| Издатель (производитель) | Экзамен |
| Период обучения | |
| ISBN | 978-5-377-06109-0 |
| Автор(ы) (Составитель) | Мельникова Н.Б., Захарова Г.А. |
| Год издания | 2014 |
| Издание | 1-е ФГОС |
| Вид издания | Учебное пособие |
| Формат издания | 60х90/16 (145х215мм) средний |
| Обложка | Обл – Мягкий переплет. Крепление скрепкой или клеем. |
| Вес (с упаковкой) | 180 г |
| Кол-во страниц | 175 |
| Возрастная категория | 12 + |
| Тип издания (жанр) | Учебное издание |
| Язык | русский |
| Иллюстрации | черно-белые |
Мельникова Н. Б. Контрольные работы по геометрии для 8 класса к учебнику Атанасяна Л. С. ОНЛАЙН
Мельникова Н. Б. Контрольные работы по геометрии: 8 класс: к учебнику Л. С. Атанасяна, В. Ф. Бутузова, С. Б. Кадомцева и др. «Геометрия. 7-9». ФГОС (к новому учебнику) / Н. Б. Мельникова. — 7-е изд., перераб. и доп. — М., 2016.
Данное пособие полностью соответствует федеральному государственному образовательному стандарту (второго поколения).
Пособие является необходимым дополнением к школьному учебнику Л. С. Атанасяна и др. «Геометрия. 7-9» (издательство «Просвещение»), рекомендованному Министерством образования и науки Российской Федерации и включенному в Федеральный перечень учебников.
Пособие предназначено для проверки знаний и умений учащихся по курсу геометрии 8 класса. Оно содержит контрольные работы по всем темам, изучаемым в 8 классе.
Каждая контрольная работа дается в четырех вариантах. Кроме того, по каждой теме дается набор заданий для подготовки к контрольной работе. Каждый вариант включает задания трех видов: с выбором ответа, с кратким ответом и с развернутым ответом, что соответствует формам заданий, используемым в настоящее время в современных видах испытаний учащихся.
СОДЕРЖАНИЕ
Предисловие…………………4
Тематика контрольных работ………………6
Задачи для подготовки к контрольной работе……………7
Контрольная работа № 1. Четырехугольники……………9
Вариант 1………….9
Вариант 2…………… 11
Вариант 3……………. 13
Вариант 4…………… 15
Задачи для подготовки к контрольной работе………….17
Контрольная работа № 2. Теорема Пифагора. Площадь…………….19
Вариант 1……………..19
Вариант 2……………..21
Вариант 3……….23
Задачи для подготовки к контрольной работе…………….27
Контрольная работа № 3. Подобные треугольники……………..29
Вариант 1…………..29
Вариант 2……….31
Вариант 3…………..33
Вариант 4………….35
Задачи для подготовки к контрольной работе……………..37
Контрольная работа № 4. Окружность……………39
Вариант 1……….39
Вариант 2……….41
Вариант 3……….43
Вариант 4……………45
Задачи для подготовки к контрольной работе…………..47
Контрольная работа № 5. Итоговая контрольная работа…………49
Вариант 1…………49
Вариант 2…………51
Вариант 3………..53
Вариант 4…………..55
Ответы……………..57
Гаврилова Н.Ф. Поурочные разработки по геометрии, 8 класс. Н.Б. Мельникова «Контрольные работы по геометрии». Л.С. Атанасян «Дидактические материалы по геометрии 8 класс».
Чтобы посмотреть презентацию с картинками, оформлением и слайдами, скачайте ее файл и откройте в PowerPoint на своем компьютере.
Текстовое содержимое слайдов презентации:
Четырехугольники. Свойства четырехугольников.Решение задач Параллелограмм{2D5ABB26-0587-4C30-8999-92F81FD0307C}Параллелограмм – это четырехугольник, у которого противоположные стороны параллельны.ABCD — параллелограмм𝑨𝑩∥𝑪𝑫 и 𝑩𝑪∥𝑨𝑫
Свойства углов параллелограмма{2D5ABB26-0587-4C30-8999-92F81FD0307C}Сумма соседних углов равна 180°∠A + ∠B = 180°, т.к. они являются односторонними при параллельных прямых BC и AD , и секущей ABПротивоположные углы параллелограмма равны∠A + ∠B = 180°∠C + ∠B = 180°,углы A и C дополняют угол B до 180°, значит они равны, т.е. ∠A = ∠С.Аналогично ∠B = ∠D.Сумма углов параллелограмма равна 360°S=180°(n-2),где n =4 – число углов, значит S=180°(4 -2) =360° — сумма углов. Свойство сторон параллелограммаПротивоположные стороны параллелограмма равны.Докажем, что 𝑨𝑩=𝑪𝑫 и 𝑩𝑪=𝑨𝑫. Проведем диагональ BD. Получили два треугольника АВD и СDB. Они равны, т.к. BD – общая сторона, ∠ABD = ∠CDB (накрест лежащие при AB ∥ CD и секущей BD), ∠ADB = ∠DBC (накрест лежащие при BС ∥ AD и секущей BD).Из равенства треугольников следует равенство соответствующих сторон, т.е. AB =CD , BC = AD
Свойство диагоналей параллелограммаДиагонали параллелограмма пересекаются и точкой пересечения делятся пополамДокажем, что точка О – середина диагоналей AC и BD.Треугольники BOC и DOA равны, т.к. BC = AD (по свойству сторон параллелограмма), ∠OBC =∠ODA (накрест лежащие при BC ∥ AD и секущей BD),∠BCO = ∠OAD (накрест лежащие при BC ∥ AD и секущей AC).Из равенства треугольников следует равенство соответствующих сторон, т.е. BO = OD, CO = OA, значит O – середина диагоналей AC и BD.
Параллелограмм. Решение задачЗадача: В параллелограмме ABCD проведена диагональ AC. ∠BCA = 30°, ∠BAC = 40°. Найдите все углы параллелограмма.Решение:Рассмотрим ΔBAC. У него ∠BCA = 30°, ∠BAC = 40°, значит ∠B = 180°−(𝟑𝟎°+𝟒𝟎°)=𝟏𝟏𝟎°. ∠B = ∠D = 110° (по свойству противоположных углов),∠A+∠B=180°, ⇒ ∠A=180°-110°=70°, ∠C=∠A=70°(по свойству противоположных углов параллелограмма)Ответ: ∠C=∠A=70°, ∠B = ∠D = 110°
Параллелограмм. Решение задачЗадача: Найдите стороны параллелограмма, если две его стороны относятся как 4:5, а периметр равен 72 см.Решение : Т. к. отношение сторон равно 4: 5, то речь в условии задачи идет о соседних сторонах параллелограмма.4+5 = 9 – частей на сумму сторон AB и BC. AB + BC = 72: 2 = 36 см,36 : 9 = 4 (см) – одна часть,AB = 4·4=16 (см), BC = 4·5=20 (см).CD = AB = 16 см, AD = BC = 20 см(по свойству сторон параллелограмма)Ответ: CD = AB = 16 см, AD = BC = 20 см
Параллелограмм. Решение задачЗадача: в параллелограмме ABCD проведена биссектриса угла А. Она разбивает сторону ВС на отрезки BH =6 см и HC =4 см. Найдите периметр параллелограмма.Решение:∠3=∠2, т.к. АH – биссектриса,∠1=∠3 (накрест лежащие при BC∥AD и секущей AH), ⇒ ∠1=∠2, ΔABH – равнобедренный ( по признаку), ⇒ AB = BH = 6cм.BC = AD = 10 cм, AB = CD = 6 cм.Р = 2·(10+6) = 32 см.Ответ: P=32 см.
Параллелограмм. Решение задачЗадача: ABCD – параллелограмм. Высота BK равна 2 см, ∠A=30°, сторона BC=13 см. Найти периметр параллелограмма.Решение.ΔABK – прямоугольный, ∠A=30°, ⇒ BK = ½ AB, ⇒ AB=2 BK, AB=4смP=2·(AB+BC), Р=2·(4+13)=34(см).Ответ: 34 см
Решение задач по готовым чертежам с последующей самопроверкой Параллелограмм. Решение задачЗадача: ABCD – параллелограмм. Найти углы C и D.Ответ: ∠C=64°,∠D=116°.
Параллелограмм. Решение задачЗадача: ABCD – параллелограмм. Найти AD.Ответ: AD=10 см.
Задача: ABCD – параллелограмм. Найти периметр ABCD и ∠AED.Параллелограмм. Решение задачОтвет: Р=30 см, ∠AED=90°.
Задача: ABCD – параллелограмм. Найти периметр ABCD.Параллелограмм. Решение задачОтвет: Р=16 см.
Задача: ABCD – параллелограмм. Найти периметр ΔCOD.Параллелограмм. Решение задачОтвет: Р=28 см
ПрямоугольникПрямоугольник – это параллелограмм, у которого все углы прямые.∠A=∠B=∠C=∠D=90°
Свойства прямоугольникаПротивоположные стороны равныВсе углы прямыеДиагонали равныДиагонали точкой пересечения делятся пополам
Свойство диагоналей прямоугольникаДиагонали прямоугольника равны.Доказательство:Прямоугольные треугольники BAD и CDA равны по двум катетам (AB=CD, AD – общий катет).Отсюда следует, что гипотенузы треугольников равны, т.е. AC=BD.
Прямоугольник. Решение задачЗадача: ABCD – прямоугольник. Найти ∠COD, если BD=12 см, AB=6 см.Ответ: 60°
Прямоугольник. Решение задачЗадача: ABCD – прямоугольник. Найти OН, если BD=12 см, AB=6 см.Ответ: 3 см
Прямоугольник. Решение задачЗадача: ABCD – прямоугольник. АК – биссектриса ∠A, СК=2,7 см, КD =4,5 см. Найти периметр ABCD.Ответ: Р=23,4 см
РомбРомб – это параллелограмм, у которого все стороны равны.AB=BC=CD=DA
Свойства ромбаВсе стороны равныПротивоположные углы равныДиагонали ромба перпендикулярныДиагонали ромба – биссектрисы углов ромба
Свойства диагоналей ромбаДиагонали ромба взаимно перпендикулярны и делят его углы пополам.Доказательство:Рассмотрим ромб ABCD.По определению ромба AB=AD, поэтому треугольник BAD равнобедренный.Т.к. ромб – параллелограмм, то его диагонали точкой О делятся пополам.Следовательно, АО – медиана треугольника BAD, а значит, высота и биссектриса этого треугольника.Итак, AC⊥BD и ∠BAC=∠DAC, ч.т.д.
Ромб. Решение задачЗадача: ABCD – ромб. Найдите углы ромба, если AB=ACОтвет: 60°,60°,120°,12O°
Ромб. Решение задачЗадача: ABCD – ромб. Найдите углы ромба, если сторона АВ ромба образует с диагоналями углы 70°,2O°.Ответ: 40°,40°,14O°,14O°
Ромб. Решение задачЗадача: ABCD – ромб. Найдите углы ромба, если сторона АВ ромба образует с диагоналями углы, такие, что один больше другого на 10°.Ответ: 80°,80°,10O°,10O°
Ромб. Решение задач Задача: ABCD – ромб. Найти ∠CBE Ответ: 15°
Ромб. Решение задачЗадача: ABCD – ромб. Найти ∠С.Ответ: 70°
КвадратКвадрат – это прямоугольник, у которого все стороны равны.AB = BC = CD = DA
Квадрат. Свойства квадратаВсе стороны равныДиагонали равныВсе углы прямыеДиагонали перпендикулярныДиагонали делятся точкой пересечения пополамДиагонали – биссектрисы углов квадрата
ЛитератураЛ.С. Атанасян «Геометрия. 7-9 классы»Гаврилова Н.Ф. Поурочные разработки по геометрии, 8 классН.Б. Мельникова «Контрольные работы по геометрии»Л.С. Атанасян «Дидактические материалы по геометрии 8 класс»
Контрольна робота 2 8 клас геометрія
Скачать контрольна робота 2 8 клас геометрія djvu
Геометрия 8 Атанасян (Мельникова) — контрольные работы с ответами, цитаты из пособия «Геометрия 8 класс. Контрольные работы по геометрии к учебнику Л.С. Атанасяна и др» (авт. Н.Б. Мельникова). Цитаты из пособия указаны в учебных целях. При постоянном использовании контрольных работ по геометрии в 8 классе рекомендуем купить книгу: Наталия Мельникова: Геометрия.
8 класс. Контрольные работы к учебнику Л.С. Атанасяна и др. ФГОС, в которой контрольные работы представлены в 4-х вариантах, а также есть набор заданий по каждой теме для подготовки к контрольным работам. Контрольные работы по геометрии в. За час карантину виконати контрольну роботу №2 по темі «Вписані та описані чотирикутники» по геометрії для 8-а, 8-в класів.
Мета: перевірити рівень засвоєння учнями знань змісту основних понять теми; якість сформованих умінь застосовувати набуті знання для зображення фігур за умовою. Геометрия. 8 класс. Самостоятельные и контрольные работы — Иченская М.А. cкачать в PDF. Учебное пособие содержит самостоятельные и контрольные работы, а также карточки к итоговым зачётам по курсу геометрии 8 класса.
Оно ориентировано на учебник «Геометрия. 7—9 классы» авторов Л. С. Атанасяна и др. Пособие адресовано школьникам, их родителям, учителям математики. Класс: 8. Категория: геометрия 8 класс. Страниц: Формат: pdf. Готовые контрольные работы для проверки знаний и умений учащихся по геометрии 8 класс по учебнику Атанасяна. Середины оснований трапеции соединены отрезком.
Докажите, что полученные две трапеции равновелики. _Контрольная работа №2. Площади фигур. Вариант 2. А1. В ромбе ABCD АВ = 10 см, меньшая диагональ АС = 12 см. Найдите площадь ромба. А2.
Геометрия. 8 класс. Самостоятельные и контрольные работы — Иченская М.А. cкачать в PDF. Учебное пособие содержит самостоятельные и контрольные работы, а также карточки к итоговым зачётам по курсу геометрии 8 класса.
Оно ориентировано на учебник «Геометрия. 7—9 классы» авторов Л. С. Атанасяна и др. Пособие адресовано школьникам, их родителям, учителям математики. Класс: 8. Категория: геометрия 8 класс. Страниц: Формат: pdf. Геометрия 8 Атанасян (Мельникова) — контрольные работы с ответами, цитаты из пособия «Геометрия 8 класс. Контрольные работы по геометрии к учебнику Л.С. Атанасяна и др» (авт. Н.Б. Мельникова). Цитаты из пособия указаны в учебных целях.
При постоянном использовании контрольных работ по геометрии в 8 классе рекомендуем купить книгу: Наталия Мельникова: Геометрия. 8 класс. Контрольные работы к учебнику Л.С. Атанасяна и др. ФГОС, в которой контрольные работы представлены в 4-х вариантах, а также есть набор заданий по каждой теме для подготовки к контрольным работам.
Контрольные работы по геометрии в. Мета: перевірити рівень засвоєння учнями знань змісту основних понять теми; якість сформованих умінь застосовувати набуті знання для зображення фігур за умовою.
rtf, fb2, djvu, EPUBПохожее:
Контрольна работа по геометрии 8 класс
Скачать контрольна работа по геометрии 8 класс txt
Геометрия 8 класс. Контрольно-измерительные материалы. Гаврилова. ВАКО. Геометрия 8 класс. Рабочая тетрадь. Глазков, Камаев. Геометрия важна для понимания многомерности мира.
Кроме того, многие производственные, строительные профессии просто невозможно освоить без ее знания. Каждый тематический раздел сопровождается контрольной работой. Так же школьникам задают большие объемы д/з, где есть задания и на логику, когда большая часть производных остается неизвестной и дается самый минимум сведений. В чем возможны сложности. Контрольные работы по геометрии 8 класса (1, 2, 3, 4 четверти) к учебнику Атанасяна Л.С. с ответами. Дополнительные материалы Уважаемые пользователи, не забывайте оставлять свои комментарии, отзывы, пожелания.
Все материалы проверены антивирусной программой. Скачать: Контрольные работы по геометрии 8 класса к учебнику Атанасяна Л.С. (PDF). Запишите обоснование к заданиям 3. Высота равнобедренного треугольника, проведенная к основанию, равна 8 см, основание равно 12 см. Найдите боковую сторону.
4. Найдите площадь равнобедренной трапеции, если ее основания равны 4 и 10 см, а боковая сторона — 5 см. 5. На рисунке ABCD – прямоугольник. Мельникова Н.Б. Решебник (ГДЗ) по Геометрии за 8 (восьмой) класс контрольные работы авторы: Мельникова издательство Экзамен, год.
Раздаточный материал с контрольными работами по геометрии на 2 варианта по всем темам курса геометрии за 8 класс к учебнику Атанасяна Л.С. Контрольная работа № по теме «Окружность» 8 класс. Вариант 1. Из точки А к окружности с центром О проведены касательные АВ и АС, В и С – точки касания.
Контрольные работы по геометрии адресованы для учащихся 8 класса к учебнику «Геометрия класс» под редакцией Атанасяна. Здесь вы найдете все контрольные работы по всем пройденным темам. Контрольные работы представлены в нескольких вариантах.
В каждом варианте задания разделены на основной и повышенный уровень проверки знаний учащихся. Для получения удовлетворительной оценки, учащемуся достаточно правильно выполнить задания отмеченные точкой. Учащиеся которые желают получить отметку хорошо или отлично, должны выполнить все задания. Все задания оцениваются традиционно по пятибальной.
Дидактические материалы. Контрольные работы. K — 1. B — 1. Самостоятельные работы. C1. B — 1. Дидактические материалы по геометрии.
8 класс. К учебнику Атанасяна Л.С. — Мельникова Н.Б., Захарова Г.А. (, с.) Геометрия. 8 класс. Контрольные работы. Мельникова Н.Б. (, 64с.) Геометрия. Самостоятельные и контрольные работы: классы. Иченская М.А. (, с.) Геометрия. 8 класс. Дидактические материалы. Мерзляк А.Г., Полонский В.Б.
и др. (, с.) Программа обучения по геометрии в 8 классе (основные темы). ГДЗ самостоятельные и контрольные работы по геометрии 8 класс Иченская, Атанасян. Авторы: Иченская, Атанасян. В восьмом классе школьники продолжают изучать геометрию, углубляя и расширяя свои знания по предмету.
Если в седьмом классе элементарные понятия и аксиомы не вызывали трудностей, то 8 класс часто преподносит неприятные сюрпризы. Они заключаются в неумении интегрировать формулы и доказательства в единое решение задания. Как помочь восьмикласснику понять геометрию? Отличный способ – ГДЗ по предмету. Полностью решенное задание из хорошего учебного пособия поможет наработать базу, понять о.
fb2, djvu, PDF, djvuПохожее:
ГДЗ Геометрия 8 класс Мерзляк, Полонский, Рабинович
Геометрия 8 класс
Дидактические материалы
Мерзляк, Полонский, Рабинович
Вентана-Граф
Наверняка все школьники сталкивались с ситуацией, когда преподаватель поверхностно пробежался по новой теме, а затем засадил за выполнение задач, чтобы высвободить себе время для каких-то других занятий. Таким образом появляется пробел, ликвидировать самостоятельно который способны далеко не все подростки. Главную роль тут играет нежелание тратить свое и без того ограниченное личное время на опостылевшую учебу. Решебник к учебнику «Геометрия. Дидактические материалы 8 класс» Мерзляк, Полонский, Якир поможет справиться с затруднениями без лишних заморочек.
Особенности построения пособия
Сборник имеет три варианта заданий, в каждом из них содержится по двести семьдесят семь упражнений. Так же в ГДЗ по геометрии 8 класс Мерзляк представлено семь контрольных работ по два варианта каждая. Таким образом охватывается весь курс этого учебного года, что позволяет более полноценно разобраться в данном предмете.
Почему им надо пользоваться
Учитывая темпы, которыми движется учебный процесс, неудивительно, если у кого-то из ребят останутся некоторые пробелы в знаниях. Учителя практически ничего толкового на уроках не говорят, выхватывая только какие-то общие фразы из учебника, которые порой не всегда бывают понятны. А вот толковать их школьникам приходится по-своему. Хорошо, когда есть родители, хорошо разбирающиеся в данном предмете, но что делать, когда таковых нет? В этом случае учащиеся остаются один на один со своими вопросами, которые разрешить некому. И таким образом любая проверочная работа становится настоящим испытанием, выдержать каковое не так-то просто. Решебник к учебнику «Геометрия. Дидактические материалы 8 класс» Мерзляк поможет выйти из затруднительной ситуации при минимуме усилий. «Вентана-граф», 2017 г.
Прием заявлений на участие в ОГЭ завершается 1 марта
https://sn.ria.ru/20210301/oge-1599380009.html
Прием заявлений на участие в ОГЭ завершается 1 марта
Прием заявлений на участие в ОГЭ завершается 1 марта
Прием заявлений на участие в государственной итоговой аттестации для девятиклассников — основном государственном экзамене и государственном выпускном экзамене — РИА Новости, 01.03.2021
2021-03-01T09:26
2021-03-01T09:26
2021-03-01T09:26
социальный навигатор
сн_образование
общество
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdn23.img.ria.ru/images/155228/73/1552287384_0:174:3023:1874_1920x0_80_0_0_4d44b882ea5dcf73a09e4a37353b885e.jpg
МОСКВА, 1 мар — РИА Новости. Прием заявлений на участие в государственной итоговой аттестации для девятиклассников — основном государственном экзамене и государственном выпускном экзамене — завершается в России 1 марта.Допуском к аттестации является успешное прохождение итогового собеседования по русскому языку.Как ранее заявляли в Рособрнадзоре, для получения аттестата об основном общем образовании выпускники девятых классов должны сдать два обязательных предмета — русский язык и математику.Профильные предметы выпускники девятых классов в этом году сдавать не будут, вместо этих экзаменов они напишут контрольные работы по одному из выбранных предметов. Контрольная работа для выпускников девятых классов по предмету по выбору будет базироваться на заданиях основного государственного экзамена по этому предмету.Устанавливать минимальные первичные баллы, соответствующие отметкам по пятибалльной шкале, за выполнение контрольной работы будут региональные власти на основе рекомендаций Рособрнадзора.Для обучающихся с ограниченными возможностями здоровья, инвалидов и детей-инвалидов, а также для обучающихся специальных учебно-воспитательных учреждений закрытого типа и учащихся заграншкол итоговая аттестация проводится в форме государственного выпускного экзамена (ГВЭ) — письменного или устного экзамена с использованием текстов, тем, заданий и билетов. Указанные лица могут выбрать форму проведения экзаменов, ОГЭ или ГВЭ, по своему желанию.Ранее Рособрнадзор сообщал, что государственные экзамены у девятиклассников в 2021 году пройдут с 24 мая по 2 июля.
https://sn.ria.ru/20210129/oge-1595084438.html
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2021
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://sn.ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdn21.img.ria.ru/images/155228/73/1552287384_147:0:2876:2047_1920x0_80_0_0_84c8b1ede090feda646e321d52f9e5a7.jpgРИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
социальный навигатор, сн_образование, общество
МОСКВА, 1 мар — РИА Новости. Прием заявлений на участие в государственной итоговой аттестации для девятиклассников — основном государственном экзамене и государственном выпускном экзамене — завершается в России 1 марта.
Допуском к аттестации является успешное прохождение итогового собеседования по русскому языку.
Как ранее заявляли в Рособрнадзоре, для получения аттестата об основном общем образовании выпускники девятых классов должны сдать два обязательных предмета — русский язык и математику.
Профильные предметы выпускники девятых классов в этом году сдавать не будут, вместо этих экзаменов они напишут контрольные работы по одному из выбранных предметов. Контрольная работа для выпускников девятых классов по предмету по выбору будет базироваться на заданиях основного государственного экзамена по этому предмету.
29 января, 10:48
Контрольная работа по предмету для девятиклассников будет основана на ОГЭУстанавливать минимальные первичные баллы, соответствующие отметкам по пятибалльной шкале, за выполнение контрольной работы будут региональные власти на основе рекомендаций Рособрнадзора.
Для обучающихся с ограниченными возможностями здоровья, инвалидов и детей-инвалидов, а также для обучающихся специальных учебно-воспитательных учреждений закрытого типа и учащихся заграншкол итоговая аттестация проводится в форме государственного выпускного экзамена (ГВЭ) — письменного или устного экзамена с использованием текстов, тем, заданий и билетов. Указанные лица могут выбрать форму проведения экзаменов, ОГЭ или ГВЭ, по своему желанию.
Ранее Рособрнадзор сообщал, что государственные экзамены у девятиклассников в 2021 году пройдут с 24 мая по 2 июля.
Урок тематического планирования.
Изображения обложек учебников показаны на страницах этого сайта исключительно в качестве иллюстративного материала (п.1 ст. 1274 части четвертой ГК РФ)
- Геометрия 8 класс. ФГОС Атанасян Просветление
- Дидактические материалы по геометрии 8 класс Зив, Мейлер Просветление
- Самостоятельная и контрольная работа в восьмом классе геометрии. ФГОС Иченская, Атанасян
- Экзамен по геометрии 8 класс Мельникова Экзамен Вак Гаврилова
- Контрольно-измерительные материалы (КИМ) по геометрическому классу 8.ФГОС Рязановский, Мухин Экзамен
Рабочие тетради
- Рабочая тетрадь по геометрии 8 класс. Часть 1, 2 Мерзляк, Полонский, Якир Вентана-Граф
- Рабочая тетрадь по геометрии 8 класс. Егоров Дрофа
- Рабочая тетрадь по геометрии 8 класс Дудницына Просвещения
- Атанасян, Бутузов, Глазков Просвещение
- Рабочая тетрадь по геометрии 8. Универсальная учебная деятельность Глазкова Экзамен
- Рабочая тетрадь по геометрии 8. ФГОС Мищенко. К учебнику Атанасян Экзамен
- Рабочая тетрадь по геометрии 8 класс.ФГОС Мищенко. К учебнику Погорелова Экзамен
- Учебное пособие по геометрии 8 класс. ФГОС Глазков, Камаев. К учебнику Атанасяна Экзамен
Контрольные работы
ГДЗ по геометрии для 8 класса — на самоконтроль и помощь в решении сложных задач
- 8 класс — учебный год, в течение которого ученики продолжают изучать сложный предмет, называемый геометрией. Если в предыдущем классе упор был сделан на ознакомление с основами предмета, то на восьмом ученики изучают новые темы на основе этих основ и решают огромное количество задач.Наиболее распространенные учебники, используемые в программах по геометрии для восьмиклассников, принадлежат А.В. Погорелов, В. Шлыков. или Атанасян Л.С. Задачи с GDZ по геометрии для 8 класса к этим учебникам, представленным на нашем сайте, помогут вам справиться с домашними заданиями разной степени сложности и проверить свой уровень знаний.
- Если геометрия для семиклассников была довольно сложным предметом, то восьмиклассникам нужно быть готовыми к тому, что материал станет еще сложнее.Программа обучения для восьмых классов ориентирована на постепенное углубление знаний. Именно в этом году студенты знакомятся с одним из важнейших утверждений, на котором построена вся геометрическая наука — теоремой Пифагора. Впоследствии он будет очень полезен в жизни для проведения разного рода расчетов. Кроме того, вводятся понятия новых геометрических фигур, таких как многоугольники, измеряются их площади и периметр.
- Учебная программа по геометрии для восьмиклассников отличается насыщенностью и большим объемом информации, которую необходимо усвоить и правильно применить на практике при решении задач.Нельзя забывать, что в этом году параллельно появляются новые сложные предметы (например, химия), поэтому часто справиться без GDZ по геометрии очень сложно.
- Содержание этого руководства можно разделить на две части: решения и готовые ответы. И первое, и второе необходимы студентам, потому что вы не можете застраховаться от пропусков занятий из-за болезни или из-за того, что домашнее задание будет настолько сложным, что его невозможно решить.Подглядывать за «рефери» — это не преступление, а проверка правильности вашего ответа.
- Этот учебник содержит решения следующих задач:
для проверки;
построить;
для поиска углов и сегментов;
поиск местности;
для определения синусов, косинусов и тангенсов;
поиск радиусов и многие другие. - В 8 классе продолжается изучение курса геометрии, начатого в предыдущем, в 7 классе продолжается.Учитывая, что вопросы и задания по этой дисциплине будут включены в обязательный экзамен по математике, сдаемым всеми выпускниками, а также трудности, которые часто вызывает у студентов изучение геометрии, организация процесса подготовки должна быть скрупулезной и ответственной. Одним из обязательных условий получения высокого результата от такой работы является правильный подбор литературы и ответов на нее. Особенно, если ведущая роль отводится полезному и эффективному самообучению.
- Однако сам процесс выбора материалов и ГДЗ и лучше доверить специалистам. От восьмиклассника вам потребуются:
— строгое соблюдение учебного плана;
— анализ достигнутых успехов, устранение трудностей и исправление возникающих проблем;
— регулярная оценка результатов. - При значительных трудностях рекомендуется обращаться за профессиональной помощью — к преподавателям, руководителям кружков и курсов, репетиторам. Иногда, чтобы разобраться в сложных моментах, достаточно подключить дополнительный справочник от комплекса УМК или обратиться к другому УМК, его списку подготовительной литературы.
- Среди тем, обсуждаемых на уроках геометрии в 8 классе, основными являются:
— понятие и особенности многоугольников;
— подобие треугольников и связанных с ними величин и математических законов;
— круги;
— области фигур и технологии их нахождения, расчетов;
— векторы и др. - Основной комплект материалов для изучения геометрии в 8 классе может состоять из:
— учебник по теории дисциплины;
— рабочая тетрадь ;
— пособия, в том числе практические задания по предметам;
— дидактические материалы и тематические тесты;
— сборник контроля и проверки. - Для тех, кто обучается на дому, этот набор может быть дополнен разработками без уроков, чтобы сделать работу более систематической и эффективной, а также сэкономить время на самостоятельное написание этих документов. Четко осознавая необходимость подготовки, восьмиклассники смогут успешно усвоить материал по дисциплине и показать высокие результаты на тестах, в том числе итоговых по математике, и в дальнейшем, после окончания школы.
Чему учат восьмиклассники на уроках геометрии
Что в коллекции
ГДЗ по геометрии на 8 классовКак грамотно подготовиться и успешно сдать экзамены?
Учебник
Контурные карты
Мастерская
Тренажер
Экзаменатор
ГДЗ по географии 8 СФЕРЫУМК «География.Россия: природа, население, экономика. 8 класс »
Учебник
УМК «География. Россия: природа, население, экономика. Учебник для 8 класса. Учебник продолжает линейку учебно-методических комплексов «Сфера» по географии. Издание подготовлено в соответствии с Федеральным … Читать далее
Электронное приложение к учебнику
УМК «География. Россия: природа, население, экономика. 8 класс «Электронное приложение к учебнику Электронное приложение к учебнику является составной частью учебно-методического комплекса« Сферы »по географии для 8 класса и значительно расширяется…
Тетрадь
УМК «География. Россия: природа, население, экономика. 8 класс «Блокнот-тренажер» Блокнот-тренажер является неотъемлемой частью учебно-методического комплекса «География». Россия: природа, население, экономика »для 8 класса линейки УМК … Подробнее
Ноутбук-мастерская
УМК «География. Россия: природа, население, экономика. 8 класс «Записная книжка-мастерская» Записная книжка-мастерская является составной частью учебно-методического комплекса «География.Россия: природа, население, экономика »за 8 класс линейки … Подробнее
Блокнот для осмотра
УМК «География. Россия: природа, население, экономика. 8 класс »Записная книжка-экзаменатор. Записная книжка-экзаменатор является составной частью учебно-методического комплекса« География. Россия: природа, население, экономика »за 8 класс линейки … Подробнее
Электронное картографическое пособие «География. Россия. Природа, население, экономика »
УМК «География. Россия: природа, население, экономика.8 класс «Электронное картографическое пособие» География. Россия. Природа, население, экономика «Электронное картографическое пособие» География. Россия. Природа, Население, Экономика »- вспомогательный ресурс информационно-образовательной среды … Подробнее
Контурные карты
УМК «География. Россия: природа, население, экономика. Контурные карты класса 8 «Цветные контурные карты печатаются на офсетной бумаге, что позволяет рисовать на них карандашами, и выполнены в технике трехмерного изображения… Подробнее
Иллюстрированный атлас. 8-9 классы
УМК «География. Россия: природа, население, экономика. 8 класс «Иллюстрированный атлас. 8-9 класс Неотъемлемой частью УМК« Сферы »для 8-9 классов является иллюстрированный учебный атлас по географии, разработанный на основе новых подходов к … Подробнее
Тематическое планирование урока
УМК «География. Россия: природа, население, экономика. 8 класс «Тематическое планирование урока Тематическое планирование урока предназначено для учителя географии, работающего с учебно-методическим комплексом« География.Россия: природа,… Читать дальше
Электронное картографическое пособие «География. Мир «
УМК «География. Россия: природа, население, экономика. 8 класс «Электронное картографическое пособие» География. Мир «Электронное картографическое пособие» География. Мир »- вспомогательный ресурс информационно-образовательной среды« Сферы. География »для основных и … Подробнее
Рабочая программа … 5-9 классы
УМК «География. Россия: природа, население, экономика. 8 класс «Рабочая программа.5-9 классы Для направлений учебно-методических комплексов издательства «Сфера» «Просвещение» разработана рабочая программа по географии для 5-9 классов. Программа… Читать дальше
Учебник по геометрии для 7-9 классов Атанасян представляет собой набор готовых домашних заданий, составленных по учебнику авторитетных российских ученых — Атанасяна Л.С., Бутузова С.Б. и другие. Учебник используется в большинстве школ России. В то же время многие школьники и их родители испытывают серьезные трудности с подготовкой домашних заданий по планиметрии.
ГДЗ по геометрии 7-9 класс Атанасян, Бутузов, Кадомцев
Геометрия — это наука, которая требует от ученика уметь эффективно визуализировать задачу. Здесь не обойтись без стандартного применения типовых формул. Поэтому не все школьники могут качественно освоить этот предмет.
Родители стремятся помочь своему ребенку, нанимают дорогих репетиторов … Однако проблему можно решить с меньшими материальными и временными затратами. Достаточно просто использовать ГДЗ по геометрии для 7-9 класса Атанасяна.В учебном пособии
IN приведены пошаговые алгоритмы выполнения геометрических задач с комментариями и готовыми ответами. В результате студенты могут легко понять, как самостоятельно решать примеры и задачи.
Наш сайт — это удобный способ использовать геометрическое решение Атанасяна. Достаточно нажать на номер задачи на странице соответствующего резолвера — и система отобразит правильное решение.
Мы контролируем удовлетворенность пользователей ресурса и благодаря этому добились:
- доступности готовых ответов с компьютера, телефона, планшета;
- Мы регулярно обновляем базу решебников до последних версий.
Такие критерии работы сайта обеспечивают экономию времени и удобство получения готовых решений.
Решебник по геометрии для 7-9 классов Атанасян, 2014-2019 гг.
В 2014 году издательство «Просвещение» выпустило очередной выпуск учебника геометрии для 9 классов Атанасяна. Включает более 130 параграфов, разделенных на 4 основных раздела:
- Луч, прямая, отрезок, угол и особенности их измерения;
- Треугольники, их свойства, типы, законы равенства и подобия;
- Параллельность и перпендикулярность линий и типов многоугольников;
- Круг и векторы.
В учебное пособие добавлены задания повышенной сложности; краткие сведения из теории 7-8 классов и предметный указатель.
Учебное пособие не только гарантирует эффективное понимание алгебры, но и помогает подготовиться к итоговой государственной аттестации.
ГДЗ по геометрии для 8 класса — это сборники готовых домашних заданий, которые содержат решенные примеры и задачи из учебников по предмету, рекомендованному Минобрнауки РФ.
Для чего нужен геометрический решебник 8 класса от Путина?
Многие школьники и их родители ошибочно полагают, что решатели геометрии для 8 класса являются основанием для бездумного жульничества. Однако это мнение ошибочно. По сути — сборники готовых домашних заданий являются важным практическим пособием, которое содержит много полезной информации для школьников.
Курс геометрии 8-го класса охватывает такие темы, как:
- четырехугольники, их свойства;
- подобие треугольников;
- круг, его виды и размеры;
- векторов и их практическое применение.
В таком разнонаправленном массиве многим ребятам разобраться крайне сложно. В связи с этим становится актуальным вопрос об использовании ГДЗ, которая позволяет:
- проверять выполненное домашнее задание;
- занимается задачами, которые не были понятны в классе.
Решебники служат оптимальной базой для подготовки школьников к контрольным работам и предметным экзаменам.
ГДЗ от Путина по геометрии для 8 класса — как сэкономить время на домашних заданиях?
Чтобы быстро и эффективно выполнять домашнюю работу по геометрии, воспользуйтесь базой ответов, представленной на нашем сайте.Причем интерфейс ресурса ориентирован на максимальное удобство для пользователя:
- требуемый ответ можно получить за несколько минут, нажав на соответствующий номер задачи;
- Вы можете пользоваться сайтом как с ПК, так и с телефона.
Все пользователи нашего ресурса получают уникальную возможность воспользоваться удобным онлайн-сервисом, позволяющим рассчитать площадь треугольника за доли секунды.
Анатасян 7-9
Учебник Мерзляк Полонский Якир
ГДЗ по геометрии 8 класс
ГДЗ по геометрии 8 класс
Конечно, к настоящему времени геометрия вам уже знакома.Но задания по этому предмету становятся все сложнее. Привычные углы, треугольники, квадраты и круги заменяются другими, более сложными геометрическими фигурами … Сложность и объем теорем, задач и правил значительно возрастает.
А вот с ГДЗ проблем нет! Любое домашнее задание будет выполнено как по волшебству! Решебник поможет справиться с большим объемом материала, даже если вы не можете все запомнить и выучить. Тщательно переписывая готовые решения, вы постепенно запомните все детали теорем и аксиом, а также принципы решения геометрических задач.
Помимо повторения ранее пройденных материалов, ученикам предстоит познакомиться с новыми определениями, освоить приемы нахождения участков различной формы, но не все знают, как легко справиться с заданиями без посторонней помощи. Для ускорения выполнения заданий и облегчения процесса самообразования ученикам предлагается использовать ГДЗ по геометрии для 8 класса … Вспомогательная литература этого типа включает не просто сухие ответы, которые помогут понять, решена ли задача. правильно.В нем обоснованы выполненные упражнения, к ним добавлены схематические рисунки или графики, описано, откуда взяты использованные коэффициенты.
Геометрия — это все больше людей, и учителя, и ученики считают одним из самых сложных школьных предметов. Для его изучения не всегда достаточно учебника. Поэтому стоит обратить внимание на ГДЗ по геометрии для 8 класса. В этой книге собраны абсолютно все решения задач по геометрии в 8 классе. Кроме того, все решения объяснены доступным и понятным для каждого ученика языком.Даже если вы не смогли понять суть проблемы на уроке, вы всегда можете прийти домой, открыть книгу и самостоятельно разобраться на примере, который вы не поняли с первого раза.
Такая книга решений — отличный помощник для всех студентов, которые хотят изучить предмет и все, что с ним связано.
ГДЗ для класса геометрии 8
Геометрия — один из самых сложных предметов, которые школьники сдают в старших классах … Чтобы ребенок все полностью понимал, необходимо не только самостоятельно готовиться дома, но и присутствовать на уроках.но также иметь пособие, на которое студент может учиться. Специалисты рекомендуют использовать сразу две книги разных авторов, это ГДЗ по геометрии 8 Атанасян, ГДЗ по геометрии 8 класс Погорелов.
Эти учебники охватывают все самые основные темы, изучаемые в школе. Большое внимание авторы обратили на параллельность прямых и признаки подобия треугольников. Главное преимущество решебника — удобное строение. В начале каждой новой темы сначала представлена теория, а затем практические упражнения по этой теме.В конце каждого курса по гдз в 8 классе по геометрии собраны вопросы и задания для проверки знаний, т.е. усвоил ли ребенок материал или нет.
В гдз много ярких рисунков и рисунков, это способствует запоминанию темы. Решебник можно использовать для подготовки к экзаменам и просто для проверки своих знаний. ГДЗ для геометрии 8 класс можно купить в книжных магазинах или скачать в Интернете. Второй вариант наиболее удобен.
Такой самоконтроль, несомненно, улучшит знания ребенка, а также повысит его успеваемость в школе. Решебник по геометрии 8 класс сделает домашнее задание интересным занятием для каждого ребенка, в ходе которого ребенок обязательно узнает много новой и полезной информации.
Работая над этими учебниками, а также проверяя себя на ответы, вы непременно повысите свой уровень знаний и качество обучения. Естественно, не стоит ругать и списывать все ответы из книги! Родители должны следить за тем, чтобы ребенок проверял свои ответы только в 8 классе, но не более того.
ГДЗ по геометрии 8 класс — ответы и ответ.
Геометрия считается одной из самых сложных наук. Сидя над очередным домашним заданием, волей-неволей вспоминаешь слова из известной песни «Будет ли еще». И хотя актер учится в 1 классе, аналогию можно провести и со старшеклассниками. Онлайн ГДЗ по геометрии 8 класс поможет ученикам решить свои задачи с домашним заданием.
Решебник по геометрии за 8 класс
Многие люди негативно относятся к этим преимуществам, полагая, что они способствуют распространению лени, но на самом деле они выполняют важную роль.Есть два способа использовать решатель геометрии для 8-го класса, с помощью которых вы не только повысите свою успеваемость, но и улучшите свои знания.
Смотри и записывай ответы по геометрии за 8 класс
Во-первых, ученик записывает решение задачи, а затем сидит и размышляет о том, что и как произошло. Если какой-то момент остается неясным, нужно вернуться к предыдущим темам и восполнить пробел, обнаруженный с помощью GDZ для 8-го класса геометрии.В дальнейшем вы сможете выполнять такие задания самостоятельно, запомнив аналогичный принцип, который вам подсказали ответы по геометрии 8 класс онлайн.
Второй способ решения подходит более упорным ученикам, которые самостоятельно пытаются решить ту или иную задачу, но это никак не поддается, и ответ не совпадает с тем, что дано в конце учебник. Когда моральные силы уже на исходе, и пора ложиться спать или идти на встречу с друзьями, не грех заглянуть в геометрию 8 класса ГДЗ для «вдохновения».«Вы найдете загвоздку и проанализируете, как она возникла и что вы упустили. Это похоже на небольшое открытие. Вы, как и Менделеев, изо всех сил пытаетесь решить конструкцию своего стола, а вот ответы по геометрии 8-го класса , как во сне, приоткройте вам завесу истины. Теперь вы точно знаете, на какие хитрости способна эта математическая наука, и что вам следует подумать в следующий раз, выполняя домашнее задание по этой теме.
Таким образом, решатель геометрии 8-го класса — очень полезное «изобретение» для школьников, желающих учиться и получать знания, а также положительные оценки для них.Если родители достаточно либеральны и доверяют своему ребенку, то они могут лично купить ему ответы по геометрии 8-го класса, что поможет не отпугнуть ученика, который обманул и забыл, что он сделал, а улучшить успеваемость, если ребенок вдумчивый и внимательный. ответственный. В конце концов, школа — это только этап к взрослой жизни, который поднимет свои собственные проблемы, и не будет решателя проблем. Вот почему так важно научиться независимости с юных лет.
В чем уникальность Европейской школы Восточного партнерства: взгляд белорусского школьника
Есть ли что-то еще, что предлагает программа IB, помимо выбора предметов, чего нет в белорусских школах?
Чтобы получить диплом, нужно проявлять творческий подход и инициативу.Мы должны участвовать в различных проектах, участвовать в волонтерской работе, а затем писать размышления, которые помогут нам обобщить полученные навыки и знания. У нас нет оценок за это, но это требование для получения диплома.
Оценки в школе публично не обсуждаются. Учителя не объявляют оценки учеников в классе, и после каждого проекта они выделяют время для индивидуальной обратной связи. Объективные критерии оценки нашей работы объявляются заранее.Устные ответы оцениваются аналогичным образом, и во время семинаров мы работаем над тем, чтобы лучше понять темы, что помогает нам подготовиться к предстоящим проектам.
У нас нет встреч родителей с учителями, но в середине семестра проводится сессия, на которой родители могут задавать вопросы. Они также могут общаться с учителями по электронной почте. Кроме меня и учителя, только мои родители имеют доступ к моим оценкам.
Учителя не тратят свое время на то, чтобы дать нам информацию, которую можно прочитать в учебнике.Большая часть материалов для чтения отправляется нам заранее, чтобы мы были готовы проанализировать и обсудить их в классе. Это позволяет учителю вовлечь нас в разговор и помочь нам рассмотреть разные точки зрения.
Еще одна вещь, которой мы много занимаемся в школе, — это написание эссе, которое помогает нам научиться интерпретировать полученные знания, понять, как использовать их в реальной жизни, и сформировать мнение. Речь идет не о защите своей точки зрения, а о том, чтобы увидеть проблему и ее решения с разных сторон.
Другой важный компонент программы — написание эссе на 4000 слов по одной из выбранных тем. Учащиеся работают над этим самостоятельно, но при необходимости могут посоветоваться с учителем. Это тоже одно из условий получения диплома.
Учителя школы из разных стран: Грузии, США, Турции, Ирана, Азербайджана, Испании, Италии и Украины. Это сильно влияет на то, как и чему нас учат. Обсуждения приветствуются, и учителя готовы выслушать любое мнение.
Где учиться сложнее — в Тбилиси или в Новополоцке?
В Тбилиси у нас много домашних заданий, на выполнение которых уходит больше времени, чем в Беларуси, особенно из-за разных учебных программ. Сейчас я обычно занимаюсь с утра до 22–11 часов. В то же время мне нравится делать домашнее задание — не потому, что я должен его делать, а потому, что это развивает меня как личность. Я думаю, что принял правильное решение, когда перешел в Европейскую школу Восточного партнерства — это прекрасное место для тех, кто любит познавать мир.
У нас много свободного времени по выходным, а в будние дни мы только учимся. Однако, если вы хотите поступить в хороший вуз, вам придется много потрудиться в течение последних двух лет в школе — это касается и белорусских школ.
Вы уже полгода учились в Европейской школе Восточного партнерства. Белорусы отличаются от других людей?
Нет. Я понял, что, хотя нас определяет наша национальность, мы все разные в силу своего характера.
В школе нас учат толерантности. Девиз программы — «Вместе мы сильнее», и теперь я понимаю, что, если бы я не записался в программу, я был бы менее открыт для других людей и смотрел бы на мир по-другому.
У нас есть студенты из стран, которые находятся в конфликте друг с другом. Я был шокирован их противоположными взглядами на статус Нагорного Карабаха — территории между Арменией и Азербайджаном. Студенты обеих стран считают эту землю своей.Изучая подобные конфликты и другие проблемы глобальной политики, мы подходим к проблемам с разных сторон, и я вижу, что взгляды людей меняются.
Перед тем, как начать занятия, мы поехали в лагерь в Кахетии, Грузия, на две недели. Всего в нем приняли участие студенты 12 национальностей. Я жил в комнате с девушкой из Азербайджана. Когда армяне уезжали в аэропорт, она даже не пошла их проводить. Теперь, когда мы уезжали на зимние каникулы, она, как и другие азербайджанцы, обняла армянских студентов.У них очень разные взгляды, но совместное обучение учит их принимать разные мнения. Я думаю, это то, что необходимо для поддержания мира и устранения конфликтов.
Границы | Структурированная оценка поведенческих тестов на грызунах, используемых в исследованиях по открытию новых лекарств
Введение
Чарльза Дарвина можно считать основоположником поведенческих исследований (Thierry, 2010). С тех пор поведенческое тестирование широко используется для лучшего понимания центральной нервной системы (ЦНС) и поиска методов лечения ее заболеваний.Ранние экспериментальные работы по поведению животных включают работу Ивана Павлова об условных рефлексах у собак, начатую в конце XIX века (Самойлов, 2007). Постоянный интерес к поведению животных привел к возникновению области этологии, результатом которой в 1973 г. стала Нобелевская премия по физиологии и медицине, которую разделили Карл фон Фриш, Конрад Лоренц и Николаас Тинберген. Они изучали животных в их естественной среде обитания, что затрудняло проведение контролируемых экспериментов. Эта проблема была решена путем введения поведенческого тестирования в лабораторных условиях в начале двадцатого века, которое превратилось в область сравнительной психологии в процессе, которому способствовал важный вклад Б. Ф. Скиннера (Gray, 1973; Dews et al., 1994).
Исторически сложилось так, что для тестирования поведения использовалось большое количество разнообразных видов, но грызуны всегда использовались широко, вероятно, потому, что они млекопитающие, и их легко содержать и разводить. В отличие от обычных домашних животных, таких как кошки и собаки, среди населения может быть более широкое признание использования грызунов в медицинских исследованиях. Хотя хомяки, морские свинки и монгольские песчанки были подвергнуты поведенческому тестированию, мыши и крысы гораздо более популярны и прочно утвердились в качестве модельных организмов с несколькими аутбредными и инбредными линиями, доступными для экспериментов.В отличие от других грызунов, используемых для исследований, мыши и крысы принадлежат к подсемейству Murinaea и иногда их называют моделями мышей. Ранние примеры тестирования поведения на грызунах включают работу Карла Лэшли по обучению и запоминанию с использованием лабиринтов в начале двадцатого века. Первоначально для экспериментов использовались выловленные в дикой природе грызуны (McCoy, 1909), но эта практика изменилась с появлением штаммов, выведенных любителями мышей и крыс (Steensma et al., 2010). После примерно ста лет разведения современные лабораторные животные теперь значительно более послушны, чем их дикие собратья (Wahlsten et al., 2003а). Со временем наблюдается непрерывная эволюция поведенческих тестов на грызунах, и в настоящее время используется более 100 тестов, которые исчерпывающе обобщены в дополнительной таблице 1 настоящего обзора. В последние годы стали доступны генетически модифицированные мыши, и использование мышей в поведенческом тестировании недавно превзошло использование крыс (рис. 1). Однако растущая доступность генетически модифицированных крыс (Jacob et al., 2010) может снова изменить ситуацию.
Рисунок 1.Общее использование мышей и крыс в поведенческом тестировании . Количество публикаций определялось в PubMed с использованием поисковых терминов (мышь или мыши) и (крыса или крысы) в сочетании с (поведение или поведение), из которых исключаются данные до 1960 г., поскольку отсутствие рефератов в более старой литературе приводит к получению результатов поиска. ненадежный. За последнее десятилетие наблюдается резкий рост поведенческого тестирования на мышах, и сейчас он немного более распространен, чем поведенческое тестирование на крысах.
К сожалению, тестирование поведения грызунов в лабораторных условиях оказалось трудным, и результаты тестов могут отличаться в зависимости от человека, проводящего эксперимент (Chesler et al., 2002), в которой проводятся эксперименты (Crabbe et al., 1999), а также факторы окружающей среды, включая, например, содержание животных (Richter et al., 2010). Для дальнейшего развития области тестирования поведения грызунов и достижения надежных и воспроизводимых результатов эти проблемы должны быть решены. К счастью, последние технологические усовершенствования облегчают проектирование и создание сложного автоматизированного испытательного оборудования. Новые методы включают в себя 3D-печать, которая позволяет создавать структуры практически любой формы (Jones, 2012), удобные в использовании электронные микроконтроллеры, такие как платы Arduino, которые могут управлять воротами, датчиками и доставкой вознаграждений (D’Ausilio, 2012), а также радиочастоты. Идентификация (RFID), которая используется для определения положения и личности отдельных крыс и мышей (Lewejohann et al., 2009). В сочетании с обоснованными этологическими принципами и хорошим пониманием биологии грызунов эти методы могут облегчить разработку и построение новых поведенческих тестов с улучшенными характеристиками.
К сожалению, идеального поведенческого теста не существует, и нужно выбирать наиболее подходящий в зависимости от целей проекта. Однако при принятии этого решения необходимо учитывать множество факторов. Чтобы облегчить процесс выявления сильных и слабых сторон существующего поведенческого теста, в настоящем обзоре оценивается множество важных аспектов поведенческого тестирования, которые суммированы в таблице 1.
Таблица 1. Что следует учитывать при оценке поведенческого теста.
Мотивация
Большинство поведенческих тестов, используемых для оценки сенсомоторной функции, а также обучения и памяти, нацелены на определение способности животного решать задачу. С другой стороны, поведенческие тесты, используемые в исследованиях наркозависимости на грызунах, такие как самостоятельное введение и обусловленное предпочтение места (см. Дополнительную таблицу 1), сосредоточены на измерении мотивации для выполнения выбранного действия.Измеряемая производительность в тесте неизменно будет включать комбинацию как способности, так и мотивации животного к решению задачи. Следовательно, для выявления различий в способностях уровень мотивации должен быть одинаковым у отдельных животных. Чтобы решить проблему вариабельности мотивации, поведенческие тесты обычно пытаются обеспечить достаточную мотивацию, чтобы каждое животное работало на пике своих способностей. Однако переменный уровень мотивации является потенциальной проблемой во многих тестах, включая тест на вращающуюся головку и силу хвата (Balkaya et al., 2013). Обычно выбираемым источником мотивации является страх, такой как страх утонуть в тесте принудительного плавания (FST; Porsolt et al., 1977), страх упасть в вращающийся стержень (Dunham and Miya, 1957) или страх получить поражение электрическим током во время обучение активному избеганию (Moscarello and LeDoux, 2013). Страх можно изучать независимо, используя, например, запахи хищников, чтобы понять, например, посттравматическое стрессовое расстройство (Staples, 2010; Johansen et al., 2011), что отличается от его использования в качестве мотиватора в тестах, оценивающих другие черты характера. .Страх следует использовать с осторожностью в качестве источника мотивации, поскольку он может вызывать нежелательные эффекты, такие как замораживание или паническое поведение, а стресс, вызванный страхом, может отрицательно влиять на когнитивные способности (Harrison et al., 2009). Когда тестовая ситуация воспринимается как опасная для животного, мотивация также может быть обеспечена путем введения пути эвакуации в домашнюю клетку, когда задача решена (Blizard et al., 2006).
Голод — еще один часто используемый мотиватор. Грызуны обычно питаются в течение дня, хотя в основном в начале и в конце темной фазы (Clifton, 2000), и достаточный уровень голода для мотивации индуцируется на уровне голодания, что вызывает снижение массы тела на 10–20%. .Следует отметить, что страх, стресс и тревога препятствуют потреблению пищи (Петрович и др., 2009), и животных, возможно, придется приучить к испытательной арене до начала эксперимента. Потребность в лишении пищи можно облегчить или избежать, если использовать очень вкусную пищу, используя естественную склонность крыс и мышей добывать пищу и накапливать ее в своих гнездах (Whishaw et al., 1995) или полагаясь на жажду. чем голод. Кроме того, на результаты анализов может влиять диета для грызунов.Свободный доступ к пище вызывает ожирение у лабораторных грызунов (Martin et al., 2010), а ограничение в питании оказалось полезным на моделях инсульта, зависимости и эксайтотоксичности (Bruce-Keller et al., 1999; Yu and Mattson, 1999; Guccione и др., 2013).
Несколько тестов основаны на спонтанном поведении грызунов, таких как исследование новой среды в открытом поле (Hall, 1934), многомерное концентрическое квадратное поле (Рисунок 2A; Meyerson et al., 2006) и тест цилиндра (Рисунок 2B; Schallert et al., 2000). Кроме того, тесты социального взаимодействия, такие как трехкамерный социальный подход (рис. 2C; Nadler et al., 2004), могут использоваться для оценки функции памяти, а также общительности. Другие виды спонтанного поведения включают строительство гнезд и рытье нор, которые можно использовать для оценки когнитивных функций (Deacon, 2012). Опора на спонтанное поведение может снизить потребность в сильных мотиваторах и, вероятно, снизить уровень стресса животного в тесте, в отличие от высвобождения гормонов стресса, вызванного, например, водным лабиринтом Морриса (MWM; Engelmann et al., 2006). Мотивация к многократному выполнению простых задач может быть обеспечена оперантным условием. Это может, например, использоваться для мотивации животных нажимать рычаг для получения гранул сахарозы и часто выполняется в ящике Скиннера. Однако оперантное обусловливание обычно требует некоторой степени лишения пищи, а также неизменной способности к обучению. Можно предположить, что использование положительных мотиваторов не только этично, но и с меньшей вероятностью приведет к аберрантному поведению, вызванному стрессом. Недостаточный интерес к выполнению задач без сильного мотиватора по-прежнему является потенциальным предостережением при поведенческом тестировании, хотя эту проблему можно смягчить за счет более длительных сеансов тестирования, разрешенных автоматическим тестированием (см. Автоматическое тестирование ниже).
Рисунок 2. Недавно представленные поведенческие тесты . (A) Многомерное концентрическое квадратное поле: животному разрешено свободно исследовать сложную арену, состоящую из нескольких субдоменов с разными характеристиками. Темная угловая комната в правом верхнем углу изображения, например, скорее всего, будет восприниматься как безопасная, в отличие от ярко освещенного моста слева, что, вероятно, считается рискованным. Результат анализируется с использованием многомерной статистики, чтобы дать поведенческий профиль животного, а не пытаться измерить индивидуальные черты. (B) Тест с цилиндром: когда животное помещается в цилиндр, оно самопроизвольно встает и использует передние лапы для поддержки. Одностороннее повреждение областей, контролирующих моторику ЦНС, обычно вызывает асимметричное использование передних конечностей при выполнении этой задачи. (C) Трехкамерный социальный подход: общительность подопытной мыши измеряется по ее склонности проводить время в пустой камере или камере, содержащей другую мышь. (D) Задача «Копать»: на основе обонятельных сигналов животное определяет правильную чашку и копает, чтобы получить награду. (E) OptoMotry: необузданное животное помещают на небольшую возвышенную платформу, окруженную четырьмя мониторами, отображающими решетчатый узор. Если у животного достаточная острота зрения, боковой поток решетки вызывает рефлекторные движения головы, которые автоматически обнаруживаются верхней камерой. (F) Мешающая задача усов: в нижнем левом углу видна рука экспериментатора, держащая небольшую палочку, которая используется для стимуляции усов. Например, черепно-мозговая травма вызывает аллодинию, которую можно обнаружить в этом тесте.Все изображения, кроме теста с цилиндром, были любезно предоставлены другими учеными, подробности см. В разделе «Благодарности».
Взаимодействие между животными и экспериментаторами
Практически во всех поведенческих тестах существует степень взаимодействия между экспериментатором и животным, которая потенциально влияет на полученные результаты. Важность этого взаимодействия была установлена на основании наблюдения, что идентичность экспериментатора имела большее влияние, чем генотип, на результаты теста горячей пластиной (Chesler et al., 2002).Хотя разные интерпретации инструкций по тестам могут быть одним из объяснений, различия между исследователями в их опыте работы с животными и тревоге по отношению к грызунам также, вероятно, будут важны. Также недавно было продемонстрировано, что присутствие самца, но не самки экспериментатора вызывает обезболивание у грызунов (Sorge et al., 2014). Кроме того, крысы способны различать, и на результаты может влиять уровень знакомства грызунов с отдельными экспериментаторами (McCall et al., 1969; van Driel and Talling, 2005), а любые оставшиеся следы запаха от хищных домашних животных, таких как кошки, вызовут стресс у грызунов (Burn, 2008). Отдельные экспериментаторы-люди могут также демонстрировать некоторые ежедневные изменения, например, уровня стресса, настроения и / или запаха, что потенциально увеличивает вариабельность результатов. Отдельные грызуны также различаются по своей реакции на человека и обычно сначала избегают контакта с человеком, но постепенно принимают его после многократного воздействия (Schallert et al., 2003; Hurst and West, 2010).Таким образом, обращение с лабораторными животными перед любым поведенческим тестированием может снизить эффект взаимодействия животных с экспериментатором и потенциально снизить изменчивость (Schmitt and Hiemke, 1998; Hurst and West, 2010). Кроме того, отсутствие обработки перед серией повторных тестов может привести к изменению результатов со временем, поскольку животные все больше и больше привыкают к контакту с людьми. Обратите внимание, однако, что присутствие человека всегда влияет на поведение животных, а снижение страха перед экспериментатором может даже снизить мотивацию к выполнению некоторых тестов.Взаимодействие между животными и экспериментаторами не ограничивается реакциями страха и может быть вызвано любопытством и ожиданием награды. Важность взаимодействия животное-экспериментатор, вероятно, различается в разных тестах и, вероятно, не вызывает особого беспокойства, например, в оперантных камерах, хотя потенциально существенно влияет на несколько тестов неврологической функции, когда экспериментатор держит животное на протяжении всего теста.
В попытках оценить воспроизводимость результатов в разных лабораториях эксперименты обычно проводят разные люди (Crabbe et al., 1999; Mandillo et al., 2008), причем личность экспериментатора считается важным источником изменчивости (Mandillo et al., 2008). Таким образом, взаимодействие между животным и экспериментатором может быть одной из причин трудностей в достижении стабильных результатов в поведенческих тестах. Полагаясь на полностью автоматизированное тестирование (см. Автоматическое тестирование ниже), можно избежать контакта с людьми и потенциально повысить воспроизводимость теста. Поскольку полностью автоматизированные, высококачественные поведенческие тесты по-прежнему редки, проблема взаимодействия экспериментатора и животного вместо этого обычно решается тем, что один и тот же человек выполняет все тесты в рамках исследования.
Диапазон надежных измерений
Поведенческий тест в идеале должен обеспечивать точные и точные измерения без эффектов пола и потолка (рис. 3) при тестировании как сильно ослабленных, так и нормально функционирующих животных. Надежная оценка в широком диапазоне уровней способностей может быть достигнута путем постоянного увеличения сложности или интенсивности стимула во время сеанса тестирования, например протоколов, использующих ускорение, а не постоянную скорость вращения ротора. В этом тесте вращающийся барабан запускается с очень низкой скоростью, необходимой только для сильно ослабленных животных, а затем разгоняется до скорости, сложной даже для наивных мышей (Dunham and Miya, 1957; Brooks and Dunnett, 2009).Тот же принцип применяется в конической балке с выступами, являющейся модификацией традиционных испытаний на ходьбу балки. Здесь луч изначально широкий и легко перемещается, но постепенно сужается и становится все более узким и сложным (Schallert et al., 2002). Этот подход к разработке тестов не ограничивается тестами двигательных функций и, например, также используется в тестах последовательных аллей тревожно-подобного поведения. Этот тест состоит из четырех переулков, которые становятся все более узкими и открытыми и, следовательно, более анксиогенными, что позволяет оценить тревожное поведение в широком диапазоне (Deacon, 2013).Требования теста также можно контролировать с помощью параметров в тесте, например, регулируя размер платформы в MWM (Vorhees and Williams, 2006) или изменяя температуру в тесте с горячей пластиной (Neelakantan and Walker, 2012). Правильные настройки параметров важны, поскольку различия между двумя группами невозможно обнаружить, если тест слишком сложен или слишком прост (рисунок 3).
Рис. 3. Уровень сложности поведенческих тестов на грызунах варьируется, что делает их пригодными для различных целей .Нетребовательный тест (сплошная линия) подходит, например, для обнаружения лечебных эффектов на моделях тяжелых поражений центральной нервной системы. Однако нетребовательные тесты могут демонстрировать эффект потолка, то есть даже больные животные получают результаты, близкие к оптимальным. С другой стороны, очень требовательный тест (пунктирная линия) вызывает риск эффекта пола, когда все животные не справляются с задачей, оставляя незамеченными какие-либо улучшения. Таким образом, сложный тест в основном подходит для обнаружения незначительных нарушений, таких как побочные эффекты лечения или дискретные эффекты генетических манипуляций.Тесты с непрерывным увеличением сложности или интенсивности стимула (смешанная линия) полезны для широкого диапазона уровней способностей / черт, т. Е. Имеют широкий динамический диапазон. Примеры см. В Диапазон надежных измерений в тексте.
Повторяемость и взаимодействие между тестами
Повторное тестирование желательно при изучении заболеваний с динамическим и длительным течением, а также при исследованиях развития и старения. Измерение исходных показателей также позволяет одинаково сбалансировать группы лечения на основе показателей эффективности до, например, введения лекарства или индукции травмы (Lenzlinger et al., 2005). Однако повторение теста не всегда возможно, поскольку опыт одного сеанса тестирования может повлиять на последующее тестирование. На большинство поведенческих тестов, вероятно, в некоторой степени влияет повторное тестирование, и практические эффекты, например, наблюдались в нулевом лабиринте (Cook et al., 2002) и тесте с горячей пластиной (Espejo and Mir, 1994). На повторное тестирование также может влиять интервал тестирования, демонстрируемый функциональным восстановлением, наблюдаемым при ежедневной, но не еженедельной оценке вращающегося стержня после черепно-мозговой травмы (O’Connor et al., 2003). Эти результаты также предполагают, что интенсивное поведенческое тестирование может функционировать как реабилитационная терапия, которая заставит само тестирование влиять на полученные результаты. Кроме того, эффекты обучения могут влиять на результаты при повторении тестов, и, таким образом, нарушения обучения и памяти могут влиять на оценку других функций мозга. Повторяемость теста также желательна, когда требуется обширное обучение перед фактическим тестированием, подход, подтвержденный, например, в непрерывном тесте производительности с 5 вариантами (Young et al., 2013).
Помимо повторения одного теста, животных также обычно подвергают нескольким различным поведенческим тестам. Эта практика может быть проблематичной, поскольку участие в одном тесте может повлиять на результаты, полученные в результате последующего тестирования. Таким образом, важен порядок, в котором проводятся тесты, и выполнение тестов в отдельные дни потенциально снижает взаимодействие между тестами. Однако, насколько нам известно, эта стратегия не была проверена. Возможным решением может быть объединение нескольких тестов в один тест.Например, тесты «открытое поле», «приподнятый крестообразный лабиринт» (EPM) и «светло-темный ящик» были объединены в единую тестовую арену (Ramos et al., 2008). Другая стратегия — использовать тест, который не измеряет ни одной поведенческой черты животного, а вместо этого определяет его профиль. Примером этой стратегии является многомерный тест концентрического квадрата поля, который использует сложную арену для одновременной оценки нескольких аспектов поведения грызунов и последующего анализа результатов с использованием многомерной статистики (Meyerson et al., 2006; Экмарк-Левен и др., 2010). Другой пример — модифицированная версия теста на дырочку, который измеряет несколько типов поведения, связанных с тревожным поведением, когнитивными и социальными взаимодействиями (Ohl and Keck, 2003).
Сбор данных и интерпретация результатов
Конкретное поведение грызунов обычно трудно описать с помощью одной непрерывной переменной, поэтому обычно используются категориальные шкалы. Ручная оценка с использованием этого типа шкал может быть субъективной и поэтому должна выполняться исследователем, не имеющим информации о лечении, заболевании и генетическом статусе оцениваемого животного.Желательно, чтобы перед оценкой также была проведена оценка надежности между экспертами и внутри них (Shrout and Fleiss, 1979; Rousson, 2011). Использование автоматизированного сбора данных, такого как программное обеспечение для видеонаблюдения за лабиринтами и использование магнитов, прикрепленных к задней лапе, для измерения бездействия в FST (Shimamura et al., 2007), не всегда возможно, но может обеспечить объективную выборку данных и, вероятно, уменьшить рабочая нагрузка (см. Автоматическое тестирование ниже). Одним из предостережений, вызванных автоматическим сбором данных, является повышенный риск ложноположительных результатов при оценке большого количества поведенческих переменных по одному или нескольким тестам.Правильное использование поправок для множественного тестирования, многомерная статистика, четко сформулированная гипотеза и воспроизведение ключевых результатов в независимых экспериментах являются потенциальными решениями этой проблемы.
Когда результаты поведенческих тестов собраны, их интерпретация редко бывает очевидной. Например, мыши, которые плавают в одном месте в MWM, не могут найти платформу, хотя такое поведение может не отражать ухудшение способности к обучению и памяти (Wahlsten et al., 2003c). Кроме того, если грызун цепляется за стержень в тесте вращающегося стержня вместо того, чтобы бегать по нему, нельзя сделать никаких выводов о его балансе и координации (Wahlsten et al., 2003b). При интерпретации результатов поведенческих тестов важным вопросом является понимание причины наблюдаемого поведения. Путем изучения естественного поведения грызунов, оценки этологической достоверности теста (см. Действительность ниже), определения источника мотивации в тесте (см. Мотивация выше) и использования знаний о сенсорной способности грызунов (см. Сенсорная модальность ниже), чтобы увидеть тест с точки зрения грызунов, можно добиться более глубокого понимания поведения грызунов в тесте.
Изменение дизайна существующих тестов может потенциально решить проблемы интерпретации в некоторых случаях. Одним из таких примеров является приподнятый нулевой лабиринт, модификация EPM, в котором центральная зона была удалена, поскольку количество времени, проведенного в ней, трудно интерпретировать (Shepherd et al., 1994; Braun et al., 2011) . Снижение уровня облизывания лапы и избегания поведения в тесте с горячей пластиной может быть связано как с обезболивающим, так и с анксиолитическим действием, а также с седативным действием (Yezierski and Vierck, 2011; Casarrubea et al., 2012). Потенциальным решением этой проблемы интерпретации является использование теста с двумя чашками, при котором животному разрешают свободно исследовать две чашки, одну чашку при комнатной температуре, а другую — при отрицательной температуре. Затем часть времени, затраченного на каждую пластину, может быть использована для количественной оценки анестезиологического эффекта (Walczak and Beaulieu, 2006). Высокая вариабельность — еще одна распространенная проблема при поведенческом тестировании, которая, вероятно, в основном вызвана факторами за пределами тестовой ситуации, такими как социальный статус и прошлый опыт животного.Однако некоторая изменчивость может быть вызвана неточными измерениями, и более обширное тестирование может смягчить эту проблему. Например, оценка большего количества ягодиц в тесте с цилиндром или выполнение большего количества тестовых прогонов в тесте ходьбы по балке может повысить надежность этих тестов. Сеансы поведенческих тестов также часто имеют ограниченную продолжительность, обычно всего несколько минут, что может быть недостаточно. Соответственно, измененные модели поведения наблюдались при использовании увеличенной продолжительности сеанса тестирования в тесте открытого поля (Fonio et al., 2012). Несмотря на то, что адекватное использование статистики выходит за рамки настоящего обзора, очевидно, что адекватное использование статистики имеет решающее значение для поведенческого тестирования, и подробное обсуждение основных концепций можно найти в серии статей Важные точки (Krzywinski and Altman, 2013). Однако при интерпретации благоприятных доклинических эффектов лечения также важно учитывать не только статистическую значимость эффекта, но и то, достаточна ли величина, чтобы привести к клинически значимому улучшению.Наконец, если результаты поведенческих тестов описываются одной, легко интерпретируемой переменной, другим ученым легче сделать из них правильные выводы. Однако эта стратегия должна быть сбалансирована с преимуществом подробного описания наблюдаемого поведения.
Автоматизированное тестирование
Непрерывный прогресс в области электроники и анализа изображений делает автоматические процедуры тестирования поведения все более возможными. Использование автоматизированных процедур имеет несколько потенциальных преимуществ, таких как объективная оценка, избежание взаимодействия между животными и экспериментаторами, увеличенная продолжительность испытаний и снижение трудозатрат.Тем не менее, полностью автоматизированные системы по-прежнему используются редко, хотя автоматический сбор данных довольно распространен (см. Сбор данных и интерпретация результатов выше), а операционные камеры обычно требуют, чтобы животное было помещено в камеру для тестирования, в то время как остальная часть процедуры выполняется. автоматизировано. Одновременное отслеживание отдельных животных в группе может быть достигнуто путем нанесения различных флуоресцентных красителей на шерсть животных, что позволяет автоматически оценивать социальную динамику в течение длительных периодов времени (Shemesh et al., 2013). Как правильно указывалось ранее (Crabbe and Morris, 2004), невозможно разработать автоматизированные тесты, которые полагались бы на роботизированную систему для отлова и переправки животных из их домашней клетки на испытательную арену. Вместо этого полностью автоматизированное тестирование может проводиться в домашней клетке для животных (de Visser et al., 2006; Krackow et al., 2010) или в тестовом модуле, прикрепленном к домашней клетке через автоматизированную систему сортировки (Schaefers and Winter, 2011; Winter, Schaefers, 2011). Интеграция испытательного оборудования и домашней клетки в единый блок, например, используется в IntelliCage (Krackow et al., 2010) и PhenoTyper (de Visser et al., 2006). Однако у этой стратегии есть определенные ограничения. Например, испытательное оборудование может использоваться только одной группой животных за раз, и для тестирования группы животных в нескольких различных внутриклеточных системах тестирования животных необходимо переводить между ними. Эти ограничения могут быть устранены путем добавления автоматизированной системы сортировки между домашней клеткой и испытательной ареной, стратегия, которая была успешно реализована как для оперантной камеры (Winter and Schaefers, 2011), так и для автоматизированного Т-образного лабиринта (Schaefers and Winter, 2011).В этой установке животные помечаются с помощью RFID-чипов, которые могут быть идентифицированы системой сортировки, которая гарантирует, что только одно животное за раз попадает на тестовую арену. Этот подход потенциально можно расширить, подключив несколько клеток к одной тестовой арене или подключив одну клетку к нескольким тестовым аренам.
Однако создание полностью автоматизированных тестов, которые точно имитируют используемые в настоящее время тесты, в большинстве случаев является непостижимой задачей. Вместо этого может потребоваться новое мышление, чтобы позволить компьютерам проводить измерения и контролировать тестовую ситуацию.Элегантный пример — автоматизированная оценка поведения при уходе, когда вибрации, вызванные уходом, обнаруживаются с помощью высокочувствительной шкалы и преобразуются в значимую информацию с помощью передовых алгоритмов (Chen et al., 2010). Попытка имитировать человека-наблюдателя, полагаясь на анализ изображений поведения груминга, снятого на видео, значительно труднее, даже несмотря на то, что машинное обучение потенциально делает это возможным (Kabra et al., 2013). Более того, грызуны подвергаются стрессу от контакта с людьми, и поэтому избегание этого было бы примером усовершенствования в системе 3R (Замена, сокращение и уточнение) (Russell and Burch, 1959).Наконец, независимо от того, насколько заманчивым может быть использование автоматизированных тестов для ускорения рабочего процесса, получение высокой пропускной способности за счет высокого качества может привести к получению ненадежных данных ограниченной ценности. Поэтому часто может быть выгодно использовать более трудоемкий тест для достижения более высокой достоверности и увеличения шансов на успешный клинический перевод.
Изменчивость
Поведение грызунов обычно значительно варьируется от животного к животному, вероятно, вызванное сочетанием генетических, экологических и экспериментальных факторов.Вариабельность может присутствовать даже до начала эксперимента, например, при использовании беспородных животных, которые должны быть генетически разнообразными. Часто используются беспородные поголовья крыс, включая, например, крыс Sprague-Dawley, Long-Evans и Wistar. Хотя мыши, используемые в медицинских исследованиях, обычно являются инбредными, мыши CD1 и Swiss Webster являются аутбредными, и разумно предположить, что генетическое разнообразие беспородных животных способствует изменчивости поведения (Chia et al., 2005).Все особи в инбредной линии должны быть генетически идентичными, но все же могут отличаться своими минисателлитными областями, короткими повторяющимися последовательностями ДНК с высокополиморфным числом копий, которые потенциально влияют на экспрессию генов и поведение (Lathe, 2004). Поскольку изменчивость в предпочтительных видах деятельности потенциально изменяет жизненный опыт, изменчивость также может увеличиваться со временем (Freund et al., 2013).
Материнское поведение также варьируется в зависимости от человека, и высокий уровень вылизывания и ухода за щенками приводит к изменению реактивности на стресс и улучшению показателей MWM, когда детеныши достигают зрелого возраста (Liu et al., 2000). Материнское поведение также наследуется негеномным образом, что делает его возможным источником изменчивости, влияющей на будущие поколения (Meaney, 2001). Эмбрионы грызунов выделяют половые гормоны в матке, где они выстраиваются в линию, как бусинки на нитке. Это означает, что половые гормоны, которым подвергается эмбрион, зависят от пола соседних эмбрионов, что потенциально влияет на поведение взрослых (Ryan and Vandenbergh, 2002). У грызунов хорошо развита иммунная система, и явные симптомы послеоперационных инфекций встречаются редко.Однако инфекция вызывает иммунный ответ, который может повлиять на результаты эксперимента и увеличить вариабельность. Например, было показано, что инфекция после операции усугубляет ишемическое повреждение головного мозга (Yousuf et al., 2013). Состав комменсальных бактерий в кишечнике грызунов также может влиять на поведение, добавляя еще один потенциальный источник изменчивости (Foster and McVey Neufeld, 2013).
Эстральный цикл самок животных также потенциально влияет на поведение (Meziane et al., 2007), хотя, к счастью, его можно довольно легко измерить с помощью цитологии вагинальных мазков (Caligioni, 2009).Самки мышей, ранее не подвергавшиеся воздействию самцов мышей, координируют свой эстральный цикл при воздействии самцов феромонов, эффект Уиттена (Whitten, 1956). Помещая на несколько дней подстилку самцов, пропитанную мочой, в клетку с самками мышей, можно проводить эксперименты с использованием людей в той же эстральной стадии (Dalal et al., 2001). Распространенное мнение о том, что самки животных имеют более высокую изменчивость из-за их эстрального цикла, недавно было поставлено под сомнение после того, как метаанализ показал, что самцы и самки имеют одинаковые уровни вариабельности по широкому спектру критериев исхода (Prendergast et al., 2014).
Экспериментальные модели болезни часто требуют хирургического вмешательства или введения психоактивных веществ, а уровень стойкой травмы или тяжести заболевания может варьироваться от субъекта к субъекту (Kim et al., 2011). Доза вводимого препарата и результирующий уровень в плазме также могут варьироваться в зависимости от человека (Kääriäinen et al., 2011). Вариабельность также может быть внесена во время фактического тестирования, например, в порядке, в котором тестируются животные в клетке (Chesler et al., 2002), и поэтому порядок тестирования должен быть рандомизированным.Влияние изменчивости может быть ограничено путем измерения поведения перед вмешательством, чтобы исключить животных с аберрантным поведением, а также путем представления результатов, нормализованных к базовому значению. Поскольку изменчивость снижает возможность обнаружения значительных различий, выявление и устранение источников изменчивости важно при разработке и уточнении поведенческих тестов и процедур тестирования. Поскольку уменьшение вариабельности позволяет уменьшить размер экспериментальной группы, это не только практично, но и этично, поскольку уменьшает количество используемых животных (Russell and Burch, 1959).
Экспериментальный образец
Риск систематической ошибки всегда присутствует в медицинских исследованиях, и непринятие мер по его предотвращению привело к завышению результатов лечения в доклинических исследованиях инсульта (Sena et al., 2007). Было подготовлено несколько руководств, в которых описаны важные меры по предотвращению предвзятости, включая руководящие принципы Camrades и ARRIVE (Kilkenny et al., 2010). В частности, оценка рискованного поведения животных является субъективной и всегда должна выполняться человеком, не имеющим информации о генотипе, хирургическом вмешательстве или лекарственном лечении.Учитывая возможность взаимодействий между животными и экспериментаторами, целесообразно также проводить фактическое тестирование вслепую. Если человек, выполняющий генотипирование, операцию или лечение, также выполняет поведенческое тестирование, ослепление становится практической проблемой. Если животные не были промаркированы до вмешательства, возможно, впоследствии они будут помечены другим исследователем. Замена карточек клетки также может быть возможным способом скрыть групповое назначение в некоторых случаях.RFID-метки, используемые для идентификации животных, содержат номер, который совпадает с текстом, отображаемым на считывателе RFID, что означает, что ослепление может быть достигнуто путем сопряжения номера с новым текстом. Размер группы — еще один важный аспект дизайна эксперимента, и было высказано предположение, что в нейробиологических исследованиях обычно используется недостаточное количество животных. Поэтому рекомендуется проводить расчеты мощности для определения адекватного размера группы (Button et al., 2013).
Групповое назначение не было бы проблемой, если бы все грызуны в эксперименте были идентичны.Однако, учитывая аргументы в разделе об изменчивости (см. Вариабельность выше), отдельные грызуны, вероятно, уникальны, и во избежание систематической ошибки требуется рандомизация. Однако неограниченная рандомизация может привести, например, к тому, что в клетке будут содержаться только контрольные животные, что создает риск систематических ошибок. Этого риска можно избежать, разделив исследование на блоки, состоящие, например, из одного помета или клетки с животными, а затем случайным образом распределив животных в каждом блоке по группам лечения (Festing and Altman, 2002).Учитывая важность слепого анализа и рандомизации, рекомендуется всегда описывать его в научных отчетах (Macleod et al., 2009).
Большинство поведенческих тестов на грызунах проводится для понимания физиологии человека и поиска методов лечения заболеваний, поэтому эксперименты должны быть спланированы таким образом, чтобы максимально увеличить потенциал успешного преобразования результатов в пользу пациента. Кажется разумным, что медикаментозное лечение, которое эффективно только для одного штамма в узком возрастном диапазоне, вряд ли превратится в эффективное клиническое лечение.С другой стороны, шанс на успешный перевод, вероятно, выше для методов лечения, которые эффективны в широком диапазоне параметров, таких как вид, род, пол, возраст и факторы окружающей среды. К сожалению, оценка лечения традиционным способом с группой лечения и контрольной группой для каждой комбинации параметров была бы чрезмерно дорогостоящей и трудоемкой. Вместо этого используя пару животных для каждого набора параметров, где одно животное на пару получает оцениваемое лечение, а другое служит в качестве контроля, устойчивые эффекты могут быть обнаружены без использования большого количества животных.Поскольку производительность, вероятно, будет зависеть от множества факторов, в частности от деформации, результаты должны быть оценены с использованием парной непараметрической статистики. Этот способ использования парного дизайна для тестирования животных разных видов, линий, возраста и пола в рамках одного исследования, насколько нам известно, ранее не оценивался. Однако это может быть способом избежать риска получения идиосинкразических результатов, вызванных использованием инбредных животных одного возраста и пола, которые содержатся и выращиваются в идентичных условиях.
Сенсорная модальность
Чтобы полностью понять поведение животных, важно признать, что их взгляд на мир может сильно отличаться от нашего (Burn, 2008). К крайним примерам можно отнести то, что морские черепахи полагаются на магнитное поле Земли для навигации, а также способность различных видов змей обнаруживать свою добычу с помощью инфракрасного излучения. Грызуны воспринимают окружающую среду в первую очередь с помощью своей превосходной обонятельной системы и сошниково-носового органа и, в отличие от людей, не сильно полагаются на зрение (Ache and Young, 2005).Зрение грызунов адаптировано к ночному образу жизни с преобладанием палочек в сетчатке. Более того, и у крыс, и у мышей есть только два типа колбочек, ограничивающих их дихроматическое зрение, хотя один тип колбочек позволяет обнаруживать ультрафиолетовый свет (Huberman and Niell, 2011). У грызунов также высокоразвитые усы с большим корковым представительством, и они активно перемещают усы над объектами, чтобы исследовать их (Diamond et al., 2008). Еще одно различие между сенсорными системами человека и грызунов заключается в способности грызунов как обнаруживать ультразвук, так и использовать его для общения (Wöhr et al., 2008, 2011). Также было высказано предположение, что мыши могут обнаруживать магнитные поля (Muheim et al., 2006) и что крысы способны эхолокировать (Rosenzweig et al., 1955).
Поведенческий тест на грызунах на основе зрения может точно имитировать процедуру клинического теста, который был предложен для облегчения перевода результатов доклинических тестов в клинику (Horner et al., 2013), в то время как другие предостерегали от принятия антропоцентрической точки зрения (Wynne , 2004). Альтернативой являются процедуры тестирования на основе обоняния, которые могут иметь лучшую этологическую достоверность (см. Validity ниже).Такие тесты по-прежнему используются нечасто по сравнению с другими типами поведенческих тестов, но есть, например, несколько процедур, в которых животные копают в поисках награды ароматизированную среду (см. Дополнительную таблицу 1). Одним из них является задача «Копать» (рис. 2D; Martens et al., 2013), хотя для этой универсальной системы когнитивной оценки доступно несколько других протоколов, в которых расположение вознаграждения может быть указано не только по запаху и типу копающей среды, но и по также структура поверхности и расположение контейнеров (Wood et al., 1999; Биррелл и Браун, 2000; Gilmour et al., 2013).
Другими факторами, которые следует учитывать, является то, что несколько широко используемых линий мышей обладают ограниченными слуховыми способностями и что бесплодная среда, в которой выращиваются лабораторные животные, может нарушать сенсорное развитие (Cancedda et al., 2004; Turner et al., 2005). Соответственно, желательным контролем качества любого поведенческого теста является проверка того, что животные обладают достаточной сенсорной способностью для обнаружения предоставленных сенсорных сигналов. Такая сенсорная оценка особенно важна при использовании генетически модифицированных животных, которые могут иметь неожиданные сенсорные дефициты, а также в моделях болезней, которые могут изменять сенсорные функции.К счастью, зрительная функция может быть оценена автоматически с помощью системы Optomotry (рис. 2E; Prusky et al., 2004), аносмия может быть быстро обнаружена с помощью теста с закопанной пищей (Yang and Crawley, 2009), а слух может быть оценен с помощью предимпульса. подавление акустической реакции испуга (Clause et al., 2011). Сенсорную систему усов можно также оценить с помощью задачи «Усы» (рис. 2F; McNamara et al., 2010). Подробную оценку сенсорных функций можно также выполнить с помощью процедур оперантного кондиционирования (см. Дополнительную таблицу 1).
Срок действия теста
Есть несколько типов валидности, которые необходимо учитывать при оценке результатов поведенческих тестов. Прогностическая достоверность, возможно, является одной из наиболее важных и обычно определяется как способность поведенческого теста на грызунах прогнозировать действие лекарства на человека. Для определения прогностической достоверности требуется существующее клиническое лечение, которое можно проверить на исторических данных в оцениваемом поведенческом тесте на грызунах (Schallert, 2006). Примером могут служить бензодиазепины, которые широко используются для лечения тревожности у пациентов, а также снижают степень тревожного поведения грызунов как в тесте «светло-темный ящик» (Crawley and Goodwin, 1980), так и в EPM (Pellow and File, 1986). ).Однако прогностическая валидность часто не может быть оценена из-за отсутствия доступных эффективных методов лечения, и вместо нее можно использовать конструктивную валидность (Strauss and Smith, 2009). Этот тип валидности зависит от того, измеряет ли тест предполагаемый психологический конструкт или нет, и может, например, быть оценен путем оценки того, схожи ли задействованные нейронные системы и нейротрансмиттеры у грызунов и людей.
В тесте с высокой достоверностью очевидно, что тест предназначен для измерения.Например, тест вращающегося стержня легко и сразу распознается большинством ученых как тест двигательной функции. С другой стороны, этологическая валидность зависит от того, насколько тест соответствует естественному поведению животных. Например, легко увидеть, как использование запахов хищников для вызова реакции страха напоминает ситуацию, с которой могут столкнуться и дикие грызуны. Напротив, мышей, подвешенных за хвост, в природе не наблюдается, хотя тест подвешивания за хвост обычно используется как индикатор депрессивно-подобного поведения (Cryan et al., 2005).
Внутренняя достоверность, воспроизводимость теста зависит от схожести результатов, полученных в результате повторных экспериментов. Внешняя валидность, обобщаемость теста определяется его способностью предсказывать результаты у других штаммов и видов, включая людей. Стандартизация поведенческих тестов и среды тестирования может повысить внутреннюю валидность, хотя, с другой стороны, она может снизить внешнюю валидность (Würbel, 2002; van der Staay and Steckler, 2002). Хотя стандартизация параметров теста может повысить воспроизводимость, выбор настройки параметров не всегда очевиден, и оптимальные настройки для одной модели болезни не обязательно идеальны для моделей других болезней.С другой стороны, систематическое изменение параметров теста может увеличить внешнюю валидность (Richter et al., 2010) и, таким образом, увеличить шанс успешной передачи результата в клинику.
Использование теста с высокой прогностической достоверностью, вероятно, лучший выбор, если он доступен. Однако существует риск того, что доказанная достоверность применима только к другим лекарствам того же класса. С другой стороны, использование непроверенных поведенческих тестов может привести к открытию лекарств, действующих с помощью новых механизмов.Если полностью проверенные тесты недоступны, потенциальной альтернативой для повышения надежности выводов является измерение признака с использованием нескольких разных тестов в одной и той же области. Тесты и процедуры тестирования также могут быть подтверждены путем проверки того, что известные различия штаммов и / или эффекты лекарств могут быть воспроизведены. В исследованиях открытия лекарств также важно отдельно рассматривать валидность модели болезни, чтобы определить надежность полученных результатов испытаний.
Помещение для животных
Корпус имеет решающее значение при тестировании поведения и может повлиять на результаты несколькими способами.Например, грызуны в клетке образуют социальную иерархию, в которой более низкий ранг связан с повышенным уровнем гормонов стресса и тревожным поведением, потенциально увеличивая поведенческую изменчивость (Barnum et al., 2008; Costa-Pinto et al., 2009; Davis et al., 2009; Prendergast et al., 2014). Доступно несколько тестов для измерения социального статуса, включая парикмахерскую, характер мочеиспускания, тест конфронтации трубки, видимую систему нор и задачу конкурса еды (Merlot et al., 2004; Wang et al., 2011; см. дополнительную таблицу 1), что позволяет формировать сбалансированные экспериментальные группы до начала эксперимента. Еще одним осложнением группового содержания является склонность мышей-самцов драться и ранить друг друга (Emond et al., 2003), хотя это менее вероятно у однопометников или среди животных, живущих в одной клетке с раннего возраста (Costa-Pinto и др., 2009). С другой стороны, поскольку и мыши, и крысы являются социальными животными, отдельное жилье может повлиять на результаты нескольких поведенческих тестов (Võikar et al., 2005). Для большинства исследований групповое содержание, вероятно, предпочтительнее, поскольку результаты, полученные с использованием социально неблагополучных одиночных животных, могут иметь меньшую достоверность.
Еще одним аспектом содержания грызунов является потенциальная неспособность клетки для грызунов обеспечивать достаточные стимулы для нормального развития. Для смягчения этой проблемы можно использовать различные формы обогащения, такие как пластиковые туннели, ходовые колеса, резиновые шары и материал для гнезд (Nithianantharajah and Hannan, 2006). Однако эффекты обогащения представляют собой сложный и условный нокаут подтипа рецептора NMDA в гиппокампе, который влияет на непространственную память и обучение у мышей, выращиваемых в стандартной, но не в обогащенной среде (Rampon et al., 2000). Клетки для грызунов также необходимо чистить через регулярные промежутки времени, предпочтительно в дни без поведенческого тестирования, поскольку перевод в новую клетку временно увеличивает уровень гормонов стресса (Castelhano-Carlos and Baumans, 2009). Также необходимо учитывать условия освещения, поскольку тестирование в разные моменты времени в цикле свет-темнота может изменить результат поведенческого тестирования (Hopkins and Bucci, 2010). В отличие от людей, крысы и мыши имеют период отдыха в течение дня, а обратный цикл свет-темнота (Bertoglio and Carobrez, 2002) позволяет тестировать, когда животные активны, что, вероятно, будет лучшей альтернативой в большинстве поведенческих исследований.
Практические рекомендации
Поведенческие тесты на грызунах значительно различаются по требуемым трудозатратам, которые необходимо сопоставить с надежностью и важностью полученных результатов. Существуют также все более эффективные методы, доступные для разработки генетических моделей и антител, а также для количественного определения уровней синтеза мРНК и экспрессии белков. Если поведенческое тестирование не соответствует этим улучшениям, оно может стать узким местом в процессе разработки лекарств (Brunner et al., 2002). Если полностью автоматизированные системы не могут быть реализованы, пропускную способность можно увеличить путем параллельного тестирования нескольких животных, например, при использовании поворотных стержней, построенных с несколькими дорожками. Тестовое оборудование небольшого размера и разумной стоимости также позволяет использовать несколько тестовых камер параллельно, чтобы сделать работу более эффективной. Стратегия, применяемая, например, в тестировании на условность страха (Maren, 2008) и при использовании оперантных камер. Опора на процедуры тестирования, которые могут выполняться новым персоналом без обширной подготовки или технических навыков, также имеет практическое значение (Brooks and Dunnett, 2009).Стоимость лабораторных помещений также может составлять значительную часть исследовательского бюджета, что необходимо учитывать при планировании использования физически большого оборудования, такого как MWM или EPM. Кроме того, если испытания не используются постоянно, возможность разборки и хранения испытательного оборудования может иметь большое практическое значение.
Поведенческие тесты должны часто выполняться в определенное время в зависимости от эстрального цикла, времени после травмы или начала болезни, или как часть графика проекта, включающего несколько партий животных, подвергнутых нескольким различным тестам.Такие строгие схемы часто необходимы, хотя и проблематичны, когда приходится сталкиваться с больничными, отпусками и праздниками. Одним из способов преодоления таких практических проблем является использование полностью автоматизированных тестов или тестов с низким уровнем взаимодействия между животными и экспериментаторами, что может позволить провести тестирование другому исследователю.
Очистка оборудования для поведенческих тестов служит для предотвращения распространения заразных болезней и удаления следов запаха, которые в противном случае могли бы повлиять на результаты теста. Помимо очевидных обонятельных сигналов, таких как фекалии и моча, грызуны выделяют жидкость из подушечек ног, что может повлиять на последующее тестирование (Quatrale and Laden, 1968).Крысы также рассматриваются мышами как хищники (Quatrale and Laden, 1968), и если эти два вида используют совместно используемое оборудование, требуется тщательная очистка. Для облегчения процесса очистки оборудование должно быть лишено узких проходов и углов, должно быть изготовлено из легко очищаемого материала и предпочтительно способно выдерживать процедуры стерилизации.
Заключительные замечания
Хотя генетика, электрофизиология и гистология являются очень важными инструментами для понимания механизмов, лежащих в основе новых лекарств, поведение представляет собой конечный результат работы ЦНС и должно быть основой для окончательного заключения доклинических оценок новых лекарств или генетических модификаций.К сожалению, поведенческое тестирование является очень трудоемким и чувствительным к факторам окружающей среды, и перевод доклинических исследований в клинические оказался трудным в области инсульта, травм головного мозга, травм спинного мозга, боли и болезни Альцгеймера (Lo, 2008; Mao, 2009; Loane, Faden, 2010; Filli, Schwab, 2012; Савоненко и др., 2012). Для преодоления этой важной проблемы могут потребоваться новые поведенческие тесты, но она, по крайней мере, потенциально может быть смягчена путем тщательного отбора и выполнения существующих поведенческих тестов.Первоначальные соображения перед поведенческим тестированием включают выбор вида животных, породы, пола и возраста, а также определение размера выборки, порядка тестирования, типа помещения и того, следует ли использовать обратный цикл свет-темнота или нет. Лучший выбор теста зависит не только от научных целей проекта, предполагаемой меры и возможной интерпретации результатов, но также от практических и экономических ограничений и, следовательно, может отличаться в зависимости от проекта. Однако в большинстве случаев идеальный тест — это тот, который не только измеряет клинически значимый признак и имеет высокую валидность, но также является практически выполнимым и этически приемлемым.Поиск такого теста может быть сложной задачей, но этот процесс потенциально облегчается структурой оценки, представленной в таблице 1, и списком доступных тестов в дополнительной таблице 1. Наконец, учитывая неполное понимание мозга и ограниченные возможности лечения неврологических заболеваний. В обозримом будущем тестирование поведения на грызунах, вероятно, продолжит развиваться и станет неотъемлемой частью нейробиологии.
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Авторы выражают благодарность Эрике Роман и Бенгту Мейерсону из Упсальского университета за организацию курсов и распространение их знаний о поведенческих исследованиях и Одри Лафренай из Университета Содружества Вирджинии за проницательные комментарии к этой рукописи. Фотографии для рисунка 2 были любезно предоставлены Эрикой Роман (mCSF), Бриджит Семпл, лабораторией Noble и Центром нейроповеденческих исследований в области реабилитации (NCRR) Калифорнийского университета в Сан-Франциско (трехкамерный социальный подход), Крисом М.Мартенс, Коул Вондер Хаар, Блейк А. Хатселл и Майкл Р. Хоан из Университета Южного Иллинойса в Карбондейле (задание на раскопки), Глен Пруски в Медицинском колледже Вейл Корнелл (оптометрия) и Одри Лафренай (неприятности с усами).
Эта работа финансировалась Шведским исследовательским советом и фондами Упсальского университета и Университетской больницы Упсалы.
Дополнительные материалы
Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: http: //www.frontiersin.org / Journal / 10.3389 / fnbeh.2014.00252 / аннотация
Список литературы
Балкая М., Кребер Дж. М., Рекс А. и Эндрес М. (2013). Оценка постинсультного поведения на мышиных моделях фокальной ишемии. J. Cereb. Blood Flow Metab. 33, 330–338. DOI: 10.1038 / jcbfm.2012.185
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Барнум, К. Дж., Бландино, П., и Дик, Т. (2008). Социальный статус модулирует базальные концентрации ИЛ-1 в гипоталамусе крыс, проживающих в парах, и влияет на некоторые характеристики стресс-реактивности. Brain Behav. Иммун. 22, 517–527. DOI: 10.1016 / j.bbi.2007.10.004
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Бертольо, Л. Дж., И Каробрез, А. П. (2002). Профиль поведения крыс, представленных на сеансе 1 — сеансе 2 в приподнятом крестообразном лабиринте во время дневной / ночной фаз и при различных условиях освещения. Behav. Brain Res. 132, 135–143. DOI: 10.1016 / s0166-4328 (01) 00396-5
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Биррелл, Дж.М., и Браун В. Дж. (2000). Медиальная лобная кора опосредует смещение перцептивного набора внимания у крысы. J. Neurosci. 20, 4320–4324.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Близард, Д. А., Вайнхаймер, В. К., Кляйн, Л. К., Петрилл, С. А., Коэн, Р., и МакКлерн, Г. Э. (2006). «Возвращение в домашнюю клетку» в качестве награды за обучение в лабиринте молодых и старых генетически неоднородных мышей. Комп. Med. 56, 196–201.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Браун, А.А., Скелтон, М. Р., Ворхиз, К. В., и Уильямс, М. Т. (2011). Сравнение приподнятого плюсового и приподнятого нулевого лабиринтов у обработанных и необработанных самцов крыс линии Sprague-dawley: эффекты анксиолитических и анксиогенных агентов. Pharmacol. Биохим. Behav. 97, 406–415. DOI: 10.1016 / j.pbb.2010.09.013
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Брюс-Келлер, А. Дж., Амбергер, Г., Макфолл, Р., и Маттсон, М. П. (1999). Ограничение питания снижает повреждение мозга и улучшает поведенческий исход после эксайтотоксических и метаболических нарушений. Ann. Neurol. 45, 8–15. DOI: 10.1002 / 1531-8249 (199901) 45: 1 <8 :: aid-art4> 3.3.co; 2-м
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Берн, К. С. (2008). Каково быть крысой? Сенсорное восприятие крыс и его значение для экспериментального дизайна и благополучия крыс. Заявл. Anim. Behav. Sci. 112, 1–32. DOI: 10.1016 / j.applanim.2008.02.007
CrossRef Полный текст
Баттон, К. С., Иоаннидис, Дж. П. А., Мокрыш, К., Носек, Б.А., Флинт, Дж., Робинсон, Э. С. Дж. И др. (2013). Сбой питания: почему небольшой размер выборки подрывает надежность нейробиологии. Нат. Rev. Neurosci. 14, 365–376. DOI: 10.1038 / nrn3475
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Cancedda, L., Putignano, E., Sale, A., Viegi, A., Berardi, N., and Maffei, L. (2004). Ускорение развития зрительной системы за счет обогащения окружающей среды. J. Neurosci. 24, 4840–4848. DOI: 10.1523 / jneurosci.0845-04.2004
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Casarrubea, M., Sorbera, F., Santangelo, A., and Crescimanno, G. (2012). Влияние диазепама на поведенческую структуру реакции крысы на боль в тесте с горячей пластиной: анксиолиз против модуляции боли. Нейрофармакология 63, 310–321. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2012.03.026
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Кастельано-Карлос, М.Дж., И Бауманс В. (2009). Влияние света, шума, чистки клеток и внутреннего транспорта на благополучие и стресс лабораторных крыс. Lab. Anim. 43, 311–327. DOI: 10.1258 / la.2009.0080098
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Chen, S.-K., Tvrdik, P., Peden, E., Cho, S., Wu, S., Spangrude, G., et al. (2010). Гематопоэтическое происхождение патологического ухода за мутантными мышами Hoxb8. Cell 141, 775–785. DOI: 10.1016 / j.cell.2010.03.055
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Чеслер, Э. Дж., Уилсон, С. Г., Ларивьер, В. Р., Родригес-Зас, С. Л., и Могил, Дж. С. (2002). Влияние лабораторной среды на поведение. Нат. Neurosci. 5, 1101–1102. DOI: 10.1038 / nn1102-1101
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Clause, A., Nguyen, T., and Kandler, K. (2011). Основанный на акустическом испуге метод оценки частотной дискриминации у мышей. J. Neurosci. Методы 200, 63–67. DOI: 10.1016 / j.jneumeth.2011.05.027
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Кук, М. Н., Кроунс, М., Флаэрти, Л. (2002). Беспокойство в приподнятом нулевом лабиринте усиливается у мышей после многократного ежедневного воздействия. Behav. Genet. 32, 113–118. DOI: 10.1023 / A: 1015249706579
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Коста-Пинто, Ф. А., Кон, Д. В. Х., Са-Роча, В.М., Са-Роча, Л.С., и Палермо-Нето, Дж. (2009). Поведение: важный инструмент для изучения взаимодействия мозга и иммунной системы. Ann. N Y Acad. Sci. 1153, 107–119. DOI: 10.1111 / j.1749-6632.2008.03961.x
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Кроули Дж. И Гудвин Ф. К. (1980). Предварительный отчет о простой модели поведения животных для анксиолитических эффектов бензодиазепинов. Pharmacol. Биохим. Behav. 13, 167–170. DOI: 10.1016 / 0091-3057 (80)
-2
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Крайан, Дж.F., Mombereau, C., и Vassout, A. (2005). Тест подвешивания за хвост как модель для оценки антидепрессивной активности: обзор фармакологических и генетических исследований на мышах. Neurosci. Biobehav. Rev. 29, 571–625. DOI: 10.1016 / j.neubiorev.2005.03.009
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Далал, С. Дж., Эстеп, Дж. С., Валентин-Бон, И. Е., и Джерс, А. Е. (2001). Стандартизация эффекта отбеливания для индукции восприимчивости к Neisseria gonorrhoeae у самок мышей. Contemp. Вершина. Лаборатория. Anim. Sci. 40, 13–17.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Дэвис, Дж. Ф., Краузе, Э. Г., Мелхорн, С. Дж., Сакаи, Р. Р., и Бенуа, С. К. (2009). Доминирующие крысы от природы склонны к риску и проявляют повышенную мотивацию к пищевым наградам. Неврология 162, 23–30. DOI: 10.1016 / j.neuroscience.2009.04.039
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
де Виссер, Л., ван ден Бос, Р., Куурман, В.В., Кас, М. Дж. Х., Спруйт, Б. М. (2006). Новый подход к характеристике поведения инбредных мышей: автоматизированные наблюдения в домашней клетке. Genes Brain Behav. 5, 458–466. DOI: 10.1111 / j.1601-183x.2005.00181.x
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Дьюс, П. Б., Эстес, В. К., Морс, В. Х., Куайн, В. В., и Хернштейн, Р. Дж. (1994). Минуты памяти Б. Ф. Скиннера. Behav. Анальный. 17, 2–5.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Даймонд, м.Э., фон Хеймендаль, М., Кнутсен, П. М., Кляйнфельд, Д., и Ахиссар, Э. (2008). «Где» и «что» в сенсомоторной системе усов. Нат. Rev. Neurosci. 9, 601–612. DOI: 10.1038 / nrn2411
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Данхэм, Н. В., и Мия, Т. С. (1957). Заметка о простом приборе для определения неврологического дефицита у крыс и мышей. J. Am. Pharm. Доц. Являюсь. Pharm. Доц. (Балтим) 46, 208–249. DOI: 10.1002 / JPS.3030460322
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Экмарк-Левен, С., Левен, А., Мейерсон, Б. Дж., И Хилеред Л. (2010). Многофакторный тест с концентрическим квадратом выявляет поведенческие профили принятия риска, исследования и когнитивных нарушений у мышей, подвергшихся черепно-мозговой травме. J. Neurotrauma 27, 1643–1655. DOI: 10.1089 / neu.2009.0953
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Эмонд, М., Фобер, С., и Перкинс, М. (2003). Программа уменьшения социальных конфликтов для мышей-самцов. Contemp. Вершина. Лаборатория. Anim. Sci. 42, 24–26.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Энгельманн, М., Эбнер, К., Ландграф, Р., и Вотяк, К. Т. (2006). Влияние тестирования в водном лабиринте Морриса на нейроэндокринную стрессовую реакцию и внутригипоталамическое высвобождение вазопрессина и окситоцина у крыс. Horm. Behav. 50, 496–501. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.04.009
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Эспехо, Э.Ф., Мир Д. (1994). Различное влияние еженедельного и ежедневного воздействия горячей плиты на поведение крысы. Physiol. Behav. 55, 1157–1162. DOI: 10.1016 / 0031-9384 (94) -9
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Freund, J., Brandmaier, A. M., Lewejohann, L., Kirste, I., Kritzler, M., Krüger, A., et al. (2013). Появление индивидуальности у генетически идентичных мышей. Science 340, 756–759. DOI: 10.1126 / science.1235294
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Гилмор, Г., Аргуэлло, А., Бари, А., Браун, В. Дж., Картер, К., Флореско, С. Б. и др. (2013). Измерение конструкции исполнительного контроля при шизофрении: определение и проверка трансляционных парадигм животных для научных исследований. Neurosci. Biobehav. Ред. 37, 2125–2140. DOI: 10.1016 / j.neubiorev.2012.04.006
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Гуччионе, Л., Джума, Э., Пенман, Дж., И Паолини, А. Г. (2013). Ограничение калорий подавляет рецидивное поведение и предпочтение алкоголя в рамках парадигмы свободного выбора из двух бутылок у предпочитающих алкоголь (iP) крыс. Physiol. Behav. 110C – 111C, 34–41. DOI: 10.1016 / j.physbeh.2012.11.011
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Холл, К. С. (1934). Эмоциональное поведение крысы. I. Дефекация и мочеиспускание как меры индивидуальных различий в эмоциональности. J. Comp. Psychol. 18, 385–403. DOI: 10,1037 / h0071444
CrossRef Полный текст
Харрисон, Ф. Э., Хоссейни, А. Х., и Макдональд, М. П. (2009). Эндогенная тревога и стрессовые реакции в задачах пространственной памяти в водном лабиринте и лабиринте Барнса. Behav. Brain Res. 198, 247–251. DOI: 10.1016 / j.bbr.2008.10.015
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Хорнер, А. Е., Хит, К. Дж., Хвослеф-Эйде, М., Кент, Б. А., Ким, К. Х., Нильссон, С. Р. О. и др. (2013). Платформа с сенсорным экраном для тестирования обучения и памяти у крыс и мышей. Нат. Protoc. 8, 1961–1984. DOI: 10.1038 / nprot.2013.122
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Джейкоб, Х.Дж., Лазар, Дж., Двинелл, М. Р., Морено, К., и Гертс, А. М. (2010). Нацеливание на гены у крысы: достижения и возможности. Trends Genet. 26, 510–518. DOI: 10.1016 / j.tig.2010.08.006
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Кяэрияйнен, Т. М., Кяэнмяки, М., Форсберг, М. М., Ойнас, Н., Таммимяки, А., и Мяннистё, П. Т. (2011). Непредсказуемые ротационные ответы на L-допа в модели болезни Паркинсона на крысах: роль фармакокинетики L-допа и истощение дофамина в полосатом теле. Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 110, 162–170. DOI: 10.1111 / j.1742-7843.2011.00782.x. [Epub перед печатью].
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Кабра М., Роби А. А., Ривера-Альба М., Брэнсон С. и Брэнсон К. (2013). JAABA: интерактивное машинное обучение для автоматического аннотирования поведения животных. Нат. Методы 10, 64–67. DOI: 10.1038 / nmeth.2281
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Килкенни, К., Браун, У. Дж., Катхилл, И. К., Эмерсон, М., и Альтман, Д. Г. (2010). Улучшение отчетности об исследованиях в области биологических наук: руководство ARRIVE по отчетности об исследованиях на животных. PLoS Biol. 8: e1000412. DOI: 10.1371 / journal.pbio.1000412
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ким, Д.-Э., Ким, Дж.-Й., Нахрендорф, М., Ли, С.-К., Рю, Дж. Х., Ким, К., и др. (2011). Прямая визуализация тромба как средство контроля вариабельности моделей эмболического инфаркта мыши: роль оптической молекулярной визуализации. Инсульт 42, 3566–3573. DOI: 10.1161 / strokeaha.111.629428
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Krackow, S., Vannoni, E., Codita, A., Mohammed, A.H., Cirulli, F., Branchi, I., et al. (2010). Согласованные различия в поведенческих фенотипах инбредных линий мышей в IntelliCage. Genes Brain Behav. 9, 722–731. DOI: 10.1111 / j.1601-183x.2010.00606.x
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ленцлингер, П.M., Shimizu, S., Marklund, N., Thompson, H.J., Schwab, M.E., Saatman, K.E., et al. (2005). Отсроченное ингибирование Nogo-A не влияет на вызванное повреждением разрастание аксонов, но способствует восстановлению когнитивной функции после экспериментальной черепно-мозговой травмы у крыс. Неврология 134, 1047–1056. DOI: 10.1016 / j.neuroscience.2005.04.048
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Левейоханн, Л., Хоппманн, А. М., Кегель, П., Крицлер, М., Крюгер, А., и Саксер, Н. (2009). Поведенческое фенотипирование мышиной модели болезни Альцгеймера в полунатуралистической среде с использованием RFID-отслеживания. Behav. Res. Методы 41, 850–856. DOI: 10.3758 / BRM.41.3.850
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Лю Д., Диорио Дж., Дэй Дж. К., Фрэнсис Д. Д. и Мини М. Дж. (2000). Материнская помощь, синаптогенез в гиппокампе и когнитивное развитие у крыс. Нат. Neurosci. 3, 799–806. DOI: 10.1038/77702
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Лоан, Д. Дж., И Фаден, А. И. (2010). Нейропротекция при черепно-мозговой травме: трансляционные проблемы и новые терапевтические стратегии. Trends Pharmacol. Sci. 31, 596–604. DOI: 10.1016 / j.tips.2010.09.005
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Macleod, M. R., Fisher, M., O’Collins, V., Sena, E. S., Dirnagl, U., Bath, P. M. W., et al.(2009). Надлежащая лабораторная практика: предотвращение систематической ошибки на рабочем месте Ход 40, e50 – e52. DOI: 10.1161 / STROKEAHA.108.525386
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Мандилло, С., Туччи, В., Хёльтер, С. М., Мезиан, Х., Банчаабучи, М. А., Калльник, М., и др. (2008). Надежность, устойчивость и воспроизводимость в поведенческом фенотипировании мышей: межлабораторное исследование. Physiol. Геномика 34, 243–255. DOI: 10.1152 / физиолгеномика.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Марен, С. (2008). Павловское кондиционирование страха как поведенческий анализ функции гиппокампа и миндалины: предостережения и предостережения. Eur. J. Neurosci. 28, 1661–1666. DOI: 10.1111 / j.1460-9568.2008.06485.x
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Мартенс, К. М., Фондер Хаар, К., Хатселл, Б. А., Хоан, М. Р. (2013). Задача «раскопки»: простое распознавание запахов позволяет выявить нарушения после повреждения лобной части мозга. J. Vis. Exp. e50033. DOI: 10.3791 / 50033
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Мартин Б., Джи С., Модсли С. и Маттсон М. П. (2010). «Контрольные» лабораторные грызуны метаболически болезненны: почему это важно. Proc. Natl. Акад. Sci. U S A 107, 6127–6133. DOI: 10.1073 / pnas.0
5107
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Макколл Р. Б., Лестер М. Л. и Кортер К. М. (1969).Эффект сторожа у крыс. Dev. Psychol. 1, 771. doi: 10.1037 / h0028199
CrossRef Полный текст
Макнамара, К. С., Лисемби, А. М., и Лифшиц, Дж. (2010). Задача «раздражение усов» позволяет выявить стойкую сенсорную чувствительность с поздним началом у крыс с диффузным повреждением головного мозга. J. Neurotrauma 27, 695–706. DOI: 10.1089 / neu.2009.1237
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Мини, М. Дж. (2001). Материнская забота, экспрессия генов и передача индивидуальных различий в стрессореактивности от поколения к поколению. Annu. Rev. Neurosci. 24, 1161–1192. DOI: 10.1146 / annurev.neuro.24.1.1161
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Мерло, Э., Мозе, Э., Бартоломуччи, А., Данцер, Р., и Неве, П. Дж. (2004). Ранг, оцениваемый в тесте на пищевую конкуренцию, влияет на последующую реактивность мышей на иммунные и социальные проблемы. Brain Behav. Иммун. 18, 468–475. DOI: 10.1016 / j.bbi.2003.11.007
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Мейерсон, Б.Дж., Аугустссон, Х., Берг, М., и Роман, Э. (2006). Поле Концентрического квадрата: многомерная тестовая арена для анализа исследовательских стратегий. Behav. Brain Res. 168, 100–113. DOI: 10.1016 / j.bbr.2005.10.020
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Meziane, H., Ouagazzal, A.M, Aubert, L., Wietrzych, M., and Krezel, W. (2007). Влияние эстрального цикла на поведение самок мышей C57BL / 6J и BALB / cByJ: значение для стратегий фенотипирования. Genes Brain Behav. 6, 192–200. DOI: 10.1111 / j.1601-183x.2006.00249.x
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Москарелло, Дж. М., и Леду, Дж. Э. (2013). Обучение активному избеганию требует префронтального подавления защитных реакций, опосредованных миндалевидным телом. J. Neurosci. 33, 3815–3823. DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.2596-12.2013
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Надлер, Дж. Дж., Мой, С.С., Долд, Г., Транг, Д., Симмонс, Н., Перес, А. и др. (2004). Автоматизированный аппарат для количественной оценки поведения мышей при социальном подходе. Genes Brain Behav. 3, 303–314. DOI: 10.1111 / j.1601-183x.2004.00071.x
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Нилакантан, Х., Уокер, Э. А. (2012). Температурно-зависимое усиление антиноцицептивных эффектов опиоидов в сочетании с габапентином у мышей. Eur. J. Pharmacol. 686, 55–59.DOI: 10.1016 / j.ejphar.2012.04.042
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Нитианантараджа Дж. И Ханнан А. Дж. (2006). Обогащенная среда, пластичность, зависящая от опыта, и расстройства нервной системы. Нат. Rev. Neurosci. 7, 697–709. DOI: 10.1038 / nrn1970
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
О’Коннор, К., Хит, Д. Л., Чернак, И., Ниммо, А. Дж., И Винк, Р. (2003). Влияние ежедневного и еженедельного тестирования и предварительной тренировки на оценку неврологических нарушений после диффузной черепно-мозговой травмы у крыс. J. Neurotrauma 20, 985–993. DOI: 10.1089 / 089771503770195830
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Оль Ф. и Кек М. Э. (2003). Поведенческий скрининг на мутагенизированных мышах — в поисках новых моделей психических расстройств на животных .. Eur. J. Pharmacol. 480, 219–228. DOI: 10.1016 / j.ejphar.2003.08.108
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Пеллоу С. и Файл С. Э. (1986). Анксиолитические и анксиогенные эффекты лекарств на исследовательскую активность в приподнятом крестообразном лабиринте: новый тест на тревожность на крысах. Pharmacol. Биохим. Behav. 24, 525–529. DOI: 10.1016 / 0091-3057 (86) -6
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Петрович, Г. Д., Росс, К. А., Моди, П., Холланд, П. К., и Галлахер, М. (2009). Центральная, но не базолатеральная миндалевидное тело имеет решающее значение для контроля питания с помощью отталкивающих заученных сигналов. J. Neurosci. 29, 15205–15212. DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.3656-09.2009
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Порсолт, Р.Д., Бертин А. и Джалфр М. (1977). Поведенческое отчаяние у мышей: первичный скрининговый тест на антидепрессанты. Arch. Int. Pharmacodyn. Ther. 229, 327–336.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Прендергаст Б. Дж., Ониши К. Г. и Цукер И. (2014). Самки мышей освобождены для включения в нейробиологические и биомедицинские исследования. Neurosci. Biobehav. Ред. 40, 1–5. DOI: 10.1016 / j.neubiorev.2014.01.001
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Пруски, Г.Т., Алам, Н. М., Бикман, С., и Дуглас, Р. М. (2004). Быстрая количественная оценка пространственного зрения взрослых и развивающихся мышей с использованием виртуальной оптомоторной системы. Инвест. Офтальмол. Vis. Sci. 45, 4611–4616. DOI: 10.1167 / iovs.04-0541
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Рамос А., Перейра Э., Мартинс Г. К., Вермайстер Т. Д. и Изидио Г. С. (2008). Объединение открытого поля, приподнятого крестообразного лабиринта и светового / темного ящика для оценки различных типов эмоционального поведения в одном испытании. Behav. Brain Res. 193, 277–288. DOI: 10.1016 / j.bbr.2008.06.007
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Рэмпон, К., Тан, Ю. П., Гудхаус, Дж., Симидзу, Э., Кьин, М., и Цзян, Дж. З. (2000). Обогащение вызывает структурные изменения и восстановление после дефицита непространственной памяти у мышей с CA1-NMDAR1-нокаутом. Нат. Neurosci. 3, 238–244. DOI: 10.1038 / 72945
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Рихтер, С.Х., Гарнер, Дж. П., Ауэр, К., Кунерт, Дж., И Вюрбель, Х. (2010). Систематические вариации улучшают воспроизводимость экспериментов на животных. Нат. Методы 7, 167–168. DOI: 10.1038 / nmeth0310-167
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Рассел, В. М. С., и Берч, Р. Л. (1959). Принципы гуманной экспериментальной техники. Wheathampstaed: Федерация университетов защиты животных.
Савоненко А.В., Мельникова Т., Hiatt, A., Li, T., Worley, P.F., Troncoso, J.C., et al. (2012). Терапия болезни Альцгеймера: перевод доклинической науки в клиническую разработку лекарств. Нейропсихофармакология 37, 261–277. DOI: 10.1038 / npp.2011.211
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Schaefers, A. T. U., Winter, Y. (2011). Быстрое получение задачи чередования с пространственной задержкой в автоматическом Т-лабиринте мышами. Behav. Brain Res. 225, 56–62. DOI: 10.1016 / j.bbr.2011.06.032
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Шаллерт, Т., Флеминг, С. М., Лизер, Дж. Л., Тиллерсон, Дж. Л., и Бланд, С. Т. (2000). Пластичность ЦНС и оценка сенсомоторных исходов передних конечностей в односторонних моделях инсульта на крысах, корковой абляции, паркинсонизма и травмы спинного мозга. Нейрофармакология 39, 777–787. DOI: 10.1016 / s0028-3908 (00) 00005-8
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Шаллерт, Т., Вудли М. Т. и Флеминг С. М. (2002). «Разделение нескольких типов восстановления после травмы головного мозга, восстановление функции», в Pharmacology of Cerebral Ischemia , eds J. Krigelstein and S. Klumpp (Stuttgart: Medpharm Scientific Publishers), 201-216.
Шаллерт Т., Вудли М. Т. и Флеминг С. М. (2003). Экспериментальное очаговое ишемическое повреждение: взаимодействие поведения и мозга и вопросы обращения с животными и их содержания. ILAR J. 44, 130–143. DOI: 10.1093 / ilar.44.2.130
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Шмитт, У., Химке, К. (1998). Различия в штамме в поведении крыс в открытом поле и в приподнятом крестообразном лабиринте без предварительной обработки и после нее. Pharmacol. Биохим. Behav. 59, 807–811. DOI: 10.1016 / s0091-3057 (97) 00502-9
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Сена, Э., ван дер Ворп, Х. Б., Хауэллс, Д., и Маклеод, М. (2007). Как мы можем улучшить доклиническую разработку лекарств от инсульта? Trends Neurosci. 30, 433–439. DOI: 10.1016 / j.tins.2007.06.009
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Шемеш Ю., Штайнберг Ю., Форкош О., Шлапоберский Т., Чен А. и Шнайдман Э. (2013). Социальные взаимодействия высокого порядка в группах мышей. Элиф 2: e00759. DOI: 10.7554 / eLife.00759
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Шеперд, Дж. К., Гревал, С. С., Флетчер, А., Билл, Д. Дж., И Дориш, К.Т. (1994). Поведенческая и фармакологическая характеристика приподнятого «нулевого лабиринта» как животной модели тревоги. Психофармакология (Berl) 116, 56–64. DOI: 10.1007 / bf02244871
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Шимамура М., Куратани К. и Киношита М. (2007). Новая автоматизированная высокопроизводительная система для анализа теста принудительного плавания у мышей на основе изменений магнитного поля. J. Pharmacol. Toxicol. Методы 55, 332–336.DOI: 10.1016 / j.vascn.2006.11.003
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Зорге Р. Э., Мартин Л. Дж., Исбестер К. А., Сотоцинал С. Г., Розен С., Таттл А. Х. и др. (2014). Обонятельное воздействие на мужчин, включая мужчин, вызывает у грызунов стресс и соответствующее обезболивание. Нат. Методы 11, 629–632. DOI: 10.1038 / nmeth.2935
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Скобы, Л. Г. (2010). Избегание запаха хищника как модель беспокойства грызунов: последствия обучения, выходящие за рамки первоначального воздействия. Neurobiol. Учиться. Mem. 94, 435–445. DOI: 10.1016 / j.nlm.2010.09.009
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Стинсма Д. П., Кайл Р. А. и Шампо М. А. (2010). Эбби Латроп, «женщина-мышь из Грэнби»: любительница грызунов и пионер случайной генетики. Mayo Clin. Proc. 85: e83. DOI: 10.4065 / mcp.2010.0647
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Тернер, Дж. Г., Пэрриш, Дж. Л., Хьюз, Л.Ф., Тот, Л. А., и Каспари, Д. М. (2005). Слух у лабораторных животных: различия в деформации и неслышные эффекты шума. Комп. Med. 55, 12–23.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Выйкар, В., Полюс, А., Вазар, Э., и Раувала, Х. (2005). Длительное индивидуальное содержание у мышей C57BL / 6J и DBA / 2: оценка поведенческих последствий. Genes Brain Behav. 4, 240–252. DOI: 10.1111 / j.1601-183x.2004.00106.x
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ворхис, К.В. и Уильямс М. Т. (2006). Водный лабиринт Морриса: процедуры для оценки пространственных и связанных форм обучения и памяти. Нат. Protoc. 1, 848–858. DOI: 10.1038 / nprot.2006.116
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Уолстен, Д., Меттен, П., и Крабб, Дж. К. (2003a). Шкала оценки дикости и простоты обращения с лабораторными мышами: результаты для 21 инбредной линии, протестированной в двух лабораториях. Genes Brain Behav. 2, 71–79. DOI: 10.1034 / j.1601-183x.2003.00012.x
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Wahlsten, D., Metten, P., Phillips, T.J., Boehm, S.L., Burkhart-Kasch, S., Dorow, J., et al. (2003b). Разные данные из разных лабораторий: уроки исследований взаимодействия генов и окружающей среды. J. Neurobiol. 54, 283–311. DOI: 10.1002 / neu.10173
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Walczak, J.-S., and Beaulieu, P. (2006).Сравнение трех моделей нейропатической боли у мышей с использованием нового метода оценки холодной аллодинии: метод двойной пластины. Neurosci. Lett. 399, 240–244. DOI: 10.1016 / j.neulet.2006.01.058
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ван Ф., Чжу Дж., Чжу Х., Чжан К., Линь З. и Ху Х. (2011). Двунаправленный контроль социальной иерархии за счет синаптической эффективности в медиальной префронтальной коре. Наука 334, 693–697. DOI: 10.1126 / наука.1209951
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Уишоу, И. К., Коулз, Б. Л., и Беллерив, К. Х. (1995). Перенос пищи: новый метод натуралистических исследований спонтанного и принудительного чередования. J. Neurosci. Методы 61, 139–143. DOI: 10.1016 / 0165-0270 (95) 00035-s
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Винтер Ю., Шеферз А. Т. У. (2011). Система сортировки с автоматическими воротами позволяет проводить индивидуальные оперантные эксперименты с мышами из социальной домашней клетки. J. Neurosci. Методы 196, 276–280. DOI: 10.1016 / j.jneumeth.2011.01.017
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Вёр, М., Хо, Б., Швартинг, Р. К. В., и Спруйт, Б. (2008). Влияние опыта и контекста на вокализацию 50 кГц у крыс. Physiol. Behav. 93, 766–776. DOI: 10.1016 / j.physbeh.2007.11.031
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Вёр М., Рулле Ф. И. и Кроули Дж.Н. (2011). Уменьшение запаховой маркировки и ультразвуковой вокализации в мышиной модели аутизма BTBR T + tf / J. Гены. Мозг. Behav. 10, 35–43. DOI: 10.1111 / j.1601-183x.2010.00582.x
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Янг, Дж. У., Мэвс, Дж. М., и Гейер, М. А. (2013). Улучшение бдительности у мышей, вызванное агонистами никотина, в непрерывном тесте производительности с выбором из 5 вариантов. Behav. Brain Res. 240, 119–133. DOI: 10.1016 / j.bbr.2012.11.028
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Юсуф С., Атиф Ф., Сайид И., Ван Дж. И Стейн Д. Г. (2013). Постинсультные инфекции усугубляют ишемическое повреждение головного мозга у крыс среднего возраста: иммуномодуляция и нейропротекция прогестероном. Неврология 239, 92–102. DOI: 10.1016 / j.neuroscience.2012.10.017
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ю., З. Ф., и Маттсон, М. П. (1999).Ограничение диеты и введение 2-дезоксиглюкозы уменьшают очаговое ишемическое повреждение головного мозга и улучшают поведенческий исход: данные о механизме предварительного кондиционирования. J. Neurosci. Res. 57, 830–839. DOI: 10.1002 / (sici) 1097-4547 (199
) 57: 6 <830 :: aid-jnr8> 3.3.co; 2-u
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
(PDF) Уверенность в себе учащихся с ограниченными возможностями в лингвистическом классе на уровне колледжа
определяет мотивацию учащихся с ограниченными возможностями для
чтения, письма, разговорной способности людей для получения
межкультурного обмена, успешного использования лингвистической информации
в способы, поддерживающие позитивный рабочий настрой
[9].
Некоторые учителя лингвистики поднимают
фундаментальных вопроса о наиболее эффективных способах обеспечения
учащихся с ограниченными возможностями высококачественной лингвистической грамотности
, которая отвечает их индивидуальным образовательным потребностям, а
повышает их уверенность в себе и социальное благополучие.
контекст обучения на уровне колледжа [6]. Лингвистическая грамотность
может быть концептуализирована как возможный путь, с помощью которого
связь между лингвистическим образованием и уверенностью в себе
может быть исследована, осмыслена и интерпретирована [5].
Более того, большое количество методологических и
психологических исследований само по себе устанавливает сильную,
положительную корреляцию между успешной грамотностью
студентов с ограниченными возможностями и уверенностью в себе [8]. Связь
между образованием и уверенностью в себе учащихся
с ограниченными возможностями имеет различные интерпретации [3, 8, 10],
, поэтому эта взаимосвязь определяется как универсальная, и в данном случае механизмы
лежат в основе «образование означает
».уверенность в себе »не были полностью проработаны и реализованы
[6].Следовательно,
понимание того, каким образом языковая грамотность в языковом классе
влияет на индивидуальную инклюзивность учащегося, уверенность в себе
и образовательные результаты учащихся с ограниченными возможностями
может быть сложной и нелегкой целью для достижения
.
Имеются свидетельства того, что низкая языковая грамотность
учащихся с ограниченными возможностями связана с уровнем уверенности ниже
. Недостаточная уверенность приводит к плохому использованию языковых навыков
и ограниченным коммуникативным навыкам.
Поскольку языковая грамотность влияет на любые формы самооценки
и социального поведения,
также необходимо развивать, повышать и продвигать языковую грамотность среди
учащихся с ограниченными возможностями. Уверенность в себе и лингвистическая
грамотность студентов с ограниченными возможностями на уровне колледжа
тесно взаимосвязаны. Было показано, что недоверие в основном
унижает мотивацию [8], а
имеет негативные образовательные последствия; неуверенный в себе
учащиеся с ограниченными возможностями не могут выбирать коммуникативные
поля, темы, фразы и т. д.; чтобы они могли преуспеть в
и наслаждаться [1, 5]. Однако причины, по которым учащиеся
с ограниченными возможностями потенциально не уверены в себе, и их влияние на это
остаются неясными. Более глубокое понимание проблемы
может привести к практическим преимуществам
: недостаточная уверенность учащихся с ограниченными возможностями
потенциально может быть изменена через учителей или сокурсников,
чем выше их успеваемость и лингвистическая грамотность в лингвистическом тесте
класс тем выше их уверенность в себе.Когда
они изучают английский язык и лингвистику в колледже шаг за шагом,
формирует у учащихся с ограниченными возможностями уверенность в себе по общему правилу
. Исследования учащихся с ограниченными возможностями
выявили высокую точность, настойчивость, усвоение поставленных задач в
лингвистических классах. Однако в начале исследования
студентов с ограниченными возможностями неуверенно считали
низким.
Мы находим один из эффективных и мощных методов в классе
английского языка для передачи полезных лингвистических знаний в контекстной манере
, которая имеет значение для других, — это метод рассказывания историй
[7].Лучше всего это можно представить как
обработанной информации. Метод повествования похож на метод
, каждый инклюзивный студент делится своим успехом в программе
. Посредством рассказывания историй и сотрудничества преподаватели колледжей
могут создать команду обучения без риска
, где каждый, кто может повлиять на
инклюзивных результатов учащихся, может быть и учеником
, и учителем.Чтобы создать инклюзивную лингвистическую команду
, все учащиеся должны чувствовать себя так, как будто они
и имеют право голоса. Наиболее важное требование
для того, чтобы метод повествования работал, — это
поддерживать возможности для заинтересованных сторон в инклюзивном коммуникативном процессе
, чтобы они могли поговорить и поделиться.
также жизненно важно, чтобы ученик в классе имел пространство и разрешение
делиться не только положительными и
приятными, связанными с инклюзией, но также и отрицательными
и трудностями.Учителя в классе английского языка с учащимися с ограниченными возможностями
должны обеспечивать безопасную среду обучения.
Некоторые учащиеся с ограниченными возможностями вначале испытывают трудности,
некоторые получают удовольствие, что нормально для разнопланового обучения в колледже
. Однако, поскольку коллектив и культурные ценности
и стандарты, касающиеся того, что важно делиться, сильно различаются, также важно, чтобы каждый, кто разделяет
, уважал индивидуальные различия каждого ученика в
классе английского языка.Безопасные места не могут быть назначены; они
должны создаваться коллективно. Каждый, кто участвует в методе повествования
, должен иметь очевидность, что их рассказ о
будет положительно воспринят.
Формальные и неформальные способы создания способов поделиться
лингвистические истории инклюзии разнообразны. Неформальные способы
обычно изготавливаются на месте студентами, когда они каким-либо образом встречаются с
в холле колледжа или кафе колледжа, библиотеке
, комнатеи так далее.Формальные методы включают запланированные
занятий в колледже в удобном месте. Группа
должна быть разумного размера, до 14 членов, чтобы все
члена могли участвовать в лингвистическом разговоре. Групповой разговор
может начаться и упроститься за счет использования
проблемы «ломка льда», тишины или новостей.
Пример: «Кто хотел бы поделиться чем-то захватывающим
или печальным, что недавно произошло в вашей жизни?
Что происходит? » это приглашение начать обсуждение
в классе, и все ученики говорят что-то новое или
положительное о включении в высшее образование.По мере создания лингвистической команды
ученики с ограниченными возможностями
будут больше доверять друг другу и больше делиться своими осмысленными идеями
. Еще одно формальное задание для учителя лингвистики — это
по созданию электронной таблицы лингвистических тестов для учащихся.
Эта таблица нужна для того, чтобы один учащийся инклюзивного обучения поделился проблемой
или историей, чтобы другие студенты, которые уже имели
, имели такой же лингвистический опыт или проблему, чтобы дать свои советы
.Они используют таблицу, чтобы вызвать лингвистические обсуждения
и записать возможные решения проблем
, которые разделяет большинство участвующих учащихся с ограниченными возможностями
. Важные темы для рассказывания историй с
учащихся с ограниченными возможностями в классе английского языка включают следующие
:
— Как изучение английского языка помогает мне и
— улучшение, которое мне нужно в классе английского языка.
— Как достичь индивидуальных целей всех учащихся
с ограниченными возможностями, сохраняющими лингвистическую грамотность.
— Лингвистическая группа разделяет ответственность за знания
и учебу.
SHS Web of Conferences 50, 01103 (2018) https://doi.org/10.1051/shsconf/20185001103
Образы российской гимнастки, выбранные Олимпийским комитетом после ношения феминистской футболки
Лежа на траве с ней, Светлые волосы, небрежно распущенные над головой, 16-летняя российская гимнастка Ангелина Мельникова позировала в белой футболке с надписью «Все должны быть феминистками», сложив руки в форме сердца.Фотография, появившаяся в Instagram пять дней назад, собрала более 2700 лайков. Потом появилось еще несколько таких фотографий, на которых Мельникова была в той же футболке, ее губы были ярко-красными, когда она посылала поцелуи, сидела на траве и позировала у забора.
«98 дней счастья», — написала она на одном из них.
«Как вы думаете, лучше быть нужным или счастливым?» она сказала по другому.
Тенденция: Дональд Трамп твитнул «Ковфеф, сбивающий с толку и поляризовавший Интернет»
Фотографии могли бы остаться незамеченными, если бы Олимпийский комитет России не написал в Твиттере четыре из них вместе с сексистским комментарием: «Она может быть феминисткой, но тем не менее, [она] красивая и талантливая.”
RTSLM0B
Ангелина Мельникова из России соревнуется на паркете во время квалификационных соревнований среди женщин на Олимпийских играх 2016 года в Рио. REUTERS / Mike Blake
Как один из пользователей Twitter, переводчик Евгения Сокольская, спросила: «Почему« но »? Что феминистки не могут быть красивыми и талантливыми? Это, честно говоря, обидно ».
Не пропустите: Сом, Кэрри Андервуд и финал Кубка Стэнли — странная история одного фаната «Нашвиллских хищников»
Мельникова — чемпионка Европы по вольному спорту в 2017 году и в прошлом году была членом олимпийской сборной России, завоевавшей серебряные медали. в Рио-де-Жанейро.Она также была национальной чемпионкой России в многоборье в 2016 году. Когда кто-то прокомментировал одну из ее фотографий: «Ты классная, но ты феминистка …», а затем озадаченный смайлик, Мельникова ответила: « Я не феминистка ». Ее ответ не обязательно удивителен, учитывая, что быть названным феминисткой в России — это все равно, что если кто-то в Сан-Франциско носит футболку с флагом конфедерации, а затем говорит: «Я не расист», когда его зовут Это.
«Независимо от личных взглядов Мельниковой, мне кажется странным, что олимпийское руководство страны комментирует внешность 16-летней спортсменки или что-либо, не имеющее отношения к ее спорту и достижениям, особенно в ответ на ее личный пост в социальных сетях. — говорит Линдси Грин, освещавшая олимпийскую гимнастику для журнала New York , NBC Olympic Talk and Bustle, где она является вице-президентом по корпоративным коммуникациям.
История продолжается
Самый популярный: Россия запускает подводные крылатые ракеты по ИГИЛ под Пальмирой
Мельникова не первая спортсменка, которая подверглась резкой критике из-за своего тела. В 1999 году американская футболистка Брэнди Честейн сорвала футболку, забив победный пенальти на чемпионате мира среди женщин. Образ Честейн, стоящей на коленях на траве в своем черном спортивном бюстгальтере и кричащей в знак празднования, когда ее загорелые, подтянутые руки качались в воздухе, стал культовым феминистским моментом.Критики, конечно, утверждали, что ее поведение было неуместным. В 2012 году и снова в прошлом году золотую медалистку Олимпийских игр Габби Дуглас опозорили в социальных сетях за свои волосы. Недавно Кейтлин Дженнер, олимпийская чемпионка, ранее известная как Брюс Дженнер, подверглась критике из-за своего преобразования. А на прошлой неделе трехкратный призер Олимпийских игр Али Райсман написала в Твиттере о «грубом и неудобном» опыте, который она пережила с двумя агентами TSA в аэропорту. Сначала женщина-агент спросила, гимнастка ли она, объяснив, что узнала ее по бицепсам.Затем агент-мужчина ответил: «Я не вижу никаких мышц».
«Он был очень груб. Смотрел на меня, качая головой, как будто это не мог быть я, потому что я не казался ему «достаточно сильным»? Не круто, — написал Райсман в Твиттере. В другом твите она добавила: «Вы сексист. Преодолей себя. Ты издеваешься надо мной? Сейчас 2017 год. Когда это изменится? »
Не скоро. Вполне возможно, что Мельникова только что стала первой гимнасткой, которую собственный олимпийский комитет осудил за тело.
Больше из Newsweek
CREB ингибирует экспрессию AP-2α, чтобы регулировать злокачественный фенотип меланомы
Абстрактные
Фон
Потеря AP-2α и повышенная активность белка, связывающего цАМФ-чувствительный элемент (CREB), являются двумя отличительными признаками злокачественного прогрессирования меланомы кожи.Однако молекулярный механизм, ответственный за потерю AP-2α во время прогрессирования меланомы, остается неизвестным.
Методология / основные выводы
Здесь мы демонстрируем, что как ингибирование PKA-зависимого фосфорилирования CREB, так и подавление экспрессии CREB с помощью shRNA восстанавливают экспрессию белка AP-2α в двух линиях метастатических клеток меланомы. Более того, восстановление экспрессии CREB в линиях клеток с подавленным CREB подавляет экспрессию AP-2α. Потеря экспрессии AP-2α при метастатической меланоме происходит по двойному механизму, включающему связывание CREB с промотором AP-2α и индуцированную CREB избыточную экспрессию другого онкогенного фактора транскрипции, E2F-1.Повышение экспрессии AP-2α после подавления CREB увеличивает эндогенный p21 Waf1 и снижает MCAM / MUC18, оба, как известно, являются нижележащими генами-мишенями AP-2α, участвующими в прогрессировании меланомы.
Выводы / Значение
Поскольку AP-2α регулирует несколько генов, связанных с метастатическим потенциалом меланомы, включая c-KIT, VEGF, PAR-1, MCAM / MUC18 и p21 Waf1 , наши данные идентифицировали CREB как основной регулятор злокачественной меланомы. фенотип.
Образец цитирования: Мельникова В.О., Добров А.С., Зиглер М., Вилларес Г.Дж., Брауэр Р.Р., Ван Х. и др. (2010) CREB ингибирует экспрессию AP-2α, чтобы регулировать злокачественный фенотип меланомы. PLoS ONE 5 (8): e12452. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012452
Редактор: Роджер Чаммас, Университет Сан-Паулу, Бразилия
Поступила: 3 июня 2010 г .; Одобрена: 4 августа 2010 г .; Опубликован: 27 августа 2010 г.
Авторские права: © 2010 Melnikova et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.
Финансирование: Исследование было поддержано Национальным институтом здравоохранения, грант R01 CA76098 (для M.B-E.). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.
Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.
Введение
Злокачественная меланома — это очень агрессивное заболевание, для которого не разработаны эффективные методы лечения. Ряд генетических изменений, включая потерю белков-супрессоров опухолей, кодируемых локусом гена INK4a / ARF, или онкогенные мутации BRAF, происходят на ранних этапах меланомагенеза [1], [2], [3]. Однако ключевым событием в прогрессировании меланомы в сторону злокачественного, локально-инвазивного и метастатического фенотипа является потеря белка-супрессора опухоли Activator Protein-2α (AP-2α).
AP-2α представляет собой индуцируемый ретиноевой кислотой белок массой 52 кДа, который регулирует экспрессию генов во время эмбрионального морфогенеза и дифференцировки взрослых клеток [4], [5]. При раке, таком как меланома, AP-2α и другие дерегулируемые факторы транскрипции, включая активирующий фактор транскрипции-1/2 (ATF-1/2) / белок связывания с цАМФ-чувствительным элементом (CREB), SNAIL / SLUG, ядерный фактор каппа B (NFκB), преобразователи сигналов и активаторы транскрипции (STAT) 3 и 5, непосредственно контролируют экспрессию молекул адгезии, разрушающих матрикс ферментов, факторов подвижности, цитокинов, факторов выживания и факторов / рецепторов роста, обеспечивая сложные взаимодействия между клетками меланомы и внеклеточная среда во время метастатического распространения [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13].
Исследования на моделях животных помогли продемонстрировать, что инактивация AP-2α в неметастатических первичных клетках меланомы кожи SB2 доминантно-отрицательным AP-2B увеличивает онкогенность клеток меланомы [14]. Напротив, принудительная сверхэкспрессия AP-2α в метастатических клетках меланомы ингибировала рост опухолевых клеток в подкожных участках и подавляла развитие метастазов меланомы в легкие in vivo [15]. Важно отметить, что с помощью микрочипов ткани меланомы и количественного иммунофлуоресцентного анализа мы показали, что экспрессия AP-2α коррелирует с плохим прогнозом у пациентов с меланомой [11], [16].Во многих типах опухолей, включая меланому, AP-2α действует как опухолевый супрессор, активируя экспрессию p21 Waf1 / Cip1 и вызывая остановку клеточного цикла [17], [18], [19]. Потеря AP-2α при метастатической меланоме напрямую связана со сверхэкспрессией молекулы адгезии клеток меланомы MCAM / MUC18, протеазно-активированного рецептора-1 (PAR-1), матриксной металлопротеиназы-2 (MMP-2) и потери тирозинкиназы. рецептор c-KIT [10], [11], [12], [14], [15], [20].
Восстановление AP-2α в клетках рака толстой кишки уменьшало опухолевую нагрузку у мышей и подавляло спонтанные метастазы в печень за счет увеличения соотношения E-кадгерин / ММР-9 [21].Было показано, что сверхэкспрессия AP-2α в клетках рака поджелудочной железы снижает рост опухоли за счет изменения паттерна экспрессии факторов, контролирующих клеточный цикл, таких как CDK-4, CDK-6, Cyclin-G1, p27 kip1 и p57 kip2 [ 22]. В различных клеточных моделях также было показано, что AP-2α регулирует c-erbB-2 / HER2-2 / neu, ингибитор активатора плазминогена типа I (PAI-1), белок-5, связывающий инсулиноподобный фактор роста (IGFBP-5 ), трансформирующий фактор роста-α (TGF-α), фактор роста гепатоцитов (HGF), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и c-Myc [23], [24], [25], [26], [27] ], [28], [29], [30], [31].Несмотря на лучшее понимание механизмов его действия, причина потери AP-2α при меланоме остается неизвестной.
Предыдущие исследования показали обратную корреляцию между потерей опухолевого супрессора AP-2α и повышением экспрессии и активности CREB с прогрессированием меланомы [32], [33]. CREB является членом класса факторов транскрипции лейциновой молнии, который связывается с элементами цАМФ-ответа (CRE), обнаруженными в промоторных и энхансерных областях сотен генов [34].CREB активируется рядом факторов роста, гормонов и стрессовых сигналов, которые запускают его фосфорилирование по Ser133 и его ассоциацию с коактиваторами паралогами CBP и p300 [35], [36]. Коактиваторы, такие как TORC2, ACT и TAF4, могут стабилизировать сборку комплексов коактиваторов над генами-мишенями CREB в определенных типах клеток, тем самым регулируя активность CREB [34], [35], [36], [37].
CREB регулирует экспрессию генов, которые подавляют апоптоз, индуцируют пролиферацию клеток и опосредуют воспаление и метастазирование опухолей, таких как BCL-2, HER-2, IL-8 и MMP-2 [8], [38], [39].При меланоме инактивация CREB доминантно-отрицательным KCREB снижает рост опухоли и экспериментальные метастазы в легкие, действуя как фактор выживания и регулируя экспрессию и активность MMP-2 и молекулы адгезии MCAM / MUC18 [37], [40], [37], [40], [ 41], [42]. Мы продемонстрировали, что активация фосфорилирования CREB при меланоме связана с конститутивной активацией провоспалительных рецепторов, связанных с G-белком, PAR-1 и рецептора фактора активации тромбоцитов [43]. Совсем недавно мы обнаружили, что CREB действует как негативный регулятор гена-супрессора опухоли меланомы, богатого цистеином белка 61 ( CCN1 / CYR61 ) [7].
Перекрытие в спектре генов-мишеней, регулируемых AP-2α и CREB, привело нас к исследованию связи между двумя факторами транскрипции. Здесь мы предлагаем потенциальный механизм, с помощью которого CREB индуцирует репрессию транскрипции AP-2α во время прогрессирования меланомы посредством активации онкогенного E2F-1. Поскольку AP-2α регулирует ключевые гены, связанные с приобретением метастатического фенотипа, наше наблюдение, что CREB регулирует экспрессию AP-2α, подчеркивает его роль в качестве «главного переключателя» в прогрессировании меланомы.
Результаты
Потеря экспрессии AP-2α коррелирует с метастатическим потенциалом клеточных линий меланомы
Чтобы изучить механизм потери AP-2α во время прогрессирования меланомы, мы сначала исследовали статус AP-2α с помощью RT-PCR в панели линий клеток меланомы человека, демонстрирующих различные метастатические способности. Фигура 1A демонстрирует, что AP-2α экспрессируется в неметастатических клеточных линиях SB2 и DX3, в то время как обе линии метастатических клеток меланомы A375SM и C8161-c9 не экспрессируют детектируемые уровни мРНК AP-2α.Кроме того, уровни экспрессии белка AP-2α определяли с помощью вестерн-блоттинга. Точно так же AP-2α обнаруживался в ядрах SB2 и DX3, тогда как AP-2α отсутствовал как в A375SM, так и в C8161-c9 (рис. 1B).
Рисунок 1. Экспрессия AP-2 α обратно коррелирует с метастатическим потенциалом меланомы.
(A) Экспрессию мРНК AP-2α в клеточных линиях меланомы человека детектировали с помощью ПЦР с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР). Высокие уровни экспрессии AP-2α наблюдаются в SB2 и DX3 (неметастатические клеточные линии), тогда как A375SM и C8161-c9 (метастатические клеточные линии) показывают неопределяемые уровни AP-2α.PcDNA3.1 AP-2α использовали в качестве положительного контроля. МРНК глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH) использовали в качестве гена домашнего хозяйства. (B) Вестерн-блоттинг ядерных экстрактов, выделенных из субконфлюэнтных культур и проанализированных на экспрессию белка AP-2α. Аналогичным образом белок AP-2α обнаруживается в неметастатических клеточных линиях. Было обнаружено, что в линиях метастатических клеток экспрессия AP-2α подавляется на 99%. Ламин использовался в качестве контроля загрузки. (C) Клеточные линии SB2 и C8161-c9 иммунофлуоресцентно окрашивали для обнаружения AP-2α (красный).Совместная локализация с DAPI (синий) и AP-2α выявляет высокую интенсивность AP-2α в ядрах клеток SB2, в то время как низкие уровни AP-2α обнаруживаются в цитоплазме клетки C8161-c9.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012452.g001
Ранее мы показали, что потеря ядерного AP-2α и увеличение соотношения цитоплазматического и ядерного AP-2α коррелируют с плохим прогнозом пациентов с меланомой [ 11], [16]. Чтобы подтвердить, повторяется ли этот фенотип в клеточных линиях меланомы, мы исследовали субклеточную локализацию AP-2α в культивируемых клеточных линиях с помощью иммунофлуоресценции.В соответствии с нашими предыдущими находками на образцах меланомы человека мы обнаружили, что белок AP-2α экспрессируется в ядрах неметастатических клеток SB2, но почти отсутствует в метастатических клетках C8161-c9 (рис. 1C). Это наблюдение было подтверждено на панели из 9 дополнительных клеточных линий с различным метастатическим потенциалом (данные не показаны).
Фосфорилирование CREB коррелирует с метастатическим потенциалом линий клеток меланомы и обратно коррелирует с экспрессией AP-2α
Некоторые факторы, участвующие в инвазии меланомы, устойчивости к апоптозу и пролиферации, такие как MMP-2, MCAM / MUC18, BCL-2 и TGF-α, регулируются как CREB, так и AP-2α, хотя и противоположным образом [8], [33], [37].Поэтому мы проверили гипотезу о том, что усиление активности CREB приводит к потере экспрессии AP-2α при меланоме. Анализ экспрессии белка CREB с помощью вестерн-блоттинга показывает, что, хотя уровни общего белка CREB остаются одинаковыми во всех линиях клеток меланомы, уровни его фосфорилирования по серину 133 (pCREB), критическому функциональному сайту фосфорилирования, были значительно выше (примерно в 5 раз). увеличение) в линиях клеток метастатической меланомы (A375SM и C8161-c9) по сравнению с линиями клеток неметастатической меланомы (SB2 и DX3) (рис. 2A).Кроме того, мы оценили уровни pCREB с помощью конфокальной микроскопии как в SB2, так и в C8161-c9. Как показано на рисунке 2B, была обнаружена высокая интенсивность pCREB в ядрах клеток C8161-c9 (низкий AP-2α), тогда как pCREB в основном не обнаруживалась в ядрах клеток SB2 (высокое AP-2α), что подтверждает наш Вестерн-блоттинг.
Рисунок 2. Ингибирование pCREB приводит к увеличению экспрессии AP-2α.
(A) pCREB анализировали в неметастатических и метастатических клеточных линиях методом вестерн-блоттинга.Как подтверждено денситометрией, pCREB в линиях метастатических клеток примерно в 5 раз выше по сравнению с линиями неметастатических клеток. α-Актин используется в качестве контроля нагрузки. (B) Клеточные линии SB2 и C8161-c9 иммунофлуоресцентно окрашивали для обнаружения pCREB (красный). Совместная локализация с DAPI (синий) и pCREB выявляет высокую интенсивность pCREB в ядрах клеток C8161-c9 (низкий AP-2α), в то время как низкий уровень pCREB в основном не обнаруживается в ядрах клеток SB2 (высокий AP-2α). (C) Экспрессия AP-2α была обнаружена в клеточных линиях A375SM и C8161-c9 после инкубации с ингибитором pCREB, H-89.Полное восстановление экспрессии AP-2α наблюдалось в обеих клеточных линиях после обработки H-89 в концентрации 10 мМ. Ламин использовался в качестве контроля загрузки.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012452.g002
Чтобы проверить, приводит ли активация CREB к потере экспрессии AP-2α, мы ингибировали фосфорилирование CREB в клетках A375SM и C8161-c9 с помощью нескольких ингибиторов киназ. такие как H-89 (путь PKA / MSK), KN-93 (путь CaMKIV), SL0101-1 (путь p90RSK) и трицирибин (путь Akt).H-89 восстанавливал общие уровни экспрессии AP-2α (фиг. 2C) и индуцировал накопление AP-2α в ядрах клеток A375SM и C8161-c9 (данные не показаны). KN-93, SL0101-1 и трицирибин ингибировали фосфорилирование CREB аналогично H-89, что приводило к повышенной экспрессии AP-2α (рисунок S1), что позволяет предположить, что активация CREB во время метастатического прогрессирования приводит к потере AP-2α. выражение.
CREB действует как негативный регулятор транскрипции экспрессии AP-2α
Чтобы подтвердить, что восстановление AP-2α является специфическим для CREB, мы стабильно подавляли экспрессию CREB в линиях метастатических клеток A375SM и C8161-c9 с использованием лентивирусной малой шпилечной РНК (shRNA), как описано ранее [7].Фигура 3A демонстрирует, что экспрессия CREB была снижена на 90% и 80% в клетках A375SM и C8161-c9, соответственно, по сравнению с клетками, трансдуцированными нецелевой кшРНК (NTshRNA). В соответствии с использованием ингибиторов пути для уменьшения pCREB, подавление CREB посредством shRNA привело к усилению экспрессии AP-2α в обеих линиях метастатических клеток меланомы, подтверждая, что CREB действительно действует как негативный регулятор AP-2α (Рисунок 3A).
Рис. 3. Подавление CREB увеличивает экспрессию AP-2α и активность промотора.
(A) Вестерн-блоттинг, показывающий подавление CREB как в клетках A375SM, так и в клетках C8161-c9, стабильно трансдуцированных кшРНК CREB, по сравнению с нецелевым контролем (NTshRNA). Приблизительно 80–90% подавление CREB наблюдалось в клетках, трансдуцированных CREB shRNA по сравнению с NTshRNA, как определено денситометрией. После подавления CREB уровни экспрессии AP-2α повышались в линиях клеток как A375SM, так и C8161-c9, как обнаружено с помощью вестерн-блоттинга. α-Актин использовали в качестве контроля загрузки для образцов общего лизата.Ламин используется в качестве контроля загрузки ядерных фракций. (B) Область промотора AP-2α (нуклеотиды от -1,500 до +50 от сайта инициации транскрипции) амплифицировали из геномной ДНК и клонировали в вектор pGL3-основной люциферазы светлячка. На схематическом изображении промоторной области показаны предполагаемые сайты связывания CREB и E2F-1. Активность люциферазы, управляемая промотором AP-2α, была значительно увеличена в 90 и 20 раз после подавления CREB в линиях клеток A375SM и C8161-c9 соответственно по сравнению с клетками, трансдуцированными NT.*, р <0,001. Клетки SB2 использовали в качестве положительного контроля. (C) Восстановление экспрессии CREB в CREB-молчащих клетках привело к подавлению экспрессии AP-2α. α-Актин использовали в качестве контроля нагрузки. (D) Активность люциферазы, управляемая промотором AP-2α, значительно снизилась (*, p <0,001) после восстановления экспрессии CREB в линиях клеток как A375SM, так и C8161-c9. NTshRNA / EV, нецелевые контрольные клетки. CREBshRNA / EV, CREB-молчащие контрольные клетки. CREBshRNA / RESCUED, CREB-молчащие клетки, трансдуцированные нецелевым экспрессионным вектором CREB.(E) Исследования иммунопреципитации хроматина (ChIP) показали снижение связывания CREB с промотором AP-2α в обеих линиях клеток с подавленным CREB (A375SM и C8161-c9) по сравнению с клеточными линиями, трансдуцированными NT. Антитела IgG использовали в качестве отрицательного контроля. Исходная ДНК использовалась для определения равных количеств хроматина. (F) Анализ образования колоний, проведенный в слое мягкого агара, показывает значительное снижение клоногенности после подавления CREB как в A375SM, так и в C8161-c9. *, р <0,001.
https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0012452.g003
Затем мы проанализировали промоторную область (2Kb) гена AP-2α человека (номер доступа в GenBank NM_003220.2). Анализ промотора AP-2α на консенсусные мотивы связывания факторов транскрипции с использованием программного обеспечения Genomatix выявил наличие трех ранее неидентифицированных предполагаемых CRE-подобных сайтов в положениях -1,450 п.н. (ACTTAAAA), -1,132 п.н. (ACACGTCT) и -962 п.н. (AAGTAACC). проксимальная область промотора AP-2α (рис. 3B — схематическое изображение). Кроме того, мы также обнаружили один сайт связывания для онкогенного фактора транскрипции E2F-1 в положении -685bp (GGGCCAAA) проксимального промотора AP-2α (рис. 3B).Чтобы подтвердить, что CREB регулирует экспрессию AP-2α на уровне транскрипции, мы клонировали промотор AP-2α перед репортерным геном люциферазы. Отражая характер экспрессии мРНК AP-2α (рис. 1A), активность промотора AP-2α была значительно выше в неметастатических клетках SB2 по сравнению с метастатическими клетками A375SM и C8161-c9, трансдуцированными NTshRNA (рис. 3B). Активность люциферазы, управляемая промотором AP-2α, увеличивалась после подавления CREB в 90 раз ( p <0,001) в A375SM и в 20 раз ( p <0.001) в клетках C8161-c9 по сравнению с активностью в контрольных клетках NTshRNA (фиг. 3B).
Для дальнейшего установления связи между экспрессией CREB и AP-2α, мы затем спасли экспрессию CREB в обеих линиях клеток с подавленным CREB путем сверхэкспрессии CREB, в которой были введены молчащие мутации, чтобы сделать его нецелевым для шРНК CREB (рис. 3C). Вестерн-блот-анализ этих клеток показал, что восстановление CREB привело к восстановлению экспрессии CREB до уровней, сопоставимых с уровнями в контрольных клетках (NTshRNA / EV).Восстановление экспрессии CREB в этих клетках также привело к снижению экспрессии AP-2α (рис. 3C) и снижению активности люциферазы, управляемой промотором AP-2α (рис. 3D). Более того, мы стремились подтвердить, что ингибирование AP-2α зависит от фосфорилирования CREB. С этой целью мы создали миссенс-мутацию в положении 133 (S → A), основном сайте фосфорилирования CREB [34], в нецелевом векторе экспрессии (CREB (S133A) ). Вестерн-блоттинг этих клеток показал, что вектор экспрессии CREB (S133A) восстанавливает общий уровень CREB.Однако этот мутант не смог снизить экспрессию AP-2α ни в одной из линий клеток с подавленным CREB (рис. S2).
Чтобы подтвердить, что CREB связывается с промотором AP-2α, мы затем использовали иммунопреципитацию хроматина (ChIP) с праймерами, разработанными для амплификации 5′-фланкирующей последовательности гена AP-2α, которая содержит 3 предполагаемых CRE-подобных сайта связывания (рис. 3E). Мы обнаружили, что CREB напрямую связывается с промотором AP-2α в клетках A375SM и C8161-c9 NTshRNA. Это связывание было значительно снижено после подавления CREB в обеих клеточных линиях (рис. 3E).
Кроме того, как CREB, так и AP-2α, как было показано, регулируют экспрессию генов, участвующих в пролиферации клеток [8]. Ранее мы продемонстрировали, что сверхэкспрессия AP-2α в клетках рака толстой кишки снижает их способность образовывать колонии в агаре [21]. Следовательно, чтобы понять вклад CREB в рост и метастазирование меланомы, мы затем оценили эффект сайленсинга CREB на клоногенность метастатических клеток меланомы. Как видно на фиг. 3F, как A375SM, так и C8161-c9, стабильно трансдуцированные кшРНК CREB, имели значительное уменьшение размера и количества колоний через 25 дней по сравнению с клетками NTshRNA.Среднее количество колоний значительно уменьшилось на 62% в клетках A375SM ( p <0,001) и на 49% в клетках C8161-c9 ( p <0,001). Взятые вместе, наши данные предполагают, что CREB регулирует транскрипцию AP-2α в клетках меланомы посредством прямого связывания с его промотором, тем самым подавляя экспрессию AP-2α и его роль супрессора опухолей.
E2F-1 действует как негативный регулятор активности промотора AP-2α и экспрессии ниже CREB
Мы ранее подвергали CREB-молчащие клетки A375SM анализу микрочипов кДНК, чтобы идентифицировать нижестоящие гены-мишени, регулируемые CREB в меланоме [7].Эксперименты с кДНК-микрочипами показали, что E2F-1 является одним из генов, экспрессия которого снижается за счет подавления CREB. Поскольку на промоторе AP-2α присутствует несколько сайтов связывания E2F-1, мы исследовали гипотезу о том, что E2F-1 действует ниже CREB и что вместе CREB и E2F-1 регулируют экспрессию AP-2α. Действительно, подавление CREB привело к снижению экспрессии белка E2F-1 в обеих клеточных линиях на 60% (A375SM) и 80% (C8161-c9), что подтверждает наши результаты микроматрицы кДНК (рис. 4A).
Рисунок 4. E2F-1 регулирует транскрипцию AP-2α путем прямого связывания с промотором AP-2α.
(A) Вестерн-блоттинг показывает подавление E2F-1 как в CREB-замалчивающих клетках A375SM, так и в C8161-c9 на 60% и 80% соответственно по сравнению с нецелевым контролем (NTshRNA). Актин используется как средство контроля загрузки. (B) Экспрессию E2F-1 анализировали с помощью вестерн-блоттинга в экстрактах общих клеток SB2, DX3 (низкометастатический), A375SM и C8161-c9 (высокометастатический). Более низкая экспрессия E2F-1 обнаруживается в неметастатических клеточных линиях, тогда как в метастатических клеточных линиях E2F-1 активируется.Актин использовался в качестве контроля загрузки. (C) Временная экспрессия E2F-1 значительно снизила уровни белка AP-2α в клетках SB2 на 90%. (D) Активность люциферазы, управляемая промотором AP-2α, была значительно снижена после временной экспрессии E2F-1 в клеточной линии SB2 (высокая экспрессия AP-2α, низкая экспрессия E2F-1) по сравнению с одной pcDNA3.1. *, р <0,001. (E) Анализы иммунопреципитации хроматина (ChIP) показали снижение связывания E2F-1 с промотором AP-2α в обеих линиях клеток с подавленным CREB (A375SM и C8161-c9) по сравнению с клеточными линиями, трансдуцированными NT.Антитела IgG использовали в качестве отрицательного контроля. Исходная ДНК использовалась для определения равных количеств хроматина. (F) Схематическое изображение точечных мутаций промотора изображено на левой стороне панели. Три идентифицированных CRE-подобных сайта связывания, а также сайт связывания E2F-1 были мутированы, как описано в разделе «Материалы и методы». Мутация одного CREB-подобного сайта связывания (-962), а также сайта связывания E2F-1 привела к значительному увеличению активности промотора AP-2α как в родительских клетках A375SM, так и в C8161-c9.* p , <0,01.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012452.g004
Чтобы оценить статус E2F-1 во время прогрессирования меланомы, мы провели вестерн-блоттинг-анализ неметастатических и метастатических клеточных линий меланомы. Как показано на фиг. 4B, было обнаружено, что E2F-1 активируется в A375SM и C8161-c9 по сравнению с неметастатическими клеточными линиями SB2 и DX3. Чтобы исследовать, вносит ли E2F-1 вклад в регуляцию экспрессии AP-2α, мы временно трансфицировали E2F-1 в AP-2α-положительную клеточную линию SB2.Сверхэкспрессия E2F-1 привела к значительному подавлению экспрессии белка AP-2α на 90% в клетках SB2 (рис. 4C). Как и ожидалось, сверхэкспрессия E2F-1 в AP-2α-отрицательных клетках A375SM не влияла на уровни AP-2α (данные не показаны). Потеря белка AP-2α в клетках SB2 дополнительно сопровождалась значительным 4-кратным снижением активности промотора AP-2α при сверхэкспрессии E2F-1 (фиг. 4D, p <0,001).
Чтобы подтвердить, что E2F-1 регулирует транскрипцию AP-2α посредством прямого связывания с его промотором, мы провели еще одну серию экспериментов с ChIP с использованием праймеров ChIP, расположенных близко к сайту связывания E2F-1.Мы обнаружили, что в клетках метастатической меланомы E2F-1 активно связывает промотор AP-2α. Кроме того, подавление CREB ингибировало связывание E2F-1 с промотором AP-2α как в клетках A375SM, так и в клетках C8161-c9 (рис. 4E).
Наконец, чтобы убедиться, что CREB-подобные сайты, а также сайт E2F-1 внутри промотора AP-2α участвуют в регуляции транскрипции AP-2α, мы изменили каждый сайт связывания путем введения точечных мутаций. Мутация элемента CREB в положении -962 и элемента E2F-1 в положении -685 (рис. 4F) привела к значительному увеличению репортерной активности, управляемой промотором AP-2α, в родительских клетках A375SM и C8161-c9 (рис. 4F). ).Интересно, что при анализе CREB-подобных сайтов в положении -1450 и -1132 не было обнаружено значительных различий в репортерной активности (Figure 4F). В целом, эти сайт-ориентированные анализы мутаций выявили, что сайт CREB, расположенный в -962, и сайт E2F-1, расположенный в -685 в промоторной области AP-2α, важны для регуляции транскрипции AP-2α.
В совокупности наши результаты предполагают, что CREB регулирует экспрессию AP-2α двумя путями: 1) путем прямого связывания промотора AP-2α и подавления его активности, и 2) путем стимуляции экспрессии E2F-1, который также связывается с AP- 2α и подавляет его активность.
Повышение AP-2α восстанавливает неметастатический фенотип меланомы путем регулирования p21
Waf1 и MCAM / MUC18Поскольку AP-2α регулирует несколько генов, участвующих в прогрессировании меланомы человека [12], [15], [33], мы стремились определить, вызывает ли повторная экспрессия AP-2α после сайленсинга CREB обратную экспрессию AP-2α ниже по течению. гены-мишени.
Ранее было показано, что форсированная экспрессия AP-2α приводит к временной транскрипционной активации экспрессии p21 Waf1 и сопутствующей остановке клеточного цикла [19].Кроме того, мы показали, что усиление экспрессии MCAM / MUC18 в метастатических клетках коррелирует с потерей экспрессии AP-2α. Действительно, мы также показали, что AP-2α регулирует экспрессию MCAM / MUC18 посредством прямого связывания с его промотором, подавляя онкогенность и метастатический потенциал клеток меланомы человека [12].
Фигура 5A демонстрирует, что p21 Waf1 экспрессируется в неметастатических клеточных линиях SB2 и DX3, но он подавляется в клеточных линиях метастатической меланомы A375SM и C8161-c9.Кроме того, CREB-молчащие линии клеток A375SM и C8161-c9 демонстрируют повышающую регуляцию экспрессии p21 Waf1 в 9 и 3 раза соответственно по сравнению с клетками, трансдуцированными NT shRNA (фиг. 5B). С другой стороны, MCAM / MUC18, который, как было показано, активируется в линиях клеток метастатической меланомы [43], [44], [45], как было обнаружено, значительно подавляется на 90% в обеих линиях клеток после подавления CREB ( Рисунок 5C).
Фиг. 5. Повышающая регуляция AP-2α в метастатической меланоме после подавления CREB модулирует экспрессию p21 Waf1 и MCAM / MUC18.
(A) Экспрессия p21 Waf1 в панели линий клеток меланомы с различным метастатическим потенциалом. (B) экспрессия p21 Waf1 была повышена в двух линиях клеток A375SM и C8161-c9 с подавленным CREB. (C) MCAM / MUC18 подавлялась на 90% в линиях клеток A375SM и C8161-c9 после подавления CREB. Актин использовался в качестве контроля нагрузки.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012452.g005
В целом эти эксперименты раскрывают связь между AP-2α и CREB, тем самым устанавливая новый молекулярный механизм, с помощью которого CREB вызывает репрессию транскрипции AP-2α через активация E2F-1.Эти исследования предоставляют еще один механизм, с помощью которого CREB способствует приобретению злокачественного фенотипа меланомы человека.
Обсуждение
Прогрессирование меланомы связано с несколькими молекулярными изменениями, включая CCN1 / CYR61, MCAM / MUC18 и PAR-1 [7], [8], [44], [46]. Мы показали, что одним из основных переключателей, связанных с прогрессированием меланомы, является потеря экспрессии транскрипционного фактора AP-2α [15]. Однако молекулярный механизм, с помощью которого AP-2α подавляется во время меланогенеза, не выяснен.
В начале 80-х и середине 90-х годов несколько исследований показали, что отсутствие экспрессии или подавление активности AP-2α в клетках злокачественной меланомы можно объяснить делецией дистальной части длинного плеча хромосомы 6 [47], [48] ], [49] или с аномалиями в коротком плече хромосомы 6 (6p), рядом с локусом HLA, в котором картирован ген AP-2α [48], [50]. Хотя повторное введение хромосомы 6 в метастатические клетки меланомы подавляет их онкогенность и метастатический потенциал [51], [52], [53], статус AP-2α не выяснен.Таким образом, ранее мы показали с помощью количественного анализа микромассивов тканей меланомы, что потеря ядерной экспрессии AP-2α была связана со злокачественной трансформацией и прогрессированием меланомы и что высокое соотношение цитоплазмы к ядру AP-2α коррелирует с плохим прогнозом [11], [16]. Подтверждая данные тканевого микрочипа, наше текущее исследование дополнительно показывает обратную корреляцию между экспрессией AP-2α и метастатическим потенциалом клеточных линий меланомы [11], [16], [54].
AP-2α играет ключевую роль в регуляции экспрессии нескольких генов, участвующих в пролиферации клеток (HER2), регуляции цикла (p21 Waf1 ), апоптоза (c-KIT, Bcl-2, FAS / APO-1) , адгезия (E-кадгерин) и инвазия / ангиогенез (MMP-2, VEGF) [8], [15], [33].Недавно было показано, что сверхэкспрессия AP-2α в клетках рака поджелудочной железы снижает рост опухоли за счет изменения паттерна экспрессии факторов, контролирующих клеточный цикл, таких как CDK-4, CDK-6, циклин-G1, p27 kip1 и p57 kip2 [22]. Кроме того, некоторые из генов, регулируемых AP-2α при меланоме, такие как MCAM / MUC18 и MMP-2, также регулируются фактором транскрипции CREB [8], [37]. Интересно, что мы продемонстрировали, что AP-2α подавляется с одновременным увеличением экспрессии CREB во время прогрессирования меланомы [55].Имея это в виду, мы показали, что инактивация AP-2α доминантно-отрицательным AP-2α (AP-2B) в неметастатических клетках SB2 увеличивает онкогенность клеток у мышей nude [14]. Более того, сверхэкспрессия AP-2α в метастатических клетках меланомы уменьшала рост опухоли и экспериментальные метастазы в легкие за счет подавления вышеописанных факторов [20].
В нашем текущем исследовании ингибирование p-CREB с помощью H-89 значительно восстановило уровни AP-2α, а также его транслокацию в ядро, что привело нас к гипотезе о том, что CREB участвует в регуляции AP-2α при меланоме. .Чтобы изучить механизм, с помощью которого CREB регулирует экспрессию AP-2α, мы стабильно трансдуцировали линии клеток метастатической меланомы с помощью shRNA, нацеленной на CREB. Подобно лечению H-89, подавление CREB привело к значительному усилению экспрессии AP-2α. Кроме того, активность репортерного гена люциферазы, управляемого промотором AP-2α (от -1,500 до +50 пар оснований), повышалась после подавления CREB. Предыдущая работа показала, что промотор AP-2α не содержит никаких мотивов канонической последовательности для основных факторов транскрипции, таких как TATA-, CCAAT или SP-1 боксы [56].Более того, инициация транскрипции происходит непосредственно перед длинной TC-богатой областью между остатками -240 и -100. Дальнейший анализ также показал, что промотор гена AP-2α подвергается положительной ауторегуляции с помощью своего собственного генного продукта [56]. Кроме того, наш анализ промотора AP-2α выявил предполагаемые консенсусные сайты связывания для факторов транскрипции CREB и E2F-1.
Здесь мы демонстрируем, что уровни экспрессии E2F-1 также подавлялись после подавления CREB в линиях клеток A375SM и C8161-c9.Однако не было описано, регулирует ли CREB экспрессию E2F-1 на уровне транскрипции во время прогрессирования меланомы. Семейство факторов транскрипции E2F неразрывно связано с контролем клеточного цикла и апоптозом. E2F координирует большую группу генов, участвующих в регуляции перехода из G1 в S-фазу, а также другие гены, участвующие в апоптозе [57], [58], [59]. И наоборот, исследования хорошо охарактеризованного E2F-1 показали, что он может обладать характеристиками как онкогена, способствуя пролиферации клеток за пределы их нормальных ограничений, так и как опухолевый супрессор [60], [61], [62], [63].Недавно подавление E2F-1 эффективно ингибировало прогрессирование рака желудка за счет уменьшения пролиферации клеток и увеличения апоптоза [64], что указывает на онкогенную функцию.
Наши анализы ChIP предоставляют дополнительные механистические доказательства того, что CREB и E2F-1 отрицательно влияют на транскрипцию AP-2α, связываясь с его промотором и ингибируя его активность. Фактически, принудительная экспрессия E2F-1 в клетках SB2 снижает экспрессию AP-2α, а также активность люциферазы, управляемую промотором AP-2α.Эти данные предполагают, что сам E2F-1 может подавлять транскрипцию AP-2α, тем самым открывая новую мощную мишень для терапии меланомы.
Наконец, мы подтвердили, что повышающая регуляция AP-2α после подавления CREB является функциональной и может модулировать экспрессию p21 Waf1 и MCAM / MUC18. Ранее было показано, что AP-2α активирует p21 Waf1 , что приводит к ингибированию синтеза клеточной ДНК и образованию стабильных колоний в клетках карциномы толстой кишки [17].Более того, значимая корреляция между экспрессией AP-2α и уровнями p21 Waf1 была обнаружена при раке груди и кожной злокачественной меланоме I стадии [65], [66]. Ранее мы показали, что уровень экспрессии MCAM / MUC18 в меланоме напрямую коррелирует с прогрессированием опухоли и приобретением метастатического потенциала, поскольку он транскрипционно регулируется как AP-2α, так и CREB [12]. Наши данные показывают значительную повышающую регуляцию экспрессии p21 Waf1 вместе со сниженной экспрессией MCAM / MUC18 после подавления CREB и экспрессии AP-2α, тем самым подтверждая функциональную модуляцию AP-2α с помощью CREB.
В совокупности мы предлагаем новый молекулярный механизм, с помощью которого онкогенные факторы транскрипции, CREB и E2F-1, вносят вклад в метастатический фенотип меланомы, негативно регулируя экспрессию AP-2α на уровне транскрипции.
Материалы и методы
Клеточные линии, условия культивирования и лечение
Все клеточные линии, использованные в этом исследовании, являются признанными клеточными линиями. Клеточная линия меланомы человека A375SM [67] была ранее создана из объединенных метастазов легких, продуцируемых клетками A375-P, инъецированными i.v. на мышей nude и поддерживали в MEM Игла с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), как описано ранее [20]. Обе неметастатические клеточные линии, SB2 [68] и DX3 [69], поддерживались в MEM Игла с добавлением 10% FBS. Амеланотическая линия агрессивных клеток меланомы человека C8161-c9 [70] поддерживалась в среде DMEM-F12 с добавлением 5% FBS. Клетки 293FT (Invitrogen), используемые для получения лентивирусной кшРНК, поддерживали в среде DMEM с добавлением 10% FBS в соответствии с инструкциями производителя.Для экспериментов с использованием ингибиторов H-89 (Calbiochem), KN-93 (Sigma-Aldrich), SL0101-1 (TOCRIS Bioscience) или трицирибина (Sigma-Aldrich) клетки лишали сыворотки в течение 24 часов, а затем обрабатывали IC . 50 из 10 мкМ, 0,5 мкМ, 1 мкМ и 10 мкМ соответственно в течение 24 часов.
Лентивирусная шРНК к CREB
кшРНК CREB (целевая последовательность: 5′-GAGAGAGGTCCGTCTAATG-3 ‘) и ненаправленная кшРНК (целевая последовательность: 5′-UUCUCCGAACGUGUCACGU-3’) были получены, как описано ранее [7].Клеточные линии метастатической меланомы A375SM и C8161-c9, высеянные при 70% конфлюэнтности в шестилуночные планшеты, трансдуцировали вирусом. Через 16 часов вирусосодержащая среда была удалена и заменена нормальной питательной средой [7].
Нецелевой вектор экспрессии CREB
Лентивирусный нецелевой экспрессионный вектор CREB был создан, как описано в другом месте [7]. Чтобы спасти экспрессию CREB в стабильно подавленных CREB клетках, A375SM и C8161-c9 CREB-shRNA или NT-shRNA помещали в 6-луночные планшеты и трансдуцировали вирусом, содержащим либо нетаргетируемый вектор экспрессии CREB, либо пустой вектор.Через 48 ч клетки повторно засевали и отбирали, как описано ранее [7]. Экспрессия CREB была подтверждена вестерн-блоттингом.
Вестерн-блоттинг
CREB, pCREB, E2F-1 и p21 Waf1 были обнаружены в общих экстрактах клеток (20 мкг), тогда как AP-2α был обнаружен в ядерной фракции (20 мкг) с помощью электрофореза в 10% SDS-полиакриламидном геле и перенесен в Мембрана для переноса Immobilon P (Millipore). Мембраны промывали трис-буферным солевым раствором с твином (10 мМ Трис-HCl, pH 8, 150 мМ NaCl и 0.05% Tween 20) и заблокировали в течение ночи при 4 ° C 5% обезжиренным молоком в трис-буферном физиологическом растворе с Tween. Затем блоты зондировали в течение ночи при 4 ° C с первичными антителами при 1-2000 (анти-CREB, Cell Signaling), 1-2000 (анти-pCREB Cell Signaling), 1-2000 (анти-E2F-1, Santa Cruz). , 1-2000 (анти-p21, Cell Signaling) и 1-2000 (анти-AP-2α, Санта-Крус). После 2 ч инкубации с вторичным антителом, конъюгированным с пероксидом хрена, иммунореактивные белки детектировались с помощью усиленной хемилюминесценции в соответствии с инструкциями производителя (система обнаружения ECL; Amersham Biosciences).Для AP-2α в ядерном экстракте A375SM и C8161-c9 были приготовлены в соответствии с инструкциями производителя (Nuclear Extraction Kit, Panomics). Концентрации белка определяли с помощью анализа белка Брэдфорда (Bio-Rad).
Конструкции векторов экспрессии
Суммарную РНК экстрагировали из A375SM и подвергали обратной транскрипции (RT) с использованием коммерческого набора (Clontech). PcDNA3.1 для AP-2α получали, как описано ранее [10]. ORF E2F-1 амплифицировали с помощью ПЦР из продукта RT с помощью следующих двух праймеров: E2F-1-Nhe-F: 5′-CTAGCTAGCATGGCCTTGGCCGGGGCCCCTGCCGGGGCCCCTGCGGGGCCCCTGCGC-3 ‘и E2F-1-R: 5’-TCAGAAATCCAGGGGGGTGAGGTCC.PcDNA3.1 для нецелевого вектора экспрессии CREB была получена, как описано ранее [7]. Для создания вектора экспрессии CREB, содержащего миссенс-мутацию в положении 133 (S → A, CREB (S133A) ), мы использовали следующие два праймера: CreB-S133A-F 5′- CTTTCAAGGAGGCCTGCCTACAGGAAAATTTTG-3 ‘и CreB-S133A-R 5’-CAAAATTTTCCTGTAGGCAGGCCTCCTTGAAAG-3 ‘. Продукты ПЦР обрабатывали NheI и клонировали в pcDNA3.1 через тот же сайт рестрикционного фермента. Вставленная ORF была подтверждена секвенированием.Временные трансфекции выполняли с использованием Lipofectamine 2000 (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. В качестве контроля клетки трансдуцировали пустым вектором pcDNA3.1.
Репортерные конструкции и анализы активности люциферазы
Промоторная область AP-2α (нуклеотиды от -1,500 до +50 от сайта инициации транскрипции) была амплифицирована из геномной ДНК клетки A375SM и лигирована в базовый вектор pGL3 (Promega). Анализ сайтов связывания факторов транскрипции проводили с использованием программного обеспечения GENOMATIX (http: // www.genomatix.de). Сайт-направленный мутагенез сайтов CRE, а также сайта связывания E2F-1 выполняли с использованием набора QuikChange II XL Site-Directed Mutagenesis Kit (Stratagene) в соответствии с инструкциями производителя. Транзиторные трансфекции выполняли, как описано ранее [7]. Вкратце, всего 2,5 × 10 4 клеток / лунку в 24-луночном планшете трансфицировали 0,8 мкг основного вектора экспрессии pGL3 без промотора или энхансерной последовательности или 0,8 мкг люциферазы светлячка pGL3-AP-2α. конструкции выражения.Для каждой трансфекции было включено 2,5 нг управляемой цитомегаловирусом (CMV) репортерной конструкции ренил-люциферазы (pRL-CMV, Promega). Через 4 часа среду для трансфекции заменяли ростовой средой, содержащей сыворотку. Через 48 часов клетки собирали и подвергали лизису, и активность люциферазы анализировали с использованием системы анализа двойных люциферазных репортеров (Promega) в соответствии с инструкциями производителя. Люминесценцию люциферазы (относительная интенсивность света × 10 6 ) измеряли с помощью считывающего устройства LUMIstar (BMG Labtech).Отношение активности люциферазы светлячков к активности люциферазы рениллы, управляемой CMV, использовали для нормализации различий в эффективности трансфекции между образцами.
Анализ иммунопреципитации хроматина (ChIP)
ChIP-анализов проводили с использованием набора ChIP-IT Express от Active Motif в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, клетки фиксировали 1% формальдегидом. Реакцию сшивания останавливали 0,125 М глицином. Клетки осаждали и ресуспендировали в гипотоническом буфере, и ядра клеток выделяли с использованием гомогенизатора Даунса.Затем хроматин был разрезан на мелкие фрагменты путем добавления ферментативного раствора в течение 10 минут при 37 ° C. Фракции растворов хроматина инкубировали в течение ночи при 4 ° C с 3 мкг контрольных антител против CREB, против E2F-1 или IgG, сшитых с магнитными шариками. Затем иммунные комплексы элюировали с магнитных шариков, и белки подвергали обратному сшиванию при 65 ° C в течение 2,5 часов. Белки расщепляли 2 мкл протеиназы К при 37 ° C в течение 1 часа, экстрагировали в буфере для элюции и анализировали с помощью ПЦР.Фрагмент длиной 609 п.н., охватывающий область от -1559 до -850 промотора AP-2α, амплифицировали с помощью ПЦР с использованием последовательностей праймеров прямого 5′-GCTCAGCCAGGAAAATTAATTACTCTG-3 ‘и обратного 5′-CAGGTTGGAGATTCTGCCAAGCGGCTC-3’. Другой фрагмент длиной 135 п.н., охватывающий область от -743 до -549 промотора AP-2α, также был амплифицирован с помощью ПЦР с использованием последовательностей праймеров прямого и 5′-GGTGGTTATGTTTAATTGCGAAAGG-3 ‘и обратного 5′-GGCATCTCTGGAGAAAAGGAAGC-3’.
Полуколичественная обратная транскриптаза-ПЦР
Один микрограмм общей РНК подвергали обратному праймированию олиго (dT) праймером и удлиняли обратной транскриптазой вируса мышиного лейкоза Молони (Clontech).ПЦР выполняли с использованием набора для ПЦР кДНК Clontech Advantage в 50 мкл реакционной смеси, содержащей 1x буфер для ПЦР, 5 мкл кДНК, 0,2 ммоль / л дезоксинуклеотидтрифосфата и 2,5 единицы полимеразы Taq. Для количественного определения AP-2α использовали специфические праймеры (5′-CTGCCAACGTTACCCTGC-3 ‘и 5′-TAGTTCTGCAGGGCCGTG-3’). КДНК глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы амплифицировали с помощью ПЦР в той же реакционной смеси и проводили путем начальной денатурации в течение 2 мин при 94 ° C с последующими 27 циклами денатурации при 94 ° C в течение 1 мин и отжигом при 58 ° C. в течение 1 мин и удлинение при 72 ° C в течение 1 мин, с заключительной стадией удлинения при 72 ° C в течение 5 мин.Конечную стадию удлинения проводили при 72 ° C в течение 10 мин.
Конфокальная микроскопия
Клетки(2 × 10 3 клеток) культивировали на круглых стеклянных покровных стеклах (13 мм) в течение 24 часов после фиксации 3,7% параформальдегидом в течение 15 минут при комнатной температуре. Затем клетки инкубировали с блокирующим раствором (150 мМ NaCl (Merck), 50 мМ Трис (Gibco Invitrogen, Карлсбад, Калифорния), 0,25% BSA (Sigma) и 0,5% Tween 20 (Sigma), pH 7,2) в течение 1 часа при комнатная температура. Антитело против AP-2α (5 мкг / мл, Santa Cruz) или антитело против pCREB (1 мкг / мл, Cell Signaling) инкубировали в течение 12 ч при 4 ° C.После нескольких промывок в PBS конъюгат родамина против мышиного IgG (1-500, Sigma) инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Альтернативно, перед фиксацией клетки обрабатывали H-89 (10 мкМ) в течение 30 минут при 37 ° C. Окрашивание ядер проводили с помощью 50 мкг / мл DAPI (Invitrogen) в течение 1 ч при комнатной температуре. Покровные стекла обрабатывали монтажной средой (Vectashield; Vector Laboratories, Burlingame, CA), чтобы уменьшить обесцвечивание, и исследовали с помощью лазерного сканирующего флуоресцентного конфокального микроскопа (MRC 1024 / UV System; Bio-Rad, Hercules, CA), снабженного проходящим светом. детектор дифференциального интерференционного контраста Номарского.
Анализ образования колоний в мягком агаре
Базовые слои (2 мл) среды Игла (MEM) с добавлением 20% FBS, содержащего 0,6% агарозы сиплак, помещали в 6-луночные планшеты. На него накладывали 1 мл второго слоя 0,8% агара, содержащего суспензию 5 × 10 3 клеток / лунку. Все культуры были сделаны в трех экземплярах. Колонии оценивали после инкубации при 37 ° C в течение 25 дней.
Статистический анализ
Значимость определялась двусторонним тестом Стьюдента t . p значений <0,05 считались статистически значимыми.
Дополнительная информация
Рисунок S1.
Ингибирование pCREB приводит к увеличению экспрессии AP-2α. Экспрессия AP-2α была обнаружена в клеточных линиях A375SM и C8161-c9 после инкубации с ингибитором CaMKIV (KN-93), ингибитором p90RSK (SL 0101-1) и ингибитором AKT (трицирибин). Повышенная экспрессия AP-2α наблюдалась в обеих клеточных линиях после обработки каждым ингибитором пути. Ламин использовался в качестве контроля загрузки.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012452.s001
(0,38 МБ TIF)
Рисунок S2.
Ингибирование AP-2α зависит от pCREB. Временная экспрессия нецелевого CREB, несущего заменяющую мутацию (S133A) в CREB-молчащих клетках, не подавляет экспрессию AP-2α ни в линиях клеток A375SM, ни в C8161-c9. Ламин использовался в качестве контроля загрузки.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0012452.s002
(0,39 МБ TIF)
Вклад авторов
Задумал и спроектировал эксперименты: VOM ASD MBE.Проведены эксперименты: ВОМ АСД MZ GJV RRB HW LH. Проанализированы данные: ВОМ АСД МЗ ГДВ МБЭ. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: HW LH. Написал статью: ВОМ АСД МБЭ.
Список литературы
- 1. Sharpless NE, Kannan K, Xu J, Bosenberg MW, Chin L (2003) Оба продукта локуса Ink4a / Arf мыши подавляют образование меланомы in vivo. Онкоген 22: 5055–5059.
- 2. Уокер Дж. Дж., Флорес Дж. Ф., Гленденинг Дж. М., Лин А. Х., Маркл И. Д. и др. (1998) Практически 100% линий клеток меланомы несут изменения на уровне ДНК внутри CDKN2A, CDKN2B или одной из их нижележащих мишеней.Гены Хромосомы Рак 22: 157–163.
- 3. Дэвис Х., Бигнелл Г.Р., Кокс С., Стивенс П., Эдкинс С. и др. (2002) Мутации гена BRAF при раке человека. Nature 417: 949–954.
- 4. Zhang J, Williams T (2003) Идентификация и регуляция тканеспецифичных цис-действующих элементов, связанных с геном AP-2α человека. Дев Дин 228: 194–207.
- 5. Schorle H, Meier P, Buchert M, Jaenisch R, Mitchell PJ (1996) Фактор транскрипции AP-2, необходимый для закрытия черепа и черепно-лицевого развития.Природа 381: 235–238.
- 6. Poser I, Bosserhoff AK (2004) Факторы транскрипции, участвующие в развитии и прогрессировании злокачественной меланомы. Histol Histopathol 19: 173–188.
- 7. Доброфф А.С., Ван Х., Мельникова В.О., Вилларес Г.Дж., Зиглер М. и др. (2009) Silencing cAMP-response element-binding protein (CREB) идентифицирует CYR61 как ген-супрессор опухоли при меланоме. J Biol Chem 284: 26194–26206.
- 8. Мельникова В.О., Бар-Эли М. (2008) Транскрипционный контроль злокачественного фенотипа меланомы.Cancer Biol Ther 7: 997–1003.
- 9. Bhoumik A, Ronai Z (2008) ATF2: фактор транскрипции, который вызывает онкогенные или опухолевые супрессоры. Клеточный цикл 7: 2341–2345.
- 10. Tellez C, McCarty M, Ruiz M, Bar-Eli M (2003) Потеря протеина-активатора-2alpha приводит к сверхэкспрессии рецептора-1, активируемого протеазой, и коррелирует со злокачественным фенотипом меланомы человека. J Biol Chem 278: 46632–46642.
- 11. Теллез К.С., Дэвис Д.В., Прието В.Г., Гершенвальд Дж.Э., Джонсон М.М. и др.(2007) Количественный анализ меланоцитарной ткани показывает обратную корреляцию между активаторным белком-2альфа и экспрессией рецептора-1, активируемого протеазой, во время прогрессирования меланомы. J Invest Dermatol 127: 387–393.
- 12. Жан Д., Гершенвальд Дж. Э., Хуанг С., Лука М., Хадсон М. Дж. И др. (1998) Потеря AP-2 приводит к усилению регуляции MCAM / MUC18 и увеличению роста опухоли и метастазированию клеток меланомы человека. J Biol Chem 273: 16501–16508.
- 13. Миллер AJ, Михм MC младший (2006) Меланома.N Engl J Med 355: 51–65.
- 14. Гершенвальд Дж. Э., Самнер В., Кальдерон Т., Ван З., Хуанг С. и др. (2001) Доминантно-негативный фактор транскрипции AP-2 усиливает рост опухоли меланомы SB2 in vivo. Онкоген 20: 3363–3375.
- 15. Бар-Эли М. (1999) Роль AP-2 в росте опухоли и метастазировании меланомы человека. Метастазы рака Rev 18: 377–385.
- 16. Бергер А.Дж., Дэвис Д.В., Теллез С., Прието В.Г., Гершенвальд Дж.Э. и др. (2005) Автоматизированный количественный анализ субклеточной экспрессии активаторного белка-2альфа в тканевых микроматрицах меланомы коррелирует с прогнозом выживаемости.Cancer Res 65: 11185–11192.
- 17. Zeng YX, Somasundaram K, el-Deiry WS (1997) AP2 ингибирует рост раковых клеток и активирует экспрессию p21WAF1 / CIP1. Нат Генет 15: 78–82.
- 18. Макферсон Л.А., Локтев А.В., Вейгель Р.Дж. (2002) Опухолевая супрессорная активность AP2alpha, опосредованная прямым взаимодействием с p53. J Biol Chem 277: 45028–45033.
- 19. Wajapeyee N, Somasundaram K (2003) Остановка клеточного цикла и индукция апоптоза белком-активатором 2α (AP-2α) и роль p53 и p21WAF1 / CIP1 в AP-2α-опосредованном ингибировании роста.J Biol Chem 278: 52093–52101.
- 20. Huang S, Jean D, Luca M, Tainsky MA, Bar-Eli M (1998) Потеря AP-2 приводит к подавлению регуляции c-KIT и усилению онкогенности и метастазирования меланомы. Embo J 17: 4358–4369.
- 21. Шварц Б., Мельникова В.О., Теллез С., Мурад-Зейдан А., Блем К. и др. (2007) Потеря AP-2α приводит к нарушению регуляции E-кадгерина и MMP-9 и увеличению онкогенности клеток рака толстой кишки in vivo. Онкоген 26: 4049–4058.
- 22. Jonckheere N, Fauquette V, Stechly L, Saint-Laurent N, Aubert S и др. (2009) Рост опухоли и устойчивость к гемцитабину раковых клеток поджелудочной железы снижаются из-за сверхэкспрессии AP-2α. Br J Cancer 101: 637–644.
- 23. Cowley GP, Smith ME (1996) Экспрессия кадгерина в меланоцитарных невусах и злокачественных меланомах. Дж. Патол 179: 183–187.
- 24. Jiang H, Su ZZ, Lin JJ, Goldstein NI, Young CS, et al. (1996) Ген mda-7, связанный с дифференцировкой меланомы, подавляет рост раковых клеток.Proc Natl Acad Sci U S A 93: 9160–9165.
- 25. Натали П.Г., Никотра М.Р., Дигези Дж., Кавальер Р., Биготти А. и др. (1994) Экспрессия gp185HER-2 при меланоме кожи человека: значение для экспериментальной иммунотерапии. Int J Cancer 56: 341–346.
- 26. Descheemaeker KA, Wyns S, Nelles L, Auwerx J, Ny T. и др. (1992) Взаимодействие AP-1-, AP-2- и Sp1-подобных белков с двумя отдельными сайтами в вышестоящей регуляторной области гена-1-ингибитора активатора плазминогена опосредует ответ форбол-12-миристат-13-ацетат.J Biol Chem 267: 15086–15091.
- 27. van den Oord JJ, Vandeghinste N, De Ley M, De Wolf-Peeters C (1994) Экспрессия Bcl-2 в меланоцитах человека и меланоцитарных опухолях. Am J Pathol 145: 294–300.
- 28. Gille J, Swerlick RA, Caughman SW (1997) Трансформирующая активация транскрипции, индуцированная фактором роста-альфа, гена фактора проницаемости сосудов (VPF / VEGF) требует AP-2-зависимого связывания ДНК и трансактивации. Embo J 16: 750–759.
- 29.Silins G, Grimmond S, Egerton M, Hayward N (1997) Анализ промоторной области гена фактора человеческого фактора, связанного с VEGF. Biochem Biophys Res Commun 230: 413–418.
- 30. Werner H, Stannard B, Bach MA, LeRoith D, Roberts CT Jr (1990) Клонирование и характеристика проксимальной промоторной области гена рецептора крысиного инсулиноподобного фактора роста I (IGF-I). Biochem Biophys Res. Commun. 169: 1021–1027.
- 31. Heimberger AB, McGary EC, Suki D, Ruiz M, Wang H и др.(2005) Потеря фактора транскрипции AP-2α связана со степенью глиомы человека. Clin Cancer Res 11: 267–272.
- 32. Nyormoi O, Bar-Eli M (2003) Транскрипционная регуляция генов, связанных с метастазами, в меланоме человека. Clin Exp Metastasis 20: 251–263.
- 33. Leslie MC, Bar-Eli M (2005) Регулирование экспрессии генов при меланоме: новые подходы к лечению. J Cell Biochem 94: 25–38.
- 34. Mayr B, Montminy M (2001) Регуляция транскрипции зависимым от фосфорилирования фактором CREB.Nat Rev Mol Cell Biol 2: 599–609.
- 35. Ravnskjaer K, Kester H, Liu Y, Zhang X, Lee D и др. (2007) Кооперативные взаимодействия между CBP и TORC2 придают селективность экспрессии гена-мишени CREB. Embo J 26: 2880–2889.
- 36. Shaywitz AJ, Greenberg ME (1999) CREB: индуцированный стимулом фактор транскрипции, активируемый разнообразным набором внеклеточных сигналов. Анну Рев Биохим 68: 821–861.
- 37. Мельникова В.О., Мурад-Зейдан А.А., Лев Д.К., Бар-Эли М. (2006) Фактор активации тромбоцитов опосредует экспрессию и активацию MMP-2 посредством фосфорилирования белка, связывающего элемент цАМФ-ответа, и способствует метастазированию меланомы.J Biol Chem 281: 2911–2922.
- 38. White PC, Shore AM, Clement M, McLaren J, Soeiro I и др. (2006) Регулирование циклина D2 и промотора циклина D2 протеинкиназой А и CREB в лимфоцитах. Онкоген 25: 2170–2180.
- 39. Zhang X, Odom DT, Koo SH, Conkright MD, Canettieri G, et al. (2005) Полногеномный анализ занятости связывающего белка элемента цАМФ, фосфорилирования и активации гена-мишени в тканях человека. Proc Natl Acad Sci U S. A 102: 4459–4464.
- 40. Xie S, Price JE, Luca M, Jean D, Ronai Z и др. (1997) Доминантно-отрицательный CREB подавляет рост опухоли и метастазирование клеток меланомы человека. Онкоген 15: 2069–2075.
- 41. Жан Д., Бар-Эли М. (2000) Регулирование роста опухоли и метастазирования меланомы человека семейством факторов транскрипции CREB. Mol Cell Biochem 212: 19–28.
- 42. Жан Д., Бар-Эли М. (2001). Нацеливание на факторы транскрипции ATF-1 / CREB с помощью одноцепочечного фрагмента Fv в меланоме человека: потенциальный метод лечения рака.Crit Rev Immunol 21: 275–286.
- 43. Мельникова В.О., Баласубраманян К., Вилларес Г.Дж., Добров А.С., Зиглер М. и др. (2009) Перекрестное взаимодействие между рецептором 1, активируемым протеазой, и рецептором фактора активации тромбоцитов регулирует экспрессию молекулы адгезии клеток меланомы (MCAM / MUC18) и метастазирование меланомы. J Biol Chem 284: 28845–28855.
- 44. McGary EC, Lev DC, Bar-Eli M (2002) Пути клеточной адгезии и метастатический потенциал меланомы человека. Cancer Biol Ther 1: 459–465.
- 45. Мельникова В.О., Бар-Эли М. (2006) Биоиммунотерапия меланомы с использованием полностью человеческих антител, нацеленных на MCAM / MUC18 и IL-8. Pigment Cell Res 19: 395-405.
- 46. Вилларес Г.Дж., Доброфф А.С., Ван Х., Зиглер М., Мельникова В.О. и др. (2009) Сверхэкспрессия активируемого протеазой рецептора-1 способствует метастазированию меланомы посредством регуляции коннексина 43. Cancer Res 69: 6730–6737.
- 47. Copeman MC (1992) Предполагаемый ген-супрессор опухоли меланомы на хромосоме человека 6q.Патология 24: 307–309.
- 48. Pathak S, Drwinga HL, Hsu TC (1983) Участие хромосомы 6 в перестройках в клеточных линиях злокачественной меланомы человека. Cytogenet Cell Genet 36: 573–579.
- 49. Чжан Дж., Цуй П., Глатфельтер А.А., Каммингс Л.М., Мельцер П.С. и др. (1995) Клонирование на основе микродиссекции точки разрыва транслокации в злокачественной меланоме человека. Cancer Res 55: 4640–4645.
- 50. Walker GJ, Palmer JM, Walters MK, Hayward NK (1995) Генетическая модель онкогенеза меланомы, основанная на аллельных потерях.Гены Хромосомы Рак 12: 134–141.
- 51. Миле М.Э., Робертсон Дж., Ли Дж. Х., Коулман А., МакГэри К. Т. и др. (1996) Метастазы подавлялись, но не влияли на канцерогенность и местную инвазивность в клеточной линии меланомы человека MelJuSo после введения человеческих хромосом 1 или 6. Mol Carcinog 15: 284–299.
- 52. Трент Дж. М., Стэнбридж Э. Дж., Макбрайд Х. Л., Миз ЕС, Кейси Дж. И др. (1990) Онкогенность клеточных линий меланомы человека контролируется введением хромосомы 6 человека.Наука 247: 568–571.
- 53. Велч Д.Р., Чен П., Миле М.Э., МакГэри К.Т., Бауэр Дж.М. и др. (1994) Опосредованный микроклетками перенос хромосомы 6 в метастатические клетки меланомы человека C8161 подавляет метастазирование, но не подавляет онкогенность. Онкоген 9: 255–262.
- 54. Бергер А.Дж., Клюгер Х.М., Ли Н., Килхорн Э., Халабан Р. и др. (2003) Субклеточная локализация активирующего фактора транскрипции 2 в образцах меланомы предсказывает выживаемость пациентов. Cancer Res 63: 8103–8107.
- 55. Бар-Эли М. (2001) Генная регуляция прогрессирования меланомы с помощью фактора транскрипции AP-2. Pigment Cell Res 14: 78–85.
- 56. Бауэр Р., Имхоф А., Пшерер А., Копп Х., Мозер М. и др. (1994) Геномная структура фактора транскрипции AP-2 человека. Nucleic Acids Res 22: 1413–1420.
- 57. Stevaux O, Dyson NJ (2002) Пересмотренная картина транскрипционной сети E2F и функции RB. Curr Opin Cell Biol 14: 684–691.
- 58. Стивенс С., Ла Танге Н.Б. (2003) E2F и контроль клеточного цикла: палка о двух концах. Arch Biochem Biophys 412: 157–169.
- 59. Тримарчи Дж. М., Лис Дж. А. (2002) Соперничество братьев и сестер в семье E2F. Nat Rev Mol Cell Biol 3: 11–20.
- 60. Белл Л.А., Райан К.М. (2004) Решения о жизни и смерти от E2F-1. Разница в клеточной смерти 11: 137–142.
- 61. Field SJ, Tsai FY, Kuo F, Zubiaga AM, Kaelin WG Jr и др. (1996) E2F-1 действует у мышей, способствуя апоптозу и подавляя пролиферацию.Cell 85: 549–561.
- 62. Ву Л., Тиммерс С., Маити Б., Сааведра Н.И., Санг Л. и др. (2001) Факторы транскрипции E2F1-3 необходимы для клеточной пролиферации. Природа 414: 457–462.
- 63. Harbor JW, Dean DC (2000) Путь Rb / E2F: расширение ролей и новые парадигмы. Genes Dev 14: 2393–2409.
- 64. Xie Y, Yin Y, Li L, Ma Y, Xiao Q (2009) Короткая интерферирующая РНК, направленная против гена E2F-1, подавляющего прогрессирование рака желудка in vitro.Онкол Реп 21: 1345–1353.
- 65. Джи Дж. М., Робертсон Дж. Ф., Эллис И. О., Николсон Р. И., Херст Х. С. (1999) Иммуногистохимический анализ показывает, что фактор транскрипции AP-2 при инвазивном раке молочной железы играет роль супрессора опухоли. Дж. Патол 189: 514–520.
- 66. Роппонен К.М., Келлокоски Дж. К., Липпонен П. К., Пиетилайнен Т., Эскелинен М. Дж. И др. (1999) Экспрессия p22 / WAF1 при колоректальной карциноме человека: связь с p53, фактором транскрипции AP-2 и прогноз.Br J Cancer 81: 133–140.
- 67. Ли Л., Прайс Дж. Э., Фан Д., Чжан Р. Д., Букана С. Д. и др. (1989) Корреляция способности опухолевых клеток человека к росту в жесткой агарозе с их пролиферативной способностью in vivo в определенных местах метастазирования. J Natl Cancer Inst 81: 1406–1412.
- 68. Verschraegen CF, Giovanella BC, Mendoza JT, Kozielski AJ, Stehlin JS Jr (1991) Специфические органные метастазы клеток меланомы человека, вводимые в артериальный кровоток голых мышей.Anticancer Res 11: 529–535.
- 69. Albino AP, Lloyd KO, Houghton AN, Oettgen HF, Old LJ (1981) Гетерогенность в экспрессии поверхностного антигена и гликопротеина клеточных линий, полученных из различных метастазов меланомы одного и того же пациента. Значение для изучения опухолевых антигенов. J Exp Med 154: 1764–1778.
- 70. Welch DR, Bisi JE, Miller BE, Conaway D, Seftor EA, et al. (1991) Характеристика высокоинвазивной и спонтанно метастатической линии клеток злокачественной меланомы человека.Int J Cancer 47: 227–237.
Байлз устанавливает новый рекорд — США выигрывают золото сборной мира по гимнастике
ШТУТГАРТ, Германия — Симона Байлз завоевала рекордную 21-ю медаль на чемпионате мира по гимнастике во вторник, поскольку Соединенные Штаты сохранили за собой титул женского командного многоборья.
Это было 15-е золото в карьере Байлза, и оно помогло российской гимнастке Светлане Хоркиной завоевать наибольшее количество медалей среди женщин на чемпионате мира.Сейчас ей на два меньше, чем рекорд Виталия Щербо — 23 года среди мужчин и женщин.
«С каждым годом становится все лучше и лучше просто потому, что мы добавляем к наследию», — сказал Байлз. «Я чувствую, что никогда не думаю о рекордах. Я просто выхожу и делаю то, ради чего пришел, а именно соревнование за страну».
Сборная США набрала 172,330 балла, обогнав Россию, занявшую второе место, на 5,801 балла и выиграла седьмой подряд командный титул на Олимпийских играх или чемпионатах мира.
Наградой за победу была медаль на батарейках, которая загоралась, когда ощущала движение.Байлз назвал это «самой болезненной медалью, которую мы когда-либо получали».
Байлз опубликовал лучшие индивидуальные результаты в прыжках с опорой, балансиром и полом.
«Думаю, если я сделаю то же самое, что и сегодня, я буду более чем счастлива» в финале индивидуального многоборья в четверг, — сказала она.
Падение Сунисы Ли на бревне в ее дебютном чемпионате мира и неудачная тренировка Грейс МакКаллум на брусьях оставили США возможности для улучшения, хотя оба были сильны на других снарядах.
«Это так нереально — оказаться здесь и оказаться на вершине с той силой, которая у нас есть, даже после того, как пара упала там», — сказал Байлз.
Россия стала первой командой, обогнавшей США на шесть очков после Китая на чемпионате мира 2015 года, что очень порадовало российской гимнастки Ангелины Мельниковой.
«Мы рады, что заняли второе место, потому что пока не можем сражаться с американцами, но сегодня разрыв был значительно меньше, чем на последних нескольких чемпионатах мира», — сказала Мельникова.
Байлз сказал, что другие команды «определенно» приблизились к
США.«Все команды улучшили свою сложность по сравнению с последним четверным, и я думаю, что очень интересно видеть силу, которая у них есть».
Италия завершила 69-летнее ожидание женской командной медали бронзой, поскольку Китаю не удалось подняться на подиум впервые после чемпионата мира 2003 года.
Китай стал четвертым после тяжелого дня для Лю Тинтин, который дважды упал на брусьях и снова на бревне.
Падение на бревне последней гимнастки Италии, Элизы Иорио, привело к напряженному финишу, но она восстановилась и набрала достаточно очков, чтобы опередить Китай на 0,536 балла.