Контрольные работы фгос 3 класс: Книга: «Математика. 3 класс. Контрольные работы к учебнику М.И. Моро и др. В 2-х частях. Часть 1. ФГОС» — Виктория Рудницкая. Купить книгу, читать рецензии | ISBN 978-5-377-17014-3

Словарь терминов, относящихся к шуму и контролю шума полезный инструмент для тех, кто исследует, как уменьшить количество шумового загрязнения окружающей среды.Первоначальные авторы сделали отличная работа по определению терминов, связанных со звуком и шумом, и мы вставили информацию зеленым цветом там, где мы почувствовали, что появились новые или полезные слова или термины, и где мы почувствовали более длинный определение может улучшить общение.

Если вы встретите слово, не определенное здесь, или если определение недостаточно четкое, дайте нам знать, используя нашу веб-форму, и мы предоставим вам дополнительная информация и улучшение словаря.

Вы можете перемещаться по словарю с помощью функции поиска в браузере. (обычно в разделе «Редактировать»), и вы можете нажать на внутренние ссылки.

ВВЕДЕНИЕ

Пытаться общаться достаточно сложно, даже если у нас есть четкое и четкие определения всех слов, которыми мы обмениваемся.

Ученые, стремящиеся к точности, известны обременять их общение бесконечными классификаторами. понимание невозможно.

В течение некоторого времени авторы чувствовали необходимость составить глоссарий технических терминов, обычно используемых в области шума контроль. Для достижения этой цели мы бесплатно заимствовали из многих источников. Те, кого мы сознательно помним, перечислены в Библиографии и в авторам выражаем огромную благодарность.

Мы одинаково ценим помощь и предложения Лона Локена и Сэнди
Пламмер с Северным проливом и Джейн
Стилуэлл с загрязнением Миннесоты
Контрольное агентство.

Особая благодарность Брайану Лоуи, Брайану
Lowey Associates, которые очень помогли нам в переводах от акустики до английского языка, и сумел выжить в этой задаче с минимум ущерба его интеллекту.

Верх

Как авторы, мы должны с признательностью признать тех, кто нам помогал. по пути; однако мы принимаем на себя полную ответственность и не допускаем ошибок и неточности, которые вы заметите на следующих страницах.Мы не собираемся эта работа должна стать последним словом, а скорее началом продолжающегося процесс, чтобы сосредоточиться на языке, который мы используем в нашей профессии, и улучшить наши коммуникации.

Если вы скрипите зубами во время чтения любого из наших определения, или вы не найдете то, что ищете, сохраните износ и надорвите свои коренные зубы и отправьте нам свои предложения. Мы бы действительно цените ваш вклад.

ПОГЛОЩЕНИЕ.Свойство материалов, которые позволяет уменьшить количество отраженной звуковой энергии. В введение абсорбента на поверхности комнаты уменьшит уровень звукового давления в этой комнате не отражая всю звуковую энергию, падающую на поверхности. Эффект поглощения просто снижает результирующий звук. уровень в комнате, произведенный энергией, которая уже вошла в комната.

КОЭФФИЦИЕНТ ПОГЛОЩЕНИЯ.А мера звукопоглощающей способности поверхности. Он определяется как доля падающей звуковой энергии, поглощенная или иным образом не отражается от поверхности. Если не указано иное, рассеянный звук поле предполагается. Значения коэффициента звукопоглощения обычно колеблется от 0,01 для мраморного сланца до почти 1,0 в течение длительного времени. поглощающие клинья часто используются в безэховых помещениях.

АКУСТИКА. (1) наука о звуке, включая генерацию, передачу и воздействие звуковых волн, как слышно, так и неслышно.(2) Физические характеристики комнаты или другой корпус (например, размер, форма, уровень шума), определяющий слышимость и восприятие речи и музыки в помещении.

АКУСТИЧЕСКАЯ ТРАВМА. Повреждение слуховой аппарат, вызванный внезапной вспышкой сильного шума или взрыв. Этот термин обычно подразумевает одно травмирующее событие.

БОРТОВЫЙ ЗВУК. Звук, который достигает точка интереса при распространении по воздуху.

Верх

ОКРУЖАЮЩИЙ ШУМ. Сумма всех шум в окружающей среде, кроме шума от источника интереса. Этот термин используется как синонимы фоновый шум.

АНЕХОЧНАЯ КОМНАТА. Комната, в которой границы поглощают почти весь падающий звук, тем самым эффективно создание свободных полевых условий.

ANSI. Американские национальные стандарты Институт.

ИНДЕКС СТАТЬИ (AI). А численно рассчитанная мера разборчивости передаваемых или обработанная речь. Он учитывает ограничения путь передачи и фоновый шум. Индекс артикуляции может диапазон значений от 0 до 1,0. Если AI меньше 0,1, разборчивость речи в целом низкая. Если он выше 0,6, речь разборчивость речи в целом высокая.

АТТЕНУАЦИЯ.Снижение звука интенсивность различными способами (например, воздух, влажность, пористые материалы …).

АУДИО ЧАСТОТА. Частота колебание слышимой звуковой волны. Любая частота от 20 до 20000 Гц.

АУДИОГРАММА. График, показывающий человека острота слуха как функция частоты.

АУДИОМЕТР. Инструмент для измерение индивидуальной остроты слуха.

УРОВЕНЬ ЗВУКА ВЕС.А мера уровня звукового давления, предназначенная для отражения остроты зрения человеческое ухо, которое не реагирует одинаково на все частоты. Ухо менее эффективен на низких и высоких частотах, чем на средних или частоты речевого диапазона. Следовательно, чтобы описать звук, содержащий широкий диапазон частот в манере, характерной для уха ответ, необходимо уменьшить эффекты низкого и высокого частоты по отношению к средним частотам.Результирующий Уровень звука считается взвешенным по шкале А, а единицы измерения — дБА. В Уровень звука, взвешенный по шкале А, также называется уровнем шума. Уровень звука измерители имеют сеть взвешивания по шкале А для измерения звука, взвешенного по шкале А уровень.

ФОНОВЫЙ ШУМ. Всего весь шум в системе или ситуации, независимо от наличия желаемый сигнал. В акустических измерениях, строго говоря, термин «фоновый шум» означает электрический шум в система измерения.Однако в популярном употреблении термин «фон» шум «часто используется для обозначения шума в окружающей среде, другие чем шум от интересующего источника.

ПОЛОСА. Любой сегмент частотного спектра.

ПОЛОСНЫЙ ПРОХОДНОЙ ФИЛЬТР. Волновой фильтр который имеет единственную полосу передачи, простирающуюся от нижнего порога частота больше нуля до конечной верхней частоты среза.

ШИРОКОПОЛОСНЫЙ ШУМ. Шум с компоненты в широком диапазоне частот.

Верх

КАЛИБРАТОР (АКУСТИЧЕСКИЙ). Устройство, которое производит известное звуковое давление на микрофон на уровне звука система измерения, и используется для настройки системы на Стандартные технические характеристики.

COCHLEA. Спирально свернутый орган, расположенный во внутреннем ухе, которое содержит рецепторные органы, необходимые для слух.

ЧАСТОТА ОБРЕЗКИ. В частоты, обозначающие концы полосы, или точки, в которых характеристики фильтра меняются от проходного к непроходному.

ЦИКЛ. Полная последовательность значений периодическая величина, возникающая в течение одного периода.

ЦИКЛОВ В СЕКУНДУ. Мера частота численно эквивалентна герцам.

ЦИЛИНДРИЧЕСКАЯ ВОЛНА. Волна в поверхности постоянной фазы которого представляют собой коаксиальные цилиндры. Линия близкорасположенные источники звука, излучаемые в открытое пространство, создают свободное звуковое поле цилиндрической формы волны.

ДЕМПФИРОВАНИЕ. Рассеяние энергии с время или расстояние. Этот термин обычно применяется к затуханию звук в конструкции за счет внутреннего звукорассеивающего свойства конструкции или добавление звукорассеивающих материалы.

дБА. Единица уровня звука. Взвешенный звук уровень давления с использованием характеристики измерения А и Взвешивание указано в Спецификациях ANSI для измерителя уровня звука,

S1.4-1983. дБА используется как мера реакции человека на звук.

ДЕЦИБЕЛЬ. Единица уровня звукового давления, сокращенно дБ.

ДИФФРАКЦИЯ. Модификация, которая звуковые волны проходят мимо краев твердых тел.

ИНДЕКС НАПРАВЛЕНИЯ. В данном направление от источника звука, разница в децибелах между (а) уровнем звукового давления, создаваемым источником в этом направление, и (b) средний по помещению уровень звукового давления этого источник, измеренный на том же расстоянии.

ЭФФЕКТ ДОПЛЕРА (ДОПЛЕРОВСКИЙ СДВИГ). В очевидный сдвиг частоты звука вверх как источник шума приближается к слушателю или очевидный сдвиг вниз, когда шум источник отступает. Классический пример — изменение высоты тона. железнодорожного свистка, когда локомотив приближается и проезжает.

ДОЗИМЕТР. Устройство, которое носит рабочий для определения накопленного шумового воздействия на рабочего с учетом уровень и время в соответствии с заранее заданной формулой интегрирования.

ЭХО. Отраженная волна или в противном случае возвращен с достаточным размахом и задержкой, чтобы быть обнаруживается как волна, отличная от передаваемой напрямую.

ЭКВИВАЛЕНТ В ВЕСЕ УРОВЕНЬ ЗВУКА (Leq). Постоянный уровень звука, который в заданное время период, будет передавать ту же звуковую энергию, что и

Верх

фактический изменяющийся во времени уровень звука, взвешенный по шкале А.

ДАЛЬНЕЕ ПОЛЕ. Описывает источник звука область в свободном пространстве, где уровень звукового давления подчиняется закон обратных квадратов (уровень звукового давления уменьшается на 6 дБ с каждым удвоение расстояния от источника). Также в этом регионе звук скорость частиц находится в фазе со звуковым давлением. Ближе к источник, в котором эти два условия не выполняются, составляет «ближний поле «регион».

ФИЛЬТР.Устройство для разделения компонентов сигнала на основе их частоты. Это позволяет компонентам в одна или несколько полос частот должны проходить относительно без ослабления, и это ослабляет компоненты в других частотных диапазонах.

СВОБОДНОЕ ЗВУКОВОЕ ПОЛЕ (СВОБОДНОЕ ПОЛЕ). А звуковое поле, в котором влияние препятствий или границ на звук распространены в этом поле незначительны.

ЧАСТОТА. Количество раз в во-вторых, что синусоидальная волна звука повторяется, или что синусоида волна вибрирующего объекта повторяется.Теперь выражено в герц (Гц), ранее в циклах в секунду (cps).

ВОЛОСЫ. Сенсорные клетки улитки которые преобразуют механическую энергию звука в нервные импульсы.

ГАРМОНИКА. Синусоидальный (чистый тон) компонент, частота которого кратна целому числу основная частота волны. Если у компонента есть частота вдвое больше, чем у

основная гармоника называется второй гармоникой и т. Д…

СЛУХ. Субъективная реакция человека на звук.

УРОВЕНЬ СЛУХА. Измеренный порог слуха на заданной частоте, выражается в децибелах относительно указанного стандарт нормального слуха. Отклонение в децибелах индивидуальный порог от нулевого эталона аудиометра.

ПОТЕРЯ СЛУХА. Термин, обозначающий снижение остроты слуха. Степень нарушения слуха, в децибел, измеренный как набор уровней порога слышимости при заданных частоты.Типы потери слуха: 1. Кондуктивная: потеря слуха. происходящие из проводящего механизма уха; 2. Сенсорно-нейронная: Потеря, возникающая в улитке или волокнах слухового нерва; 3. Шум, индуцированный: потеря сенсорно-нервной системы, связанная с воздействием шум.

ПОРОГ СЛУХА (HTL). Величина (в децибелах), на которую индивидуальный порог слышимость отличается от стандартного аудиометрического порога.

ГЕРЦ (Гц).Единица измерения частота, численно равная циклам на второй

КЛАСС УДАРНОЙ ИЗОЛЯЦИИ (IC). Однозначный рейтинг, который сравнивает звукоизоляцию от ударов. возможности сборки перекрытия и потолка по опорному контуру.

Верх

ЗВУК УДАРА. Звук, производимый столкновение двух твердых предметов. Типичные источники — шаги, сброшенные предметы и т. д., На внутренней поверхности (стене, полу или потолке) здания.

ИМПУЛЬСНЫЙ ШУМ, a) Либо a одиночный пик звукового давления (с временем нарастания менее 200 миллисекунд или общая продолжительность менее 200 миллисекунд) или несколько пики звукового давления (время нарастания менее 200 миллисекунд) или общая продолжительность менее 200 миллисекунд) с интервалом не менее 200 миллисекундные паузы, б) резкий пик звукового давления, возникающий в короткий промежуток времени.

ИНФРАЗНИК. Звуки частоты ниже 20 герц.

ИНТЕНСИВНОСТЬ. Поток звуковой энергии через единицу площади за единицу времени.

ЗАКОН ОБ ОБРАТНОЙ ПЛОЩАДИ. А описание поведения акустической волны, при котором среднеквадратичный давление изменяется обратно пропорционально квадрату расстояния от источник. Такое поведение происходит в бесплатных полевые ситуации, когда уровень звукового давления снижается на 6 дБ при каждом удвоении расстояния от источника.
.
ISO. Международная организация по Стандартизация.

УРОВЕНЬ. Логарифм отношения количество к контрольному количеству того же вида. Основа логарифм

контрольное количество, и необходимо указать тип уровня.

ЛОГАРИФМ. Показатель, указывающий степень, в которую должно быть возведено число, чтобы получить данное число.Например, для десятичного логарифма, используемого в акустике, 2 — это логарифм 100.

ГРОМКОСТЬ. Субъективное суждение интенсивность звука человека. Громкость зависит от звука давление и частота раздражителя. По большей части частоты диапазона требуется примерно трехкратное увеличение звукового давления (десятикратное увеличение акустической энергии, или 10 дБ), чтобы произвести удвоение громкость.
.
УРОВЕНЬ ГРОМКОСТИ. Измеряется в phons он численно равен среднему звуку уровень давления (дБ) свободной прогрессивной волны 1000 Гц, представленной на слушатели обращены к источнику, который в ряде исследований оценивается слушатели должны быть одинаково громкими.

МАСКИРОВКА. 1. Процесс, с помощью которого порог слышимости для звук усиливается наличием другого (маскирующего) звука. 2. В величина, на которую повышается порог слышимости звука на наличие другого (маскирующего) звука.

МАСКИРУЮЩИЙ ШУМ. Шум, который достаточно силен для рендеринга неслышно или неразборчиво другой звук, который также присутствует.

СРЕДНИЙ. Вещество, несущее звуковую волну.

РЯДОМ ПОЛЯ. Звуковое поле очень близко к источник, где звуковое давление не подчиняться закону обратных квадратов и скорость частицы не совпадает со звуковым давлением.

NIOSH. Национальный институт охрана труда.

NOISE, 1. Нежелательный звук. 2. Никакого звука нет происходящие в естественной среде, такие как звуки, исходящие от самолеты, автомагистрали, промышленные, коммерческие и жилые источники. 3. Беспорядочные, прерывистые или статистически случайные колебания.

КЛАСС ШУМОИЗОЛЯЦИИ. (NIC). Единый числовой рейтинг, полученный в установленном порядке из измеренные значения снижения шума между двумя зонами или комнатами.Это обеспечивает оценку звукоизоляции между двумя закрытыми пространства, которые акустически связаны одной или несколькими дорожками.

УРОВЕНЬ ШУМА. Для воздушного звука если не указано иное, это уровень звука, взвешенный по шкале А.

СНИЖЕНИЕ ШУМА (NR). В числовая разница в децибелах среднего звукового давления уровни в двух областях или комнатах. Измерение «снижения шума» сочетает в себе эффект потери передачи звука конструкции, разделяющие две зоны или комнаты, плюс эффект акустическое поглощение, присутствующее в приемном помещении.

СНИЖЕНИЕ ШУМА КОЭФФИЦИЕНТ (NRC). Показатель звукопоглощения материала, рассчитанного путем усреднения его звукопоглощения коэффициенты при 250, 500, 1000 и 2000 Гц, выраженные с точностью до ближайшего кратно 0,05.

НЕИМПУЛЬСНЫЙ ШУМ. все шум не входит в определение импульсного шума.

ОКТАВА. Интервал между двумя звуками имеющий отношение частот два.- На клавиатуре 8 октав стандартного фортепиано.

ОКТАВНЫЙ ДИАПАЗОН. Сегмент частотный спектр, разделенный октавой.

OCTAVE BAND LEVEL. В интегрированный уровень звукового давления только тех синусоидальных компонентов в указанная октавная полоса.

КОЛЕБАНИЯ. Вариация со временем, поочередно увеличивая и уменьшая: (а) некоторая особенность слышимый звук, например звуковое давление; или (б) некоторые особенности вибрирующего твердого объекта, такие как смещение его поверхности.

OSHA Безопасность и охрана труда Администрация.

ПИКОВОЕ ЗВУКОВОЕ ДАВЛЕНИЕ. В максимальное абсолютное значение мгновенного звукового давления в конкретный временной интервал. Примечание: в случае периодической волны, если рассматриваемый временной интервал является полным периодом, пиковое звуковое давление становится идентичным максимальному звуковому давлению.

Верх

ПЕРИОД.Продолжительность времени, необходимого для периодическая форма волны (например, синусоида), чтобы повторяться.

ПОСТОЯННЫЙ ПОРОГ SHIFT (PTS). Постоянное снижение остроты зрения уха при указанная частота по сравнению с ранее установленным эталоном уровень. Величина постоянного сдвига порога обычно выражается в децибелах.

ТЕЛЕФОН. Единица измерения громкости уровень.

РОЗОВЫЙ ШУМ.Шум с постоянной энергией на октавную ширину полосы.

ПИТЧ. Признак слухового ощущения который упорядочивает звуки по шкале от низкого до высокого. Подача зависит в первую очередь от частоты звукового раздражителя, но она также зависит от звукового давления и формы волны раздражителя.

ПЛОСКАЯ ВОЛНА. Волна, волновые фронты которой параллельны и перпендикулярны направлению, в котором волна путешествия.

PRESBYCUSIS. Снижение слуха острота зрения, связанная с процессом старения.

ЧИСТЫЙ ТОН. Звук, для которого звук давление — простая синусоидальная функция времени, и характеризуется монотонностью звука.

СЛУЧАЙНЫЙ ШУМ. Колебание, чье мгновенная величина не указана для любого данного момента время. Это может быть

статистически описывается функциями распределения вероятностей, дающими тяга общего времени, в течение которого величина шума лежит в пределах указанного диапазона.

ОТРАЖЕНИЕ. Возвращение звуковой волны с поверхности.

ПРЕЛОМЛЕНИЕ. Изгиб звука волна от своего первоначального пути, либо потому, что она проходит от одного среды на другую или изменением физических свойств среда, например, градиент температуры или ветра в воздухе.

РЕЗОНАНС. Относительно большой амплитуда вибрации, возникающей, когда частота какого-либо источника звука или вибрации «совпадает» с собственной частотой вибрация какого-либо объекта, компонента или системы.

РЕЗОНАТОР. Устройство, которое звучит или вибрирует в знак симпатии к источнику звука или вибрации.

РЕВЕРБЕРАНТНОЕ ПОЛЕ. Область в комнате, где преобладает отраженный звук, а не область вблизи источника шума, где преобладает прямой звук.

РЕВЕРБЕРАЦИЯ. Настойчивость звук в замкнутом пространстве в результате многократных отражений, после источник звука остановился.

КОМНАТА РЕВЕРБЕРАЦИИ. Комната имеющий длительное время реверберации, специально разработанный для того, чтобы звуковое поле внутри него максимально диффузное (однородное).

Верх

ВРЕМЯ РЕВЕРБЕРАЦИИ (RT). В время реверберации комнаты — это время, необходимое для звукового давления уровень для уменьшения 60 дБ от его установившегося значения, когда источник звуковая энергия внезапно прерывается. Это мера постоянство импульсивного звука в комнате, а также количество звукопоглощения, присутствующего в комнате.Комнаты с длинными времена реверберации называются живыми комнатами.

ЗВУКОВОЕ ДАВЛЕНИЕ СКО. Квадрат корень из усредненного по времени квадрата звукового давления.

КОРЕНЬ-СРЕДНЯЯ ПЛОЩАДЬ (RMS). 1. В среднеквадратичное значение изменяющейся во времени величины получается следующим образом: возводя функцию в квадрат в каждый момент, получая среднее значение квадратов значений за интересующий интервал, а затем взяв квадратный корень из этого среднего.Для синусоиды, если умножить среднеквадратичное значение значение квадратным корнем из 2, или примерно 1,41, вы получите пиковое значение волны. Среднеквадратичное значение, также называемое эффективным значением звуковое давление, это лучший показатель обычного непрерывного звука, но пиковое значение необходимо для оценки импульсных шумов. 2. А термин «, описывающий математический процесс определения» среднего » значение сложного сигнала.

САБИН.Показатель звукопоглощения поверхность; это эквивалент одного квадратного фута идеально впитывающая поверхность.

ЗАЩИТА. Затухание звука, достигается за счет установки барьеров между источником звука и приемником

SONE. Единица измерения громкости. Один sone — это громкость звука с уровнем громкости 40 телефоны. Громкость пропорциональна звуку рейтинг громкости, e.г., два сона в два раза громче одного сона.

SOCIOCUSIS. Потеря слуха, вызванная воздействие шума, которое является частью социальной среды, за исключением воздействие производственного шума, физиологические изменения с возрастом и болезнь.

ЗВУК. 1. Колебание по давлению, напряжению, смещению частицы, скорости частицы и т. д., в эластичной или частично эластичной среде, или при наложении такие размноженные переделки.2. Слуховое ощущение, вызванное колебания, описанные выше. Не все звуковые волны могут вызывать слуховой ощущение: например УЗИ.

УРОВЕНЬ ЗВУКА. Взвешенный звук уровень давления, полученный с помощью шумомера и сеть частотного взвешивания, такая как A, B или C, как указано в ANSI спецификации для шумомеров (ANSI Sl.4-1971 или последний утвержденная редакция). Если используемое частотное взвешивание не указано, подразумевается A-взвешивание.

ИЗМЕРИТЕЛЬ УРОВНЯ ЗВУКА. An инструмент, состоящий из микрофона, усилителя, измерителя мощности и частотно-весовые сети, которые используются для измерения уровни шума и звука.

Верх

МОЩНОСТЬ ЗВУКА. Общая звуковая энергия излучается источником в единицу времени. Единицей измерения является ватт.

ЗВУКОВОЕ ДАВЛЕНИЕ. Мгновенный разница между фактическим давлением звуковой волны и среднее или барометрическое давление в данной точке пространства.

УРОВЕНЬ ЗВУКОВОГО ДАВЛЕНИЯ (УЗД). 20-кратный логарифм по основанию 10 отношения давления звука, измеренного до эталонного давления, которое составляет 20 микроньютон на квадратный метр. В форме уравнения уровень звукового давления в децибелах выражается как SPL (дБ) = 20 log p / p _r .

КЛАСС ПЕРЕДАЧИ ЗВУКА (STC). Предпочтительная однозначная рейтинговая система, разработанная, чтобы дать оценка звукоизоляционных свойств конструкции или ранга заказ серии конструкций.

ПОТЕРЯ ПЕРЕДАЧИ ЗВУКА (STL). Степень звукоизоляции, обеспечиваемая структурным конфигурация. Выражается в децибелах, это 10-кратный логарифм для основание 10 обратной величины коэффициента передачи звука конфигурация.

СПЕКТР. Описание звука разрешение волны на составляющие частоты и амплитуда.

РЕЧЬ-ВМЕШАТЕЛЬСТВО УРОВЕНЬ (SIL).Расчетное количество, указывающее на вмешательство шума в прием речи. В уровень речевых помех — это среднее арифметическое для октавной полосы уровни

мешающих шумов в наиболее важной части речи частотный диапазон. Уровни в октавных полосах с центрами 500, 1000 и 2000 Гц обычно усредняются для определения речевых помех. уровень.

СКОРОСТЬ (СКОРОСТЬ) ЗВУКА В ВОЗДУХЕ.344 м / сек (l128 фут / сек) при 70 градусах F в воздухе при уровень моря.

СФЕРИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ. В условие распространения сферических волн, относящееся к регулярное уменьшение интенсивности сферической звуковой волны при постепенно увеличиваются расстояния от источника. При этом условии уровень звукового давления уменьшается на 6 децибел с каждым удвоением удаленность от источника.

СФЕРИЧЕСКАЯ ВОЛНА.Звуковая волна в поверхности постоянной фазы представляют собой концентрические сферы. Маленький (точечный) источник, излучающий в открытое пространство, производит свободное звуковое поле сферических волн. .

СТАЦИОНАРНЫЕ ЗВУКИ. Звуки чьи средние характеристики остаются относительно постоянными во времени. А практическим примером установившегося источника звука является воздушный блок кондиционирования.

ВРЕМЕННЫЙ ПОРОГ SHIFT (TTS).Временное ухудшение остроты слуха, на что указывает: изменение порога слышимость.

ТРЕТЬЯ ОКТАВА ПОЛОСА. Частота полоса, частота среза которой составляет от 2 до одной трети мощность, которая составляет примерно 1,26. Частоты среза 891 Гц. и 1112 Гц определяют широко используемую третьоктавную полосу 1000 Гц.

Верх

ПОРОГ СЛУЧАЙНОСТИ (ПОРОГ ОБНАРУЖЕННОСТИ).Минимальный уровень звукового давления при который человек может слышать определенную частоту звука через указанное количество испытаний.

ПОРОГ БОЛИ. Минимум уровень звукового давления звука за пределами уха, который вызывает переход от дискомфорта к явной боли.

ПОРОГОВОЙ СДВИГ. Изменение в порог слышимости на заданной частоте от порога ранее установлено.Величина смещения порога обычно выражается в децибелах.

TIMBRE. Признак слухового ощущения позволяя субъекту судить, что два звука представлены одинаково и с одинаковой громкостью и высотой не похожи друг на друга, например, труба и скрипка.

ТИННИТУС. Звон в ухе или шум чувствуется в голове. Начало может быть связано с акустическим травмы и сохраняются при отсутствии акустической стимуляции (в в этом случае это может указывать на поражение слуховой системы).

ТОН. Звук определенной высоты. Чистый тон имеет синусоидальную форму волны.
ПРЕОБРАЗОВАТЕЛЬ. Устройство, способное быть приводятся в действие волнами от одной или нескольких систем передачи или средств массовой информации и предоставление связанных волн одному или нескольким другим

систем передачи или средств массовой информации. Примеры: микрофоны, акселерометры и громкоговорители.

УЛЬТРАЗВУК. Звуки или частота на выше , чем 20000 герц.

ВИБРАЦИЯ. Колебательное движение твердые тела, описываемые смещением, скоростью или ускорением с помощью относительно заданной контрольной точки.

ВИБРАЦИОННЫЙ ИЗОЛЯТОР. А упругая опора для вибрирующего оборудования, предназначенная для уменьшения количество вибрации, передаваемой на другие конструкции.

ВОЛНА. Нарушение, которое распространяется через среда в силу упругих свойств этой среды.

ДЛИНА ВОЛНЫ. Для периодической волны (такой как звук в воздухе), расстояние между аналогичными точками на любых двух последовательные волны. Длина волны звука в воздухе или в воде равна обратно пропорционально частоте звука. Таким образом, нижний частота, тем больше длина волны.

ВЗВЕШИВАНИЕ. Предписанная частота фильтрация предусмотрена в шумомере.

БЕЛЫЙ ШУМ. Шум, энергия которого однородны в широком диапазоне частот, будучи аналогичными в спектральные характеристики до белого света.

Верх

ВЕТРОВОЕ СТЕКЛО. Пористое устройство, используемое для покрытия микрофон системы измерения уровня звука, который спроектирован минимизировать влияние ветра и порывов ветра на уровень шума измеряется. Обычно изготавливается из пенополиуретана с открытыми порами и сферической формы.

«О звуке», Агентство по охране окружающей среды США, Вашингтон, Д.С., май 1976 г.

«Предпосылки для исков о прекращении слушания», Альянс Американские страховщики, Чикаго, Иллинойс, 1981.

«Руководство для государственных и местных проекторов», США. Агентство по охране окружающей среды, Вашингтон, округ Колумбия, 1980 г.

«NPC 1 — Определение, разделение и варианты шума Положение о контроле за загрязнением «Контроль за загрязнением штата Миннесота» Агентство, Сент-Пол, Миннесота, 1974.

Петерсон, А.П.Г., Гросс Э.Е. «Справочник по шуму». Измерение, General Radio, Конкорд, Массачусетс, седьмое издание.

«Стандартная акустическая терминология США, S1.1,» Американский Национальный институт стандартов, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, 1976 год.

Карьерный рост в ВВС — офицер

Сегодня мы обсудим карьерный рост. Как бывший пилот Active Duty, я признаю, что не люблю эту тему.

Вы должны понять: я пилот.Я пришел в ВВС не для того, чтобы сидеть за столом, толкая бумаги или отправляя электронные письма. Когда в 2004 году я окончил Военно-воздушную академию и пожал руку президенту Бушу, все, что я сказал ему, было «Спасибо, сэр» и девиз нашего класса: «Готов к войне!»

Я участвовал в его войне несколько лет, и мне это нравилось!

Вы могли подумать, что пилот не может сосредоточиться ни на чем, кроме этого… только на том, чтобы быть экспертом в использовании силы авиации против врагов Соединенных Штатов, а военные, в свою очередь, позаботятся об этом пилоте и его или ее семье.Нравится вам это или нет, но дело не только в этом.

Если вы хотите продолжить службу в армии в течение полной карьеры, и если вы хотите, чтобы ваша семья имела доступ к удивительным льготам и выходу на пенсию, которые сопровождают эту карьеру, вы должны убедиться, что вы соблюдаете инструкции военных о том, как быть хорошим офицером. (Стража и Резервы, как правило, лучше справляются с этим, но каждое подразделение требует, чтобы его пилоты играли в одну и ту же игру в разной степени.)

К счастью, игра карьерного роста не космическая.Можно делать то, что от вас ожидают военные, при этом сосредотачиваясь на тех частях работы, которые вам действительно небезразличны.

Я живое доказательство того, что можно действительно хорошо выглядеть в глазах военных, не жертвуя слишком много времени или внимания на вещи, которые вы считаете несущественными. Понимаете, меня любили ВВС. Мои отчеты об исполнении были смущающими. Военно-воздушные силы предложили отправить меня в Норвежский командно-штабной колледж для получения промежуточного развивающего образования.У них есть только одно место для этой школы каждый год, и только престиж от посещения этой программы почти гарантировал бы мне командование отрядом и повышение до O-6.

Мне не пришлось жертвовать своей личностью как пилота, чтобы добиться чего-либо из этого. Я был пилотом-оценщиком в двух самолетах и ​​пилотом-инструктором в трех. Совершил 312 боевых вылетов по всему миру. Я проверил все флажки, о которых когда-либо просили ВВС, но делал это с пренебрежением ко всему, что могло увести меня от полета.

Оглядываясь назад, я могу сказать, что презрение было не таким уж продуктивным. Я надеюсь, что ты справишься лучше меня и вместо этого уйдешь с эффективным безразличием. Однако сегодня я собираюсь рассказать вам, как сделать фантастическую военную карьеру, сохранив при этом все возможности продвижения по службе, не отказываясь от того, что важно. Мы собираемся сосредоточиться на продвижении пилота Active Duty Air Force. Те же принципы будут применяться в охране и резерве. Некоторые блоки растягивают сроки или не требуют от вас выполнения всех этих шагов.Тем не менее, вам стоит понять, с чем имеют дело ваши коллеги по Active Duty для контекста.

Вы заметите, что эта статья разбита на две отдельные категории карьерного роста: одну для офицера и одну для пилота. Оказывается, каждый военный пилот должен управлять своим прогрессом на каждом из этих путей. Один путь предполагает управление самолетом, а другой — офицером. Да, офицер (или прапорщик) играет роль военного пилота.Однако большая часть того, что военные определяют как «офицерство», включает написание отчетов, посещение собраний персонала и выполнение другой офисной работы. Мы рассмотрим эти два пути по отдельности, начиная со стороны офицера.

1. Назначение офицеров
2. Специальное обучение
3. Первая работа
4. Возможности руководства для должностных лиц компании (CGO)
5. Военно-профессиональное образование (ВОП)
6. Выход из эскадрильи
7. PME для офицеров полевого ранга (FGO)
8. Магистратура
9. Персонал
10. После персонала
11. Команда
12. Различия между защитой и резервом
13. Обсуждение целей с командиром
14. Вперед

Для наших наглядных учеников первые несколько разделов обсуждения продвижения по службе охватывают эту часть вашей карьеры:

Карьера военного летчика начинается у пуско-наладочного предприятия. Для многих это Академия ВВС США или ROTC. Для пилотов, достаточно умных, чтобы идти прямо в Стражу или Резерв, это будет означать OTS (теперь называется TFOT). Честная правда в том, что не имеет значения, из какого вы источника. С этого момента все, что имеет значение, — насколько вы хороши как человек и пилот.

Всегда ходят слухи, что одна группа (особенно выпускники Академии) несправедливо отдает предпочтение своим.По моему опыту, большинство людей, которые действительно волнуются из-за этого, — это люди, которых не замечают по причинам, отличным от их источника ввода в эксплуатацию … и они просто не осознают этого. Не будь этим парнем или девушкой.

Сколько раз в колледже кто-то спрашивал или действительно интересовался спортом или клубами, в которых вы участвовали в старшей школе? Готов поспорить, ваш ответ близок к нулю. То же самое и с военными. Людей заботит, чтобы вы хорошо выполняли свою работу и чтобы с вами было приятно находиться рядом.Неважно, были ли вы самым крутым ребенком в своей прошлой жизни или полным неудачником. Это не имеет никакого отношения к тому, что вы делаете сейчас.

Я думаю, что большинство людей испытывают некоторую преданность своему колледжу и людям, с которыми они его посещали. Однако служба в армии дает вам гораздо больше значимых впечатлений, чем пьяные вечеринки в общежитии или ночные учебные занятия. Сосредоточьтесь на том, где вы сейчас находитесь, и на людях, с которыми вы находитесь.

Вернуться к содержанию

В день окончания колледжа или TFOT вы станете самым бесполезным человеком во всей армии США.Конечно, у вас будет какая-то фантастическая степень, но у вас не будет навыков, которые можно использовать для использования авиации против врагов Америки. Вам нужно будет пройти какое-то обучение, что означает UPT для большинства читателей BogiDope.

Мы обсудим это более подробно, когда будем говорить о карьерном росте с точки зрения пилота. (Мы также писали о UPT в нашей серии, описывающей все три фазы обучения, и нашей серии о победе в UPT. После окончания UPT вы, вероятно, перейдете на SERE и Water Survival.Подробности читайте в нашем посте об этих школах.)

С точки зрения развития офицера вам следует сосредоточиться на изучении ваших новых навыков во время этого обучения. Если вы являетесь старшим должностным лицом (SRO) на каком-либо курсе, вас могут назначить ответственным за своих одноклассников. Постарайтесь хорошо выполнять свою работу в качестве лидера, но помните, что ваша работа не будет официально задокументирована. Это может повлиять на ваш рейтинг командира звена в UPT, но это второстепенный фактор.

Иногда из-за ограничений по расписанию вам придется ждать целый год между вводом в эксплуатацию и запуском UPT.В таком случае вас, скорее всего, отправят на случайную базу для выполнения случайной роли в этом году. Этот год, который иногда называют «случайным статусом» или просто APT для «ожидания обучения пилота», может быть хорошим или плохим.

Если вам повезет, вы получите веселую и интересную работу с хорошими людьми. Вы даже можете быть назначены командовать некоторыми военнослужащими и научитесь с ними бороться — навык, который упускают большинство пилотов ВВС.

Еще одна желанная APT-работа — та, где ваш босс действительно не очень полезен вам. У вас будет достаточно времени, чтобы пойти в тренажерный зал и найти копию руководства к самолету Т-6 и AETCMAN 11-248, чтобы начать подготовку к UPT.

Чуть менее желательное назначение APT будет заключаться в работе со скупым и / или требовательным начальником, который не понимает концепции «баланса» в жизни. Он или она может дать вам много скучных проектов и ожидать завершения в нереалистичные сроки. Если у вас это получится, просто извлеките из этого максимум пользы.

UPT служит ровно один год в ВВС, хотя, как известно, подготовка пилотов ВМС занимает два года. С учетом всех других этапов раннего развития карьеры пилота, о которых мы упоминали, вполне реально предположить, что вы уже могли бы стать старшим лейтенантом / лейтенантом JG, когда попадете в свою первую оперативную эскадрилью.

Вернуться к содержанию

Если вы посмотрите правила для вашего самолета (пабы серии «11-2»), вы найдете параграф, в котором говорится примерно следующее: «Новым пилотам запрещается иметь любую работу, кроме работы пилотом. в течение первых 6 (или 12) месяцев на новом самолете ». Это абсолютно прекрасное настроение, и ВВС США были бы лучше, если бы это произошло. К сожалению, каждый командир эскадрильи, на которого я когда-либо работал, сознательно нарушал это правило.Его или ее оправдание всегда заключалось в том, что эскадрилья даже не была укомплектована в полном составе, и чтобы цирк продолжал работать, приходилось помогать даже 2-м эскадрильям.

Это означает, что как только вы явитесь в свой новый отряд, вам будет назначена работа. В вашей эскадрилье есть много «магазинов» или отделов, которые включают: планирование, мобильность (развертывание), планы (долгосрочное планирование), оружие и / или тактику, обучение, стандартизацию и оценку, администрирование / награды и награды и т. Д.

Также ВВС имеет должность исполнительного директора. Не путайте это с другими видами вооруженных сил, где старший офицер (сокращенно XO) является вторым командиром лодки или подразделения. В ВВС «Exec» имеет служебный символ CCE и, по сути, является секретарем / административным помощником командира, которому переплачивают.

Каждый из этих магазинов существует, потому что он необходим для управления боевой эскадрильей, и вам нужно будет узнать, что каждый из них делает в рамках вашей работы.

Вы начнете как бестолковый миньон в своем магазине. Со временем вы поймете, чем должен заниматься ваш магазин, и начнете получать задания. Вас могут переводить из магазина в магазин в течение первых нескольких лет. Хотя это могло произойти из-за того, что вы странный или плохо пахнете, это, вероятно, хорошо.Если вы надеетесь в конечном итоге стать командиром эскадрильи, отвечающим за их все, вам нужен опыт работы в как можно большем количестве различных магазинов.

Вернуться к содержанию

Ваша первая реальная возможность стать лидером в качестве офицера роты (CGO — от второго лейтенанта до капитана) будет в качестве начальника цеха в одном из этих отделов. Некоторые из других видов вооруженных сил доставляют ВВС неприятности из-за того, что они не дают своим офицерам возможности руководить на раннем этапе их карьеры.Эти люди просто не понимают, как работают ВВС. Shop Chief — это абсолютно лидерская позиция, и вы уязвимы для этой должности как 1Lt.

Вы потенциально будете руководить офицерами, военнослужащими и даже гражданскими лицами. Вы будете отвечать своему оперативному офицеру эскадрильи (DO) и / или командиру (Sq / CC). Ваша способность эффективно руководить своими людьми напрямую повлияет на способность вашей эскадрильи вступать в войну. Это большая ответственность для человека в возрасте от 20 до 20 лет.

Назначения магазина — это функциональные области, которые поддерживают работу отряда. Хотя начальник цеха имеет власть над людьми в цехе, по сути, это не командная работа. Каждая эскадрилья ВВС также делится на три или более «звеньев». У каждого звена есть командир (Flt / CC), который подчиняется непосредственно командиру эскадрильи. Обычно это капитан (O-3), хотя я видел уникальные обстоятельства, когда командиры звеньев занимали ранги от 1-го до полковника. (Командиры звена О-6 были в стоматологической эскадрилье моей жены.Это странный мир.) У каждого командира звена есть помощник, иногда сокращенно AFC.

Flight Commander — фактическое звено в цепочке команд между линейным пилотом и Sq / CC. Flt / CC отвечает за составление годового отчета о служебной деятельности пилота (OPR) и за другие виды деятельности по уходу и кормлению. Это не означает, что начальник цеха также не может заботиться о благополучии людей в своем цехе, но эти обязанности только формально возложены на командира звена.

Можно стать AFC или Flt / CC, даже не будучи начальником магазина. Также можно перейти от Shop Chief к Flt / CC. Неважно, каким образом вы это сделаете. Ваши записи покажут вам, что вы продвигаетесь к новой работе с растущей ответственностью на протяжении всей вашей карьеры, и это все, что имеет значение.

Вернуться к содержанию

Военно-воздушные силы уделяют большое внимание профессиональному военному образованию или PME.Как капитан, вам необходимо пройти школу офицеров эскадрильи (SOS). Вариант этого курса проводится на базе Maxwell AFB, AL, и длится 5-8 недель, в зависимости от того, кто отвечает и как они пытались скорректировать программу в последнее время.

Также существует заочная (она же онлайн) версия SOS. Раньше ожидалось, что офицер завершит заочную версию курса PME до того, как начальство даже рассмотрит возможность отправки его или ее в резиденцию. К счастью, ВВС осознали, насколько пустой тратой налоговых долларов был такой менталитет, и в значительной степени его подавили.AF прилагает все усилия, чтобы сделать экстренную помощь в резиденции доступной для всех капитанов. Вам следует делать заочную версию только в том случае, если необычные обстоятельства помешали вам лично присутствовать на семинаре.

Официально не имеет значения, как вы делаете SOS. В основном это правда. На доске продвижения обычно достаточно, чтобы различать двух людей, поэтому никто никогда не узнает, какую версию SOS использовал офицер. Однако, если два человека выглядят почти одинаково, теоретически их проживание может иметь значение.

Внутренняя версия SOS также дает вам право участвовать в соревнованиях за звание выдающегося выпускника (DG). Я считаю, что это очень негативная характеристика ВВС, но получение генерального директора очень важно для вашей карьеры. Это ставит вас на особый, ускоренный карьерный путь. Благодаря этому вы получите более качественные задания и больше внимания со стороны вашего подчиненного. Если вы стремитесь к высокому званию и долгой карьере, SOS по месту жительства важен, потому что он дает вам шанс на эту классификацию.

Когда я пошел в SOS, люди, которые хотели этого больше всего, в конечном итоге не получили его. Те, кто это делал, казались более опытными офицерами, которым было чем поделиться с классом. Они активно участвовали в уроках и хорошо справлялись со всеми своими заданиями, потому что это их личный стандарт, но они не зацикливались на чем-то. Они позаботились о том, чтобы развлечься и отдохнуть от реальной жизни.

В целом, не слишком увлекайтесь попытками стать генеральным директором SOS.Есть и другие способы вступить на блестящую карьеру за копейки. Просто старайтесь изо всех сил, сохраняя баланс в жизни, и все наладится.

Вернуться к содержанию

После того, как вы стали начальником цеха и / или командиром звена, вы почти достигли вершины полезного карьерного роста в своей эскадрилье. В эскадрилье DO есть несколько помощников (ADO), обычно это должности майоров или подполковников. Это хороший переход от Shop Chief или Flt / CC, но не обязательный.

Даже если вы проводите время в качестве ADO, вам рано или поздно придется искать работу вне отряда. Обычно есть должности на уровне «Группы» (на один уровень выше, чем отряд) для старших офицеров, оружия и тактики, а также стандартизации и оценки. Некоторые группы также могут иметь должности для других функциональных областей. У вашего командира крыла есть свои руководители, а также служба безопасности, магазин планов и другие отделы.

Вам нужно перейти на одну из этих работ.Став капитаном или майором, вы начнете все сначала как миньон более высокого уровня. Военно-воздушные силы полагаются на работу на протяжении всей вашей карьеры, чтобы подвергать вас все более широким кругам ответственности. Для вас важно получить представление о более высоком организационном уровне, чем оперативный отряд.

Это второй этап вашей карьеры офицера, кратко описанный на этой диаграмме:

Вернуться к содержанию

Как полевой офицер (FGO — звания от майора до полковника) вы должны пройти следующий уровень PME, который называется Колледж командования и штаба авиации (ACSC).Как и SOS, ACSC можно заполнить лично или по переписке. Разница в том, что не все могут посещать резиденцию, поэтому это становится соревнованием.

Вы будете работать ADO, в группе или крыле, пока будете ждать своего выстрела в ACSC. Хотя официально от вас не требуется сначала заполнять заочную версию, вы можете почувствовать некоторое давление. ACSC в переписке сейчас кошмар. В нем есть несколько курсов для самостоятельного изучения, но есть также четыре курса в режиме реального времени / под присмотром, которые предлагаются только несколько раз в год.Если вы не завершите курсы для самостоятельного изучения вовремя, чтобы записаться на следующий раздел контролируемого курса, вы застрянете в бездействии до следующей возможности. В лучшем случае на заполнение ACSC по переписке уходит семь месяцев.

Лично я рекомендую зарегистрироваться в ACSC и выйти из него как можно скорее, то есть в тот день, когда вы узнаете, что вас выбрали для повышения до Major. Будет боль в шее, но лучше сделать это и не нужно, чем наоборот.

Еще одна причина, по которой это нужно сделать раньше, заключается в том, что ACSC — не единственный вариант проведения PME для специальностей (также известного как Intermediate Developmental Education, или IDE). Каждый год ВВС публикует список специальных программ, которые вы можете подать на участие в программе IDE. Они варьируются от прохождения IDE-эквивалента в колледжах для персонала других служб до стажировок в DARPA, программ стипендиатов в Гарварде, обучения иностранных офицеров в Военно-морской аспирантуре (NPS) и Институте оборонного языка (DLI), а также более.

Мне сказали, что ACSC в резиденции — это веселый и расслабляющий год; однако большинство этих других конкурентоспособных программ IDE также уникальны и приятны. Они, по крайней мере, немного лучше подходят для вашей карьеры, потому что выделяют вас среди сверстников. Некоторые из этих программ считаются чрезвычайно престижными и имеют такой же эффект, как SOS DG, но усиливаются.Во многих случаях вам необходимо заполнить ACSC по переписке, чтобы уникальная программа считалась IDE. Гораздо лучше уже сделать это, чем пытаться втиснуться в ACSC по переписке, пока вы учитесь в Гарварде, пытаетесь выучить китайский язык в DLI или пытаетесь подобрать пьяный напиток за выпивку в командно-штабном колледже морской пехоты.

Вернуться к содержанию

Прежде чем мы перейдем к заданиям после внедрения IDE, нам нужно уделить время обсуждению аспирантуры.Нравится вам это или нет, но офицер ВВС на длительный срок должен получить степень магистра. Раньше это было предпосылкой для создания Major. К счастью, нехватка пилотов помогла избавиться от этого требования. Возможно, можно будет сделать подполковника без магистра, но я бы не стал рисковать. Без него полковником не сделаешь.

Это означает, что в первые 6-8 лет своей карьеры в ВВС вам нужно найти время, чтобы поступить в аспирантуру. Если вам повезет, вы можете получить одну из специальных программ IDE, по которой вы также получите степень магистра.Однако эти программы довольно конкурентоспособны, поэтому я бы не стал на это рассчитывать.

Военно-воздушные силы предлагают альтернативную версию ACSC в переписке под названием Online Masters Program (OLMP). Если вы не хотите платить за аспирантуру и видите полезность в сочетании этой задачи с выполнением вашей IDE, это может быть хорошим вариантом. Поймите, что этот курс требует даже большего, чем обычная заочная версия ACSC. Вы должны ожидать, что это займет 1,5 — 2 года.

Я считаю, что OLMP — довольно редкий выбор.В наши дни существует множество университетов с онлайн-программами. Многие из них обслуживают студентов-военнослужащих и взимают ровно столько, сколько оплачивает программа помощи военно-воздушным силам. Я выбрал степень магистра психологии человеческого фактора в Университете Айдахо отчасти потому, что это был строгий курс, не требующий защиты диссертации. Однако у меня есть несколько друзей, которые выложились на все сто и защитили диссертацию на степень магистра астронавтики.

Официально ВВС все равно, в какую школу вы ходите и какое у вас образование.Это просто поле для отметки в вашей записи. Хотя это верно для совета по продвижению, выбор вашей степени может быть важен в дальнейшей жизни. Если вы хотите стать летчиком-испытателем, космонавтом или кем-нибудь еще в технической сфере, вам следует получить степень по математике, точным наукам или инженерии. Если вы претендуете на одну из специальных программ IDE, связанных с политикой или для того, чтобы стать сотрудником по иностранным делам (ФАО), вам следует изучать политологию или международные отношения.

Также стоит отметить, что будущие работодатели обращают внимание на то, что и где получить вашу степень магистра в более позднем возрасте.Когда я пошел на обучение наставников в своей авиакомпании, кто-то из высокопоставленных сотрудников компании сказал нам, что наличие степени в более престижной школе и / или технической степени является плюсом для вашего заявления.

Может возникнуть соблазн получить диплом по «военным наукам» в безымянном университете, доступном только в режиме онлайн. Однако, если вы готовы приложить немного больше усилий, я считаю, что стоит получить сложную степень в школе, у которой, по крайней мере, есть физический кампус и имя, которое люди узнают (по уважительным причинам).

Если вы обратите внимание на длину каждого раздела в этой статье, то заметите, что я потратил гораздо больше времени на обсуждение образования, чем на фактическую работу военного руководства. Мы обсудим больше возможностей для лидерства, которые вы получаете в качестве пилота, во второй части этого поста. Тем не менее, я признаю, что критика ВВС некоторыми другими службами обоснована. Некоторые из них просто основаны на структуре боевых действий ВВС. Помимо позиций экипажа на некоторых наших самолетах (капитаны по погрузке, бортинженеры, стрелки, операторы стрелы и т. Д.)) большая часть боевой авиации используется офицерами. Морскому пехотинцу или сухопутному командиру чрезвычайно сложно понять эту разницу (помогает проиллюстрировать свои мысли мелками!). Однако, к лучшему или к худшему, это правда, что военно-воздушные силы в значительной степени полагаются на образование для повышения квалификации своих офицеров.

Чем раньше офицер ВВС завершит каждый этап своего образования, тем лучше. Это освобождает вас, чтобы сосредоточиться на действительно важных вещах (например, полетах или создании жизни / семьи).Также для вашего командира очень заметно, если у вас есть утки подряд в начале вашей карьеры. Независимо от того, делают ли они это сознательно или нет, они будут отдавать вам предпочтение для наград и заданий, если вы поставите все эти важные флажки как можно раньше. Сделайте это, а затем забудьте об этом и двигайтесь дальше!

Вернуться к содержанию

После завершения обучения в авиации и персонала Колледж, ВВС предпочитают, чтобы вы во время следующего задания служили в штабе.

Существует много разнообразия среди сотрудников и поездок сотрудников, и существует своего рода иерархия в отношении престижа этих назначений. Верхний уровень — это штаб авиации, работающий на шефа в Пентагоне или, возможно, работающий непосредственно на председателя Объединенного комитета начальников штабов. Ниже приведены штабы боевого командования уровня Министерства обороны США (COCOM), такие как Командование специальных операций США (USSOCOM) или Европейское командование (EUCOM). Далее идут основные командования ВВС (MAJCOM), такие как Воздушное боевое командование (ACC) или Тихоокеанские ВВС (PACAF).

Назначение сотрудников основано на вашем общем послужном списке и вашей работе в вашей программе IDE. Если вы стремитесь к высокому званию, вам следует стремиться к самому престижному персоналу. В штабе не хватит места для всех, так что не обижайтесь, если не поймете. Как всегда, делайте все возможное с тем, что у вас есть.

Удовольствие от экскурсий с персоналом неоднозначно. Иногда вы будете работать на отличного начальника, который понимает, что ваша семья многим пожертвовала.Вы будете работать над интересными, значимыми проектами и ходить домой каждую ночь в разумное время. К сожалению, на некоторых штатных должностях вас подчиняют люди, которые просто этого не понимают. Они будут ожидать, что вы будете работать сверхурочно. Они могут не понимать, что дает ваш опыт в борьбе, и будут использовать вас в проектах, которые не имеют ничего общего с вашей специальностью. Они могут посылать вам много TDY (в командировки) или даже позволить вам работать в течение 6–12 месяцев во время командировки сотрудников. Я надеюсь, что вы получите хороший тур для персонала.Если нет, просто помните, что когда-нибудь это закончится.

Вернуться к содержанию

После того, как поездка с вашим персоналом завершена, вам нужно принять некоторые решения. Если вы очень конкурентоспособны на командных позициях, вы пойдете по пути, который мы обсудим в следующем разделе. Если вы конкурентоспособны лишь в некоторой степени или совсем не конкурентоспособны, у вас, вероятно, будет возможность остаться в штате или вернуться в Крыло.

Если вы решите остаться на штатной работе, это должно быть основано на том факте, что вы использовали свое время там, чтобы пообщаться, и у вас есть хорошая последующая работа.В идеале это обеспечит вам хорошую базу на работе, которая вам нравится, с друзьями. Часто можно выбрать работу, которая также приблизит вас к большой семье. Обычно это игра для повышения качества жизни семьи, а не для карьерного роста. Если вы можете заставить это работать, я думаю, что это отличный вариант.

Если вы решите вернуться к полетам, у вас будет несколько возможностей. Вы можете вернуться к своей основной системе вооружения (MWS) в оперативном подразделении. Вы также можете вернуться в школу своего самолета в качестве пилота-инструктора.Это может позволить вам вернуться к полетам на любимом самолете в известном вам месте, но при этом вы будете менее уязвимы для развертывания… по крайней мере, на какое-то время. У вас также будет возможность пойти на базу UPT или на другую более общую учебную работу.

В любом из этих заданий вы в первую очередь будете искать работу ADO в летающей эскадрилье, работая где-нибудь на базе на уровне группы или крыла. Вы будете иметь право на должности начальника отдела стандартизации и оценки группы (OGV) или начальника отдела планов.Это не всегда самые захватывающие работы, но вы сможете летать на стороне. Можно было сделать намного хуже. Если вы склоняетесь к уходу из Active Duty и, возможно, пытаетесь получить работу UPT IP в резервах, назначение на базу UPT было бы сильным выбором.

Если вы не конкурентоспособны на командных позициях, это может стать концом вашей карьеры в Active Duty. Обычно можно найти способ остаться на 20 лет и выйти на пенсию.

Вполне возможно, что вы не будете соревноваться за командование в своей MWS, но у вас может быть такая возможность на UPT или другой тренировочной базе.Когда я работал в Лафлине, у меня было два выдающихся командира эскадрильи. Один из них был пилотом F-15C, и его команда была его последней задачей. Другой был пилот F-16. Он отлично справился со своей командой и в итоге перешел к заданиям более высокого уровня. Оба, казалось, получали огромное удовольствие от своего времени в качестве командира эскадрильи. Не бойтесь выбрать этот путь, если вы стремитесь командовать и не получите этого в своем сообществе MWS.

Вернуться к содержанию

Говоря о командовании, это то место, где ВВС хотят, чтобы офицеры преследовали IDE и персонал.«Идеальный» карьерный рост предполагает некоторое время в качестве операционного директора (DO). Это хороший способ вернуться в свой самолет, освежиться в жизни в эскадрилье после штаба и узнать, как стать командиром. Если на вашей базе недостаточно рабочих мест DO, должность начальника отдела безопасности обычно считается не менее конкурентоспособной ступенькой.

В общем, ВВС пытаются поставить вас во главе эскадрильи, в которой вы не были DO. Если на базе есть две эскадрильи, использующие один и тот же тип самолетов, нередко эти два DO берут на себя командование противоположными эскадрильями одновременно.В ВВС командование эскадрильей обычно длится 2 года. Если у вас все хорошо и вы идете по пути к дальнейшему продвижению по службе, вам будет интересна программа повышения квалификации для пожилых людей (SDE). Возможно, вам придется подождать этого, потратив некоторое время в качестве заместителя командира группы или вернувшись на штабную должность. Военно-воздушным силам необходимо продвигать так много офицеров через командование эскадрильей, что крайне редко можно командовать эскадрильей более одного раза.

Мы могли бы вдаваться в подробности о продвижении по служебной лестнице после этого момента, но я думаю, что на данный момент мы рассмотрели достаточно. Если вы дойдете до этого момента, не будет недостатка в полковниках и генералах, которые будут рады обсудить с вами ваши варианты. К тому времени вы также поймете, есть ли у вас потенциал для дальнейшего прогресса или нет.

Многие пилоты считают командование эскадрильей вершиной своей летной карьеры. К тому времени, как вы закончите эту работу, вам будет около 20 лет, и, если вы действительно не хотите заниматься более высоким званием и работой в штате, это прекрасное время для выхода на пенсию.

Хотя ВВС уделяют огромное внимание командованию эскадрильей, я не рекомендую использовать его, равно как и любое другое звание или титул, в качестве своей конечной цели в карьере. При принятии решения о выгодных сделках бывает удивительно много субъективности, и вредно основывать свое счастье на чем-то, что выходит за рамки вашего контроля.Один из лучших командиров моей эскадрильи постоянно говорил нам, что каждый человек должен определять для себя «успех». Если вы основываете свои определения на вещах, которые можете контролировать, позволяя любым титулам или званиям служить бонусом, вы гарантированно будете довольны своей карьерой.

Сложите все вместе, и карьерный рост офицера ВВС, вероятно, будет выглядеть примерно так:

Вернуться к содержанию

Мы только что рассмотрели основы повышения квалификации для пилота Active Duty Air Force.Большая часть этого в той или иной степени относится к гвардии и резерву. Основное отличие состоит в том, что сроки могут быть увеличены.

Одна из лучших составляющих подразделения гвардии или резерва — это то, что пилот может провести там всю карьеру. Однако это означает, что не существует постоянного потока людей, которые продвигаются по служебной лестнице и занимают посты, оставляя вам место. Возможно, вам придется подождать, пока кто-то из высокопоставленных лиц уйдет на пенсию и оставит место для людей, которые могут перейти на новую работу или пройти повышение по службе, прежде чем у вас появится возможность сделать то же самое.Это очень много!

На Active Duty все постоянно участвуют в крысиной гонке карьерного роста. В Страже или Резерве у вас будет больше возможностей наслаждаться тем, где вы находитесь, выполнять свою текущую работу и получать удовольствие от полета на своем самолете. Получите удовольствие и воспользуйтесь этим!

У вас по-прежнему будет возможность перемещаться по разным должностям как в вашей эскадрилье, так и на уровне группы, крыла или даже персонала. Часто для выполнения этих работ требуется работник, работающий полный рабочий день, поэтому вы сможете выполнять их только в том случае, если будете выполнять заказы на полный рабочий день в течение нескольких лет.В этом нет ничего плохого, хотя вы должны быть осторожны, чтобы не превысить свои ограничения на военный отпуск с гражданской работы.

Вы можете проходить курсы PME заочно. На каждом из этих курсов выделяются места для персонала гвардии и резерва, и ВВС иногда трудно найти добровольцев для их заполнения. Если вы хотите потратить пару месяцев на участие в программе SOS или год на участие в ACSC, обязательно сообщите об этом своему руководству заранее, чтобы они могли заранее спланировать работу и поработать над тем, чтобы получить вам место.

Долгосрочный характер членства в гвардейском или резервном подразделении означает, что существует система стажа, почти аналогичная авиационной. Вы будете знать, кто впереди вас в очереди на такие должности, как командир эскадрильи. Если вы стремитесь к чему-то подобному, лучшее, что вы можете сделать, — это прекрасно выполнять свою работу и поддерживать хорошие отношения с людьми в вашем сообществе. Пока вы это делаете, ваше руководство будет мотивировано, чтобы помочь вам добиться успеха в работе своей мечты.

К счастью, в отличие от Active Duty, Guard и Reserve также рады, что вы останетесь и просто летаете, даже если вы не стремитесь к высокому званию или необычным командным должностям.Как ни странно, на этот трек тянется большинство пилотов гвардии и резерва.

Если вы стремитесь получить штатные должности или заработать звёзды генерала, вы также можете сделать это здесь. Пилоты гвардии и резерва могут работать неполный или полный рабочий день. Возможно, вы сможете сделать что-то в своем состоянии, в то время как другие потребуют переезда. Вы можете работать в штабе ANG, AFRES, а также на постах охраны или резерва в штатах, где большинство ваших сотрудников являются действующими лицами.

В большинстве штатов есть по крайней мере один генерал-офицер, занимающий должность генерал-адъютанта (командующий на уровне штата).Командиры самого высокого уровня в гвардии и резерве — 4-звездочные генералы. Достижение этих уровней обычно требует достаточного количества полных рабочих дней, что было бы трудно выполнить пилотом авиакомпании. Однако, если вы к этому стремитесь, это вполне возможно.

Вернуться к содержанию

Независимо от ваших карьерных целей, важно, чтобы ваш командир знал о них!

Как новенький пилот, сюда входит и ваш командир звена, но вам также следует поговорить об этом напрямую с командиром эскадрильи. Большинство командиров эскадрилий будут рады поговорить с вами о карьерном росте. Лучше всего поговорить с руководителем или секретарем начальника и назначить официальную встречу в его или ее календаре.

Независимо от того, с кем вы говорите о карьерном росте, вам нужно делать это тактично. Как новенький лейтенант, ваша задача №1 — научиться правильно использовать свой самолет. Вы должны тратить почти все свое время, беспокоясь об этом, и очень мало времени на размышления о 5–10-летнем будущем. Вы должны убедиться, что люди знают вас как труженика, который знает свое дело и хорошо владеет самолетом, прежде чем вы начнете с кем-либо обсуждать тему карьерного роста.

Начав эти разговоры, вы не должны сразу переходить к тому, чего хотите в будущем. Вам следует смиренно и искренне попросить поделиться своим мнением о том, как вы выполняете свою текущую работу. Это нормально — озвучивать свои будущие цели, но делайте это осторожно. Сначала вам следует просто упомянуть свои цели, чтобы спросить, чем еще вы можете заниматься на своей текущей работе, чтобы иметь право на эти возможности.

Прежде чем начинать выдвигать конкретные задания или возможности, которые вы хотите реализовать, вам следует подождать, пока вы не заработаете часть своей продвинутой пилотной квалификации и определенное доверие в сообществе.Если вы открыты для множества возможностей, это может подождать, а если вы хотите чего-то особенного или особенного, вам, возможно, придется начать обсуждение этого раньше в своей карьере. (Ожидайте следующих статей, которые помогут проиллюстрировать это.)

На определенном уровне ваш босс хочет и должен услышать, что вы планируете стать экспертом по своему самолету, завершить IDE и получить задание в штате, а затем вернуться, чтобы стать экспертом. Командир эскадрильи.Желать чего-то другого — это нормально, но я рекомендую всегда подчеркивать, как стремление к другим / особым возможностям будет поддерживать вашу конкурентоспособность для традиционного карьерного роста в вашем сообществе.

Некоторые командиры эскадрилий (или групп, или крыла) действительно будут оскорблены и сбиты с толку, если вы скажете, что хотите воспользоваться возможностью, которая выведет вас из вашего основного сообщества. Когда в первый раз одного из моих приятелей подобрали для участия в U-2, он был так взволнован, что на следующий день я заполнил заявку.Я как раз собирался отправить его командиру эскадрильи, когда от командира звена пришло известие, что он больше не собирается выпускать пилотов для BS, таких как программа U-2. Это глупый образ мышления, который имеет больше негативных последствий для ВВС в целом, чем он мог бы иметь положительные последствия для какого-либо конкретного крыла, но это прерогатива командующего. В итоге я (к сожалению) даже не подал заявку, потому что не видел никакого смысла в том, чтобы рассердить людей.

Не беспокойтесь, если вы столкнетесь с подобными препятствиями.Моя карьера в любом случае складывалась очень хорошо. Я преуспел в своем сообществе и в этом крыле, а также получил некоторые другие особые возможности. Я также закончил преподавание на базе UPT, где я был в значительной степени вне досягаемости моего сообщества MWS. Я мог бы подать заявку на U-2 оттуда и быть в безопасности от недружественного гнева командира звена. Если вы обнаружите, что ваш путь сейчас заблокирован, подождите немного, и вы, возможно, найдете способ заставить все работать в конце концов.

Чтобы поговорить с начальником о своих карьерных целях, требуется некоторый такт, но это важно.Вы не можете получить то, что хотите, если не попросите об этом. Командиры эскадрилий ВВС летают меньше, чем кто-либо в своем подразделении, потому что их основная работа — заботиться о своих людях. Ваш начальник будет в восторге, если он или она поможет вам получить задание вашей мечты. Дайте ему или ей возможность помочь вам, выразив ваши цели.

Вернуться к содержанию

Мы только что рассмотрели офицерскую сторону карьерного роста пилота ВВС до звания подполковника.Кажется, это много, хотя, честно говоря, это всего лишь обзор. Не бойтесь найти наставника, который подробно остановится на каждом из этих разделов и поможет поместить их в контекст для достижения ваших целей. Нравится вам это или нет, но вам нужно обращать внимание на эту часть вашего карьерного роста и по возможности отмечать соответствующие флажки.

Однако это только часть вашей работы. Также нужно позаботиться о карьерном росте пилота. Эта тема достаточно широка, поэтому мы отложим ее еще на неделю. В ближайшем будущем ждите 2-й части.

Вернуться к содержанию

Кредиты изображений:

Изображение функции для этого сообщения взято из видео по адресу: https://www.dvidshub.net/video/712178/leadership-and-development-course.

Проверка FOD студента APT: https://www.dvidshub.net/image/5315178/laughlin-airmen-earn-air-force-level-awards.

Изображение линии мобильной связи: https://www.dvidshub.net/image/5813699/training.

Фотография студентов SOS взята из: https: // www.dvidshub.net/video/714011/cde-squadron-officer-school-craig-smith.

Фотография брифинга ACSC CSAF взята из: https://www.dvidshub.net/image/4699048/csaf-shares-squadron-revitalization-vision-command-insights-with-acsc.

Встреча персонала в Ираке находится по адресу: https://www.dvidshub.net/image/55/honorable-ellen-m-lord-meets-key-staff-members-union-iii-iraq.

Предположение о командном фото взято из: https: //www.dvidshub.net / image / 6085539 / новый командир берет на себя ответственность 492-й истребительной эскадрильи.

Снимок генерала Ленгьеля взят из: https://www.dvidshub.net/image/6056009/gen-lengyel-guam-national-guard-troop-visit.

Сессия наставничества находится по адресу: https://www.dvidshub.net/image/5674402/angs-outstanding-first-sergeant-year-1st-sgt-rachel-l-landegent.

ВОЗМОЖНОСТЕЙ ТЕХНОЛОГИИ СМЕШАННОГО ОБУЧЕНИЯ В ОРГАНИЗАЦИИ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ УЧАЩИХСЯ НАЧАЛЬНОЙ ШКОЛЫ | Алексеева

Андреева Н.В., Рождественская, Л.В. И Ярмахов, Б.Б. (2016). Шаг школы в смешанное обучение. Москва: Буки Веди.

Бенард Б. (2004). Устойчивость: чему мы научились. Сан-Франциско: WestEd

Кларк Р. (1983). Пересмотр исследований по обучению через СМИ. Обзор образовательных исследований, 5 (4), 449–454.

Кубан, Л. (2003). Компьютеры и класс: победа в классе. Отчет Педагогического колледжа, 95 (2), 185–210.

Кертис, Дж. Бонк и Чарльз Р.Грэм. (2006). Справочник смешанного обучения: глобальные перспективы, местные образцы. Пфайффер.

Ефремцев, С. (2013). Диагностика доминирующей перцептивной моды. Получено с https://psycabi.net/testy/289-test-audial-vizual-kinestetik-diagnostika-dominiruyushchej-pertseptivnoj-modalnosti-s-efremtseva.

Федеральный государственный образовательный стандарт начального общего образования (ФГОС НОО), (2009). Проверено с

https: // kpfu.ru / docs / F200

55 / FGOS.NOO_23_10_09_Minjust_3._1_.pdf

Гаррисон, Д. и Воган, Н. (2008) Смешанное обучение в высшем образовании: рамки, принципы и руководящие принципы. Джосси-Басс.

Горчинская, А.А. (1999) Развитие познавательного интереса младших школьников в учебной деятельности. Дисс. … Канд. пед. наук: 13.00.01. Челябинск.

Хорн, М. и Стейкер, К. (2015). Смешанное обучение. Использование прорывных технологий для улучшения школьного образования.Сан-Франциско: Wiley.

Лебедева Л.А., Акпаева А.Б. (2010) Теория и технология педагогического процесса в малокомплектной начальной школе. Алматы, Казахский национальный педагогический университет им. Абая.

Логинова, А. (2016). Смешанное обучение: преимущества, ограничения и опасности. Молодой учоный, 7, 156-161. Взято с http://www.moluch.ru/ archive / 87/16877

Медведева М.В. (2009) Активизация познавательной деятельности на уроках химии.Среднее профессиональное образование, 6, 24-26.

Панова Н. (2019). Использование технологии смешанного обучения в малокомплектной школе. Общество и образование в XXI веке: опыт прошлого — взгляд в будущее. Псков: Псковский государственный университет.

Шамова Т.И. (2012). Активизация учения школьников. Москва: Педагогика

Щукина, Г.И. (2011). Активизация познавательной деятельности учащихся в учебном процессе.Москва: Просвещение.

Щукина, Г.И. (2012). Педагогические проблемы формирования познавательных интересов учащихся. Москва: Педагогика.

Щукина, Г.И. (2014). Исследование проблемы активизации учебно-познавательной деятельности. Сов. Педагогика, 11, 46–51.

Сидоров К. (2012) Количественная оценка продуктивности внимания в методике «Корректурная проба» Б. Бурдона. Вестник Удмуртского университета. Философия.Социология. Психология. Педагогика, 4, 51-57. Получено с https://cyberleninka.ru/article/n/kolichestvennaya-otsenka-produktivnosti-vnimaniya-v-metodike-korrekturnaya-proba-b-burdona/viewer

% PDF-1.4 % 1 0 объект > / Метаданные 2 0 R / Страницы 3 0 R / Тип / Каталог / PageLabels 4 0 R >> эндобдж 5 0 obj > эндобдж 2 0 obj > ручей uuid: 21c71224-09d2-4b90-9419-5d61d5111754adobe: docid: indd: 2522ee55-cc70-11e4-b05d-a4778e1ce4e1proof: pdf8d7e65e1-cc63-11e4-b05d-a4778ad7ed1ce4e4-b05d-a4778ad0ed1ce4e4-b05d-a4778ad0ed1ce4e4-b05d-a4778ad1ed1ce4e4-b05d-a4778bed1ce5 СсылкаStream72.0072.00Inchesuuid: 7ae08f96-8b80-4022-a106-0078651c0fe4uuid: 74e6092a-a6f3-40c1-aa87-89a507522d39

Внеклеточные везикулы-миРНК в качестве биомаркеров жидкой биопсии для идентификации и прогноза заболевания у пациентов с метастатическим колоректальным раком

Abstract

Диссеминированное заболевание присутствует у ≈50% пациентов с колоректальным раком после постановки диагноза и является причиной большинства смертей от рака. Добавление биологических препаратов, таких как бевацизумаб, к химиотерапии, увеличило выживаемость без прогрессирования заболевания и общую выживаемость пациентов с метастатическим колоректальным раком (mCRC).Однако об этих преимуществах сообщалось только у небольшой части пациентов. На сегодняшний день не существует биомаркеров, которые могли бы объяснить неоднородность этого заболевания и помочь в выборе лечения. Недавние открытия показали, что микроРНК (miRNA) играют важную роль в развитии рака и могут быть инкапсулированы с высокой стабильностью во внеклеточные везикулы (EV), которые выделяются в биологических жидкостях. ЭМ могут действовать как коммуникаторы от клетки к клетке, передавая генетическую информацию, такую ​​как miRNA.В этом контексте мы стремились изучить сывороточные миРНК, ассоциированные с EV (EV-miRNA), в качестве новых неинвазивных биомаркеров для диагностики и прогноза пациентов с мКРР, принимающих бевацизумаб. Мы наблюдали, что исходные miRNA-21 и 92a превзошли уровни карциноэмбрионального антигена при диагностике наших 44 пациентов с mCRC по сравнению с 17 здоровыми добровольцами. Кроме того, у умерших пациентов через 24 недели наблюдались более высокие уровни miRNA-92a и 222. Однако в многомерном анализе Кокса более высокие уровни miRNA-222 через 24 недели были связаны с более низкой общей выживаемостью.В целом эти данные указывают на то, что EV-miRNA имеют большой потенциал в качестве биомаркеров жидкой биопсии для идентификации и прогноза mCRC.

Термины темы: Биомаркеры опухоли, биомаркеры опухолей, Колоректальный рак, Колоректальный рак

Введение

Колоректальный рак (CRC) является вторым по распространенности раком у женщин и третьим по частоте у мужчин во всем мире. Более того, на него приходится 8,9% всей смертности, связанной с опухолями, и он является второй по частоте причиной смерти от рака ¹ .Распространенное заболевание присутствует при постановке диагноза у 50% пациентов [лимфатические узлы (35%) и отдаленные органы (22%)], и у половины пациентов с диагнозом локализованная опухоль в конечном итоге разовьется. ² . В последние годы применение новых таргетных методов лечения, включая антиангиогенные препараты, способствовало значительному увеличению общей выживаемости (ОВ) пациентов с метастатическим колоректальным раком mCRC, сообщая о средней выживаемости ≈30 месяцев ³ .Бевацизумаб, гуманизированное моноклональное антитело, нацеленное на фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), продемонстрировало преимущества в отношении выживаемости без прогрессирования (PFS) и общей выживаемости в сочетании с химиотерапией. ^{4 , 5} . Несмотря на эти улучшения ожидаемой продолжительности и качества жизни, а также доказанную эффективность бевацизумаба, только 40% пациентов демонстрируют положительный ответ на терапию. ⁶ . Уровни VEGF-A в плазме / сыворотке ⁷ и мутации в пути Ras / Raf / Mek / Erk ⁸ , среди прочего ⁹ , были предложены в качестве предикторов эффективности бевацизумаба.Пока что были получены противоречивые результаты ^{10 — 13} . Циркулирующие опухолевые клетки (ЦКО), которые считаются ответственными за рецидив заболевания, также оценивались как биомаркеры прогноза для пациентов с мКРР, получающих терапию бевацизумабом. ^{14 — 16} , однако для клинического применения необходимы дополнительные доказательства.

Этот сценарий вызывает острую необходимость в обнаружении и проверке прогностических биомаркеров для прогноза и ответа на лечение ¹⁷ .Использование жидкой биопсии обеспечивает потенциально клинически значимые неинвазивные геномные и эпигеномные сигнатуры для мониторинга рака.

Из-за их большого количества и их роли в качестве регуляторов экспрессии генов, циркулирующие микроРНК (миРНК), небольшие некодирующие РНК (длиной 19–24 нуклеотида) были предложены в качестве потенциальных маркеров при нескольких типах рака ¹⁸ . Хотя они участвуют в физиологических процессах, миРНК также принимают участие в механизмах рака, включая рост опухоли, ангиогенез и метастазирование.При раке miRNA играют две разные роли, которые, по-видимому, зависят от контекста: они действуют как онко-miRNA, когда они ингибируют экспрессию генов-супрессоров опухолей, ускоряющих онкогенез, или как опухолевые супрессоры, когда они предотвращают прогрессирование опухоли, блокируя экспрессию онкогенов ¹⁹ .

MiRNA были описаны в жидкостях организма как молекулы без циркуляции ²⁰ , связанные с белками ²¹ или инкапсулированные во внеклеточные везикулы (EV) ²² .В то время как миРНК, не циркулирующие в крови, выделенные из жидкостей организма, включают миРНК, высвобождаемые во время гибели и повреждения клеток ²³ , миРНК, упакованные в ЭМ, селективно высвобождаются клетками для целей коммуникации. Кроме того, гипоксические условия, происходящие внутри опухоли, усиливают высвобождение ЭВ и модулируют их содержание. ²⁴ . Таким образом, они могут увеличивать количество специфических миРНК опухолей, обнаруживаемых в крови ²⁵ . Более того, покрытие липидной мембраной защищает miRNA от деградации РНКаз.В результате miRNA, полученные из EV, обладают более высокой специфичностью и стабильностью, чем циркулирующие miRNA, что делает их лучшими биомаркерами жидкой биопсии для диагностики и прогноза рака.

Это исследование было направлено на сравнение потенциала выборочно разработанной панели EV-miRNA с обычно используемыми клиническими или экспериментальными биомаркерами, такими как статус CEA, CTC или KRAS, в диагностике и прогнозе пациентов с mCRC, получающих комбинированное химиотерапевтическое лечение бевацизумабом первой линии ( Рис. ).

Графическое изложение методологии, использованной во время этого исследования.

Результаты

В это исследование было включено 44 пациента с мКРР, 23 (52,3%) из них с первичными опухолями, локализованными в толстой кишке, и 21 (47,7%) в прямой кишке. Среднее время наблюдения за всеми пациентами составило 27 месяцев (от 1 до 67 месяцев). Клинические характеристики пациентов и здоровых доноров сведены в таблицу, включая исходные значения CEA, которые также были доступны в нашей когорте здоровых доноров.

Таблица 1

Характеристики пациентов с метастатическим колоректальным раком и здоровых доноров, включенных в исследование.Сокращения: mCRC: метастатический колоректальный рак; 12w: 12 недель; 24w: 24 недели; ЦКО: циркулирующие опухолевые клетки.

Выделение и характеристика ЭВ от больных раком

Исследование сыворотки стал очень многообещающим инструментом в области жидкостной биопсии.Перед выполнением конкретного анализа обязательным этапом является определение характеристик электромобилей. Согласно рекомендациям Международного общества внеклеточных везикул (ISEV), существуют минимальные требования для обеспечения надлежащей изоляции EV ²⁶ . Чтобы оценить неоднородность популяции, ISEV рекомендует использовать электронную или атомно-силовую микроскопию в сочетании с одним методом отслеживания. Он также рекомендует идентификацию специфических маркеров, таких как трансмембранные белки (CD63), внутриклеточные белки, связанные с мембранными белками (Alix, Hsp70), и внутриклеточные белки, не связанные с белками плазматической мембраны (Calnexin), с помощью вестерн-блоттинга.Следуя этим требованиям, мы провели точную характеристику наших образцов электромобилей. Во-первых, анализ отслеживания наночастиц (Nanosight, Marvel. UK) привел к концентрации 1,02 × 10 ¹¹ частиц / мл и диаметру моды = 127 нм ± 6,5 нм (рис.). Во-вторых, аналогичный размер и типичная морфология ЭМ наблюдались с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) (рис.). Наконец, вестерн-блоттинг продемонстрировал высокую экспрессию Alix и CD63 на образцах EV, аналогичную экспрессию Hsp70 как на культуральных клетках, так и на EV, а также более высокие уровни калнексина в культуральных клетках по сравнению с EV (рис.). Эти данные позволяют предположить, что используемая методология подходит для выделения EV из образцов сыворотки. Оригинальные блоты доступны на дополнительном рисунке ^S1 .

Характеристика EV: ( A ) Анализ с отслеживанием наночастиц анализ внеклеточных везикул из сыворотки здоровых доноров: концентрация 1,02 × 10 ¹¹ ± 1,38 × 10 ¹⁰ и режим 127 нм ± 16 нм размером. ( B ) Изображение, полученное с помощью просвечивающей электронной микроскопии (TEM) изолированных EV от пациентов после очистки с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC), чтобы уменьшить загрязнение белком при окрашивании.( C ) Изображение вестерн-блоттинга из клеточного контроля и сывороточных лизатов EVs, показывающее более высокие уровни калнексина, более низкие уровни Alix и более низкие уровни CD63 в клетке по сравнению с лизатами EV. Кроме того, аналогичные уровни Hsp70 можно было наблюдать в трех образцах.

EV-miRNA как биомаркеры при идентификации mCRC

Чтобы оценить потенциал выбранных miRNA для идентификации пациентов с mCRC, мы сравнили исходную (B) сывороточную экспрессию 10 выбранных EVs-miRNA в нашей когорте из 44 пациентов с mCRC с 17 здоровых добровольцев.Выбор этих 10 miRNA был основан на ранее описанных ролях в патогенезе или наличии гена, связанного с CRC, в качестве мишени. Проанализированные miRNA были miR-126, 155, 19b, 194, 20a, 200b, 21, 222, 552 и 92a (дополнительная таблица ^S1 ).

Мы выявили статистически значимые различия в 7 miRNA, выявив более высокие уровни miR-19b ( p = 0,008), miR-20a ( p <0,001), miR-200b ( p <0,001), miR- 21 ( p <0.001), miR-222 ( p <0,001), miR-552 ( p = 0,038) и miR-92a ( p <0,001) у пациентов с мКРР (U-критерий Манна-Уитни). Однако miR-126 ( p = 0,054), miR-194 ( p = 0,343) и miR-155 ( p = 0,131) не показали статистически значимых различий между двумя группами (рис.).

miRNA у пациентов с mCRC и здоровых доноров: внеклеточные везикулы (EV) от пациентов с метастатическим колоректальным раком (mCRC) показали более высокую экспрессию miR-19b, 200b, 21, 222 и 92a по сравнению с таковыми у здоровых доноров.Данные представлены в виде графиков в виде прямоугольников и усов (от минимального до максимального). Использовался U-критерий Манна-Уитни: * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, нс: достоверных различий нет.

Одномерная логистическая бинарная регрессия, скорректированная по возрасту и полу, показала, что miR-19b ( p = 0,029), miR-21 ( p = 0,005), miR-222 ( p = 0,026) и miR -92a ( p = 0,005) были независимыми диагностическими факторами mCRC (дополнительная таблица ^S2 ).Мы также оценили соответствующие ROC-кривые, чтобы проверить чувствительность и специфичность по сравнению с текущим клиническим биомаркером CEA (рис.). AUC miR-21 и miR-92a были значительно выше, чем AUC CEA ( p <0,0001), тогда как miR-222 и miR-19b показали аналогичную AUC ( p = 0,147) и более низкую AUC ( p ). = 0,0084) соответственно (рис.) (Дополнительная таблица ^S2 ).

Кривые ROC и AUC экспрессии EV-miRNA при идентификации mCRC: ( A ) Кривые рабочих характеристик приемника (ROC) и AUC исходных EV miR-19b, 21, 222, 92a и CEA, скорректированные в зависимости от возраста и пола, согласно идентификации метастатического колоректального рака (mCRC).Заштрихованные области показывают повышенную чувствительность и специфичность каждой микроРНК по сравнению с кривой СЕА. ( B ) Гистограмма, представляющая AUC каждой miRNA и их статистические различия с исходным CEA. miR-21 и miR-92 были лучшими предикторами в идентификации mCRC с более высокой чувствительностью и специфичностью, чем исходный CEA, тогда как miR-222 не показал статистических различий, а 19b имел более низкую чувствительность и специфичность, чем CEA. Данные представлены в виде гистограммы среднего значения со стандартными планками ошибок.* p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, **** p <0,0001, нс: достоверных различий нет.

EV-miRNAs в сравнении с клиническими характеристиками и CTCs

Мы сравнили клинические характеристики и CTCs наших 44 пациентов с mCRC с экспрессией 4 EV-miRNA, связанных с раком (таблица). Корреляция с другими 6 EV-miRNAs представлена ​​в Supplementary table ^S3 . Мы наблюдали, что высокие уровни miR-222 (B) коррелировали с пожилыми пациентами ( p = 0.017). Пациенты с мутацией K-RAS показали низкие уровни miR-92a (B) ( p = 0,010) (дополнительный рисунок ^S2 ). Кроме того, пациенты с повышенными уровнями CEA (B) экспрессировали более высокие уровни miR-126 ( p = 0,041) и miR-200b ( p = 0,035) на исходном уровне (данные не показаны). Низкие уровни miR-222 (B) были связаны с высокими уровнями Ca 19,9 через 24 недели (24 недели) во время второй оценки ответа ( p = 0,042), но не было обнаружено связи между EV-miRNA и другими клиническими переменными. .Что еще более интересно, когда мы сравнивали экспрессию EVs-miRNA и присутствие CTCs во время последующего наблюдения, мы обнаружили корреляцию между высокими уровнями miR-21 (B) и присутствием CTC (24w) ( p = 0,023). (Таблица ). Точно так же высокие уровни miR-92a через 12 недель (12 недель) во время оценки первого ответа были связаны с присутствием ЦОК (12 недель) ( p = 0,031) (данные не показаны).

Таблица 2

Связь между исходной экспрессией miRNA EV и характеристиками пациентов с mCRC.Использовались тесты Манна-Уитни U и Краскела-Уоллиса. Сокращения: ЦКО: циркулирующие опухолевые клетки; miR: miRNA; B: исходный уровень; 12w: 12 недель; 24 недели: 24 недели; * р <0,05.

Протеиназа К и контроль эксклюзионной хроматографии

Одной из основных проблем этой работы была чистота EV из образцов сыворотки.Методы последовательного центрифугирования также могут привести к совместному выделению липопротеинов и белкового комплекса. Что еще более интересно, эти белковые агрегаты могут быть соосаждены с циркулирующими в сыворотке свободными миРНК. По этой причине, чтобы убедиться, что наши результаты экспрессии miRNA в основном связаны с содержанием EV, мы выполнили два контроля. Первый контроль включал обработку протеиназой К, а второй заключался в выделении EV методом эксклюзионной хроматографии (SEC).

В контроле протеиназы К ни miR-21, ни miR-222 не показали статистических различий между обработанными и обработанными.контрольные парные образцы в тесте ранговых знаков совпадающих пар Уилкоксона ( p = 0,25 и p = 1,00, соответственно) (дополнительный рисунок ^S3 ). Точно так же при сравнении парных образцов, полученных с помощью ультрацентрифугирования и SEC, не было обнаружено статистических различий в отношении экспрессии miR-21 и miR-222 ( p = 0,5 и p = 0,25, соответственно) (дополнительный рисунок ^S4 ).

Обсуждение

CRC — одна из наиболее частых причин смерти от рака в мире ¹ .В последние годы методы скрининга были усовершенствованы с особым упором на биомаркеры крови ²⁷ . Тем не менее, диссеминированное заболевание все еще присутствует на момент постановки диагноза у большого процента пациентов, являясь причиной большинства этих смертей. С другой стороны, miRNA играют важную роль в биологических и патологических процессах во всех типах клеток. В частности, в раковых клетках специфические miRNA активно инкапсулируются в EV, которые попадают в кровоток.Кроме того, из-за гипоксического микроокружения и / или изменений в эндолизосомном переносе скорости продукции ЭВ в опухолевых клетках относительно увеличиваются. ²⁸ . Принимая во внимание преимущества жидкой биопсии как неинвазивной с возможностью многократного отбора образцов с течением времени, что особенно важно при последующем наблюдении за пациентами с метастазами, мы подумали, что микроРНК, полученные из сыворотки EV, могут служить надежными и специфическими биомаркерами опухоли. Целью настоящего исследования было оценить выявление диссеминированного заболевания и прогностический потенциал нашей панели EV-miRNA у пациентов с мКРР, получавших антиангиогенную терапию в сочетании со схемой FOLFOX.Это исследование включало гомогенную популяцию мКРР, получавшую бевацизумаб-FOLFOX-6m, стандартную комбинацию первой линии для этих пациентов.

Наша разработанная панель состояла из 10 miRNA, которые ранее были описаны как маркеры, связанные с диагностикой (miR-155, 20a, 200b, 21, 222, 92a), прогнозом (miR-155, 194, 20a, 21, 222, 552 и 92a), локализация метастазов (miR-19b, 194, 200b, 20a и 552), ответ на химиотерапию (miR-126, 200b, 21), лечение бевацизумабом (miR-126 и 155) и клиническая стадия (miR-21, 552 и 92a) (Дополнительная таблица ¹ ).Наши результаты показали метастатическое обнаружение и прогностическую ценность каждой из этих EV-miRNA в нашей когорте пациентов.

На основании наших экспериментов мы смогли заявить, что наша методология успешно охарактеризовала экспрессию miRNA груза EVs с минимальным загрязнением от циркулирующих miRNAs, которые могут быть связаны с EV в белковых агрегатах.

Анализ экспрессии EV-miRNA у здоровых субъектов и пациентов с mCRC показал, что miR-19b, miR-21, miR-222 и miR-92a являются независимыми диагностическими факторами с высокой специфичностью и чувствительностью.Четкие различия между двумя группами демонстрируют потенциальное использование этих 4 miRNA в качестве биомаркеров для раннего прогнозирования метастатического заболевания у пациентов с CRC. Кроме того, miR-21 и 19b показали более высокую чувствительность и специфичность, чем обычный клинический биомаркер CEA.

Наши результаты согласуются с предыдущими исследованиями CRC, в которых плазма или сыворотка использовались в качестве образца для исследования miRNA. Чен и др. . выявили более высокие уровни сывороточного miR-222 у пациентов с CRC с использованием секвенирования Solexa ²⁹ и Giráldez, et al .обнаружили, что miR-19b значительно повышается в плазме пациентов с CRC по сравнению со здоровыми донорами ³⁰ . Как мы наблюдали в наших результатах, метаанализ, проведенный Янгом, и др., . определил плазменный miR-92a как диагностический маркер для CRC ³¹ . Кроме того, Огата-Кавата, и др. . доказали, что происходящий из экзосом сыворотки miR-21 был независимым диагностическим фактором ³² и прогностическим фактором для ОС на всех стадиях CRC ³³ .Наши результаты подтверждают результаты Ostenfeld et al ., Которые сообщили о значительно более высокой экспрессии miR-222 в EpCAM ⁺ EV от CRC по сравнению со здоровыми донорами ³⁴ и Fangfang et al . которые коррелировали экзосомальную экспрессию miR-92a с клинической стадией пациентов с CRC ³⁵ . Интересно, что, несмотря на включение схожих групп пациентов, каждое из этих исследований идентифицировало разные миРНК в качестве диагностических биомаркеров.Эти различия могут указывать на то, что передача сигналов miRNA зависит от статуса заболевания и / или типа извлеченного образца (EV-miRNAs, EPCAM ⁺ Exo miRNA или свободные miRNA).

Наблюдаемая сверхэкспрессия miR-20a, miR-21, miR-222 и miR-92a все согласуется с многочисленными доказательствами, которые демонстрируют важность этих miRNA как промоторов опухолей. Например, хорошо задокументировано, что miRNA-21 нацелена на большое количество ключевых белков: активированный белок 1 (AP-1), ядерный фактор I (NFI), маспин, лиганд fas, белок 4 программируемой гибели клеток (PDCD4), тропомиозин 1 (TPM1), тканевой ингибитор металлопротеиназы 3 (TIMP3), кислый ядерный фосфопротеин 32 A (ANP32A), гомолог фосфата и тензина (PTEN), преобразователь сигнала и активатор транскрипции 3 (STAT3), N-концевая киназа c-Jun (JNK), киназа, регулируемая внеклеточными сигналами (ERK), митоген-ассоциированная протеинкиназа (MAPK), s и многие другие белки, играющие важную роль в развитии рака ³⁶ .Однако из-за высокой гомогенности нашей популяции и большого диапазона сложных генных взаимодействий каждой miRNA мы не наблюдали многих значимых ассоциаций между уровнями miRNA и клиническими данными. Другие исследователи исследовали зависимость от KRAS для отбора miRNA в качестве груза EV, где miR-10b преимущественно обогащалась экзосомами, происходящими из KRAS дикого типа, тогда как miR-100 была обогащена экзосомами, полученными из мутантных KRAS ³⁷ . Здесь мы наблюдали более низкие уровни происходящего от EVs miR-92a у мутировавших KRAS по сравнению с пациентами дикого типа.Это можно объяснить исследованием, проведенным Mackenzie et al .; их результаты показали, что мутация KRAS снижает упаковку специфических miRNAs в EVs за счет снижения фосфорилирования Ago2 ³⁸ .

Кроме того, наши данные сообщают о связи между уровнями miRNA и присутствием или отсутствием CTCs. За последние 20 лет ЦКО стали более сильным маркером прогноза и ответа на лечение ^{39 , 40} .ЦКО участвуют в распространении болезни, и они были предложены в качестве индикаторов минимальной остаточной болезни ⁴¹ , которые не могут быть обнаружены стандартными методами визуализации в клинической практике ^{42 , 43} . Профили миРНК связаны с метастатическим распространением опухоли, характеризующимся наличием ЦОК ⁴⁴ . Однако методы идентификации ЦКО не были полностью стандартизированы, включая несколько дорогостоящих и трудоемких протоколов выделения и характеризации ⁴⁵ .Наше исследование с более коротким сроком выполнения доказывает, что EV-miRNA могут стать важным инструментом жидкой биопсии для замены или дополнения клинической значимости ЦКО.

Наконец, в соответствии с предыдущими исследованиями, наши результаты сообщают о высокой экспрессии EV-miR-92a у пациентов с более короткими PFS и OS, хотя и не достигают достаточной статистической значимости, вероятно, из-за небольшого количества пациентов. С другой стороны, мы наблюдали, что пациенты с более высокими уровнями EV-miR-222 имели более короткую ОС с четкими статистическими различиями.В других исследованиях сообщается, что сверхэкспрессия miR-222 связана с плохой выживаемостью при нескольких типах рака, включая колоректальный рак ⁴⁶ , поскольку она связана с усиленной миграцией и инвазией раковых клеток. Кроме того, наш многомерный анализ показал, что miR-222 (24w) является лучшим прогностическим фактором для общей выживаемости, чем клинические биомаркеры CEA и Ca 19.9, а также ЦОК, которые потеряли статистическую значимость во время анализа.

В заключение, наши данные подтверждают важность EV-miRNA в качестве потенциальных биомаркеров жидкой биопсии для выявления метастатических заболеваний и прогноза общей выживаемости пациентов с mCRC, дополняющих или даже заменяющих текущие клинические биомаркеры CEA и Ca 19.9 и ЦОК.

Ограничения исследования

Это исследование имеет два существенных ограничения. Во-первых, в нашу когорту вошли всего 44 пациента, что требует подтверждения этих результатов в более крупной серии случаев. Во-вторых, мы ограничили наш анализ конкретной панелью EV-miRNAs на основе результатов литературы и биоинформатики, однако мы не можем исключить возможность того, что другие miRNAs также могут иметь клиническое значение для нашей популяции.

Методы

Дизайн исследования

Это проспективное продольное исследование включало 44 пациента с мКРР, которые прошли лечение первой линии с помощью FOLFOX-6m (оксалиплатин 85 мг / м2, лейковорин 400 мг / м2, 5-фторурацил (FU) 400 мг / м2 болюс и 5-ФУ 2400 мг / м2) в течение 46 часов и бевацизумаб (5 мг / кг) каждые 2 недели до прогрессирования заболевания в отделении онкологии университетской больницы Сан-Сесилио в Гранаде (Испания) с апреля 2011 г. по ноябрь 2015 г. .Ни один из пациентов ранее не получал никакого другого биологического лечения. Когорта из 17 доноров крови, не страдающих злокачественными заболеваниями, была отобрана из Университета Балеарских островов, Майорка (Испания). Исследование было проведено в соответствии с Хельсинкской декларацией и одобрено этическим комитетом больницы. Письменное информированное согласие было получено от каждого зачисленного субъекта.

Компьютерная томография грудной клетки, живота и таза выполнялась на исходном уровне, через 12 недель (12 недель), через 24 недели (24 недели) и, наконец, каждые 12 недель до смерти.Интерпретация изображения выполнялась с использованием критериев оценки ответа в солидных опухолях (RECIST) версии 1.1 ⁴⁷ для классификации эволюции пациента как полного ответа, частичного ответа, стабильного заболевания, считающегося благоприятным, или прогрессирующего заболевания, считающегося неблагоприятным ответом. . Данные были собраны для следующих клинических переменных: возраст, пол, локализация первичной опухоли, хирургия метастазов, хирургия первичной опухоли, синхронное метастазирование, статус K-RAS, исходный уровень, 12 недель и 24 недели Карциноэмбриональный антиген (CEA) и Углеводный антиген 19.9 (Ca 19,9), ответ RECIST через 12 и 24 недели, прогрессирование и выживаемость. Клинические исходы оценивались с точки зрения ВБП и ОВ. ВБП определялась как время, прошедшее от начала лечения до прогрессирования или смерти. ОС была определена как время, прошедшее от начала лечения до смерти.

Образцы крови и выделение ЦОК

Образцы периферической крови (10 мл в пробирках с EDTA Vacutainer® для ЦОК и 5 мл в пробирках BD Vacutainer® SST ™ II Advance для сыворотки) были взяты до начала терапии (B), а затем в 12 недель и 24 недели после, что совпадает с оценкой ответа RECIST.Также было взято 5 мл периферической крови от здоровых доноров. Обогащение и обнаружение ЦКО проводили согласно протоколам, ранее установленным нашей группой ^{48 , 49} . Вкратце, образцы обрабатывали центрифугированием в градиенте плотности с Histopaque-1119 (Sigma-Aldrich, UK) при 700 × g в течение 45 минут для выделения фракции мононуклеарных клеток, содержащей ЦОК. Эту фракцию инкубировали с микрогранулами мультицитокератин-специфических антител (CK3–11D5) (которые связываются с клонами 7, 8, 18 и 19) (Miltenyi Biotec, Германия) и FITC-антителами против цитокератина (CK3-6H5). (Miltenyi Biotec, Германия).Клетки пропускали через магнитные колонки MACS Cell Separation (Miltenyi Biotec, Германия), и обогащенные цитокератин-положительные клетки центрифугировали на стеклянных предметных стеклах, покрытых полилизином, для последующей визуализации и подсчета с помощью флуоресцентной микроскопии.

Изоляция EVs

Образцы крови центрифугировали при 1500 × g в течение 15 минут для сбора сыворотки. Затем сыворотку центрифугировали при 10.000 × g в течение 30 минут для удаления клеточного дебриса. Супернатанты ультрацентрифугировали в 6 мл полиалломерных ультрацентрифужных пробирках (Thermo Scientific, Великобритания) в TFT 80.4 Ротор (Thermo Scientific, Великобритания) при 100000 × г в течение 1 ч при 4 ° C. После этого супернатанты удаляли и осадки EVs были непосредственно ресуспендированы в пробирку либо путем добавления буфера для лизиса RIPA, для контроля белка вестерн-блоттинга, либо буфера для гомогенизации из набора Maxwell 16 miRNA Tissue (Promega, США) для последующего анализа miRNA в пациенты. Образцы хранили при -80 ° C до дальнейшей обработки.

Клеточная культура

Клетки MCF-7 культивировали в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы Glutamax (Gibco, Германия) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (Gibco, Германия), 100 Ед / мл пенициллина и 100 нг / мл стрептомицина (Gibco, Германия) в увлажненном инкубаторе с 5% CO2 при 37 ° C.

Анализ слежения за наночастицами

Распределение размеров и концентрацию EV измеряли с помощью системы NanoSight NS300, оснащенной фиолетовой лазерной установкой LM14 с длиной волны 405 нм (Malvern Instruments, UK). EV были разбавлены в PBS (1: 500) для соответствующего анализа и визуализированы на уровне камеры 16 под управлением сценария, который включал получение 3 фильмов в течение 1 минуты при фиксированной температуре 22 ° C. Анализ проводился с использованием программного обеспечения NTA 3.1. Порог обнаружения был установлен на 5, а остальные настройки оставлены по умолчанию.

Анализ с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ТЕМ)

Сначала суспензии EV очищали с использованием SEC для устранения белкового фона. Затем их адсорбировали на сетках с активированным углем в течение 10 мин, промывали и фиксировали в течение 15 мин в 2% растворе параформальдегида и 0,2% глутарового альдегида. Сетки на короткое время промывали водой и немедленно переносили в капли уранилметилцеллюлозы с pH 4,0 на охлажденной металлической пластине на 5 мин, собирали и сушили при комнатной температуре. Наконец, сетки были внедрены в ПЭМ FEI Tecnai ™ F20 (ThermoFisher, США) для получения изображений.

Вестерн-блоттинг

белков EV экстрагировали, добавляя 50 мкл буфера для лизиса RIPA (Sigma Aldrich, Германия) к полученным осадкам EV или клеткам MCF-7 для контроля клеток. Лизаты центрифугировали при 14000 × g , супернатанты собирали и хранили для определения белка. Концентрацию белка определяли количественно с помощью набора BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific, UK) в соответствии с инструкциями производителя. Одно и то же количество белка из каждого образца загружали в предварительно отлитый гель SDS-PAGE (GE life science, UK) и прогоняли при 100 мВ до достижения оптимального разделения.Затем белки переносили на мембрану PDVF при 30 мВ в течение ночи. Нанесенные на график мембраны вырезали и инкубировали с первичными антителами [анти-CD63 (клон MEM-259) (Abcam, Великобритания), анти-Hsp70 (клон BB70) (ENZO Life Science, США), антикалнексином (клон AF18) и анти- Alix (клон 3A9) (Thermo Scientific, Великобритания)] в течение ночи при 4 ° C, а затем с вторичным антимышиным антителом IRDye 800CW (LICOR, Германия) в течение 1 ч при комнатной температуре. Наконец, мембраны были обнаружены с помощью инфракрасного сканера Odyssey.

Экстракция РНК, обратная транскрипция и qRT-PCR

EV-miRNA были извлечены и проанализированы в соответствии с предыдущими публикациями нашей группы ⁴⁴ .Вкратце, экстракцию миРНК EVs проводили с использованием набора Maxwell® 16 miRNA Tissue Kit (Promega, США). Комплементарную ДНК синтезировали с помощью набора TaqMan ™ Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit (Applied Biosystems, Великобритания), и уровни экспрессии miRNA анализировали в трех экземплярах с использованием зондов для анализа TaqMan ™ MicroRNA (дополнительная таблица ^S1 ) и TaqMan ™ Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems). , Великобритания) в соответствии с рекомендациями производителя в системе быстрой ПЦР в реальном времени Applied Biosystems 7900HT (Applied Biosystems, UK).

Выбор панели miRNA

Мы разработали панель из 10 miRNA (126, 155, 19b, 194, 20a, 200b, 21, 222, 552, 92a) и miR-16 в качестве эндогенного контроля. Нормализация проводилась по методу 2 ^{-ΔΔCt 50} . miRNA были выбраны в соответствии с ранее описанной ассоциацией с миграцией, ангиогенезом, метастазированием, диагностикой и прогнозом при CRC. Они также были отобраны на основе сообщенных ими мРНК-мишеней генов, связанных с бевацизумабом, CRC и mCRC, таких как VEGF-1, VEGF-2, KRAS, APC, TGFBR, PI3KCA и TP53 ⁵¹ , с использованием starBase v3.0 база данных ⁵² (Дополнительная таблица ^S1 ).

Обработка протеиназой К

Сначала три образца сыворотки объемом 4 мл были разделены на две аликвоты по 2 мл каждая. Их центрифугировали при 10.000 × g в течение 30 мин, а полученный супернатант центрифугировали при 100000 × g в течение 3 часов. После этого супернатант удаляли, а осадки ресуспендировали в 100 мкл буфера для переваривания (50 мМ Tris-HCL; pH 8, 0,1 мМ CaCl ₂ , 3 мМ DTT и 2.0 М мочевины). Во-вторых, аликвоту каждого образца обрабатывали протеиназой К (Qiagen, Германия) до конечной концентрации 0,25 мг / мл, в то время как другую считали необработанным контролем. Все аликвоты инкубировали при 37 ° C в течение 30 минут для расщепления и при 70 ° C в течение 15 минут для инактивации протеиназы K. Наконец, обработанные и необработанные пробирки промывали PBS и снова центрифугировали при 100000 × g в течение 3 часов. Осадки экзосом получали и использовали для последующего анализа миРНК.

Эксклюзионная хроматография (SEC)

Как и при обработке протеиназой К, использовали две аликвоты по 2 мл из 3 образцов сыворотки. Все образцы центрифугировали при 10.000 × g в течение 30 минут, а затем супернатанты использовали для выделения EV; одна аликвота от каждого образца методом SEC, а другая — ультрацентрифугированием. В SEC 2 мл супернатанта вводили в колонку SEC Hiprep ™ 16/60 Sephacryl® S-400 HR (GE Healthcare, США) при скорости потока 0,5 мл PBS / мин, как описано ранее. ⁵³ .Собирали аликвоты по 5 мл и фракции, содержащие EVs, удаляли центрифугированием 100000 × g в течение 3 часов. Аликвоты для ультрацентрифугирования следовали нашему ранее описанному протоколу. Осадки экзосом использовали для анализа миРНК.

Статистические методы

Статистический анализ и графики были выполнены с использованием SPSS [SPSS Statistics для Windows, версия 22.0 (IBM Corp., США)] и GraphPad Prism [версия 7.00 (GraphPad Software, США)]. EV-miRNA и CTC оценивали как количественные и дихотомические (miRNA: низкий / высокий и CTC: присутствие / отсутствие) переменные.Пороговые значения экспрессии miRNAs рассчитывали с помощью веб-приложения Cutoff Finder ⁵⁴ . Связь между miRNA и клиническими характеристиками или CTC оценивалась с использованием непараметрических тестов Mann-Whitney U и Kruskal-Wallis. Парные контрольные образцы анализировали с помощью знакового рангового критерия Уилкоксона. Логистическая бинарная регрессия, кривые рабочих характеристик приемника (ROC) и площадь под кривой (AUC) были выполнены для проверки чувствительности и специфичности miRNA для идентификации пациентов с mCRC.Категориальные переменные сравнивали с помощью точного критерия Фишера, а корреляции измеряли с помощью ранговой корреляции Спирмена. Анализ PFS и OS проводился с помощью лог-рангового теста и однофакторной и многомерной регрессии пропорциональных рисков Кокса. Мы применили критерий более чем 10% изменения оценки коэффициента и p <0,15 ⁵⁵ для выбора переменных, которые будут включены в многомерную модель. Значения p <0,05 считались статистически значимыми.

Что означает КТ? [Текст] — PLCS.net