзаки Х., Куросава М., Фурукава Ю. и др.(2010) Мутантный фрагмент хантингтина избирательно подавляет фактор транскрипции домена Brn-2 POU, опосредуя дисфункцию гипоталамических клеток. Hum Mol Genet 19: 2099–112.
33. 33. Шаффар Г., Брейер П., Ботева Р., Берендс С., Цветков Н. и др. (2004) Клеточная токсичность белков экспансии полиглутамина: механизм дезактивации фактора транскрипции. Молекулярная ячейка 15: 95–105.
34. 34. Furukawa Y, Kaneko K, Matsumoto G, Kurosawa M, Nukina N (2009) Перекрестная фибрилляция Q / N-богатых белков предлагает новый патомеханизм полиглутаминовых заболеваний.J Neurosci 29: 5153–62.
35. 35. Meriin AB, Zhang X, Miliaras NB, Kazantsev A, Chernoff YO (2003) Агрегация расширенного полиглутаминового домена в дрожжах приводит к дефектам эндоцитоза. Mol Cell Biol 23: 7554–65.
36. 36. Hazeki N, Tukamoto T, Goto J, Kanazawa I (2000) Муравьиная кислота растворяет агрегаты N-концевого фрагмента хантинтина, содержащего расширенный полиглутаминовый тракт: применение для количественной оценки белковых компонентов агрегатов. Biochem Biophys Res Commun 277: 386–93.
37. 37. Iuchi S, Hoffner G, Verbeke P, Djian P, Green H (2003) Олигомерные и полимерные агрегаты, образованные белками, содержащими расширенный полиглутамин. Proc Natl Acad Sci USA 100: 2409–14.
38. 38. Iranzo M, Aguado C, Pallotti C, Cañizares JV, Mormeneo S (2002) Активность трансглутаминазы участвует в строительстве стены Saccharomyces cerevisiae . Микробиология 148: 1329–34.
39. 39. Mazan M, Farkas V (2007) Трансглутаминазоподобная активность участвует в биогенезе клеточной стенки в Saccharomyces cerevisiae .Биология 62: 128–31.
40. 40. Инаба К., Аказоме Y, Морисава М. (1993) Очистка протеасом из спермы лососевых рыб и их локализация вдоль жгутиков сперматозоидов. J Cell Sci 104: 907–15.
41. 41. Чжао X, Пак И.Н., Тодор Х., Мумау С., Масисон Д. и др. (2012) Секвестрация Sup35 агрегатами фрагментов хантинтина вызывает токсичность у дрожжей с прионом [ PSI ⁺ ]. J Biol Chem 287: 23346–55.
42. 42. Кочнева-Первухова Н.В., Александров А.И., Тер-Аванесян М.Д. (2012) Амилоид-опосредованная секвестрация незаменимых белков способствует токсичности мутантного хантинтина у дрожжей.PLoS One 7: e29832.
43. 43. Гонг Х., Романова Н.В., Аллен К.Д., Чандрамоулишваран П., Гокхале К. и др. (2012) Токсичность полиглутамина контролируется прионным составом и дозировкой генов в дрожжах. PLoS Genet 8: e1002634.
44. 44. Giorgini F, Guidetti P, Nguyen Q, Bennett SC, Muchowski PJ (2005) Геномный скрининг дрожжей предполагает, что кинуренин-3-монооксигеназа является терапевтической мишенью для болезни Хантингтона. Nature Genet 37: 526–31.
45. 45. Duennwald ML, Jagadish S, Giorgini F, Muchowski PJ, Lindquist S (2006) Сеть белковых взаимодействий определяет токсичность полиглутамина.Proc Natl Acad Sci USA 103: 11051–6.
46. 46. Wang Y, Meriin AB, Costello CE, Sherman MY (2007) Характеристика белков, связанных с агрегатами полиглутамина: новый подход к изоляции агрегатов от нарушений конформации белков. Прион 1: 128–35.
47. 47. Киктев Д., Паттерсон Дж. С., Мюллер С., Бариар Б., Пан Т. и др. (2012) Регулирование шаперонных эффектов на прион дрожжей с помощью кокаперона Sgt2. Mol Cell Biol 32: 4960–70.
48. 48.Ван Ю., Мериин А.Б., Заарур Н., Романова Н.В., Чернов Ю.О. и др. (2009) Аномальные белки могут образовывать агресомы в дрожжах: сигналы нацеливания на агресомы и компоненты механизма. FASEB J 23: 451–63.
49. 49. Вишвешвара Н., Брэдли М.Э., Либман С.В. (2009) Секвестрация основных белков вызывает токсичность, связанную с прионами, у дрожжей. Mol Microbiol 73: 1101–14.
50. 50. Harrison PM, Gerstein M (2003) Метод оценки систематической ошибки в биологических последовательностях и его применение к прионоподобным доменам, богатым глутамином / аспарагином, в протеомах эукариот.Геном Биол 4: R40.
51. 51. Чернов Ю.О., Галкин А.П., Левитин Э., Чернова Т.А., Ньюнам Г.П. и др. (2000) Эволюционное сохранение прионообразующей способности дрожжевого белка Sup35. Mol Microbiol 35: 865–76.
52. 52. Чернофф Ю.О., Ньюнам Г.П., Кумар Дж., Аллен К., Зинк А.Д. (1999) Доказательства мутатора белка в дрожжах: роль шаперона ssb, связанного с Hsp70, в формировании, стабильности и токсичности [ PSI ⁺ ] прион. Mol Cell Biol 19: 8103–12.
53. 53. Чернов Ю.О., Линдквист С.Л., Оно Б., Инге-Вечтомов С.Г., Либман С.В. (1995) Роль шаперонного белка Hsp104 в распространении прионоподобного фактора дрожжей [ psi ⁺ ]. Наука 268: 880–4.
54. 54. Рубель А.А., Сайфитдинова А.Ф., Лада А.Г., Нижников А.А., Инге-Вечтомов С.Г. и др. (2008) Дрожжевой шаперон Hsp104 контролирует экспрессию генов на посттранскрипционном уровне. Мол биол (Москва) 42: 110–6.
55. 55. Rose MD, Winstone F, Hieter P (1990) Методы генетики дрожжей.CSHL Press, 198 с.
56. 56. Blum H, Beier H, Gross HJ (1987) Улучшенное окрашивание серебром растительных белков, РНК и ДНК в полиакриламидных гелях. Электрофорез 8: 93–9.

границ | За пределами вариантов: мутационные паттерны в данных секвенирования следующего поколения для точной медицины рака

Введение

На протяжении десятилетий ученые знали, что рак — это результат изменений в геномах клеток. С 1977 года технология секвенирования ДНК была одним из инструментов в арсенале ученых для обнаружения этих генетических изменений, ведущих к злокачественным новообразованиям (Sanger et al., 1977). К сожалению, первоначальное секвенирование по Сэнгеру было трудоемким и дорогостоящим, и только в 2005 году, когда массовое параллельное секвенирование стало коммерчески доступным, крупномасштабное, рентабельное и эффективное секвенирование стало возможным в клинических условиях (Mardis, 2011). В то же время направленная терапия рака становится все более распространенной, поскольку все больше лекарств было разработано для воздействия на конкретные генные изменения при злокачественных новообразованиях. Это сочетание повышенной клинической применимости и технической практичности сделало новый акцент на обнаружении мутаций и перестроек хромосомной структуры, и, таким образом, секвенирование участков злокачественных геномов стало частью рутинной клинической практики для некоторых типов опухолей (Sequist et al., 2011; Нагараджан и др., 2017; Zehir et al., 2017).

Массивно-параллельное секвенирование, также называемое «секвенирование следующего поколения» (NGS), предоставляет не только информацию о простых изменениях единичного нуклеотида, но также может предоставить информацию о сложных вариациях, таких как вставки и делеции, изменения числа копий и структурные изменения. варианты. Секвенирование может быть выполнено на неопластических тканях в поисках приобретенных соматических изменений, или оно может быть выполнено на неопухолевых тканях для выявления зародышевой линии, наследственных различий.Секвенирование неопластической и неопухолевой ткани пациента вместе может помочь в интерпретации соматических вариаций.

Варианты с одним нуклеотидом — это простейшее изменение, обнаруживаемое технологией секвенирования, и наиболее частое выявленное изменение, при котором один нуклеотид (A, T, G или C) заменяется альтернативным нуклеотидом. Эти вариации включают ряд эффектов от патогенных изменений до обычно наследуемых доброкачественных полиморфизмов. Вставка — это результат вставки дополнительных нуклеотидов в генетический материал, где они обычно не находятся, без обмена нуклеотидов один на один.Генетическая делеция противоположна вставке, при которой нуклеотиды теряются из генома, а общее количество нуклеотидов уменьшается. Варианты вставки-делеции (инделы) представляют собой комбинации потери и увеличения нуклеотидов. NGS легко идентифицирует индели, когда они маленькие, но труднее — когда они больше. Более крупные и сложные вариации могут быть идентифицированы после постобработки данных NGS с помощью реорганизатора на основе сборки (Mose et al., 2014; Au et al., 2017).

Люди диплоидны с двумя копиями каждого гена.Часто при раке этот номер копии изменяется. Ген или большая часть генома могут быть дублированы, что приведет к большему количеству копий конкретного гена или генов, или, альтернативно, генетический материал может быть потерян, так что количество копий гена будет меньше ожидаемого. Эти дупликации и делеции могут быть идентифицированы в данных следующего поколения путем анализа глубины последовательности, полученной для локуса. Затем количество считываний нормализуется до объединенного эталона, чтобы определить, действительно ли область увеличена или потеряна.Нормализация считываний к объединенной ссылке помогает контролировать альтернативные факторы, которые, как ожидается, изменят глубину считывания, например, содержимое GC, размер целевой области интереса или повторяющиеся области (Talevich et al., 2016).

Хотя обычно хромосомную транслокацию обнаруживают с помощью цитогенетических методов, ее также можно обнаружить с помощью NGS. Транслокация — это когда часть генома перемещается в другое место, где она сливается с существующим генетическим материалом.Слияние генов, когда два разных гена становятся одним функциональным продуктом, иногда является результатом транслокации, но также может происходить в контексте больших делеций или других сложных структурных изменений. Используя несколько иные методы, NGS может также идентифицировать транслокации или слияния генов либо посредством выравнивания парных концов, либо, в случае слияния некоторых генов, с использованием кДНК, полученной после обратной транскрипции мРНК.

Каждое из этих описанных выше изменений, которые можно увидеть при раке и обнаружить с помощью NGS, представляет собой отдельные события.Они отвечают на основные вопросы, которые хотят знать врачи, например: « TP53 мутировал?» или « MET усилен?» На каждый из этих вопросов также можно ответить с помощью различных методологий, в приведенном выше примере с использованием ПЦР для исследования TP53 или с помощью FISH-анализа MET . Однако одним из основных преимуществ технологии NGS является то, что с помощью анализа огромных участков генома можно увидеть закономерности при вторичном анализе данных секвенирования. Эти шаблоны могут предоставить дополнительную информацию: они дают ключ к разгадке происхождения опухоли, предположения о прошлых воздействиях окружающей среды, понимание конкретных биологических дефектов в репарации ДНК и даже выявляют основные слабые места в самой опухоли с последующими рекомендациями по оптимальному лечению (Александров и другие., 2013, 2020). В этой главе основное внимание будет уделено нескольким общегеномным метрикам или биомаркерам, которые можно различить по данным NGS соматического рака, в широком смысле называемым мутационными паттернами и сигнатурами.

Мутационная нагрузка опухоли

Иммунная система человека естественным образом настроена распознавать опухолевые клетки как чужеродные и уничтожать их. Один из способов уклонения раковых клеток от врожденного Т-клеточного ответа — повышение активности трансмембранного белка, называемого лигандом 1 запрограммированной смерти, PD-L1. В здоровых тканях PD-L1 экспрессируется на поверхности клеток, где он взаимодействует с рецептором Т-клеток, белком запрограммированной гибели клеток 1, PD-1, чтобы способствовать самотолерантности и подавлять Т-клетки от уничтожения нормальных тканей.При раке, несмотря на экспрессию молекул, связанных с MHC I, с антигенами «чужеродного рака», PD-L1, обнаруженный на этих клетках, продолжает подавлять Т-клетки посредством взаимодействий PD-L1: PD-1, а некоторые опухолевые клетки могут даже увеличивать экспрессию PD-L1 на поверхности клетки для усиления этого иммунного подавления (Friss et al., 1989). Антитела, разработанные против PD-1 и PD-L1, продемонстрировали эффективность для подгруппы пациентов с несколькими различными типами опухолей (рис. 1). Примечательно, что не все пациенты реагируют на это лечение, и скорость ответа сильно зависит от типа опухоли, при этом меланома и немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) обычно демонстрируют благоприятные ответы (Brahmer et al., 2012; Топалян и др., 2012). Однако даже при НМРЛ только часть этих пациентов ответит на иммунотерапию. Поэтому идентификация биомаркера, который является как чувствительным, так и специфическим для опухолей, который будет реагировать на ингибирование иммунных контрольных точек (ICI), имеет большой приоритет.

Рисунок 1. Взаимодействие белка 1 запрограммированной гибели клеток и лиганда 1 белка запрограммированной гибели клеток (PD-1 / PD-L1) представляет собой контрольную точку иммунитета, нацеленную на иммунотерапию против PD-1 / PD-L1.

Экспрессия PD-L1, оцененная с помощью иммуногистохимии, была исходным кандидатным биомаркером, оцениваемым для прогнозирования ответа на ICI (Topalian et al., 2012; Таубе и др., 2014). Экспрессия PD-L1 на опухолевых клетках использовалась в нескольких клинических испытаниях и когортных исследованиях, при этом положительность была связана с благоприятным ответом на ICI; однако чувствительность и специфичность биомаркера далека от совершенства (Hellmann et al., 2017; Garon et al., 2019). Таким образом, интерес к идентификации альтернативного или, возможно, дополнительного биомаркера экспрессии PD-L1 привел к исследованию мутационной нагрузки опухоли (TMB), чтобы быть одним из таких кандидатов.

Секвенирование всего экзома (WES) было выполнено на образцах NSCLC, обработанных терапией анти-PD-1, которые либо клинически ответили, либо не ответили на иммунотерапию. Ответ на терапию был связан с количеством мутаций, идентифицированных WES (Rizvi et al., 2015). Этот простой учет мутаций в геноме опухоли получил название TMB и считается новым биомаркером вероятности эффективного лечения с помощью иммунотерапии многих типов опухолей. Интересно, что у меланомы и NSCLC медиана TMB значительно выше по сравнению с другими злокачественными новообразованиями, такими как гематопоэтические, педиатрические или мягкие опухоли, что соответствует лучшему ответу на иммунотерапию, наблюдаемому при этих типах опухолей (Reck et al., 2016; Ларкин и др., 2019).

Предложенный механизм, лежащий в основе использования TMB в качестве биомаркера для иммунотерапии, связан с увеличением продукции неоантигенов (Александров и др., 2013; Лоуренс и др., 2013; Чалмерс и др., 2017; Чен и др., 2017). Опухоли с наибольшим геномным мутационным бременем будут транслировать больше измененных белковых продуктов, которые выглядят не так, как нативные пептиды. Увеличение количества ненативных антигенов или неоантигенов, экспрессируемых клеткой, облегчает распознавание опухоли иммунной системой.Ингибирование PD-L1 и PD-1 является необходимым этапом для иммуно-модулированного разрушения и облегчается, если опухоль экспрессирует множество узнаваемых неоантигенов.

Поскольку клиническая применимость TMB была первоначально описана с помощью WES, WES стал золотым стандартом для количественной оценки TMB. К сожалению, из-за отсутствия рутинного внедрения WES в клиническую практику внедрение нормального для опухоли WES для рутинного тестирования биомаркеров для иммунотерапии не является практическим вариантом. Поэтому в клинических молекулярно-диагностических исследованиях цель сместилась к обеспечению точной оценки TMB с помощью целевых панелей NGS, часто с данными только об опухолях.Хотя размер целевой панели, необходимой для точной оценки TMB, в настоящее время четко не определен, обычно считается, что необходимы панели с охватом не менее 1,0 МБ (Allgauer et al., 2018; Buchhalter et al., 2019; Endris et al., 2019; Stenzinger et al., 2019). Панели меньшего размера будут иметь более низкую корреляцию с золотым стандартом, в частности, при оценке опухолей с низкой общей мутационной нагрузкой (Chalmers et al., 2017; Buchhalter et al., 2019). Кроме того, существует множество дополнительных технических деталей для расчета TMB для целевых панелей NGS, которые еще предстоит полностью выяснить, например, следующие: какие типы вариантов следует включить (пропущенные, информативные и т. Д.)), включение кодирующей или некодирующей территории, пороговых значений, используемых для определения «высокого» TMB, и передовых методов фильтрации вариантов зародышевой линии, и это лишь некоторые из них. В настоящее время ведется несколько межведомственных мероприятий, направленных на создание лабораторных стандартов для тестирования и отчетности TMB для согласования усилий во всем мире, включая инициативы как Друзей исследований рака, так и Qualitätssicherungs-Initiative Pathologie (QUIP). В предварительном совместном отчете организации Friends of Cancer Research и QUIP дается отличный обзор многих технических проблем, на решение которых направлены эти инициативы по стандартизации (Stenzinger et al., 2019). Основные проблемы, которые подчеркивают их предварительные результаты, — это важность размера целевой панели генов (не менее 1 Мб), состав панели и биоинформатический конвейер.

Помимо технических соображений для расчета TMB, остается еще много вопросов относительно клинической применимости и валидности этого нового биомаркера, поскольку данные испытаний противоречивы. В частности, отсутствуют данные, подтверждающие связь между высоким TMB и улучшенной общей выживаемостью после ICI (Planchard et al., 2018). Хотя TMB, по-видимому, не предсказывает исходы у пациентов, получающих комбинированную ICI и химиотерапию (Paz-Ares et al., 2019), он, по-видимому, является надежным биомаркером ответа у пациентов, получающих монотерапию анти-PD-1 как в первом, так и в вторые линии терапии (Herbst et al., 2019). Несмотря на то, что TMB считается многообещающим новым биомаркером, остается дальнейшая работа, чтобы полностью установить как клиническую, так и техническую валидность этого полногеномного биомаркера для его пан-опухолевого использования для прогнозирования клинического ответа на ICI.

Мутационные подписи

Некоторые мутагены вызывают определенные генетические изменения чаще, чем другие; эта склонность к одному мутационному паттерну по сравнению с другими называется «сигнатурой мутации». Математические модели могут отображать общее количество выявленных мутаций, наблюдаемых в конкретной опухоли, и сравнивать их со справочными данными. Такие мутационные сигнатуры могут включать как замены одиночных оснований (SBS), замены двойных оснований (DBS), так и небольшие вставки и делеции, и подробно описаны в Каталоге соматических мутаций при раке (COSMIC) (Tate et al., 2019; Александров и др., 2020). Было описано более 40 сигнатур SBS, каждая мутационная сигнатура охарактеризована с использованием шести подтипов замен: C> A, C> G, C> T, T> A, T> C и T> G. В дополнение к каталогизации конкретного нуклеотида При изменении, эти сигнатуры также принимают во внимание предыдущий (5 ‘) и следующий (3’) нуклеотид, что дает 96 возможных перестановок для каждой нуклеотидной замены (Alexandrov et al., 2013, 2020). Некоторые из этих мутационных сигнатур связаны с канцерогенами и воздействием окружающей среды, в том числе некоторые с известными механизмами канцерогенеза.Одним из таких примеров является сигнатура 7, результат УФ-активированного сшивания димеров пиримидина (C & T). Затем эти основания ДНК требуют удаления с предпочтительной заменой тимина для исправления более часто дефектного ТТ-димера. Таким образом, димеры тимина часто заменяются правильно, однако любые димеры цитозина, вовлеченные в процесс, могут подвергаться несоответствующей замене динуклеотидными заменами CC> TT, возникающими в этих сайтах (рис. 2A). Другие мутационные сигнатуры являются результатом неэффективных механизмов восстановления клеток.Например, сигнатура 10 является результатом специфической мутации ДНК-полимеразы эпсилон, домена корректирующего считывания ДНК-полимеразы. Эта специфическая мутация приводит к большому количеству мутаций во время репликации ДНК, которые не корректируются, предпочтительно мутации C> A и C> T в ведущей цепи (рис. 2B). Следует отметить, что опухоли с мутациями ДНК-полимеразы-эпсилон также обладают высоким TMB.

Рисунок 2. Механизмы мутационной подписи. (A) Ультрафиолетовая сигнатура 7 связана с большим количеством динуклеотидных мутаций CC> TT у дипиримидинов, а также с сильным транскрипционным смещением цепи, указывающим на то, что мутации происходят в пиримидинах за счет образования пиримидин-пиримидиновых фотодимеров и что эти мутации являются репарируется путем эксцизионной репарации связанных с транскрипцией нуклеотидов. (B) POLE Signature 10 демонстрирует смещение цепи для мутаций C> A в контексте TpCpT и мутаций T> G в контексте TpTpT. Мутационный процесс, лежащий в основе этой сигнатуры, представляет собой измененную активность подверженной ошибкам полимеразы POLE из-за мутаций, происходящих в домене экзонуклеазы.

Список экзогенных и эндогенных мутагенов обширен; однако не все описанные мутационные сигнатуры имеют четко определенный механизм патогенеза. Некоторые сигнатуры четко изолированы в пределах небольшого числа конкретных типов рака, но связь с конкретной этиологией неясна; в то время как другие распространены среди широкого спектра онкологических групп (Helleday et al., 2014). Вероятно, что эти неопределенные в настоящее время мутационные сигнатуры в конечном итоге будут связаны либо с экологическими, либо с клеточными путями мутагенеза с будущими исследованиями и крупномасштабным анализом данных.

Определение того, какая мутационная сигнатура присутствует в данной опухоли, имеет несколько показаний для клинического применения. У пациентов со сложной историей болезни и опухолями неизвестного происхождения молекулярные сигнатуры могут помочь в определении типа опухоли; например, пациент со значительным курением в анамнезе с многочисленными кожными инвазивными плоскоклеточными карциномами и новой плоскоклеточной карциномой легкого может иметь новый первичный или одиночный метастаз из карциномы кожи пациента.Если бы эта опухоль содержала УФ-сигнатуру, поражение легкого можно было бы с уверенностью диагностировать как метастаз, а не как первичный плоскоклеточный рак легкого, который имел бы значительные различия в клиническом ведении (Sholl et al., 2016). Мутационные сигнатуры также могут использоваться для выбора терапии, например, микросателлитная нестабильность в случае ICI, а также дефицит гомологичной рекомбинации при ингибировании поли-АДФ-рибозо-полимеразы (PARP), оба из которых будут подробно описаны в следующих разделах.

Нестабильность микроспутника

Микросателлиты — это участки в геноме с повторяющимися нуклеотидными последовательностями. ДНК-полимеразы с трудом реплицируют эти области и будут скользить во время репликации, что приводит к вставкам или делециям нуклеотидов. Эти вставки и делеции обычно распознаются и исправляются системой исправления несоответствий (MMR). Система MMR представляет собой комплекс белков, включая белки MLh2, MSh3, MSH6 и PMS2, среди прочих, которые работают для выявления и замены несовместимости пар оснований.В ситуациях с дефектным MMR неисправленные ошибки останутся, и локусы с микросателлитами будут показывать «нестабильность» (MSI), новые аллели, появляющиеся в этих позициях различной длины.

Дефекты MMR могут передаваться по наследству или приобретаться. Унаследованные дефициты MMR, такие как синдром Линча, не редкость в образцах рака с распространенностью 0,4% в общей популяции (Haraldsdottir et al., 2017). Возможность унаследованного синдрома предрасположенности к раку имеет значение для скрининга рака, а также для других членов семьи и планирования семьи, и поэтому MSI вызывает клиническую озабоченность в течение многих лет.Пациенты с синдромом Линча имеют примерно 75% пожизненного риска развития рака толстой кишки, а также повышенного риска рака эндометрия, других видов рака желудочно-кишечного тракта и мочеполовых путей, рака простаты, яичников, груди и кожи (Hunter et al., 2017).

Опухоли с MSI традиционно выявлялись с помощью анализа ПЦР, который амплифицирует выбранное количество микросателлитных локусов с последующим капиллярным электрофорезом для разделения размера фрагментов. Пять локусов были отобраны для клинического использования в 1996 году, названы «панелью Bethesda» и официально одобрены несколькими годами позже семинаром Национального института рака по микросателлитной нестабильности для обнаружения рака и семейной предрасположенности (Boland et al., 1998). Эти локусы включали два мононуклеотидных повтора (BAT25 и BAT26) и три динуклеотидных повтора (D2S123, D5S346 и D17S250). Выбор был основан на воспроизводимости, чтобы различать микросателлитные стабильные (MSS) и микросателлитные нестабильные (MSI) опухоли толстой кишки. Применимость этих пяти локусов к карциноме эндометрия или другим неколоректальным карциномам MSI была несколько неудовлетворительной из-за ложноотрицательных результатов ПЦР с гель-электрофорезом (Wang et al., 2017). Частично это связано с меньшим сдвигом нуклеотидов в изменении размера фрагмента.Например, колоректальный рак имеет средний сдвиг нуклеотидов на шесть пар оснований, тогда как эндометриоидная карцинома эндометрия имеет средний сдвиг на три пары оснований.

Крупномасштабные панели NGS часто по своей природе секвенируют большое количество микросателлитов и могут быть разработаны для секвенирования дополнительных локусов, например, для включения пяти локусов ПЦР среди других. Эти сотни локусов обеспечивают глобальную картину стабильности микросателлитов по всему геному и, следовательно, могут быть более чувствительными для неколоректальных карцином с MSI (Hause et al., 2016). Как и в анализе на основе ПЦР, NGS по своей природе подвержен ошибкам в этих областях, и поэтому микросателлиты будут иметь множество вставок / делеций разного размера, которые могут быть занесены в таблицу для каждого локуса. Более высокая неверность этих микросателлитов наблюдается в опухолях с микросателлитной нестабильностью. Были разработаны различные биоинформатические подходы и алгоритмы для обнаружения MSI с использованием данных NGS, включая mSINGS, MSIsensor и MANTIS, и многие другие были подробно рассмотрены в другом месте (Yamamoto and Imai, 2019).Одновременное секвенирование белков MMR, таких как MLh2, MSh3 и MSH6 , может дополнительно подтвердить некоторые случаи опухолей с дефицитом MMR, хотя в случаях гиперметилирования промотора MLh2 , распространенного Механизм соматического приобретения дефицита MMR (Baudrin et al., 2018) и PMS2 трудно секвенировать из-за обширных псевдогенов и гомологии по всему геному.

В целом, тестирование MSI на основе NGS имеет более высокую диагностическую чувствительность, чем традиционные методы ПЦР, особенно в случаях неколоректальной карциномы (Baudrin et al., 2018). Кроме того, поскольку тестирование NGS обычно проводится на опухолях, которые обычно не проверяются с помощью иммуногистохимии MMR, оно позволяет обнаруживать MSI при типах рака, которые обычно не исследуются с использованием традиционных диагностических алгоритмов. Наконец, следует отметить, что опухоли с MSI также имеют высокую мутационную нагрузку (высокий TMB) и с большей вероятностью экспрессируют неоантигены, которые иммунная система может идентифицировать как чужеродные и разрушать. Таким образом, статус MSI был первым одобренным Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (FDA) опухолевым биомаркером с показаниями для ICI независимо от типа опухоли (Lemery et al., 2017; Маркус и др., 2019). Это знаковое одобрение было основано на знании того, что биология MSI была одинаковой для разных типов опухолей, и на общей скорости ответа, наблюдаемой в пяти отдельных клинических испытаниях с одной группой. Общая частота ответа составила около 39,6% у 149 пациентов с 15 различными типами опухолей, и 78% ответов продолжались не менее 6 месяцев (Le et al., 2015, 2017).

Дефицит гомологической рекомбинации

Существует множество механизмов репарации ДНК для различных типов повреждений ДНК.Самым надежным методом восстановления двухцепочечных разрывов ДНК является путь гомологичной рекомбинации (Wright et al., 2018). Гомологичная рекомбинация — это процесс, состоящий из нескольких этапов: во-первых, двухцепочечный разрыв должен распознаваться связыванием белка. Эти связанные белки способствуют проникновению поврежденного конца в интактную гомологичную область для синтеза ДНК. После синтеза ДНК комплекс ремонтирует оставшиеся трещины и разбирает их. В этих стадиях участвует множество белков, включая BRCA1, BRCA2, CHK2, NBN и многие другие.Когда какой-либо из белков, участвующих в гомологичной рекомбинации, является дефицитным (HRD), дефицитные клетки не будут способны восстанавливать двухцепочечные разрывы с помощью этого механизма. Затем эти клетки полагаются на альтернативные методы восстановления, такие как подверженный ошибкам метод негомологичного соединения концов (NHEJ). В NHEJ две разорванные спирали сливаются вместе, так что репликация ДНК может продолжаться. Это слияние осуществляется без заботы о точности ДНК и приводит к транслокациям, вставкам и делециям (Chang et al., 2017).

Изначально было обнаружено, что ингибиторы поли-АДФ-рибозо-полимеразы

демонстрируют высокую чувствительность мутантных клеток BRCA1 / 2 (Bryant et al., 2005; Davies et al., 2017). Эта чувствительность является результатом синтетической летальности клеток с HRD и сопутствующим ингибированием PARP. Клинически дефект гомологичной рекомбинации (HRD) предполагает, что у пациента будет хороший ответ на ингибиторы PARP, а также на химиотерапию платиной (24, 26, 27). Химиотерапия на основе платины индуцирует сшивание ДНК.Клетки пытаются восстановить поперечно-сшитую ДНК посредством удаления нуклеотидов. Удаление нуклеотидов приводит к множественным одноцепочечным разрывам (SSB). PARP — это фермент, который связывается с SSB, вырезает одно основание, а затем привлекает ферменты репарации ДНК для восстановления цепи, включая разрыв. В клетках, подвергнутых действию ингибиторов PARP, SSB остаются, и после репликации SSB становятся двухцепочечными разрывами. Если клетка имеет интактную гомологичную рекомбинацию, клетка может легко восстановить эти двухцепочечные разрывы и выжить.В клетках с дефицитом гомологичной рекомбинации, однако, катастрофическое количество двухцепочечных разрывов не может быть исправлено соответствующим образом, и клетка подвергается апоптозу (Farmer et al., 2005). Три ингибитора PARP (олапариб, рукапариб и нирапариб) в настоящее время одобрены FDA для лечения рака яичников, тогда как олапариб и талазопариб одобрены для лечения рака груди.

Секвенирование образцов рака может определить, есть ли мутации (зародышевые или соматические) во многих генах, участвующих в гомологичной рекомбинации, например, мутации в BRCA1 .Кроме того, существуют мутационные паттерны, которые также указывают на HRD, так называемые «геномные шрамы» (Hoppe et al., 2018). Было предложено несколько различных показателей для идентификации этого биомаркера дефицита репарации ДНК, включая сигнатуру № 3, HRDetect, делеции с микрогомологией, потерю гетерозиготности (LOH), теломерный аллельный дисбаланс (TAI) и крупномасштабные переходы между состояниями (LST) ( Александров и др., 2013; Zhao et al., 2017). Многие из этих показателей являются показателями HRD и опорой на ошибочные альтернативные механизмы восстановления двухцепочечных разрывов (Abkevich et al., 2012). Сигнатура № 3 была идентифицирована несколькими различными типами опухолей, включая рак груди, яичников, простаты и желудка (Александров и др., 2013; Zhao et al., 2017). Показано, что HRDetect полезен для прогнозирования «дефицита BRCA», определяемого соматическими мутациями или мутациями зародышевой линии в BRCA1 , а также гиперметилированием промотора в нескольких типах опухолей, таких как рак груди, яичников и поджелудочной железы (Davies et al., 2017 ).

Хотя некоторые метрики HRD были первоначально определены и идентифицированы с помощью массива SNP, NGS также имеет возможность идентифицировать эти метрики, и WES является отличным инструментом для регистрации этих биомаркеров (Sztupinszki et al., 2018). Один из методов выявления опухолей, содержащих HRD, состоит в том, чтобы получить оценку, которая представляет собой сумму следующих показателей: LOH, LST и TAI (Abkevich et al., 2012; Birkbak et al., 2012; Popova et al., 2012 ; Рисунок 3). Несмотря на то, что были предложены различные комбинированные оценки, больше всего данных существует для использования комбинации LOH, LST и TAI и было продано Myriad Genetics как тест myChoice HRD (Timms et al., 2014). Подробности того, как рассчитываются эти метрики, описаны в оригинальных публикациях.Вкратце, оценка LOH определяется количеством областей, обнаруженных с помощью LOH, размер которых превышает 15 МБ, за исключением полной потери хромосомы, которая, как считается, происходит из-за другого механизма. Оценка LST представляет собой сумму количества хромосомных разрывов размером не менее 10 Мб, но менее 15 Мб, и между ними должно быть расстояние 3 Мб, чтобы считаться отдельным разрывом. Наконец, TAI — это простой учет любого разрыва, который распространяется на теломер. В многофакторной модели комбинационная оценка LOH, TAI и LST была достоверно связана с дефицитом BRCA в образцах рака груди.Кроме того, комбинированная оценка была также ретроспективно проверена для прогнозирования ответа на неоадъювантную терапию платиной при тройном отрицательном раке молочной железы (TNBC) (64). Также было показано, что комбинированный балл предсказывает ответ в TNBC после химиотерапии независимо от статуса мутации BRCA (65). Тест myChoice HRD был оценен в исследовании NOVA по применению нирапариба при раке яичников, которое показало значительную пользу у положительных пациентов, которая была больше, чем польза, отмеченная для пациентов без HRD (17). Высокий показатель HRD (> 42) и / или мутация BRCA1 / 2 также связаны с устойчивым ответом на олапариб (46).Напротив, среди тестов с единичной оценкой только оценка LOH Foundation Medicine была проспективно подтверждена в исследовании III фазы ARIEL 3 (Coleman et al., 2017).

Рисунок 3. Показатели дефицита гомологической рекомбинации. Оценка LOH определяется количеством обнаруженных областей с потерей гетерозиготности, размер которых превышает 15 Mb, за исключением потери всей хромосомы. TAI — это метрика, учитывающая хромосомные разрывы, которые распространяются на теломеры. Оценка LST представляет собой сумму количества хромосомных разрывов размером не менее 10 Мб, но менее 15 Мб с расстоянием между разрывами не менее 3 Мб.

Хотя биомаркеры HRD очень многообещающие, они не без ограничений. Например, комбинированный показатель HRD не смог предсказать чувствительность к платине в исследовании TNT, оценивающем метастатический TNBC (Tutt et al., 2018). Существует несколько возможных объяснений неэффективности этого биомаркера в этой и других случаях, например, предыдущее воздействие химиотерапии, приводящее к появлению механизмов устойчивости, что подтверждается данными, свидетельствующими о том, что геномные рубцы HRD улучшили свои характеристики в неоадъювантных условиях ( Телли и др., 2016). Описанные механизмы устойчивости включают приобретение «обратных» мутаций, которые могут восстановить функциональную гомологичную рекомбинацию в опухоли, но при этом остаются геномные рубцы. О таких мутациях реверсии сообщалось в BRCA1 / 2 , PALB2 и RAD51C / D (Edwards et al., 2008; Sakai et al., 2008; Goodall et al., 2017; Kondrashova et al., 2017). Дополнительным механизмом устойчивости, который может быть не связан с HRD и не обнаруживаться ни одним из родственных маркеров, является повышенная экспрессия переносчика оттока АТФ-связывающего кассетного переносчика B1 (ABCB1; P-гликопротеин; белок 1 множественной лекарственной устойчивости) (Rottenberg et al., 2008). Дополнительные данные необходимы для полного осознания клинической применимости различных анализов биомаркеров HRD.

Мутационные паттерны рака: текущая и будущая клиническая реализация в прецизионной медицине рака

Секвенирование соматического рака, выполняемое NGS, является отличным комплексным тестом для выявления простых мутаций, сложных генетических изменений, количественной оценки TMB, определения MSI и HRD и распознавания потенциальных мутационных сигнатур. Результаты, полученные из паттернов, наблюдаемых в данных NGS, являются действенными: и MSI, и HRD имеют одобренные FDA показания для терапии, а TMB также является новым биомаркером иммунотерапевтического ответа.

По отдельности, некоторые результаты не имеют прямого действия, но имеют клиническую значимость: мутационные сигнатуры помогают решать диагностические проблемы, возникающие из-за ограничений традиционной гистологии и иммуногистохимии (Sholl et al., 2016). Мутационные сигнатуры предполагают механизмы, лежащие в основе болезни и причинных мутагенов окружающей среды, которые могут указывать на конкретный диагноз в конкретных случаях. Однако остаются проблемы для внедрения NGS в качестве комплексного теста на TMB, MSI, мутационные сигнатуры и HRD в дополнение к идентификации традиционных генетических изменений.NGS, хотя и значительно более доступный в последние годы, по-прежнему является дорогостоящим тестом. С точки зрения развития лаборатории и с технической точки зрения, существуют также значительные проблемы, в том числе отсутствие стандартизации для расчета многих показателей, трудности с получением проверочных образцов с известной «достоверной достоверностью данных» и отсутствие согласованных нормальных испытаний во многих лабораториях. Даже если некоторые из этих препятствий будут преодолены, многие метрики на основе NGS сложны в вычислительном отношении и требуют обширной разработки и развертывания биоинформатики, что может стать серьезным узким местом и препятствием для многих лабораторий.

В наш век «персонализированной медицины» ни один результат не будет определять судьбу пациента или оптимальное лечение, вместо этого клиницисты должны объединить огромное количество сложных результатов тестов в единый согласованный клинический план. Огромный объем данных, полученных в результате первичного и вторичного анализа результатов большой панели NGS, делает этот единичный тест все более привлекательным вариантом для интегрированной отчетности.

Авторские взносы

LR и MP внесли свой вклад в содержание, написание, редактирование и рецензирование рукописи.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Список литературы

Абкевич В., Тиммс, К. М., Хеннесси, Б. Т., Поттер, Дж., Кэри, М. С., Мейер, Л. А. и др. (2012). Паттерны геномной потери гетерозиготности предсказывают дефекты репарации гомологичной рекомбинации при эпителиальном раке яичников. Br. J. Cancer 107, 1776–1782.DOI: 10.1038 / bjc.2012.451

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Александров, Л. Б., Ким, Дж., Харадхвала, Н. Дж., Хуанг, М. Н., Тиан, А. В., Ву, Ю. и др. (2020). Репертуар мутационных сигнатур рака человека. Природа 578, 94–101. DOI: 10.1038 / s41586-020-1943-3

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Александров, Л. Б., Ник-Зайнал, С., Клин, Д. К., Апарисио, С. А., Бехьяти, С., Бианкин, А. В. и др. (2013). Сигнатуры мутационных процессов при раке человека. Природа 500, 415–421. DOI: 10.1038 / природа12477

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Allgauer, M., Budczies, J., Christopoulos, P., Endris, V., Lier, A., Rempel, E., et al. (2018). Внедрение анализа мутационной нагрузки опухоли (TMB) в рутинную диагностику — учебник для молекулярных патологов и клиницистов. Пер. Lung Cancer Res. 7, 703–715. DOI: 10.21037 / tlcr.2018.08.14

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Au, C.Х., Леунг, А. Ю., Квонг, А., Чан, Т. Л., и Ма, Э. С. (2017). INDELseek: обнаружение сложных вставок и удалений из данных секвенирования следующего поколения. BMC Genomics 18:16. DOI: 10.1186 / s12864-016-3449-9

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бодрен, Л. Г., Делёз, Дж. Ф., и Хау-Кит, А. (2018). Молекулярные и вычислительные методы обнаружения микросателлитной нестабильности при раке. Фронт. Онкол. 8: 621. DOI: 10.3389 / fonc.2018.00621

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Биркбак, Н.J., Wang, Z.C., Kim, J.Y., Eklund, A.C., Li, Q., Tian, ​​R., et al. (2012). Теломерный аллельный дисбаланс указывает на дефектную репарацию ДНК и чувствительность к агентам, повреждающим ДНК. Рак Discov. 2, 366–375. DOI: 10.1158 / 2159-8290.CD-11-0206

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Боланд, К. Р., Тибодо, С. Н., Гамильтон, С. Р., Сидрански, Д., Эшлеман, Дж. Р., Берт, Р. В. и др. (1998). Семинар национального института рака по микросателлитной нестабильности для выявления рака и семейной предрасположенности: разработка международных критериев для определения микросателлитной нестабильности при колоректальном раке. Cancer Res. 58, 5248–5257.

Google Scholar

Брамер, Дж. Р., Тыкоди, С. С., Чоу, Л. К., Хву, В. Дж., Топалиан, С. Л., Хву, П. и др. (2012). Безопасность и активность антител против PD-L1 у пациентов с запущенным раком. N. Engl. J. Med. 366, 2455–2465. DOI: 10.1016 / j.juro.2012.08.169

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Брайант, Х. Э., Шульц, Н., Томас, Х. Д., Паркер, К. М., Флауэр, Д., Лопес, Э. и др. (2005).Специфическое уничтожение BRCA2-дефицитных опухолей ингибиторами поли (АДФ-рибоза) полимеразы. Природа 434, 913–917. DOI: 10.1038 / nature03443

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Buchhalter, I., Rempel, E., Endris, V., Allgauer, M., Neumann, O., Volckmar, A. L., et al. (2019). Размер имеет значение: анализ ключевых параметров для панельного анализа мутационной нагрузки опухоли. Внутр. J. Cancer 144, 848–858. DOI: 10.1002 / ijc.31878

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чалмерс, З.Р., Коннелли, К. Ф., Фабрицио, Д., Гей, Л., Али, С. М., Эннис, Р. и др. (2017). Анализ 100000 геномов рака человека раскрывает картину мутационного бремени опухолей. Genome Med. 9:34. DOI: 10.1186 / s13073-017-0424-2

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чанг, Х. Х. Ю., Паннунцио, Н. Р., Адачи, Н., Либер, М. Р. (2017). Негомологичное соединение концов ДНК и альтернативные пути репарации двухцепочечных разрывов. Нат. Преподобный Мол. Cell Biol. 18, 495–506.DOI: 10.1038 / nrm.2017.48

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Chen, Y. P., Zhang, Y., Lv, J. W., Li, Y. Q., Wang, Y. Q., He, Q. M., et al. (2017). Геномный анализ иммунных типов микроокружения опухоли по 14 типам солидного рака: иммунотерапевтические последствия. Theranostics 7, 3585–3594. DOI: 10.7150 / thno.21471

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коулман, Р. Л., Оза, А. М., Лоруссо, Д., Агаджанян, К., Окнин, А., Дин, А., и другие. (2017). Поддерживающая терапия рукапарибом при рецидивной карциноме яичников после ответа на терапию платиной (ARIEL3): рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование фазы 3. Ланцет 390, 1949–1961. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (17) 32440-6

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дэвис, Х., Глодзик, Д., Морганелла, С., Йейтс, Л. Р., Стааф, Дж., Зоу, X. и др. (2017). HRDetect — это предиктор дефицита BRCA1 и BRCA2 на основе мутационных сигнатур. Нат. Med. 23, 517–525. DOI: 10,1038 / нм. 4292

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эдвардс, С. Л., Бро, Р., Лорд, К. Дж., Натраджан, Р., Вачева, Р., Левин, Д. А. и др. (2008). Устойчивость к терапии, вызванная внутригенной делецией в BRCA2. Природа 451, 1111–1115. DOI: 10.1038 / nature06548

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эндрис, В., Буххальтер, И., Аллгауэр, М., Ремпель, Э., Лиер, А., Фолькмар, А. Л. и др.(2019). Измерение опухолевой мутационной нагрузки (TMB) в рутинной молекулярной диагностике: in silico и анализ в реальной жизни трех больших панелей генов. Внутр. J. Cancer 144, 2303–2312. DOI: 10.1002 / ijc.32002

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фармер, Х., Маккаб, Н., Лорд, К. Дж., Татт, А. Н., Джонсон, Д. А., Ричардсон, Т. Б. и др. (2005). Нацеливание на дефект репарации ДНК в мутантных клетках BRCA в качестве терапевтической стратегии. Природа 434, 917–921. DOI: 10.1038 / природа03445

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фрисс, Л., Фридман, Б., и Демакис, Дж. (1989). Географические различия в использовании больниц администрации ветеранов. Soc. Sci. Med. 28, 347–354. DOI: 10.1016 / 0277-9536 (89)

-1

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гарон, Э. Б., Хеллманн, М. Д., Ризви, Н. А., Карцерени, Э., Лейл, Н. Б., Ан, М. Дж. И др. (2019). Пятилетняя общая выживаемость пациентов с запущенным немелкоклеточным раком легких, получавших пембролизумаб: результаты исследования I фазы KEYNOTE-001. J. Clin. Онкол. 37, 2518–2527. DOI: 10.1200 / JCO.19.00934

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гудолл, Дж., Матео, Дж., Юань, В., Моссоп, Х., Порта, Н., Миранда, С. и др. (2017). Циркулирующая внеклеточная ДНК для лечения рака простаты с ингибированием PARP. Рак Discov. 7, 1006–1017. DOI: 10.1158 / 2159-8290.CD-17-0261

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Haraldsdottir, S., Rafnar, T., Frankel, W. L., Einarsdottir, S., Sigurdsson, A., Hampel, H., et al. (2017). Комплексный популяционный анализ синдрома Линча в Исландии выявил мутации-основатели в MSH6 и PMS2. Нат. Commun. 8: 14755. DOI: 10.1038 / ncomms14755

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хауз, Р. Дж., Притчард, К. С., Шендуре, Дж., И Салипанте, С. Дж. (2016). Классификация и характеристика микросателлитной нестабильности по 18 типам рака. Нат. Med. 22, 1342–1350. DOI: 10.1038 / nm0418-525a

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хелледей Т., Эштад, С., Ник-Зайнал, С. (2014). Механизмы, лежащие в основе мутационных сигнатур рака человека. Нат. Преподобный Жене. 15, 585–598. DOI: 10.1038 / nrg3729

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хеллманн, М. Д., Ризви, Н. А., Гольдман, Дж. У., Геттингер, С. Н., Боргей, Х., Брамер, Дж. Р. и др. (2017). Ниволумаб плюс ипилимумаб в качестве лечения первой линии при распространенном немелкоклеточном раке легкого (CheckMate 012): результаты открытого многокомпонентного исследования фазы 1. Ланцет Онкол. 18, 31–41. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (16) 30624-6

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хербст, Р. С., Лопес, Г., Ковальски, Д. М., Нишио, М., Ву, Ю., Де Кастро Джуниор, Г. и др. (2019). Связь между тканевым TMB (tTMB) и клиническими исходами при монотерапии пембролизумабом (pembro) при PD-L1-положительном распространенном НМРЛ в исследованиях KEYNOTE-010 и -042. Ann. Онкол. 30, v851 – v934.

Google Scholar

Хоппе, М.М., Сундар, Р., Тан, Д. С. П., и Джеясекхаран, А. Д. (2018). Биомаркеры дефицита гомологичной рекомбинации при раке. J. Natl. Cancer Inst. 110, 704–713. DOI: 10.1093 / jnci / djy085

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хантер, Дж. Э., Арнольд, К. А., Кук, Дж. Э., Зепп, Дж., Гилмор, М. Дж., Веревка, А. Ф. и др. (2017). Универсальный скрининг на синдром Линча среди пациентов с колоректальным раком: перспективы пациентов на скрининг и обмен результатами с родственниками из группы риска. Fam. Рак 16, 377–387. DOI: 10.1007 / s10689-017-9972-2

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кондрашова, О., Нгуен, М., Шилд-Артин, К., Тинкер, А. В., Тенг, Н. Н. Х., Харрелл, М. И. и др. (2017). Вторичные соматические мутации, восстанавливающие RAD51C и RAD51D, связаны с приобретенной устойчивостью к ингибитору parp рукапарибу при карциноме яичников высокой степени злокачественности. Рак Discov. 7, 984–998. DOI: 10.1158 / 2159-8290.CD-17-0419

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ларкин, Дж., Кьярион-Силени, В., Гонсалес, Р., Гроб, Дж. Дж., Рутковски, П., Лао, К. Д. и др. (2019). Пятилетняя выживаемость при применении комбинации ниволумаба и ипилимумаба при запущенной меланоме. N. Engl. J. Med. 381, 1535–1546. DOI: 10.1056 / NEJMoa16

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лоуренс, М.С., Стоянов, П., Полак, П., Крюков, Г.В., Цибульскис, К., Сиваченко, А., и др. (2013). Мутационная гетерогенность рака и поиск новых генов, связанных с раком. Природа 499, 214–218.DOI: 10.1038 / природа12213

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ле, Д. Т., Дарем, Дж. Н., Смит, К. Н., Ван, Х., Бартлетт, Б. Р., Аулах, Л. К. и др. (2017). Дефицит репарации несоответствия предсказывает ответ солидных опухолей на блокаду PD-1. Наука 357, 409–413. DOI: 10.1126 / science.aan6733

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ле, Д. Т., Урам, Дж. Н., Ван, Х., Бартлетт, Б. Р., Кемберлинг, Х., Эйринг, А. Д. и др. (2015). Блокада PD-1 в опухолях с дефицитом репарации несовпадений. N. Engl. J. Med. 372, 2509–2520. DOI: 10.1056 / NEJMc1510353

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лемери С., Киган П. и Паздур Р. (2017). Первое одобрение FDA независимо от места рака — когда биомаркер определяет показание. N. Engl. J. Med. 377, 1409–1412. DOI: 10.1056 / NEJMp1709968

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маркус, Л., Лемери, С. Дж., Киган, П., и Паздур, Р. (2019). Резюме одобрения FDA: пембролизумаб для лечения солидных опухолей с высокой микросателлитной нестабильностью. Clin. Cancer Res. 25, 3753–3758. DOI: 10.1158 / 1078-0432.CCR-18-4070

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мардис, Э. Р. (2011). Десятилетний взгляд на технологию секвенирования ДНК. Природа 470, 198–203. DOI: 10.1038 / nature09796

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Моз, Л. Е., Вилкерсон, М. Д., Хейс, Д. Н., Перу, К. М., и Паркер, Дж. С. (2014). ABRA: улучшено обнаружение отступов кодирования с помощью перестройки на основе сборки. Биоинформатика 30, 2813–2815. DOI: 10.1093 / биоинформатика / btu376

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нагараджан Р., Бартли А. Н., Бридж Дж. А., Дженнингс Л. Дж., Камель-Рид С., Ким А. и др. (2017). Окно в клинические практики онкологического тестирования нового поколения на основе секвенирования. Arch. Патол. Лаборатория. Med. 141, 1679–1685. DOI: 10.5858 / arpa.2016-0542-CP

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пас-Арес, Л., Лангер, К.J., Novello, S., Halmos, B., Cheng, Y., Gadgeel, S.M., et al. (2019). Пембролизумаб (пембро) плюс химиотерапия на основе платины (химиотерапия) при метастатическом НМРЛ: тканевый TMB (tTMB) и результаты в KEYNOTE-021, 189 и 407. Ann. Онкол. 30, v851 – v934.

Google Scholar

Планчард, Д., Попат, С., Керр, К., Новелло, С., Смит, Э. Ф., Фейвр-Финн, К. и др. (2018). Метастатический немелкоклеточный рак легкого: клинические рекомендации ESMO по диагностике, лечению и последующему наблюдению. Ann. Онкол. 29, iv192 – iv237.

Google Scholar

Попова Т., Мани Э., Ренье Г., Ко-Монкутье В., Тирапо К., Дюбуа Т. и др. (2012). Плоидность и крупномасштабная геномная нестабильность последовательно выявляют базальные карциномы молочной железы с инактивацией BRCA1 / 2. Cancer Res. 72, 5454–5462. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-12-1470

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рек, М., Родригес-Абреу, Д., Робинсон, А.Г., Хуэй, Р., Csoszi, T., Fulop, A., et al. (2016). Пембролизумаб в сравнении с химиотерапией при PD-L1-положительном немелкоклеточном раке легкого. N. Engl. J. Med. 375, 1823–1833. DOI: 10.2217 / imt-2019-0178

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ризви, Н. А., Хеллманн, М. Д., Снайдер, А., Квистборг, П., Макаров, В., Гавел, Дж. Дж. И др. (2015). Иммунология рака. Мутационный ландшафт определяет чувствительность к блокаде PD-1 при немелкоклеточном раке легкого. Наука 348, 124–128.DOI: 10.1126 / science.aaa1348

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Rottenberg, S., Jaspers, J. E., Kersbergen, A., Van Der Burg, E., Nygren, A.O., Zander, S.A., et al. (2008). Высокая чувствительность BRCA1-дефицитных опухолей молочной железы к ингибитору PARP AZD2281 отдельно и в комбинации с препаратами платины. Proc. Natl. Акад. Sci. США 105, 17079–17084. DOI: 10.1073 / pnas.08060

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сакаи, В., Свишер, Э.М., Карлан, Б. Ю., Агарвал, М. К., Хиггинс, Дж., Фридман, К. и др. (2008). Вторичные мутации как механизм устойчивости к цисплатину при раке с мутацией BRCA2. Природа 451, 1116–1120. DOI: 10.1038 / nature06633

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сангер Ф., Никлен С. и Колсон А. Р. (1977). Секвенирование ДНК с помощью ингибиторов обрыва цепи. Proc. Natl. Акад. Sci. США 74, 5463–5467.

Google Scholar

Секвист, Л.В., Хейст, Р. С., Шоу, А. Т., Фидиас, П., Розовски, Р., Темель, Дж. С. и др. (2011). Внедрение мультиплексного генотипирования немелкоклеточного рака легких в повседневную клиническую практику. Ann. Онкол. 22, 2616–2624. DOI: 10.1093 / annonc / mdr489

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шолл, Л. М., До, К., Шивдасани, П., Керами, Э., Дубук, А. М., Куо, Ф. К. и др. (2016). Институциональное внедрение клинического профилирования опухолей в неизбираемой популяции раковых опухолей. JCI Insight. 1: e87062. DOI: 10.1172 / jci.insight.87062

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стензингер, А., Аллен, Дж. Д., Маас, Дж., Стюарт, М. Д., Мерино, Д. М., Вемпе, М. М. и др. (2019). Инициативы по стандартизации бремени мутаций опухоли: рекомендации по последовательной оценке бремени мутаций опухоли в клинических образцах для принятия решений о лечении при иммунотерапии. Genes Chromosom. Рак 58, 578–588. DOI: 10.1002 / gcc.22733

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Sztupinszki, Z., Diossy, M., Krzystanek, M., Reiniger, L., Csabai, I., Favero, F., et al. (2018). Перенос показателей дефицита гомологичной рекомбинации на основе массива SNP в данные секвенирования рака груди следующего поколения. NPJ Рак молочной железы 4:16. DOI: 10.1038 / s41523-018-0066-6

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Талевич Э., Шайн А. Х., Боттон Т. и Бастиан Б. К. (2016). CNVkit: определение и визуализация числа копий в масштабе всего генома на основе целевого секвенирования ДНК. PLoS Comput. Биол. 12: e1004873. DOI: 10.1371 / journal.pcbi.1004873

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тейт, Дж. Г., Бэмфорд, С., Джубб, Х. К., Сондка, З., Беар, Д. М., Биндал, Н. и др. (2019). КОСМИКА: каталог соматических мутаций при раке. Nucleic Acids Res. 47, D941 – D947.

Google Scholar

Таубе, Дж. М., Кляйн, А., Брамер, Дж. Р., Сюй, Х., Пан, X., Ким, Дж. Х. и др. (2014). Ассоциация PD-1, лигандов PD-1 и других особенностей иммунного микроокружения опухоли с ответом на терапию анти-PD-1. Clin. Cancer Res. 20, 5064–5074. DOI: 10.1158 / 1078-0432.CCR-13-3271

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Телли, М. Л., Тиммс, К. М., Рид, Дж., Хеннесси, Б., Миллс, Г. Б., Дженсен, К. С. и др. (2016). Оценка дефицита гомологичной рекомбинации (HRD) предсказывает ответ на платиносодержащую неоадъювантную химиотерапию у пациентов с трижды отрицательным раком груди. Clin. Cancer Res. 22, 3764–3773. DOI: 10.1158 / 1078-0432.CCR-15-2477

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тиммс, К.М., Абкевич, В., Хьюз, Э., Нефф, К., Рид, Дж., Моррис, Б. и др. (2014). Связь дефектов BRCA1 / 2 с геномными оценками, позволяющими прогнозировать дефицит репарации повреждений ДНК среди подтипов рака молочной железы. Breast Cancer Res. 16: 475. DOI: 10.1186 / s13058-014-0475-x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Топалиан, С. Л., Ходи, Ф. С., Брамер, Дж. Р., Геттингер, С. Н., Смит, Д. К., Макдермотт, Д. Ф. и др. (2012). Безопасность, активность и иммунные корреляты антитела против PD-1 при раке. N. Engl. J. Med. 366, 2443–2454. DOI: 10.1016 / j.eururo.2014.12.052

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тутт, А., Тови, Х., Ченг, М. К. У., Кернаган, С., Килбурн, Л., Газинска, П., и др. (2018). Карбоплатин в подгруппах BRCAness с мутацией BRCA1 / 2 и трижды отрицательным раком молочной железы: исследование TNT. Нат. Med. 24, 628–637. DOI: 10.1038 / s41591-018-0009-7

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ван, Ю., Ши, К., Айзенберг, Р., и Вненчак-Джонс, К. Л. (2017). Различия в профилях микросателлитной нестабильности между эндометриоидным и колоректальным раком: потенциальная причина ложноотрицательных результатов? J. Mol. Диаг. 19, 57–64. DOI: 10.1016 / j.jmoldx.2016.07.008

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Райт, В. Д., Шах, С. С., Хейер, В. Д. (2018). Гомологичная рекомбинация и восстановление двухцепочечных разрывов ДНК. J. Biol. Chem. 293, 10524– 10535.

Google Scholar

Ямамото, Х., и Имаи, К. (2019). Обновленный обзор микросателлитной нестабильности в эпоху секвенирования нового поколения и точной медицины. Семин. Онкол. 46, 261–270. DOI: 10.1053 / j.seminoncol.2019.08.003

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Зехир, А., Бенаед, Р., Шах, Р. Х., Сайед, А., Миддха, С., Ким, Х. Р. и др. (2017). Мутационный ландшафт метастатического рака выявлен в результате проспективного клинического секвенирования 10 000 пациентов. Нат. Med. 23, 703–713.DOI: 10,1038 / нм0817-1004c

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чжао, Э. Ю., Шен, Ю., Удовольствие, Э., Касаян, К., Лилакумари, С., Джонс, М., и др. (2017). Дефицит гомологичной рекомбинации и результаты терапии на основе платины при распространенном раке груди. Clin. Cancer Res. 23, 7521–7530. DOI: 10.1158 / 1078-0432.CCR-17-1941

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мобильное инсультное отделение UTHSC получило первую в своем роде аккредитацию

Во вторник передвижное инсультное отделение UTHSC получило престижную аккредитацию от Международной комиссии по аккредитации.Доктор Андрей Александров, медицинский директор Мобильного инсультного отделения, получил сертификат от Мэри Лалли, генерального директора комиссии. В центре внимания Нэнси Меррилл, CT-директор по аккредитации организации. (Фото Натали Брюэр / UTHSC)

Мобильное инсультное отделение Медицинского научного центра Университета Теннесси сегодня получило первую в своем роде аккредитацию Межобщественной аккредитационной комиссии (IAC) за обеспечение безопасности пациентов, радиационной безопасности, приверженности качеству, и стремление к постоянному совершенствованию.

Престижная трехлетняя аккредитация распространяется на области неврологической КТ (компьютерная томография) / острого инсульта и сосудистой КТА (компьютерная томографическая ангиография), оба инструмента диагностической визуализации, используемые в отделении для определения лечения инсульта. Это первый случай, когда IAC предоставил эту аккредитацию мобильному CT-подразделению, присвоив ему такое обозначение только после того, как Mobile Stroke Unit UTHSC прошел интенсивный процесс подачи заявки и проверки.

Запущенный в 2016 году мобильный инсультный блок UTHSC представляет собой 14-тонное отделение неотложной помощи на колесах с оборудованием для компьютерной томографии больничного класса.Он разработан таким образом, чтобы диагностику и лечение можно было начинать в полевых условиях, а не откладывать до прибытия в больницу.

Поскольку 1,9 миллиона нейронов теряются за каждую минуту без лечения, время имеет существенное значение, когда дело доходит до успешных результатов. Устройство предназначено для сокращения времени до лечения и повышения шансов на выздоровление после инсульта, который является пятой по значимости причиной смерти и причиной номер 1 постоянной нетрудоспособности у взрослых в США.

Мэри Лалли, MS, CAE, главный исполнительный директор IAC, и Нэнси Меррилл, BS, RT (R) (M) (CT), CT-директор по аккредитации IAC, были сегодня в кампусе на церемонии, посвященной важной вехой для мобильного инсультного отделения.

«Став первым аккредитованным мобильным отделением компьютерной томографии в стране, фактически в мире, вы установили планку для инноваций в области инсульта, которой могут следовать другие», — сказал Лалли, обращаясь к группе, собравшейся в холле Центра здравоохранения UTHSC. Улучшение и моделирование пациента, где проходила церемония. «Благодаря вашим инновациям и вашим усилиям будут спасены жизни».

Аккредитация МАК является «знаком одобрения» и показателем качества обслуживания, по мнению организации.

«Это очень, очень важный момент в истории Центра медицинских наук Университета Теннесси», — сказал Кен Браун, исполнительный вице-канцлер и главный операционный директор UTHSC. «Работа, проделанная доктором Александровым и его командой, была просто замечательной. Наш партнер, компания Methodist Healthcare, — это другое учреждение, мы — другая организация в результате такого уровня помощи, оказываемой нашему сообществу ». Университетская больница Methodist, одна из клиник-партнеров UTHSC, является домом для Центра комплексного лечения инсульта, куда пациентов, перенесших инсульт, часто доставляют мобильным инсультным отделением.

Внутри передвижного инсультного отделения представители IAC смогли увидеть компьютерный томограф медицинского качества, который используется для диагностики.

Андрей Александров, доктор медицинских наук, медицинский директор мобильного инсультного отделения и заведующий отделением неврологии UTHSC, похвалил команду инсультного отделения за проделанную работу. С момента запуска установка была призвана реагировать на возможные инсульты в среднем от четырех до пяти раз в день, когда она находится в эксплуатации. Подразделение размещено в пожарном депо по адресу 980 E. McLemore и соединено со службами скорой медицинской помощи для отправки в районе Мемфиса.

Доктор Александров сказал, что на выполнение компьютерной томографии на передвижном инсультном блоке требуется около 3 1/2 минут. «С того момента, как передвижное инсультное отделение прибывает на место происшествия, и до момента, когда мы получаем окончательный диагноз, мы осмотрели мозг, а также осмотрели кровеносные сосуды, и мы знаем, с каким типом инсульта мы имеем дело и в каком учреждении. нам нужно ехать с этим пациентом, это займет всего 7 минут », — сказал он. Для сравнения, сказал он, парамедикам в Теннесси дается 10 минут на оценку пациентов с болью в груди.«Итак, мы сокращаем 10 минут до сердечного приступа». В зависимости от типа диагностированного инсульта до прибытия в больницу в передвижном инсультном блоке можно начать лечение тромбообразователем tPA, тканевым активатором плазминогена.

«Причина, по которой это так важно, заключается в том, что он сообщает общественности, что, когда мы подъезжаем, чтобы позаботиться о вас прямо перед вашим домом, вы получаете самое высокое качество изображения компьютерной томографии, которое доступно», — сказала Анна Александрова, доктор философии RN, CCRN, ANVP-BC, NVRN-BC, FAAN, ведущая практикующая медсестра мобильного инсультного отделения и профессор Колледжа медсестер UTHSC.

IAC обеспечивает аккредитацию программ, включающих сосудистое тестирование, эхокардиографию, МРТ, КТ, стентирование сонных артерий, лечение вен, электрофизиологию сердца и катетеризацию сердечно-сосудистой системы. IAC предоставил аккредитацию более чем 14 000 сайтов в США, Канаде и Пуэрто-Рико.

Показана команда мобильного инсультного отделения с представителями IAC и д-ром Кеном Брауном, исполнительным вице-канцлером и главным операционным директором UTHSC, который открыл церемонию (задний ряд, третий слева).

Связанные

Метрическая геометрия Осень 2019 — профессор Сормани

Мы начинаем с обзора большого разнообразия метрических пространств и обзора классической метрической геометрии. Затем мы рассматриваем различные понятия сходимости для метрических пространств, включая Громова-Липшица, Громова-Хаусдорфа и внутреннюю плоскую сходимость. Мы рассмотрим условия, которые подразумевают сходимость и субсходимость, а также свойства, сохраняющиеся при сходимости. Студентам продвинутого уровня будет предложено выполнять работы, связанные с метрическими пространствами, возникающими в их собственной области исследований, в то время как студентам первого и второго курса будут предоставлены более простые метрические пространства для изучения.Завершенная работа может быть достаточно высокого качества для публикации в виде небольшой статьи. Список литературы включает учебник Бураго-Бураго-Иванова и различные статьи, опубликованные за последнее десятилетие.

Оценки A B C INC или F будут зависеть от завершения проектов (HW см. Ниже каждый урок), которые будут постепенно распределяться в течение всего семестра и собираться как завершенные (должны быть в конце семестра). Каждый будет работать над разными проектами, хотя некоторые могут работать в команде над некоторыми частями, если захотят.Результатом будет работа, которая идеально подходит для публикации, хотя для экзамена A она не требуется.

Была запрошена точная схема выставления оценок, поэтому она выглядит следующим образом:

20% оценок основано на правильном завершении Урока 1 HW

20% оценка основана на правильном завершении Урока 2 HW

20% оценки основана на правильном завершении Урока 3 HW

20% оценки основана на правильном завершении Урока 5 HW

20% оценки основывается на правильном завершении завершение одного дополнительного урока HW или проекта

Отзывы будут даны о работе, выполненной вовремя, так что, когда она будет повторно представлена ​​на финальной неделе, надеюсь, она будет идеальной.Некоторые продвинутые ученики пропустили Урок I, потому что он был слишком простым. Вы можете отправить более сложный урок HW вместо урока 1 HW, если хотите. Цель состоит в том, чтобы выбрать HW по темам, которые вам наиболее интересны.

Материалы, ресурсы и приспособления:

Короткая статья с обзором этой области в уведомлениях AMS, которые я недавно написал.

Книги и статьи: (будут связаны под каждым уроком)

Текст Бураго-Бураго-Иванова настоятельно рекомендуется и стоит его покупки

Советы для докторантов и около Предыдущие докторанты и Постдоки , которые работали со мной

Приспособление к инвалидности: CUNY стремится предоставить доступ ко всем программам и учебным планам для всех студентов.

Учащиеся с ограниченными возможностями, которым может потребоваться проживание в классе, должны сообщить мне, что я могу сделать.

Размещение в праздники: Если у вас есть отпуск во время урока или дополнительного урока, дайте мне знать, и что-то будет организовано.

Имена / Пол: Мы будем использовать последние фамилии в этом классе . Вы можете называть меня Сормани или Профессор.

Уважение: Все ученики будут относиться друг к другу с уважением и достоинством.Сообщите мне, если у вас возникнут проблемы.

Расписание : (темы и ссылки на связанные статьи будут появляться по ходу семестра).

на веб-странице курса:

https://sites.google.com/site/professorsormani/metric-geometry-fall-2019

29 августа: Урок I: Метрическая геометрия, Шары, Открытые наборы, Пределы баллов , Непрерывность, Липшицевы карты, билипшицевы карты, Липшицева сходимость, Пространства продуктов, Продукты такси, Диаметры, Карты проекций,

HW: (1) Пришлите мне свое доказательство того, что если f является лямбда-липшицевым, а x_j — x_infty, то f ( от x_j) до f (x_infty), включая соотношение между N для x_j и N для f (x_j).(2) Пришлите мне ваше доказательство взаимосвязи между diam (X) и diam (Y), когда X и Y являются лямбда-билипшицевыми, используя определение диаметра. (3) Также отправьте мне электронное письмо с указанием, какие курсы и экзамены вы прошли и сдаете в этом году, и какие исследования их интересуют. Таким образом я могу разработать ваши индивидуальные проекты. Обязательно дайте мне знать, если у вас есть опыт работы в области римановой геометрии или теории вероятностей.

12 сентября: Урок 2: Компактность, равномерная компактность, метрические пополнения и теорема Громова о компактности

HW (1) Предположим, что последовательность метрических пространств X_j имеет бипшицевы отображения $ f_j: X_0 \ to X_j $ с константами Липшица lambda_j

(1a) показывают, что если lambda_j le K, то N_j (r) может быть ограничено равномерно, явно относится к N_0 (R) и дает явное построение сетей.

(1b) пройдитесь по доказательству теоремы Громова и опишите конструкцию предельного пространства

(1c) покажите, что предельное пространство (X_infty, d_infty) является biLip до (X_0, d_0)

(1d) что если lambda_j сходятся к 1?

(2) Рассмотрим X_j как торы, где один круг имеет фиксированный радиус 1, а другой радиус R_j равен 0

(2a) Найдите однородный N_j (r) для последовательности и явные r-сети

(2b) go через доказательство теоремы Громова и описать конструкцию предельного пространства

(2c) показать, что предельное пространство — это круг

(3) Рассмотрим X_j как последовательность метрических пространств по вашему выбору и исследуем, является ли последовательность равномерно компактной из нет.

(4) Возьмите любое метрическое пространство

(4a) Докажите, что N (r) может быть принято как максимальное количество непересекающихся шаров радиуса R_r.

(4б) Какая формула для R_r?

(4c) Что, если максимальное количество непересекающихся шаров в последовательности метрических пространств расходится до бесконечности?

19 сентября: Урок 3: Множество эквивалентных определений расстояния Громова-Хаусдорфа

(1) Напишите доказательство того, что если расстояние GH

(это было сделано в классе беспорядочно, так что напишите это аккуратно)

(2) Напишите доказательство того, что если существует почти изометрия r, то расстояние GH будет <2r

(это не было полностью завершено в классе, так как мы построили только Z и сделали не проверять расстояние Хаусдорфа в Z)

(3) Если расстояние Громова-Липшица между двумя пространствами

(4) Докажите, что все более тонкие торы S ^ 1xS ^ 1_ (1 / j) GH сходятся в S ^ 1 с использованием почти изометрий

(5) Выберите пару компактных метрических пространств, которые вы изучали в прошлом, и оцените расстояние GH между ними.

26 сентября: Урок 4: Коническая сходимость GH, касательные конусы на бесконечности, касательные конусы в точке и метрические конусы

Начните думать об ограничениях метрических пространств, которые вы хотите изучать. На сегодняшнем уроке им не нужно быть компактными. Следите за первыми тремя проектами. Обязательно отправьте мне по электронной почте идеи о метрических пространствах или попросите порекомендовать некоторые из них, напоминая мне о вашем прошлом. Важно, чтобы никто еще не бросил курс, поэтому повторно отправьте работу, если вы сделали много ошибок.Присылайте только полные четкие доказательства (не все идеи, которые у вас есть в пути). Напишите мне, если вы не получали фотографии классных досок для каждого урока.

3 октября: Урок 5: (без собрания), но изучайте и выполняйте HW на пространствах длины, геодезических, средних точках и теореме GH Арзелы Асколи

HW (1) (a) Докажите, что если X и Y содержат r сетей {x_1, …, x_N (r)} и {y_1, …, y_N (r)}, и если существует взаимно однозначное соответствие между r сетями, которое является дельта-почти сохраняющим расстояние | d_X (x_i, x_j ) -d_Y (y_i, y_j) |

(2) Предположим, что X_j GH в X, поэтому есть r_j почти изометрий от X до X_j с r_j до 0, (a) Докажите, что если X имеет сеть R с N точками, то

X_j также имеет сети R_j с N точками поиск формулы для R_j в зависимости от r_j и R. (b) Используйте это свойство, чтобы найти последовательность метрических пространств без предела GH и доказать это.

(3) Предположим, что X_j GH в X, поэтому существует r_j почти изометрий от X до X_j с r_j в 0, (a) докажите, что для любых p, q в X мы можем найти p_i и q_i в X_i такие, что d_i (p_i , q_i) в d (p, q).(b) докажите, что если эти p_i и q_i имеют среднюю точку x_i, то p и q также имеют среднюю точку. (c) сделать вывод, что пределы GH пространств компактной длины являются пространствами компактной длины (см. учебник для получения дополнительной информации о пространствах длины. (d) примените это к последовательности метрических пространств, которые являются пространствами длины.

(5) Предположим, что X_j GH соответствует X и Y_j GH в Y все компактны, и предположим, что F_j: X_j до Y_j липшицевы с константой Липшица K. Используйте почти изометрии phi_j: X в X_j и psi_j: Y_j в Y, чтобы определить H_j = psi_j F_j phi_j: X to Y.(а) H_j Липшиц? Найдите контрпример или докажите это. Если это не Липшиц, что знает о H_j? (b) пусть S = {x_1, x_2, …, x_N, …} — счетное плотное множество в X такое, что x_1, …, x_N (r) — r-сеть. Докажите, что можно найти подпоследовательность H_j, сходящуюся к некоторой функции H: S в Y, и что H липшицево K (c). Докажите, что вы можете расширить H до X однозначно как липшицеву K-функцию. Это называется теоремой Дж. Х. Арзелы Асколи.

10 октября: Урок 6: Длины, геодезические, Карты Липшица, Меры Хаусдорфа, R Эктифицируемые метрические пространства, Хаусдорфова размерность,

Прочтите о мерах Хаусдорфа множеств в геометрическом пространстве Евориклида

Прочтите это доказательство теоремы Радемахера о том, что липшицевы функции дифференцируемы почти всюду

(1) Покажите, что куб — это 2-спрямляемое метрическое пространство с 6 диаграммами

(2) Покажите, что торы — это 2 спрямляемых метрических пространства, а круг — 1 спрямляемое метрическое пространство

(3) Покажите, что графы с конечным набором ребер 1 спрямляемы и их мера Хаусдорфа 1 является суммой длин ребер.

(4) Покажите, что квадрат такси 2 можно исправить с помощью 1 диаграммы (очень просто).

(5) Покажите, что если два метрических пространства билипшицевы, а одно спрямляемо, то другое тоже, и оцените меры Хаусдорфа этих двух пространств в терминах константы биЛипа. Означает ли сходимость Громова Губа сходимость хаусдорфовых мер?

17 октября: Урок 7: Метрические пространства с границей: Интегральные текущие пространства

Основным источником сегодняшнего урока является исходная статья Сормани-Венгера JDG

. Для получения дополнительной информации о дифференциальных формах см. «Исчисление на многообразиях» Спивака

Следующее HW должно быть выполнимым только на основе нашего урока и вектора calc

(1) (a) нарисуйте несколько конечных ориентированных графов с взвешенными ребрами и найдите их границы.

(b) объясняют, почему любой взвешенный ориентированный граф с конечным числом ребер длины 1 является целым текущим пространством.

(c) рассмотрите метрическое произведение конечного взвешенного графа с интервалом, объясните, почему это целое текущее пространство, и найдите его границу.

(d) на этот раз сделайте то же самое, но возьмите изометрическое произведение конечного графа на окружность.

(2) Если вы изучали риманову геометрию, покажите, что любое ориентированное риманово многообразие с краем является целостным текущим пространством.

(3) Докажите, что если от F: X до Y би липшицево и (X, d, T) — целое текущее пространство, то (Y, d_Y, F_ # T) — целое текущее пространство. Если biLip const равно K (находит диаграммы и проверяет точки положительной плотности). Какая связь между взвешенными объемами?

(4) Если (X, d, T) — это пространство интегральных токов, то show (X, d, kT) — это пространство интегральных токов, если k — целое число. Какая связь между взвешенными объемами?

24 октября: Урок 8: Гостевая лекция Введение в Александровскую геометрию Профессор Нан Ли (City Tech)

Аннотация: Это вводный доклад о Александровской геометрии.Мы начнем с мотивации, а затем сосредоточимся на следующих темах: (1) определения и примеры, (2) глобализация локальных пространств Александрова, (3) измерения, (4) касательные конусы и сингулярные / регулярные множества, (5) стратификационные структуры.

Глава 4 учебника Бураго-Бураго-Иванов — хороший ресурс по этой теме.

HW: Докажите, что если X_j — пространства Александрова с кривизной, ограниченной снизу на 0, и если X_j GHto X_infty, то X_infty — это пространство Александрова с кривизной, ограниченной снизу на 0.

Решите четыре задачи на ваш выбор из 4 главы Бураго-Бураго-Иванов.

31 октября: Класс встречается онлайн на этой неделе в формате pdf слайдов и задавайте вопросы по электронной почте или скайпу

Урок 9: Копченое метрическое пространство

HW Прочтите https://arxiv.org/pdf/1906.03403.pdf который вводит это понятие строго и не требует дополнительной информации.

Необязательно подробно читать корректуру. Постарайтесь понять всю бумагу. В конце статьи приведены некоторые открытые проблемы.Дайте мне знать, если вы заинтересованы в любом из них. Обратите внимание, что «натянутая нить» — это «натянутая нить».

(1) Является ли пространство вытянутой строки пространством длины? Это геодезическое пространство?

(2) Является ли пространство вытянутой струны пространством Александрова с кривизной, ограниченной сверху или снизу, или ни с одной из них?

(3) — это смонтированное метрическое пространство длиной? Это геодезическое пространство?

(4) Является ли суженное пространство пространством Александрова с кривизной, ограниченной сверху или снизу, или ни с одной из них?

7 ноября: Урок 10: Введение в сходимость гладкой и внутренней плоской (SWIF)

Просмотрите слайды этого выступления: « сходящихся последовательностей метрических пространств » (AMS Sampler) (слайды )

Основным источником сегодняшнего урока является исходная статья Сормани-Венгера JDG

Статьи о внутренней плоской конвергенции можно найти здесь

Урок преподается, вводя все необходимые концепции и только то, что необходимо.Напишите мне, чтобы получить фотографии досок.

(1) Покажите, что внутренний плоский предел последовательности сфер с уменьшающимся до 0 радиусом — это пространство 0.

(2) Покажите, что последовательность схлопывающихся торов также сходится во внутреннем плоском смысле к пространству 0

(3) (a) Используйте infimum defn внутреннего плоского расстояния и внутренней плоской сходимости, чтобы доказать, что M_j сходится в пространстве внутренний плоский смысл M тогда и только тогда, когда существуют метрические пространства Z_j и сохраняющие расстояние отображения phi_j: M_j в Z_j и psi_j: M в Z_j и интегральные токи A_j и B_j в Z_j, массы которых сходятся к 0, так что граница B_j равна A_j плюс разница между изображениями M_j и M, рассматриваемых как токи.

(3) (b) Покажите, что если M_j сходится в собственном плоском смысле к M, то границы сходятся к границе.

(4) Интересуют ли вас метрические пространства для изучения естественно целых пространств токов?

14 ноября: Урок 11: Сходимость метрических мер и расстояние Вассерштейна

У Штурма есть статья, представляющая его подход к сходимости метрических мер

Это стоит прочитать, если вас интересуют вероятностные или метрические пространства мер

Примеры сходящихся последовательностей римановых многообразий

Деформированные изделия с Брайаном Алленом см. Препринт

Шитье с Хорхе Базилио и Йозефом Додзюком см. Статью

21 ноября: Урок 12: Конвергенция Громова-Хаусдорфа, внутренняя общий Z

Группы полиномиального роста по Громову Раздел 6

Внутренняя плоская бумага Сормани или препринт Арзела-Асколи

Нет встречи в День Благодарения

5 декабря: Урок 13: Гостевая лекция: Проф. Теория геометрической группы Джейсона Behrstock (GC и Lehman)

Группы полиномиального роста Громова стр. aper

(1) (легко) доказать, что два порождающих набора дают квазиизоморфные метрики слов

(2) (2) (легко) доказать, что если два метрических пространства X и Y квазиизоморфны, то изменив их масштаб на фиксированную константу R, они по-прежнему квазиизоморфны. изоморфный.2 без использования теоремы Громива. Если вы сделаете это, отправьте его и профессору Берстоку, и профессору Сормани

12 декабря: Урок 14: Студенты встречаются для завершения курсовых проектов

Сдать мне все выполненные и исправленные домашние задания, чтобы я мог определить вашу окончательную оценку. Вы должны были выполнить домашние задания из уроков 1–5 плюс один дополнительный урок или проект. Вы также можете отправить более сложные hw вместо более простых уроков, если хотите. Последний шанс получить отзывы перед окончательной отправкой был 6-8 декабря в выходные дни.Окончательный крайний срок подачи готовой работы — четверг, 19 декабря, в классе в 18:30 или по электронной почте.

19 декабря: Урок 15: Жесткость и почти жесткость

См. Учебник римановой геометрии doCarmo и учебник Бураго-Бураго-Иванова

См. Шен-Сормани по топологии многообразий с неотрицательной 9000 манвивной кривизны Риччи 2 000 с более низкой границей кривизны Риччи для обзора жесткости и почти жесткости Риччи

См. Скалярная кривизна Сормани и внутренняя плоская конвергенция

Подача окончательных проектов по электронной почте или лично.

Мы могли бы продолжить весной семинар по чтению, на котором студенты представят более подробную информацию.

No related posts.